广东省食品中单核细胞增多性李斯特菌脉冲场凝胶电泳技术分子分型的研究

目的应用脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）对广东省食品中分离的单核细胞增多性李斯特菌（Lm）进行分子分型,并建立PFGE数据库。方法参照美国PulseNet的Lm PFGE分子分型标准方法进行检测。应用BioNumerics软件对不同食物种类、时间和地点的分离株进行比对,分析菌株之间的相关性。结果107株Lm分成41个PFGE型,型别较为分散;从鸡肉中分离的菌株数最多（37株）,PFGE分型也最多（19个）;冷藏和冷冻食品的分离率较高,其中有26株菌仅存在1-2个电泳条带的差异,相似度极高;韶关和惠州地区分离的Lm存在着地区特异性;随时间变迁,部分菌株仍存在不同程度的相关性。结论广东省食品中分离的Lm在整体上表现出较大的遗传多样性,但部分菌株有不同程度的相关性。     

北京市西城区食源性与临床感染性单核细胞增生李斯特菌PFGE和MLST分型研究

目的研究北京市西城区食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,Lm)的脉冲场凝胶电泳(plused-field gel electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)分型特征,分析两种分型方法的应用价值。方法采用PFGE和MLST两种方法对2012-2015年50株食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌进行分型研究。结果 50株单核细胞增生李斯特菌PFGE分型得到23种型别,GX6A16.CN0004为优势带型。MLST分析获得12个型别,ST9为优势型别。其中5组数据是ST型别只对应一种PFGE型别,3种PFGE型别同时存在食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌,并且其ST型别进化关系比较远。结论北京市西城区不同来源单核细胞增生李斯特菌污染长期存在,出现致病型别,并且致病性单核细胞增生李斯特菌的遗传关系呈多元化。两种分子分型方法的结合,从基因水平上解释了单核细胞增生李斯特菌的变化趋势及流行特征。     

单核细胞增生李斯特菌PFGE分型与血清学分型的联合分析

目的:采用国际标准化的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析方法对单核细胞增生李斯特菌(Lm)进行基因分型,同时进行血清学分型,比较分析两种分型方法的优劣和之间的关系。方法:按照标准化的Lm-PFGE方法对17株Lm进行PFGE分型,分别用限制性内切酶ApaI和AscI酶对菌株进行酶切,通过脉冲场凝胶电泳获得电泳图谱,利用B ioNum erics软件对图谱进行聚类分析。同时对上述菌株进行血清学分型。结果:17株Lm被内切酶ApaI分为13种带型,被内切酶AscI分为14种PFGE型。17株Lm分为5种血清型。结论:Lm-PFGE分型方法是一种高分辨力、稳定可靠的技术。PFGE的分辨力高于血清学分型,两种分型方法密切相关。聚类分析结果显示ApaI酶切分型与H抗原密切相关。     

湖北省36株单增李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型

目的:了解湖北省各类食品中分离到的单核细胞增生李斯特菌各菌株之间的遗传相关性,了解湖北省Lm基因型的分布情况和分子流行特点。方法:按照标准化的Lm-PGFE方法对所分离到的36株Lm菌株进行脉冲场凝胶电泳分型。结果:36株Lm菌株通过PGFE分成了12个型别,各型别之间不紧密相关。结论:湖北省食品中Lm的污染来源于不同的克隆株,菌型分散,未发现单个基因型菌株流行的迹象。     

1例孕妇感染李斯特菌病例的病原学分析及分子特征研究

目的对北京市1名孕妇感染单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,Lm)病例进行病因食品溯源、病原学检测、血清学分型、耐药及分子特征研究。方法对流行病学相关的1株孕妇病例Lm分离株和1株可疑食品Lm分离株进行血清型分型及脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型,并采用CLSI和EUCAST推荐的微量肉汤稀释法检测菌株对12种抗生素的敏感性。结果 2株Lm分离株均为1/2a血清型,药敏结果一致,对有国际标准的青霉素、氨苄西林、复方新诺明及红霉素敏感,其他8种抗生素的MIC值均较小,经AscⅠ酶切后具有100%同源的PFGE指纹图谱带型。结论结合流行病学调查、实验室病原学检测、药敏和PFGE分子分型结果,高度怀疑本例孕妇感染李斯特菌病例是由进食受1/2a血清型单核细胞增生李斯特菌污染的牛肉三明治所致。     

北京市西城区2012年-2013年食源性单核细胞增生李斯特菌同源性及耐药状况调查

目的研究2012年-2013年北京市西城区食源性单核细胞增生李斯特菌的同源性和耐药情况。方法按GB4789.30—2010方法分离鉴定菌株,按照标准化的Lm-PFGE方法对分离到的13株单核细胞增生李斯特菌,进行脉冲场凝胶电泳分型,药敏试验采用K-B法和E-test法。结果单核细胞增生李斯特菌总检出率为9.85%,耐药率为46.15%,主要耐药的抗生素有环丙沙星、红霉素、氯霉素、左氧氟沙星、美罗培南和头孢噻肟,并出现了多重耐药株。13株单核细胞增生李斯特菌通过PFGE分成了6个型别,以GX6A16.CN0004为主要带型(7株),占总菌株数的53.85%。结论本城区2012年-2013年部分食品不同程度地受到单核细胞增生李斯特菌的污染,GX6A16.CN0004基因型为优势菌,2013年出现新的基因型,单核细胞增生李斯特菌对多种抗生素敏感。加强对新型基因型的监测和临床使用抗生素的管理。     

新疆食源性单核细胞增生李斯特菌分离株的分子分型与耐药性分析

目的 了解新疆食源性单核细胞增生李斯特菌分子分型特征及抗生素耐药状况.方法 对2010年-2020年食品中分离的32株单核细胞增生李斯特菌采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分子分型,采用微量肉汤稀释法对8种抗生素进行耐药性检测.结果 32株单核细胞增生李斯特菌经Asc I酶切与脉冲场凝胶电泳后共获得21种PFGE带型...     

中国四省甲型副伤寒分离株脉冲场凝胶电泳分析及分型数据库建立

目的对中国4个甲型副伤寒流行省份的分离株进行标准化脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型分析。方法对来自4个省的甲型副伤寒沙门菌利用XbaⅠ酶切染色体DNA进行PFGE分析，利用BioNumerics建立数据库和进行相似性聚类。结果分离自1998-2002年的89株甲型副伤寒分离株共有11种PFGE带型，这些菌株中具有优势带型。有3种带型相似性在96．3％，这3种带型的菌株占到分析菌株的865％，并在不同省份和年度中出现。结论建立了中国甲型副伤寒沙门菌的用于网络监测分析的PFGE技术和数据库，近年中国部分省份的甲型副伤寒沙门菌分离株PFGE型别集中，存在同型菌株的广泛流行。     

北京市售即食熟肉制品中单核细胞增生李斯特菌定量污染水平研究

目的了解北京市售即食熟肉制品中单核细胞增生李斯特菌污染情况及污染来源。方法采用MPN法定量检测即食熟肉制品中的单核细胞增生李斯特菌,在对分离菌株正确鉴定的基础上,对单核细胞增生李斯特菌分离株进行脉冲场凝胶电泳分型研究。结果 197份即食熟肉制品中有14份检出单核细胞增生李斯特菌,检出率为7.11%,平均污染水平为14.31 MPN/g。其中农贸市场采集的样品单核细胞增生李斯特菌污染率(13.89%)高于熟肉专卖店(8.57%)、超市(5.75%)和饭馆(2.56%)。而超市采集样品中该菌的平均污染水平最高,为22.78 MPN/g。共发现13种单核细胞增生李斯特菌PFGE型,其中从同一农贸市场采集的样品中分离到两株同一个PFGE型别的单核细胞增生李斯特菌,提示加工环境存在单核细胞增生李斯特菌的污染或加工过程的交叉污染。结论北京市售即食熟肉制品中存在单核细胞增生李斯特菌污染,农贸市场出售产品污染状况高于超市、熟肉专卖店和饭馆。     

北京市西城区食源性与临床感染性单核细胞增生 李斯特菌ＰＦＧＥ 和ＭＬＳＴ 分型研究

摘要：目的　研究北京市西城区食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌（ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ,Ｌｍ） 的脉冲场凝胶电泳（ｐｌｕｓｅｄ ｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,ＰＦＧＥ） 和多位点序列分型（ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｓｓｅｑｕｅｎｃｅｔｙｐ ｉｎｇ,ＭＬＳＴ）分型特征,分析两种分型方法的应用价值。方法　采用ＰＦＧＥ 和ＭＬＳＴ 两种方法对２０１２－ ２０１５年５０株食源性和临床感染性单核细胞增生李斯特菌进行分型研究。结果　５０株单核细胞增生李斯特 菌ＰＦＧＥ 分型得到２３种型别,ＧＸ６Ａ１６．ＣＮ０００４为优势带型。ＭＬＳＴ 分析获得１２ 个型别,ＳＴ９ 为优势型 别。其中５组数据是ＳＴ 型别只对应一种ＰＦＧＥ 型别,３种ＰＦＧＥ 型别同时存在食源性和临床感染性单核细 胞增生李斯特菌,并且其ＳＴ 型别进化关系比较远。结论　北京市西城区不同来源单核细胞增生李斯特菌 污染长期存在,出现致病型别,并且致病性单核细胞增生李斯特菌的遗传关系呈多元化。两种分子分型方 法的结合,从基因水平上解释了单核细胞增生李斯特菌的变化趋势及流行特征。 关键词：单核细胞增生李斯特菌;ＰＦＧＥ 分型;ＭＬＳＴ 分型;进化树;分子分型;食源性致病菌;人源性 中图分类号：Ｒ５１７．７　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１７）０９ ０６７５ ０５     

进出口食品中单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型研究

目的研究进出口食品中分离的单核细胞增生李斯特菌(LMO)之间分子分型特征和遗传相关性。方法参照美国PulseNet推荐的LMO脉冲场凝胶电泳(PFGE)标准方法,用限制性内切酶AscⅠ酶切LMO染色体DNA进行PFGE试验。用BioNumerics软件对不同地区分离的LMO进行比对,分析菌株之间的相似度。结果 24株LMO分成20种PFGE型,菌株之间的相似度在44.45%～100%。来源于加拿大的LMO16、美国的LMO18、丹麦的LMO13,丹麦的LMO7和顺德的LMO22,广州的LMO21和山西的LMO8,分别有相同的PFGE型,相似度达到100%。结论进出口食品中分离的LMO在整体上表现出较大的遗传多样性,但部分菌株有一定程度的相关性。     

江西省钩端螺旋体分离株脉冲场凝胶电泳分型和分析

目的 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,对江西省钩端螺旋体(钩体)患者及动物宿主中分离的钩体菌株型别进行分子流行病学调查.方法 利用核酸内切酶Not Ⅰ对提取的钩体菌株染色体DNA进行酶切,通过PFGE将DNA片段分离.获得的PFGE图像采用分析软件BioNumerics 4.0进行处理并建立数字化数据库,以相似度＞75%为标准,将获各钩体PFGE图谱与中国15群15型钩体参考标准株进行比较并进行聚类分析.结果 江西省不同地区(的139株钩体可分为46个PFGE型,优势型为LepNot Ⅰ.0071、LepNotⅠ.0072和LepNotⅠ.0043型,分别占所有钩体菌株的28.06%、15.11%和7.19%.139株钩体分离株中,84.89%(118/139)菌株的PFGE图谱与6群6型中国钩体参考标准株基本相符,其中32.37%(45/139)钩体菌株属于黄疸出血群赖型,15.83%(22/139)和15.11%(21/139)钩体菌株分别属于澳洲群澳洲型和爪哇群爪哇型.结论 PFGE是一种快速、准确、高效的钩体分型方法 .黄疸出血群赖型是江西省人群及动物中优势血清型,澳洲群澳洲型和爪哇群爪哇型位于其次.     

Real-time application of automated ribotyping and DNA macrorestriction analysis in the setting of a listeriosis outbreak

A cluster of three cases of listeriosis cases occurred against a background of endemic listeriosis in Western Australia. Human and environmental isolates of Listeria monocytogenes obtained during the outbreak investigation were rapidly subtyped by automated ribotyping using an EcoRI protocol and a RiboPrinter. DNA macrorestriction analysis by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) was used to confirm the relatedness of isolates. Serogroup 1/2 predominated among the food samples and the four clinical isolates from the outbreak cluster were also of this serogroup. All isolates from chicken material were serogroup 1/2 and indistinguishable by ribotype pattern. PFGE subdivided strains of this ribotype into four subtypes. The preliminary analysis had an immediate impact on hypothesis generation, environmental health investigations, environmental specimen collection and initial control measures. Sufficient typing data to guide environmental health and disease control initiatives was generated in less than one week by combining automated ribotyping with PCR-based detection of L. monocytogenes in suspect foodstuffs and an L. monocytogenes DNA probe. There were no further cases of bacteriologically confirmed listeriosis in Western Australia for six months after completion of the investigation.     

Pulsed-Field Gel Electrophoresis, Conventional, and Molecular Serotyping of Listeria monocytogenes from Food Proficiency Testing Trials Toward an Harmonization of Subtyping at European Level

Abstract The European Union Reference Laboratory for Listeria monocytogenes (EURL for L. monocytogenes) coordinates a European network of 29 National Reference Laboratories (NRLs). Depending on a national decision, NRLs undertake food, environmental, and veterinary L. monocytogenes strain surveillance in their respective countries. In the framework of the PulseNet Europe network, two pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) subtyping proficiency testing (PT) trials were carried out in 2003 and 2006. The obtained data showed that PFGE profiles can be compared and exchanged between laboratories. However, no further PT trial had been performed since 2006. In this context, two PT trials were organized by the EURL to evaluate the ability of NRLs to perform conventional serotyping, molecular serotyping and PFGE subtyping. Eleven well-characterized isolates of L. monocytogenes were used: six and nine isolates were tested in 2009 and 2010, respectively. Three isolates were repeated between the two studies. In the 2010 panel, a strain was tested in duplicate, and two strains were related to the same epidemiological group. The strains were analyzed blind in different laboratories (17 in 2009 and 25 in 2010) using (1) their own in-house method for serotyping methods and (2) standardized protocols based on the PulseNet protocol for PFGE. For conventional serotyping, 86.0% in 2009 and 91.0% in 2010 of the serotypes obtained were in agreement with the EURL data. For molecular serotyping, 93.5% of the results in 2009 and 95.2% in 2010 matched the EURL data. For PFGE, 68.9% in 2009 and 81.7% of the combined AscI/ApaI profiles were indistinguishable from the EURL reference profiles. The variations observed could be attributed to slight standardization defaults or, in a few cases, to a failure in DNA extraction. These PT trials provided a valuable opportunity to improve the subtyping ability of NRLs and facilitate exchanges of subtyping data in the future.     

O157血清群大肠杆菌分子亚型的研究

目的：了解山东和福建两省不同来源的O157血清群大肠杆菌分子亚型和菌株间的相关性。方法：对1993－1996年间分离到菌株进行脉冲场电泳（PFGE），图象经计算机处理后进行聚类分析。结果：O157大肠杆菌染色体DNA用XbaI酶切后，经PFGE可生15－20条带，以90％的同源性作为界值，可将11株菌分成9个PFGE亚型，其中山东分离到的6株菌分成4个亚型，福建的5株菌分属5个亚型。结论：山东、福建的O157血清群大肠杆菌均存在多个克隆系。     

8类食品单核细胞增生李斯特菌流行特征及耐药性状研究

目的：了解扬州市8类食品中Lm污染状况、流行特征及耐药状况，为制定HACCP提供依据，以有效控制Lm的生物性危害。方法：从市场及宾馆饭店采集957份熟食、生肉制品、水产品等8类食品检测Lm，检出菌株以生化及PCR方法鉴定并做药物敏感试验。结果：共检出加43株，检出率为4．49％。其中熟肉制品检出率为9．62％，生肉制品为3．83％，蔬菜、牛奶、鲜鸡蛋及冰淇淋中未检出。17种抗生素中有9种抗生素出现了不同程度的耐药。结论：本市8种食品中存在一定程度Lm污染，以熟食污染率最高。生肉制品为食品链中Lm的主要来源，熟食是实施HACCP控制Lm的关键环节。Lm耐药现象在一定程度上存在。加强食品卫生管理尤其是熟肉制品的管理，控制动物饲料亚治疗抗生素的使用并严格遵守休药期对防止耐药菌株、控制食源性疾病很有必要。