黄芪口服液治疗病毒性心肌炎50例

50例(男31,女19;年龄37±9a)症状未恢复且有免疫失控的病毒性心肌炎患者经黄芪口服液(健心饮)15g;bid;治疗3-6mo后,α-干扰素效价明显升高。在46例中测得天然杀伤细胞活性亦明显增高。11例进行核素心血管造影,治疗后左室功能明显改善。另12例予维生素C,辅酶A,脱氧核糖核酸等一般治疗者则无上述效应。提示黄芪口服液有调节患者免疫失控及改善心功能的作用。     

α-干扰素治疗肝癌耐药性机制的研究

目的观察α-干扰素(IFN-α)治疗肝癌产生耐药性的过程,探讨其机制。方法裸鼠肝内原位接种裸鼠人肝癌高转移裸鼠模型LCI-D20肿瘤组织,随机分为7组,每组6只。其中治疗组于接种肿瘤后第2天皮下注射给予IFN-α(1．5×10~7 U/kg体重/d)20 d,治疗组A和B裸鼠于停药后第1和21天分别被处死；治疗组C和D于停药后第21天再次给予同剂量IFN-α(1．5×10~7 U/kg体重/d)联合格列卫(100mg/kg体重/d,灌胃)治疗20 d。对照组E～G分别在接种肿瘤后第28、48、68天被处死。观察裸鼠体重,肿瘤大小、体积,检测血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)浓度、肿瘤组织微血管密度。抽提A、D、E、G各组总RNA做关于血管生成SuperArray基因芯片。结果A～G组肿瘤的大小分别为0．27、1．54、3．22、2．23、0．68、1．93、3．98 g,其中组A和组E,组D和组G相比,肿瘤大小差异有统计学意义(P＜0．05)。外周血VEGF浓度组A和组E,组C、D和组G相比差异有统计学意义(P＜0．05)。芯片结果提示在IFN-α治疗过程中,肝癌组织VEGF mRNA和裸鼠血清中的VEGF仍保持较低水平,而PDGF-AA mRNA的表达水平逐渐升高。组A微血管密度显著低于组E,而在组C和组G间差异无统计学意义。HE染色显示治疗组与对照组相比,异常核分裂象增多,肿瘤周围包膜变薄,纤维成分减少。结论肝癌可对IFN-α治疗产生耐药性,可能的机制为肝癌肿瘤血管生成由VEGF依赖转化为PDGF依赖。     

鼠肝癌细胞的热休克蛋白诱导及其抗瘤机理研究

摸索鼠肝癌Ｈ２２细胞膜热休克蛋白７０最适的话导条件，并明确其体内外的抗瘤机理。方法用免疫荧光及ＦＣＭ光检测热休克Ｈ２２细胞膜ＨＳＰ７０蛋白的动态表达。并用ＭＭＣ灭活，热休克后的Ｈ２２细胞作抗原进行体内肿瘤免疫保护试验及体外肿瘤杀伤试验。     

热休克对H22细胞膜HSP70蛋白及其mRNA水平的影响

将IL-2或/和IFN-γ基因体内转染腹腔巨噬细胞(MΦ),其表达的基因产物能提高MΦ的细胞毒活性,并诱导MΦ分泌TNF、IL-1和NO等抗肿瘤免疫介质.激发机体的非特异性免疫功能而产生抗肿瘤效应,特别是IL-2和IFN-γ基因联合转染MΦ,其表达的基因产物既能使MΦ产生更强的细胞毒活性并分泌高水平的TNF、IL-1和NO,又能激活脾CTL细胞,从而激发机体的非特异性和特异性免疫功能,产生更强的快同抗肿瘤效应.结果表明,IL-2和IFN-γ基因转染MΦ较单基因转染具有更强的抗瘤效应     

α干扰素抑制肝癌转移复发及其机制

肝癌占全世界癌症死亡的第三位，是我国癌症死因的第二位。经过几十年的努力，肝癌研究取得了许多进展，在某些临床中心，肝癌根治性切除后5年生存率可达40％以上（本所治疗的肝癌患者的5年生存率在小肝癌切除术者中约为60％，大肝癌切除术者约为30％）。但术后5年复发率高达60％以上（小肝癌也达40％～50％）。转移复发已成为进一步提高远期疗效的瓶颈问题，     

肝癌患者粘附性LAK细胞制备及抗瘤活性研究

本研究在常规LAK细胞制备基础上进行改进，用苯丙氨酸甲酯(PME)去除肝癌患者外周血中抑制LAK细胞活性的单核巨噬细胞。制备抗癌活性较高扩增迅速的粘附性LAK细胞，从实验结果分析。外周血处理后粘附性LAK细胞较未粘性LAK细胞具有较强的扩增能力，最大扩增倍数23～243倍，同时粘附性LAK细胞中TH细胞亚群有增加趋势，Ts细胞亚群有碱少趋势，其IL-2R^ 表达增加至64．3%。此外,在抗瘤活性方面粘附性LAK细胞与非粘附性LAK细胞存在一定差别，分别为64．6%和42．8%．因此。从临床实用出发。制备相对高效的粘附性LAK细胞可以提高LAK疗法的治疗效果。     

肝癌MHCC97H细胞肝细胞生长因子(HGF)/c-Met通路激活对血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究肝癌MHCC97H细胞中肝细胞生长因子(HGF)诱导血管内皮生长因子(VEGF)表达过程中的转录因子Sp1的活性.方法:将MHCC97H细胞分为对照组、HGF组、光辉霉素组,分别用RT-PCR及Western blot分析与VEGF mRNA、蛋白质表达及Sp1水平、磷酸化Sp1水平变化以及应用Sp1阻断剂光辉霉素后上述目标蛋白的变化情况.结果:外源性HGF 60 ngmL-1孵育15 min、16 h后分别可以使MHCC97H细胞的VEGF mRNA及其蛋白质的表达明显提高(P<0.01).这一过程中Sp1水平无明显变化(P>0.05).进一步分析发现磷酸化Sp1水平明显升高(P<0.01).用Sp1抑制剂光辉霉素预先处理MHCC97H细胞1 h后,再加入HGF 60 ngmL-1VEGFmRNA及其随后蛋白质表达均受到抑制(P<0.01).结论:HGF诱导MHCC97H肝癌细胞VEGF表达是通过增强Sp1磷酸化实现的.     

靶向Arnt的RNAi慢病毒载体的构建及其在HCCLM6中对Arnt基因表达的影响

目的：构建并鉴定Arnt基因特异性RNAi慢病毒载体，将其导入HCCLM6肝癌细胞中，筛选有效抑制ARNT表达的稳定细胞株。方法：针对已经筛选确定的Arnt基因RNAi有效靶序列，合成靶序列的OligoDNA，退火形成双链DNA，与经HpaI和XhoI酶切后的pLVTHM载体连接[含U6启动子和绿色荧光蛋白（GFP）]产生LV-shArnt慢病毒载体，PCR筛选阳性克隆，测序鉴定。用LV—shArnt载体，pCMV—dR8．74载体，pMD2G载体三质粒共转染包装细胞293T细胞，包装产生慢病毒，以293T细胞GFP蛋白表达水平测定病毒滴度，挑选细胞克隆，收获病毒上清，将病毒上清转染HCCLM6中，经过GFP筛选得到稳定抑制Arnt表达的HCCLM6细胞株，通过RT—PCR鉴定抑制Arnt表达的效果。结果：双酶切与测序鉴定证实成功构建了ArntshRNA的慢病毒载体，转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了HCCLM6，并且抑制了Arnt的表达。结论：运用pLVTHM载体构建的LV—shArnt慢病毒载体可有效抑制Arnt在肝癌细胞株HCCLM6中的表达，为观察转染shRNA慢病毒表达载体的肿瘤细胞的恶性生物学行为变化奠定了实验基础。     

Janus激酶/信号传导子和转录激活子信号通路重建对MHCC97细胞干扰素α应答的影响

目的阐明原发性肝癌MHCC97细胞中Janus激酶/信号传导子和转录激活子信号通路对干扰素α抗肿瘤增殖作用的影响.方法用Dosper转染干扰素调节因子9（IRF9）表达质粒入MHCC97细胞;用Western blot和寡核苷酸迁移率实验分别检测肝癌细胞中IRF9、细胞周期调控蛋白和干扰素刺激基因因子3的表达;用四甲基偶氮唑盐和流式细胞术分别检测细胞的增殖水平及各期细胞的分布情况. 结果通过高表达IRF9因子可恢复MHCC97细胞对干扰素α抗增殖的应答能力,同时阻滞细胞由S期过渡到G 2期.结论完整的Janus激酶/信号传导子和转录激活子信号通路对介导干扰素α抗肝癌MHCC97细胞的增殖作用至关重要.