Bcl-2、Bax与气道上皮细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡抑制基因(Bcl-2)、Bax是Bcl-2基因家族分别抑制和促进气道上皮细胞凋亡的结构相似、作用相反的一对胞内蛋白质,其比值决定细胞凋亡抑制作用强弱及气道上皮细胞凋亡的发生、发展方向.本文综述了Bcl-2、Bax基因及相关蛋白的特点,Bcl-2蛋白可能通过稳定线粒体膜发挥基质金属蛋白酶(MMP)的抑制效应抗气道上皮细胞凋亡,Bax作用于线粒体增加其外膜通透性促进气道上皮细胞凋亡及二者相互作用调节气道上皮细胞凋亡的机制.     

红霉素干预对体外培养人鼻息肉上皮细胞凋亡基因表达的影响

目的：观察红霉素对上皮细胞凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响,进一步探讨上皮细胞凋亡在鼻息肉组织形成中的意义。方法：将30例鼻息肉组织及6例下鼻甲组织的上皮细胞均分成两组,其中一组加红霉素（红霉素组）,进行原代上皮细胞的培养,另一组加蒸馏水（对照组）,以免疫组化法检测细胞凋亡基因Bax、抑凋亡基因Bcl-2。结果：鼻息肉上皮细胞Bcl-2和Bax表达均显著强于下鼻甲（均P〈0.01）;培养3d后鼻息肉上皮细胞红霉素组Bax表达显著强于对照组（P〈0.05）,Bcl-2表达虽强于对照组,但差异无显著性;下鼻甲上皮细胞红霉素组与对照组的Bcl-2与Bax阳性表达差异均无显著性（P〉0.05）;红霉素干预5d后鼻息肉上皮细胞显示明显的促凋亡趋势（P〈0.05）。结论：红霉素能显著提高Bax蛋白的表达,有显著的促鼻息肉上皮细胞凋亡的作用。     

结肠癌患者血清IL-8与抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bax的相关性研究

目的探讨结肠癌患者血清白细胞介素8(IL-8)与抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bax的关系。方法检测不同分期结肠癌患者血中的IL-8、肿瘤组织中的抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Bax的表达,并分析其中可能存在的关系。结果 C、D期患者血清IL-8、Bcl-2含量明显高于A、B期,D期患者IL-8含量明显高于C期;D期患者中Bax含量明显低于A、B、C三期患者,同时C期患者Bax含量明显低于A患者,但与B期患者无明显差异。相关性分析发现,IL-8与Bcl-2呈显著正相关,而与Bax呈显著负相关。结论 IL-8可能通过升高Bcl-2表达,同时抑制Bax的表达,使细胞凋亡受到影响,从而促进了结肠癌的进展。     

血必净对地塞米松诱导的T淋巴细胞凋亡及凋亡相关基因mRNA水平的影响

目的 观察血必净对地塞米松诱导的T淋巴细胞凋亡及凋亡相关基因mRNA水平的影响.方法 提取BAB/C小鼠睥脏T淋巴细胞并培养,观察血必净对T细胞增殖活性影响的MTT检测;以地塞米松诱导T细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Bax、Bcl-2、IL-2 mRNA表达水平,观察血必净对各项指标的影响.结果 血必净可明显提高T淋巴细胞的增殖活性;地塞米松诱导后T淋巴细胞凋亡率增加,Bax mRNA表达升高,Bcl-2、IL-2 mRNA表达下降.血必净干预后可降低T淋巴细胞凋亡,降低Bax mRNA表达,提高IL-2 mRNA表达.结论 血必净可通过降低促凋亡基因表达,提高IL-2表达而降低地塞米松诱导的T淋巴细胞凋亡.     

miR-204-3p靶向CYP2E1介导脂多糖诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的探讨miR-204-3p靶向细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)介导脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及细胞凋亡的分子机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,qRT-PCR与Western blot分别检测miR-204-3p、CYP2E1的表达量;实验分组:Con组、LPS组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-204-3p组、LPS+si-NC组、LPS+si-CYP2E1组、LPS+miR-204-3p+pcDNA组、LPS+miR-204-3p+pcDNA-CYP2E1组;ELISA检测IL-6、TNF-α的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-204-3p与CYP2E1的靶向结合关系;Western blot检测Bcl-2、Bax的表达量。结果与Con组比较,LPS组细胞中miR-204-3p的表达水平降低,CYP2E1的表达量升高,IL-6、TNF-α的水平升高,凋亡率和Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-204-3p组IL-6、TNF-α水平降低,凋亡率和Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS+si-NC组比较,LPS+si-CYP2E1组IL-6、TNF-α的水平降低,凋亡率和Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-204-3p能够靶向结合CYP2E1;与LPS+miR-204-3p+pcDNA组比较,LPS+miR-204-3p+pcDNA-CYP2E1组IL-6、TNF-α的水平升高,凋亡率和Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-204-3p过表达可靶向调控CYP2E1的表达从而抑制LPS诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及细胞凋亡。     

鼻用糖皮质激素对鼻息肉组织中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨局部糖皮质激素对鼻息肉组织中抑制凋亡基因Bcl-2和促进凋亡基因BaX蛋白表达的影响及意义。方法应用免疫组织化学方法检测Bcl-2蛋白和Bax蛋白在15例鼻息肉组织中的表达，并在鼻腔局部糖皮质激素治疗2周后观察其表达的变化。结果鼻息肉组织Bcl-2在使用激素后，表达明显减低，Bax蛋白在使用激素后，表达明显增加。结论鼻息肉细胞凋亡相关基因表达异常与鼻息肉的发生发展有一定关系，鼻腔局部糖皮质激素调节鼻息肉上皮细胞的相关凋亡基因，达到治疗鼻息肉和抑制鼻息肉复发的效果。     

Bcl-2和Bax调节细胞凋亡的研究

Bcl-2和Bax是凋亡调节基因Bcl-2家族的两个重要成员,二者可通过形成同源或异源二聚体来调节细胞凋亡。Bcl-2和Bax调节凋亡的机制与线粒体内信号传递系统、Bcl-2蛋白磷酸化和Bax转位有密切关系,并且,Myb、CREB、P53、Gif-1和WT1等多种基因均对Bcl-2的表达或功能具有调节作用。     

冠心病猝死者心肌细胞凋亡与Bcl-2和Bax 基因蛋白表达及其临床意义

目的：探讨Bcl-2和Bax基因蛋白在冠心病心脏性猝死者心肌细胞凋亡中的作用，为冠心病生物治疗提供理论依据。方法；用凋亡原位末端标记检测（TUNEL）法检测16例冠心病心性猝死者和10例心脏正常其他原因死亡者心肌细胞凋亡，用免疫组化法检测Bcl-2和Bax基因蛋白在心肌细胞中表达水平，并探讨其相互关系。结果：（1）冠心病心性猝死者梗死区心肌细胞凋亡数与Bax蛋白表达阳性细胞数均明显高于正常对照组（P〈0．05）；且于梗死区心肌细胞凋亡数及冠状动脉病变支数成明显正相关性。Bcl-2基因蛋白表达则与之相反，梗死区心肌细胞Bcl-2基因蛋白表达明显低于对照组（P〈0．05），且与梗死心区肌细胞凋亡数、冠状动脉病变支数成明显的负相关性。结论：冠心病心性猝死者梗死心肌细胞存在明显的凋亡现象，且受Bax蛋白与Bcl-2基因蛋白下调影响，Bax蛋白与Bcl-2蛋白共同调节心肌细胞凋亡，诱导心肌细胞表达Bcl-2将可能成为探索心肌生物治疗措施的新途径。     

酪丝缬肽诱导高转移性肝癌细胞HCCLM3凋亡及机制研究

目的：观察酪丝缬肽（tyroservatide,YSV）诱导高转移性人肝癌细胞HCCLM3的凋亡,分析YSV对肿瘤细胞凋亡相关基因Bax与Bcl-2的影响。方法：建立人肝癌细胞HCCLM3的体外培养体系,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测YSV对体外培养的HCCLM3的增殖抑制作用,流式细胞仪检测对照组与YSV剂量组的凋亡率,实时定量PCR法检测YSV对肝癌细胞中Bax与Bcl-2 mRNA表达,Western blotting检测YSV对Bax与Bcl-2蛋白表达的影响。结果：YSV可显著地抑制肝癌细胞HCCLM3的生长,当药物剂量10mg·L-1,作用72h时,抑制率为41.34%（P〈0.05）。YSV不同浓度组随着药物作用时间的延长肝癌细胞凋亡率呈升高趋势。实时定量PCR结果显示YSV能上调促凋亡基因Bax mRNA的表达,同时下调凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA的表达。Western blotting在蛋白水平上进一步证实了实时定量PCR的结果。结论：YSV可在基因及蛋白水平上调促凋亡基因Bax的表达,同时下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达,进而实现其诱导肝癌细胞HCCLM3的凋亡。     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

IL-21诱导SUDHL-4细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨IL-21对弥漫大B淋巴瘤(DLBCL)细胞系SUDHL-4细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 用不同浓度IL-21(终浓度1、10、100、1000 ng/m1)处理SUDHL-4细胞不同时间(24、48、72 h),用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率,绘制细胞增殖抑制曲线,计算Ic50值;用流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot法检测IL-21处理后SUDHL-4细胞caspase-9、caspase-3、cleaved caspase3、Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax和c-myc蛋白表达.用RT-PCR法检测Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax、c-myc和Survivin基因mRNA表达.结果 IL-21可明显抑制SUDHL-4细胞增殖,且呈时间.剂量依赖性,其48 h半数抑制浓度(1C50)为140.9 ng/ml.流式细胞术分析发现100.g/ml IL-21处理的SUDHL-4细胞48 h凋亡率(Annexin V-FITC+细胞率)明显增加[(19.7±2.3)%],同时caspase-9、caspase.3、Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达减低,均呈时问依赖性.cleaved caspase-3从48 h开始出现明显的剪切带;Bax和c-myc蛋白表达明显增高,而Bid蛋白表达变化不明显.RT-PCR检测显示IL-21上凋c-myc和Bax基因mRNA的表达,下调Bcl-2和Bci-XL基因mRNA的表达,Bid和Survivin基因mRNA表达变化不明显.结论 IL-21可抑制SUDHL-4细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用可能是通过c-myc和Bcl-2基因调节的线粒体途径实现.     

RPB5介导蛋白与HBx蛋白共表达对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的通过乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与RPB5介导蛋白(RMP)在肝癌Hep G2细胞中的共表达,探索RMP与HBx对肝癌细胞凋亡的影响。方法脂质体介导瞬时转染细胞;实时荧光定量RT-PCR和western blot分别检测RMP与HBx在肝癌Hep G2细胞中的表达量;流式细胞仪检测细胞凋亡率;逆转录PCR检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase3、P53、Bcl-2 mRNA相对表达水平,western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与未经任何处理的Hep G2细胞比较,转染RMP质粒的稳定表达HBx的Hep G2细胞中RMP、HBx在基因及蛋白质水平表达均显著升高(P0.01);细胞凋亡率显著降低;促凋亡基因Bax、Caspase3和P53 mRNA相对表达水平均显著下调(P0.01),凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA相对表达水平显著上调(P0.01);促凋亡蛋白Bax表达量明显降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显升高。结论 RMP与HBx共表达可降低肝癌Hep G2细胞凋亡率,提示RMP和HBx可能在肝癌发生和发展过程中起着重要的作用。     

Bax和Bcl2基因在单纯和放射复合伤口中的表达及与细胞凋亡和愈合延迟的关系

目的：研究Bax,Bcl-2基因在单纯和放射复合伤口愈合中的表达规律及与细胞凋亡和愈合延迟的关系。方法：用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡,用核酸原位杂交方法检测Bax,Bcl-2mRNA表达并定量分析。结果：（1）照射后细胞凋亡出现的频度及延续的时间明显高于单伤组;（2）伤口愈合过程中Bax,Bcl-2表达随着细胞凋亡的增加呈规律性改变;Bax表达明显增强,且与细胞凋亡发生有良好的相应关系;而Bcl-2呈明显下降趋势,结论：Bax和Bcl-2基因在放射复合伤口愈合细胞凋亡的调控和愈合延迟中起重要作用。     

肾移植急性排斥反应时Bcl-2/Bax及Fas/FasL蛋白表达的变化

背景：在器官移植急性排斥反应过程中，靶细胞的凋亡被认为是移植物功能丧失的主要作用途径之一。细胞凋亡受一系列分子调控，其中Bcl-2家族起着决定性作用；Fas系统介导的细胞凋亡亦在移植免疫中起十分重要的作用。 目的：分析移植肾发生急性排斥反应时Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白表达规律与急性排斥反应预后的关联。 设计、时间及地点：观察对比实验，于2002／2005在解放军总医院第二附属医院器官移植中心完成。 对象：收集肾移植术后发生急性排斥反应的移植肾穿刺活检蜡块标本30例；另选同期20例无明显排斥反应表现肾移植患者的移植肾穿刺活检蜡块标本作为对照组。 方法：应用免疫组织化学方法检测移植肾急性排斥反应穿刺活检标本中Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白的表达水平，并与对照组进行对比。 主要观察指标：急性排斥组和对照组移植肾穿刺活检标本中Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白的表达水平。结果：①Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白主要在肾小管上皮细胞中表达。②两组肾小管上皮细胞中Bcl-2表达水平差异无显著性意义（P〉0．05），急性排斥反应组肾小管上皮细胞中Bax，Fas及FasL蛋白表达水平均高于对照组（P〈0．05）。结论：在肾移植急性排斥反应中Bcl-2家族可能参与调控细胞凋亡，引起移植肾免疫损伤；Fas及FasL可能直接参与移植肾急性排斥反应，造成肾小管上皮细胞凋亡，引起移植肾免疫损伤。     

125Ⅰ粒子对小鼠S180肉瘤凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响

目的探讨^125I粒子对小鼠S180肉瘤凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法应用RT-PCR技术检测^125I粒子照射后肿瘤凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达。结果对照组Bcl-2mRNA奈带显著，实验组不明显；实验组Bax mRNA奈带显著，对照组不明显。2组Bax／β-actin与Bcl-2／β-actin比值差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论^125I粒子治疗肿瘤可能是通过Bcl-2和Bax基因在组织间表达的增减决定了凋亡率的高低，这可能是低剂量率放射线杀伤肿瘤重要途径之一。     

凋亡相关基因Bcl-2及Bax在糖尿病大鼠早期视网膜病变细胞凋亡中的作用

目的研究凋亡相关基因 Bcl- 2,Bax在早期糖尿病大鼠视网膜的表达,探讨其在糖尿病视网膜病变细胞凋亡中的作用. 方法选择健康成年 Wistar 大鼠 40只,随机分成正常对照( CON)、糖尿病 1个月( DM1)、 3个月( DM3)及 6个月( DM6)组.腹腔内注射链脲佐菌素( STZ)诱发大鼠糖尿病.制备大鼠视网膜石蜡切片行免疫组化 ABC法染色,并对染色结果进行计算机图像分析. 结果于 CON及 DM各组, Bax和 Bcl- 2二基因的蛋白均在视网膜血管表达,且随病程进展,其阳性反应强度逐渐增加.此外, Bcl- 2阳性反应在 DM3组于色素上皮细胞出现,在 DM6组,再进一步扩大到视杆内节和节细胞.而 Bax在 DM6亦出现于节细胞. 结论凋亡相关基因 Bcl- 2和 Bax在早期糖尿病大鼠视网膜血管和神经细胞的表达随病程的进展逐渐增强,二者在糖尿病视网膜细胞凋亡中起重要作用.     

Bcl-2/Bax与脊髓损伤

细胞凋亡在脊髓继发性损伤过程中起着关键性作用。Bcl-2是一个多基因家族,成员有15种之多,其中Bcl-2、Bcl-xL抑制细胞凋亡,而Bax、Bad、Bak、Bcl-xS促进其凋亡,Bcl-2和Bax是Bcl-2基因家族中最具代表性的基因,其比率决定细胞是否凋亡。近年来国内外通过调节Bcl-2/Bax的比例促进脊髓损伤修复的最新研究进展作一综述。     

miR-23b-3p靶向PALM3对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的研究miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的作用及机制。方法将肺泡上皮细胞A549细胞分为对照组、感染组、转染组、感染组+转染组;对照组A549细胞常规培养,感染组用1×108 CFU/mL肺炎链球菌培养A549细胞,转染组转染不同载体,感染组+转染组在A549细胞被肺炎链球菌处理前48h进行转染。qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和paralemmin-3(PALM3)mRNA的水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中PALM3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax),酶联免疫法(ELISA)检测肺炎链球菌诱导后细胞培养上清中白介素-6(interleukin 6,IL-6)和白介素-10(interleukin 10,IL-10)的含量;双荧光素酶报告系统验证miR-23b-3p与PALM3的关系。结果与对照组相比,感染组A549细胞中miR-23b-3p、IL-10、Bcl-2含量明显降低(P0.05),PALM3、IL-6、Bax水平及细胞凋亡率明显升高(P0.05);过表达miR-23b-3p和干扰PALM3表达均可抑制肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症;miR-23b-3p靶向负调控PALM3的表达;过表达PALM3逆转了过表达miR-23b-3p对肺炎链球菌诱导的A549细胞凋亡和炎症的作用。结论 miR-23b-3p靶向PALM3抑制肺炎链球菌诱导的A549炎症和细胞凋亡。     

黄芪当归合剂对大鼠缺血性急性肾损伤的保护研究

目的:探讨黄芪当归合剂对实验性缺血性肾损伤大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用.方法:建立大鼠实验性缺血性急性肾损伤模型,在缺血30 min再灌注不同时间点检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)和尿液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖酐酶(NAG).同时取肾组织,苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察细胞形态学变化.免疫组织化学方法检测Bcl-2和Bax基因的蛋白表达,观察黄芪当归合剂对上述表达的影响.结果:缺血性急性肾损伤时肾脏存在明显的细胞凋亡;Bcl-2和Bax基因的蛋白表达主要在近曲肾小管和远曲肾小管,肾小球很少;肾脏缺血性损伤时Bcl-2基因表达增加,Bax基因表达中量增加,Bcl-2/Bax比率升高.与缺血/再灌注组比较,黄芪当归合剂组Bax表达明显增加,Bcl-2/Bax比率降低,肾脏损伤亦减轻.结论:黄芪当归合剂对急性肾损伤具有显著的保护作用,其机制可能与其降低Bcl-2/Bax比率有关.     

NT-3对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡及脊髓损伤修复的作用

【目的】研究神经营养素-3（NT-3）对大鼠皮质脊髓束横断后神经细胞凋亡及脊髓损伤修复的影响及意义。【方法】健康Sprague-Dawley大鼠100只,分为损伤对照组（C组）和损伤NT_3注射组（NT-3组）。各组内分别行BBB评分、神经元中丝蛋白（NF）染色及RT—PCR检测Bax和Bcl-2基因表达的变化。【结果】①损伤后C组和NT-3组Bax及Bcl-2基因转录水平升高;②NT-3组与损伤对照组相比Bax基因转录水平下降而Bcl-2基因转录水平升高;③NT-3组NF平均灰度值小于C组。【结论】NT-3可能通过影响凋亡基因Bax和Bcl-2表达的变化对脊髓损伤起保护作用及修复促进作用。