积雪草酸通过调节TLR4和PPAR-γ活性抑制内毒素诱导的血管平滑肌细胞炎症反应

目的观察积雪草酸(asiatic acid,AA)能否抑制内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)炎症反应,并探讨其作用机制。方法原代培养SD大鼠主动脉VSMCs;不同浓度AA干预后,采用MTT法测定VSMCs的活性;分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和real-time PCR检测IL-6、MCP-1、TNF-α蛋白及mRNA水平;Western blot和real-time PCR法测定TLR4和PPAR-γ的蛋白及mRNA的表达水平。结果当AA浓度在0~30μmol·L^-1范围内时,对VSMCs细胞活性无明显影响,当500μg·L^-1LPS刺激VSMCs后,IL-6、MCP-1、TNF-α、TLR4蛋白及mRNA水平明显升高(P<0.05),而PPAR-γ的表达明显降低(P<0.05);AA(10、20、30μmol·L^-1)对LPS诱导的VSMCs细胞IL-6、MCP-1和TNF-α蛋白及mRNA水平的降低作用呈浓度依赖性;此外,AA能浓度依赖性地抑制LPS诱导的VSMCs细胞TLR4 mR-NA和蛋白表达,且TLR4-siRNA能够起到与AA类似的抗炎作用。AA还可上调VSMCs细胞内PPAR-γmRNA和蛋白表达,而PPAR-γ拮抗剂GW9662则能够部分抵消AA的抗炎作用。结论AA能有效抑制LPS诱导的VSMCs细胞IL-6、MCP-1、TNF-αmRNA和蛋白表达,AA的抗炎作用可能与其下调TLR4表达和上调PPAR-γ活性作用相关。     

二苯乙烯苷对平滑肌细胞增殖及其抗氧化作用的影响

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)对血清诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响,并研究其相关机制。方法组织贴块法原代培养大鼠主动脉VSMCs,采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)参入法检测VSMCs增殖情况,乳酸脱氢酶(LDH)法检测药物对细胞毒性作用,流式细胞仪测定细胞周期,Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达,荧光法测定胞内活性氧(ROS)水平,酶生化法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性。结果 0.1~100μmol.L-1实验浓度的TSG无细胞毒性作用;10μmol.L-1和100μmol.L-1TSG可明显抑制血清诱导的VSMCs增殖,抑制细胞由G0/G1期向S期的转变,抑制血清诱导的VSMCs核内PCNA的蛋白表达,降低细胞内ROS含量;100μmol.L-1TSG能明显提高SOD、GSH-px活性。结论一定浓度的TSG能抑制血清诱导的VSMCs增殖,其机制可能与TSG影响细胞增殖周期、抑制PCNA的表达、提高VSMCs抗氧化能力有关。     

萘哌地尔抗大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的研究萘哌地尔(naftopidil,Naf)对去甲肾上腺素(noradrenalin,NA)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响并探讨其机制。方法培养的VSMCs经NA诱导其增殖,分别用MTT比色法和细胞计数法检测Naf对VSMCs增殖的影响;荧光法测定细胞内钙浓度([Ca2+]i)及Real-TimeRT-PCR检测c-myc、c-fos、高血压相关基因(hypertension related gene-1,HRG-1)mRNA的表达。结果萘哌地尔(10-7～10-6mol·L-1)能够抑制NA诱导的VSMCs增殖,并明显降低VSMCs[Ca2+]i,降低c-myc、c-fos mRNA表达,增加HRG-1 mRNA的表达。结论萘哌地尔明显抑制NA诱导的VSMCs增殖,作用机制可能与其降低VSMCs[Ca2+]i、拮抗NA上调c-myc、c-fos mRNA的表达和拮抗NA下调HRG-1 mRNA的表达有关。     

前列腺素E1抑制血管平滑肌细胞增殖的作用

目的从细胞周期蛋白和凋亡相关基因探讨前列腺素E1(PGE1)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的调控作用.方法采用培养的新生牛主动脉VSMC,以胎牛血清及白介素1(IL-1)分别作为促增殖剂,测定不同浓度PGE1对VSMC增殖、细胞内周期蛋白d1 mRNA表达、p53及Bcl-2基因表达和培养液内NO含量的影响.结果 PGE1浓度依赖性抑制胎牛血清促VSMC增殖作用;显著减少细胞周期蛋白d1 mRNA含量;浓度依赖性诱导IL-1孵育下VSMC产生大量NO, 同时抑制VSMC增殖;并促进p53基因表达,下调bcl-2基因,诱导细胞凋亡.结论 PGE1具有抑制VSMC增殖的作用,其机制可能与其阻滞VSMC生长有关;在炎性因子存在情况下,PGE1可诱导VSMC内大量产生NO,抑制VSMC增殖,并加速VSMC凋亡.     

半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察半胱氨酸(Cys)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响.方法 采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡.RT-PCR法检测bax mRNA的表达.结果 体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和10001μmol/L Cys的培养液中孵育24h后的吸光度(A)值均高于对照组(P<0.05),表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时.VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组(P<0.05),bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡.结论 浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡.     

葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖及凝血酶受体mRNA表达的影响

目的通过建立凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖模型,观察葛根素对凝血酶诱导的VSMC增殖的影响,并进一步观察其对凝血酶受体(TR)mRNA的表达有何作用,旨在认识葛根素的作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定法观察凝血酶及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。凝血酶及葛根素等各处理因素作用24h后,以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TRmRNA的表达。结果凝血酶对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24h末达峰,且凝血酶浓度在0.1U/L~1.0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成;高浓度(1.5×10-3mol/L)的葛根素可显著抑制凝血酶诱导的TRmRNA上调。结论葛根素抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这可能部分与其抑制TRmRNA表达有关。     

低剂量亚砷酸钠诱导人THLE-3细胞增殖hormesis效应与IL-6mRNA表达变化CSCD

目的 探讨低剂量亚砷酸钠诱导人THLE-3细胞增殖毒物兴奋(hormesis)效应与IL-6 mRNA表达改变。方法 常规培养THLE-3细胞至对数生长期,调整细胞浓度至2×105个/ml,分别运用较低浓度(0、1. 5、3和4. 5μmol/L)的亚砷酸钠处理各组细胞4 h;以CCK-8分析细胞增殖速度;以实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)分析IL-6 mRNA表达;以Pearson相关分析探讨细胞增殖及IL-6 mRNA表达与染毒浓度的关系。结果 随着亚砷酸钠浓度的升高,THLE-3细胞增殖增强,细胞IL-6 mRNA表达增加,二者与亚砷酸钠染毒浓度呈现正相关关系(r1=0. 6964,P1<0. 05;r2=0. 8756,P2<0. 05)。结论 低剂量亚砷酸钠能诱导THLE-3细胞增殖性状的hormesis效应,且IL-6 mRNA表达同时增加,二者与亚砷酸钠染毒浓度正相关。     

葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖及凝血酶受体mRNA表达的影响

目的通过建立凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖模型,观察葛根素对凝血酶诱导的VSMC增殖的影响,并进一步观察其对凝血酶受体(TR)mRNA的表达有何作用,旨在认识葛根素的作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定法观察凝血酶及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。凝血酶及葛根素等各处理因素作用24h后,以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TRmRNA的表达。结果凝血酶对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24h末达峰,且凝血酶浓度在0.1U/L～1.0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成;高浓度(1.5×10^-3mol/L)的葛根素可显著抑制凝血酶诱导的TRmRNA上调。结论葛根素抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这可能部分与其抑制TRmRNA表达有关。     

羟基红花黄色素A通过影响PCNA表达和MEK-ERK1/2信号通路抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的探讨羟基红花黄色素A(HYSA)影响增殖细胞核抗原(PCNA)表达和MEK-ERK1/2信号通路抑制血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的分子机制。方法采用贴块法培养大鼠血管平滑肌细胞,用血小板源生长因子(PDGF)诱导其增殖,采用MTT法检测HYSA对平滑肌细胞增殖的抑制作用;采用Western blot和免疫组织化学方法检测HYSA对PCNA表达及对MEK-ERK1/2信号通路的影响。结果HYSA浓度依赖性地抑制PDGF诱导的VSMC增殖,降低PCNA的表达,阻断PDGF受体的激活和MEK/ERK信号通路的活化,但不影响JNK和p38MAPK的活性。结论 HYSA通过降低PCNA表达和阻断MEK-ERK1/2信号通路抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

八肽胆囊收缩素通过p38MAPK通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达

目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对LPS诱导RAW264.7细胞IL-1β表达的影响及相关机制。方法用ELISA及RT-PCR法检测RAW264.7细胞IL-1βmRNA及蛋白表达;用Western blot检测RAW264.7细胞p38 MAPK的磷酸化水平。结果①LPS可时间依赖性的诱导RAW264.7细胞IL-1βmRNA及蛋白的表达,分别于刺激后3 h及6 h达到高峰;②10-10 mol.L-1 CCK-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达无影响;10-8、10-6 mol.L-1CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达;③10-10 mol.L-1 CCK-8未影响LPS诱导的p-p38MAPK水平,10-8、10-6 mol.L-1 CCK-8浓度依赖性地抑制了LPS诱导的p-p38 MAPK水平;④p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达,与CCK-8共同作用后,抑制作用进一步加强。结论 CCK-8通过抑制p38 MAPK磷酸化而抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞IL-1β表达,这可能是CCK-8发挥抗炎作用的信号转导机制之一。     

成骨细胞的功能与损伤和骨质疏松的防治

骨质疏松是一种全身性骨骼疾病,导致骨折风险增加。成人的骨量通过破骨细胞的骨吸收和成骨细胞的骨形成作用来维持动态平衡,治疗骨质疏松症的理想策略是抑制破骨细胞的骨吸收和/或增强成骨细胞的骨形成功能。目前针对保护成骨细胞及增强其功能的骨质疏松疗法相对较少。因此,本文针对成骨细胞相关功能蛋白、各种细胞损伤机制（内质网应激、氧化应激、机械过载、微小RNA和长链非编码RNA的影响等）及骨质疏松的治疗与预防作一综述,以期为针对增强成骨细胞功能的骨质疏松治疗策略提供新思路。     

CD44与肿瘤侵袭、转移及预后的关系

CD44是一种跨膜受体蛋白 ,属于黏附分子家族 ,可与透明质酸等配体结合 ,介导细胞与细胞、细胞与基质之间的黏附。近年来发现CD44及其变异体在许多肿瘤细胞中异常表达 ,且与肿瘤的发生发展及患者的预后存在着一定的关系 ,因此 ,可作为一个辅助性指标预测肿瘤的发展情况     

Seasonal variation of alkaloids of Adhatoda vasica and detection of glycosides and N-Oxides of vasicine and vasicinone

The distribution pattern of the alkaloids of A. Vasica has been studied with change of season. The study also resulted in the detection of glycosides and N-oxides of vasicine and vasicinone.     

PTEN和DNA含量与非小细胞肺癌侵袭转移的关系探讨

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中抑癌基因PTEN的表达和DNA含量与NSCLC侵袭、转移的关系.方法 采用免疫组织化学SP方法检测PTEN在78例肺癌标本中的表达,并用流式细胞术检测30例肺癌标本中DNA含量.结果:肺癌标本中PTEN蛋白总缺失率为42.3%,有淋巴结转移组和无淋巴结转移组肺癌表达缺失率分别为52.1%和26.7%(P＜0.05),其表达缺失率随TNM分期增加而上升,分期越晚表达缺失率越高.PTEN缺失率高者生存时间短.DNA指数(DI)的分布范围在1.04～1.93.异倍体肿瘤24例,DI值随TNM分期增加而增加(P＜0.05),与淋巴结转移呈正相关.结论 肺癌组织中PTEN的表达与肺癌淋巴结转移有显著相关性,肺癌细胞DNA含量与肺癌TNM分期及淋巴结转移密切相关.检测PTEN蛋白表达和DNA含量将有助于判断肺癌的转移及预后.