低剂量电离辐射引起拓扑异构酶Ⅱα蛋白和mRNA的表达变化

目的 探讨低剂量电离辐射引起DNA拓扑异构酶IIα(TOPOIIα)蛋白质和mRNA表达变化规律.方法 用Western blot和RT-PCR的方法分别检测Hela细胞在接受低剂量电离辐射后不同时间、不同剂量和多次辐射的累积后蛋白质和mRNA的变化.结果 细胞受5Gy的照射时,TOPOⅡα蛋白的表达较对照在4h已开始下降,12h降为最低,16h已开始恢复, mRNA在4h开始下降,8h降为最低,12h开始恢复,较蛋白的变化早;细胞受不同剂量照射后12h,TOPOⅡα蛋白和mRNA的表达均较对照降低,且下降程度随剂量增加而增加,且具有次数累加效应.结论 低剂量电离辐射引起TOPOIIα表达的变化具时间效应、剂量效应和多次累加效应,mRNA的变化早于蛋白质的变化.     

致死剂量的γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞的凋亡规律及与bax、bcl-2和Bcl-XL表达的关系

目的：观察致死剂量γ线照射后小鼠胸腺淋巴细胞凋亡特征及与Bax、Bcl-2和Bcl-XL蛋白和mRNA表达的关系，为急性重度以上放射病的治疗提供依据。方法：清洁级C57小鼠250只，随机分为0、6、9、12、15和20 Gy6个剂量组.经γ线全身1次照射后，于照射后1～28d和3～12个月，活杀取胸腺和外周血，用原位末端标记(TUNEL)和麦格-姬姆萨(MGG)染色检测胸腺淋巴细胞的凋亡：用原位杂交和碱性磷酸酶免疫组化染色法，检测Bax、Bcl-2和Bcl-XL mRNA和其蛋白的表达。结果.(1)各剂量组小鼠外周血白细胞在照射后6h，出现一过性的升高，以后迅速下降.6Gy照射后7d降至最低，至照射后28d基本恢复到正常水平：(2)不同剂量的γ线照射后24h，胸腺淋巴细胞的凋亡率迅速升高；在6～12Gy范围内与照射的剂量呈正比，≥15Gy照射后变化不明显。(3)6Gy照射后24h，胸腺淋巴细胞的凋亡率达高峰，而后开始降低；但直至照射后6个月和12个月，凋亡率仍明显高于对照组。(4)6Gy照射后3h，胸腺淋巴细胞中Bax蛋白的表达即出现增加，至24h达峰值，显示出时效关系；而Bcl-2蛋白于照射后3h即明显下降，24h降至最低；Bcl-XL蛋白也在照射后24h降至最低。bax和bel-2 mRNA的检测与蛋白水平的检测一致。结论：经6～12 Gy照射后，淋巴细胞的凋亡与照射剂量成正比，≥15 Gy照射后凋亡率下降，提示≤12 Gy照射后胸腺淋巴细胞的凋亡是其死亡的主要方式。促凋亡蛋白Bax表达的增加及抗凋亡蛋白Bcl-XL表达的下降，与照射剂量和淋巴细胞的凋亡率呈现较好的对应关系，提示它们在致死剂量的照射所致胸腺淋巴细胞凋亡的调控中起着重要作用。     

低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡及P53基因和蛋白表达

目的:研究低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞凋亡及 P53 基因和蛋白表达的影响。方法:应用密度梯度离心法分离不同种类生精细胞, 流式细胞术检测其细胞凋亡, 免疫组化法观察生精细胞P53蛋白表达, 原位杂交法观察其 P53 mRNA水平。结果:0.025-0.2 Gy X射线全身照射后, 生精细胞凋亡具有明显的细胞种类规律性。在较低剂量照射(0.025和0.05 Gy)时, 以精原细胞凋亡为主, 随照射剂量增加(0.075-0.2 Gy)逐渐累及精母细胞, 并且前者凋亡率明显高于后者, 很少累及精子细胞和精子。P53蛋白表达主要见于精原细胞和精母细胞, 并且前者阳性率高于后者, 随照射剂量增加, 其阳性率逐渐升高, 而精子细胞和精子阳性率较低; P53 mRNA表达在较低剂量照射(0.025 Gy)时, 主要以精母细胞和精子细胞为主, 随剂量增加(0.05-0.2 Gy)逐渐累及精原细胞。精原细胞和精母细胞 P53 mRNA表达呈明显的剂量依赖性关系, 但精子细胞表现不明显。结论:低剂量电离辐射可选择性诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡, 具有明显的剂量和时程效应关系。提示, 这种选择性诱导凋亡调控机制可能与 P53 基因和蛋白表达相关联。     

电离辐射后ERp29蛋白在IEC-6细胞中的表达

目的 探讨大鼠空肠上皮细胞株（IEC-6）受到不同剂量γ射线照射后，ERp29蛋白（endoplasmic reticulum protein）在不同时相点的表达变化情况。方法分别提取正常IEC-6细胞和5、10、15、20Gy照射后3、12、24、48、72h细胞的蛋白样品，采用Western blotting方法检测ERp29的表达。结果不同剂量照射后IEC-6 ERp29蛋白表达比正常细胞高，蛋白表达随照射时间的增加而增加。结论电离辐射可诱导IEC-6细胞高表达ERp29蛋白，提示该蛋白在肠道的损伤修复中起重要作用。     

TNF-α对小鼠肺泡巨噬细胞CD14和清道夫受体表达的影响

本研究旨在通过观察TNF-α对肺泡巨噬细胞(AM)清道夫受体(SR)、CD14表达的影响，探讨TNF-α在内毒素血症时AM由早期防御性(清除、灭活内毒素)向后期效应性(释放大量的致炎与抗炎因子)转变中的作用。分离培养小鼠AM，以不同剂量TNF-α(0，0．001，0．01，0．1，1，10，100μg／L)刺激细胞16h或以100μg／L TNF-α刺激细胞不同时间(0，2，4，6，8，12，16，24h)，采用免疫细胞化学及RT-PCR方法观察SR、CD14表达变化。结果显示，以低至0．1μg／L TNF-α刺激16h或100μg／L TNF-α刺激6h以上就能显著增强CD14并抑制SR蛋白的表达，实验同时显示，CD14mRNA、SRmRNA表达也显著增强，SRmRNA表达变化与SR蛋白表达趋势不一致。研究结果提示，TNF-α能通过增强CD14蛋白表达并抑制SR蛋白表达而在内毒素血症时小鼠AM由免疫防御型向炎症效应型转变中发挥重要作用。     

苯中毒病人TOPOⅡα启动子调控因子Sp1组蛋白化学修饰改变

目的:研究拓扑异构酶Ⅱα(TOPOⅡα)启动子调控因子SP1组蛋白化学修饰在苯中毒病人中的改变。方法:25例临床慢性苯中毒患者骨髓单个核细胞为病例组,25例正常人骨髓单个核细胞为对照组,染色质免疫沉淀技术探讨TOPOⅡα启动子调控因子Sp1组蛋白乙酰化和甲基化水平的变化,RT-PCR法测定Sp1 mRNA的表达水平。结果:与对照组相比,临床苯中毒病例TOPOⅡα启动子调控因子Sp1组蛋白H4和H3乙酰化水平下降(P0.01),组蛋白H3K9甲基化水平升高(P0.01),组蛋白H3K4甲基化水平无明显改变。与正常对照组相比,临床苯中毒病例TOPOⅡα启动子调控因子Sp1的mRNA表达水平降低(P0.05)。结论:慢性苯中毒TOPOⅡα启动子调控因子Sp1组蛋白H4、H3乙酰化及H3K9甲基化修饰水平的改变伴随着mRNA水平的变化。TOPOⅡα启动子调控因子Sp1可能通过组蛋白H4、H3乙酰化及H3K9甲基化修饰改变在苯中毒所致的造血毒性中发挥作用。     

杂色曲霉素对小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达和蛋白分泌的影响

目的：探讨杂色曲霉素（ST）对体外培养的小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达及其蛋白分泌的影响。 方法： 分别采用半定量RT-PCR及ELISA方法，研究5种不同剂量ST（0.125 mg/L、0.25 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L）预处理2 h、12 h对小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达及其蛋白分泌的影响，观察ST对IL-4影响的时效及量效关系。 结果： ST预处理2 h，较小剂量ST（0.125、0.25、0.5 mg/L）处理组小鼠脾细胞IL-4 mRNA的表达高于对照组，以0.5 mg/L组表达最高；当ST预处理达到12 h时，较小剂量ST处理组IL-4 mRNA表达均低于对照组，其中以ST 0.125、0.25 mg/L组降低最明显。而大剂量ST（1 mg/L、2 mg/L）处理2 h及12 h对小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达均低于对照组。在蛋白水平上的改变与mRNA水平变化相似。 结论： ST对小鼠脾细胞IL-4 mRNA表达的影响与其剂量和作用时间有关，既可表现为抑制作用，也可表现诱导作用。     

X线电离辐射通过上调c-Myc表达促进肺癌A549细胞上皮间质转化

目的:探讨电离辐射对肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其可能机制。方法:采用不同剂量(0 Gy、1 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy)的X射线分别照射肺癌A549细胞不同时间,通过倒置显微镜观察X射线照射12 h、24 h和48 h时肺癌A549细胞形态的改变;Western blot检测X射线照射12 h与24 h时EMT相关蛋白vimentin、N-cadherin及E-cadherin和转录因子c-Myc的表达。结果:照射后肺癌A549细胞轮廓不清,突起增多,边缘不规则且呈煎蛋样塌陷,以8 Gy X射线照射48 h时肺癌A549细胞上皮间质化形态最明显。与0 Gy照射剂量对照组相比,vimentin虽然于4 Gy剂量照射12 h时下调,但是处理24 h时各剂量照射组vimentin均表现为上调,其中2 Gy剂量照射组其上调最明显(P0.01);与0 Gy照射剂量对照组相比,1 Gy、2 Gy及4 Gy照射组照射肺癌A549细胞24 h后其N-cadherin表达上调(P0.05);各照射剂量对肺癌A549细胞E-cadherin表达没有显著影响。照射24 h后肺癌A549细胞c-Myc表达上调,以4 Gy剂量照射组表达差异最明显(P0.01)。结论:X线电离辐射可能通过上调c-Myc表达促进肺癌A549细胞发生上皮间质转化。     

分化型甲状腺癌细胞株131Ⅰ照射后摄碘能力及特异基因表达变化的实验研究

目的:分化型甲状腺癌131Ⅰ治疗后可出现失分化的现象,本文通过体外培养的甲状腺癌FTC-133细胞株在低剂量131Ⅰ照射后摄碘能力的变化及甲状腺细胞特异蛋白(NIS、RSHR、TPO、Tg)及其mRNA水平变化,初步研究131Ⅰ照射与甲状腺癌失分化的关系.方法:培养的FTC-133细胞株,用诊断剂量的131Ⅰ内照射(不同时间,不同剂量),测量细胞摄125Ⅰ能力的变化,并利用蛋白印迹法、放射免疫分析和免疫荧光检测NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白含量和定位,利用实时荧光聚合酶链反应检测上述蛋白mRNA水平的变化.结果:131Ⅰ照射使FTC-133细胞摄125Ⅰ能力(cpm/min值)下降,各试验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),利用15μCi照射48h吸碘率下降最明显,下降率为34.6%(t=12.72,P<0.01),NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白以及mRNA均下降,在48h下降最明显,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),蛋白定位照射前后无明显变化.结论:131Ⅰ照射可使FTC-133细胞摄碘能力下降,NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白及mRNA水平下降,131Ⅰ照射可以使分化型甲状腺癌细胞出现分化程度降低.     

基础核医学

0502154 低剂量辐射对荷瘤鼠放疗后血清中抗氧化酶活性的影响；0502155 低剂量电离辐射预处理对高剂量辐射诱导的肝癌细胞hepG2细胞周期阻滞的影响；0502156 急性放射损伤小鼠血清蛋白质分析；0502157 致死剂量γ射线照射小鼠淋巴结淋巴细胞凋亡动力学及其与相关蛋白表达的关系；0502158 用双核素心肌断层显像评价Q波和非Q波心肌梗死存活心肌。     

分化型甲状腺癌细胞株131^I照射后摄碘能力及特异基因表达变化的实验研究

目的：分化型甲状腺癌131^I治疗后可出现失分化的现象,本文通过体外培养的甲状腺癌FTC-133细胞株在低剂量131^I照射后摄碘能力的变化及甲状腺细胞特异蛋白（NIS、RSHR、TPO、Tg）及其mRNA水平变化,初步研究131^I照射与甲状腺癌失分化的关系。方法：培养的FTC-133细胞株,用诊断剂量的131^I内照射（不同时间,不同剂量）,测量细胞摄125^I能力的变化,并利用蛋白印迹法、放射免疫分析和免疫荧光检测NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白含量和定位,利用实时荧光聚合酶链反应检测上述蛋白mRNA水平的变化。结果：131^I照射使FTC-133细胞摄125^I能力（cpm/min值）下降,各试验组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）,利用15μCi照射48h吸碘率下降最明显,下降率为34.6%（t=12.72,P〈0.01）,NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白以及mRNA均下降,在48h下降最明显,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0.05）,蛋白定位照射前后无明显变化。结论：131^I照射可使FTC-133细胞摄碘能力下降,NIS、TSHR、TPO、Tg蛋白及mRNA水平下降,131^I照射可以使分化型甲状腺癌细胞出现分化程度降低。     

金黄色葡萄球菌对Bcap-37细胞TLR2和IL-1β、TNF-α以及NF-kB表达的影响

目的 观察金黄色葡萄球菌对Bcap-37细胞Toll样受体2(TLR2)的表达以及对促炎性细胞因子、核因子κB (NF-κB)的影响.方法 用金黄色葡萄球菌处理Bcap-37细胞,采用RT-PCR检测TLR2 mRNA的表达,流式细胞术检测TLR2蛋白的表达,ELISA分别检测IL-1 β和TNF-α的分泌,Western blot检测NF-κB的表达变化.结果 金黄色葡萄球菌作用于Bcap-37细胞后,TLR2 mRNA和蛋白水平的表达量随着作用时间延长而逐渐增高,分别在4h和6h达到高峰,之后又逐渐下降(P＜0.05).IL-1β、TNF-α的表达呈现明显的时间依赖性增高(P＜0.05),IL-1β在12 h到达峰值后下降,TNF-α在16 h表达仍然很高.NF-κB的表达随着刺激时间的延长也呈现时间依赖性增高,在12 h时表达量最高,14 h开始下降.结论 金黄色葡萄球菌能上调Bcap-37细胞TLR2 mRNA和蛋白的表达,激活Bcap-37细胞NF-κB的表达,促进IL-1β和TNF-α的分泌.     

呼吸道合胞病毒感染人肺上皮细胞活化Toll样受体3介导的抗病毒作用研究

目的 探讨呼吸道合胞病毒( RSV)感染人肺上皮A549细胞后,Toll样受体3(TLR3)的水平变化及其产生的Ⅰ型干扰素的抗病毒作用.方法 RSV感染体外培养的人肺上皮A549细胞,并给予TLR3特异性抗体处理,分别感染4、8、12、16、24h后收集各组细胞.未感染病毒的细胞作为对照组.RT-PCR法检测TLR3、IFN-α、IFN-β,RSV F蛋白的mRNA表达水平变化.结果 RSV感染A549细胞后,TLR3、IFN-α、IFN-β,RSV F蛋白的mRNA表达量均升高且有时间依赖性,TLR3 mRNA在24h表达量是基础表达量的5倍,IFN-α、IFN-β mRNA在24 h表达量是基础表达量的4倍多,RSVF蛋白的mRNA表达量近1.7倍.TLR3抗体预先处理以抑制TLR3受体,再行RSV感染,IFN-α和IFN-β mRNA表达量虽然升高,但较感染组均有所下降,mRNA表达在12 h后显著降低,且IFN-ββ的mRNA表达量下调更明显.但RSV F基因的mRNA表达在12 h、24 h升高有显著性差异.结论 RSV感染A549细胞后可上调TLR3表达,其活化细胞介导产生的Ⅰ型干扰素起抗病毒作用,在一定程度上可抑制病毒的增殖水平.     

RSV 感染诱导的 RANTES、FKN、IP-10表达及 PPARγ激动剂抑制作用的体外研究

目的研究A549细胞呼吸道合胞病毒（ RSV）感染12 h、24 h、48 h后调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子（RANTES）、分形趋化因子（FKN）、干扰素诱导蛋白-10（IP-10） mRNA和蛋白水平的变化及不同剂量过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂15-脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）和罗格列酮及其拮抗剂（ GW9662）的干预作用。方法建立RSV感染A549细胞的体外模型，将传代培养的细胞随机分成5组：A组（15d-PGJ2＋RSV组），B组（罗格列酮＋RSV组）、C组（DMSO＋RSV组）、D组（ GW9662＋罗格列酮＋RSV组）、E组（细胞对照组）。各组分别在培养12 h、24 h、48 h收获细胞及上清液待测。应用ELISA检测各组上清液RANTES、FKN、IP-10蛋白水平，实时荧光定量RT-PCR检测各组RANTES、FKN、IP-10 mRNA表达。结果与细胞对照组相比， RSV感染组RAN-TES、FKN、IP-10 mRNA和蛋白的表达在12 h、24 h和48 h均明显升高（P均＜0．05），其中RANTES、FKN、IP-10 mRNA的表达量在24 h达高峰，48 h有所下降，与12 h的表达量比较差异无统计学意义（P均＞0．05）；而3种趋化因子蛋白的表达量均在48 h达高峰，与12 h、24 h比较差异有统计学意义（P均＜0．05）。在同一作用时间点上，随着15d-PGJ2和罗格列酮药物浓度的增加，RANTES、FKN、IP-10 mRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性下降，与 RSV 感染组相比差异有统计学意义（ P 均＜0．05），其中以20μmol/L 15d-PGJ2和30μmol/L罗格列酮干预后RANTES、FKN和IP-10 mRNA和蛋白的表达量最低。结论 RSV感染可导致RANTES、FKN和IP-10 mRNA及蛋白表达升高，其中mRNA水平在感染后24 h达到高峰，蛋白的表达自感染后48 h达到高峰；而PPARγ激动剂能以剂量依赖性方式抑制上述趋化因子mRNA和蛋白的表达，从而起到减轻炎症的作用。     

低剂量X射线诱导小鼠胸腺细胞蛋白质表达及生物活性

目的:观察低剂量X射线照射的昆明小鼠胸腺细胞蛋白质表达及生物活性。方法:采用SephadexG-100凝胶过滤和高效液相分析75mGy全身照射组和假照射组小鼠胸腺细胞蛋白质的表达,通过小鼠脾淋巴细胞转化和人外周血淋巴细胞染色体畸变检测蛋白质表达的生物活性。结果:高效液相分析发现胸腺细胞24.5kD蛋白质照射组明显低于假照射组,这种降低的蛋白质组分在终浓度为6.25mg/L时,对ConA刺激正常小鼠脾淋巴细胞转化和X射线损伤人外周血淋巴细胞所致染色体畸变分别具有抑制和保护作用。结论:低剂量辐射兴奋效应可能与24.5kD蛋白质的表达下调有关。     

胆固醇诱导人血管平滑肌细胞表型转化

目的观察胆固醇对人血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响。方法体外培养人血管平滑肌细胞株,分别用(12.5、25.0、50.0)mg/L浓度的胆固醇作用细胞48 h;50.0 mg/L的胆固醇分别作用细胞24、48、72 h。采用实时定量PCR检测VSMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;采用Western blot法检测胆固醇对VSMC中α-SMA、SM22α及单核细胞趋化蛋白-1诱导蛋白(MCPIP)表达的影响;CCK-8法检测VSMC增殖。结果 (12.5、25.0、50.0)mg/L胆固醇作用VSMC 48 h较对照组相比,α-SMA及SM22αmRNA水平及蛋白水平表达均降低(P0.05),50.0 mg/L胆固醇作用后表达水平最低,存在剂量依赖效应;用50.0 mg/L胆固醇分别作用VSMC 48、72 h后,α-SMA及SM22αmRNA及蛋白表达与对照组相比均降低(P0.05)。与对照组相比,胆固醇作用均明显促进VSMC增殖(P0.05)。50.0 mg/L胆固醇作用VSMC48 h可诱导MCPIP蛋白表达增加。结论胆固醇作用VSMC后可降低收缩型标志蛋白α-SMA及SM22α的表达、促进VSMC增殖,提示胆固醇可诱导VSMC表型转化。     

内毒素致伤小鼠肺组织SSeCKS表达变化的研究

目的 观察内毒素，脂多糖（LPS）致伤小鼠肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物（SSeCKS）的表达变化和细胞定位。方法 腹腔注射LPS制备小鼠内毒素肺损伤模型，依据注射时相和剂量不同随机分组。用Real-time PCR法和Western blot法检测各组肺组织SSeCKS的mRNA和蛋白质水平表达情况，间接免疫荧光双标法检测SSeCKS在肺组织中的细胞定位。结果 SSeCKS表达水平与LPS用量呈现剂量和时间依赖关系：1、5、10和15mg/kg组SSeCKS mRNA水平皆显著高于对照组（P〈0．05），且随注射剂量增高SSeCK SmRNA表达量亦逐渐增高；不同时相LPS（5mg/kg）注射后肺组织中SSeCKS mRNA水平表达呈动态变化过程，1h开始增高，3h达到表达高峰，12h降至正常水平；SSeCKS蛋白水平表达变化与mRNA水平变化相一致。SSeCKS在肺组织中定位于肺泡间隔毛细血管内皮细胞。结论 SSeCKS是炎症反应蛋白，其表达量与炎症的严重程度相关。内毒素可诱导肺泡间隔毛细血管内皮细胞SSeCKS表达上调。     

X线电离辐射诱导人鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化及其潜在机制

目的:探讨X线电离辐射诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及其可能的信号通路。方法:分别采用0 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy的X线照射鼻咽癌CNE-2细胞,通过倒置显微镜观察照射24 h后细胞形态的改变;应用细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化;分别采用real-time PCR和Western blot法检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)mRNA及蛋白水平的变化,并采用Western blot法检测Akt和p-Akt蛋白水平的变化。结果:经X线照射后鼻咽癌CNE-2细胞呈典型的"鹅卵石"样或纺锤形,且伸出伪足,细胞间隙增大,细胞的侵袭和迁移能力增强(P0.01);real-time PCR和Western blot法检测结果显示,与未照射组相比,各照射组细胞中E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平均显著下调(P0.01),而N-cadherin和vimentin mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P0.05);PI3K/Akt信号通路中p-Akt蛋白的水平显著升高(P0.01),而Akt的表达无明显变化。结论:X线电离辐射能够诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生EMT,其机制可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

炎症因子对原代培养海马神经元CLC-3表达的影响

目的:研究不同浓度TNF-α、IL-1β、TGF-β刺激对原代培养海马神经元CLC-3(voltage-gated chloride channel 3)mRNA及蛋白质水平的影响。方法:取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为对照组、TNF-α组、IL-1β组和TGF-β组。TNF-α、IL-1和TGF-β组分别加入加入含有浓度为10 ng/ml的相应炎症因子培养液,每组分别在孵育6、12、24 h后分别收集细胞提取总RNA和蛋白采用实时定量PCR、Western Blot技术检测CLC-3 mRNA及蛋白水平的表达。结果:TNF-α、IL-1β处理12 h后培养海马神经元CLC-3在mRNA及蛋白水平开始上调,高峰持续从12 h至24 h(P0.05)。TNF-α刺激作用强于IL-1β。TGF-β处理海马神经元CLC-3 mRNA在6 h后即开始升高(P0.05),但在孵育6 h到24 h时下降至正常对平(P0.05)。结论:TNF-α、IL-1β、TGF-β可能通过刺激海马神经元CLC-3表达增加增强神经元存活能力。     

γ射线对人淋巴细胞cx43和ANLN基因转录表达的影响

目的 研究γ射线对人外周血淋巴细胞 cx43和ANLN基因转录表达的影响.方法 对数生长期的淋巴细胞,分别给予1、2、3、4、5、6 Gy的60Coγ射线照射,照射后12 h,以及2 Gy照射后4、8、12、24、36、48、72 h,分别提取总RNA,反转录成cDNA.利用实时荧光定量PCR技术,检测各组cx43和ANLN基因表达改变.结果 人外周血淋巴细胞cx43 mRNA表达水平在2 Gy照射后4、8、12 h明显增高,分别为对照组(未照射组)的6.74、9.06、7.22倍(P＜0.05);24～72 h,其表达水平与对照组相比没有明显变化.1、2、3、4、5、6 Gy剂量照射后12 h,cx43 mRNA表达水平显著增高(P＜0.05).ANLN mRNA表达水平在2 Gy不同时间点及1～5 Gy照射后12 h,表达降低(P＜0.05),6 Gy照射后12 h其表达开始升高,为对照组的6.08倍(P＜0.05).结论 γ射线照射2 Gy不同时间点及不同剂量照射后12 h,cx43基因表达上调,ANLN 基因表达下调.1～3 Gy剂量照射后12 h,cx43 mRNA表达在此范围内有时间和剂量的依赖性.cx43可能会发展为核事故受照射人员的分子生物学剂量标记物.