环磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型建立与评价

目的 建立环磷酰胺致免疫低下模型,应用流式细胞术检测小鼠自然杀伤细胞(NK)细咆分化抗原CD69 /自然杀伤细胞G2D受体(NKG2D )和T淋巴细胞分化抗原CD69 /CD3 评价其免疫低下动物模型中的应用.方法 以环磷酰胺强化注射、少量多次注射、一次大剂量注射分别建立免疫低下模型,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69 /NKG2D 和外周血T淋巴细胞CD69 /CD3 亚群,同时进行脾NK细胞活性测定,ConA诱导的小鼠脾淋巴细咆转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响.结果 环磷酰胺强化注射、少量多次注射均可使小鼠外周血和牌的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细咆转化增殖能力、脾NK细胞活性降低.结论 环磷酰胺强化注射可以长时降低小鼠细胞免疫功能的作用,适用于建立长期免疫低下模型;流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在免疫调节功能评价中有较好应用价值.     

CD69+/NKG2D+比值在保健食品评价中应用

目的研究小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)细胞分化抗原CD 69+/NKG2D+检测在保健食品免疫调节作用评价中的应用.方法以左旋咪唑25mg(kg·bw)连续灌胃3 d设立左旋咪唑阳性对照;进行小鼠外周血自然杀伤细胞(NK)亚群CD69+/NKG2D+检测和脾NK细胞活性测定试验,观察0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉对小鼠NK细胞免疫功能的影响.结果与阴性对照组比较,左旋咪唑对照组和0.83,1.67g/(kg·bw)剂量组蛋白粉剂量组外周血NK细胞CD69-/NKG2D+、CD69+/NKG2D+比值以及脾NK细胞活性均明显升高.结论外周血NK细胞CD69+/NKG2D+检测与传统的NK细胞免疫检测结果有较好一致性,且方法敏感性较好,在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值.     

免疫低下模型的建立及流式细胞术的检测研究

目的：探讨环磷酰胺致免疫低下模型的建立,并试图研究应用流式细胞术检测小鼠自然杀伤细胞（NK）和T淋巴细胞的应用。方法：以环磷酰胺强化注射、少量多次注射、一次大剂量注射分别建立免疫低下模型,30 d后处死,取外周血和脾,分别检测小鼠外周血自然杀伤细胞（NK）亚群和外周血T淋巴细胞亚群,同时进行脾NK细胞活性测定、ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验,观察环磷酰胺对外周血T淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。结果：环磷酰胺强化注射、少量多次注射均可使小鼠外周血和脾的活化的NK细胞和T淋巴细胞比例及T淋巴细胞转化增殖能力、脾NK细胞活性降低。结论：环磷酰胺强化注射可以长时降低小鼠细胞免疫功能的作用,适用于建立保健食品免疫低下模型;流式细胞术检测T淋巴细胞和NK细胞分化抗原在保健食品免疫调节功能评价中有较好应用价值。     

胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能的变化及临床意义

目的检测胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能的变化,探讨其与胃癌新临床病理分期(TNM)及组织病理学分级的关系。方法流式细胞仪测定胃癌患者及正常对照组外周血淋巴细胞亚群及NK细胞数量。结果胃癌患者外周血CD3+、CD4+、NK、CD19+细胞数量及CD4+/CD8+比值较正常对照组明显下降(P<0.01),而CD8+细胞水平显著升高(P<0.01)。Ⅲ～Ⅳ期患者的CD3+细胞数、CD4+/CD8+比值、NK细胞数降低(P<0.05)。胃癌组织的分化程度与细胞免疫功能无明显相关性。结论胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能低下,且临床病理分期越晚,其免疫功能越低。检测淋巴细胞亚群、NK细胞可用于胃癌患者的免疫状态监测。     

鼻咽癌患者外周血T细胞亚群及活化T淋巴细胞的检测及放疗后对其变化的影响

目的:探讨用流式细胞仪检测鼻咽癌(NPC)患者外周血T细胞亚群及活化T淋巴细胞的检测及放疗后对其变化的影响。方法:用双色直标的免疫荧光试剂,采用流式细胞术检测30例正常人,128例NPC患者外周血在细胞膜受体上的表达。结果:126例NPC患者外周血T细胞亚群中的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值明显下降,CD8+升高,导致NPC患者免疫功能紊乱,特别是细胞免疫功能明显低下,放疗后肿瘤有复发或转移者CD4+、CD4+/CD8+也有明显的下降。NPC患者的活化淋巴细胞CD3+/HLA—DR、CD8+/HLA—DR的含量明显高于正常对照组活化T淋巴细胞的含量(P<0.01)。结论:用流式细胞术检测T细胞亚群及活化T淋巴细胞,对NPC患者的免疫功能状况,放疗对免疫功能的影响,对NPC放疗后复发及转移的可能性判断有一定的临床意义。     

T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞及B淋巴细胞的变化对肝癌家族聚集性影响的研究

目的通过对肝癌高发家族成员外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及B淋巴细胞的检测,探讨机体免疫状态在肝癌发生及家族聚集中的作用,为临床治疗提供参考依据。方法收集2008年3月-2013年3月以配对方法选取广西肝癌高发区的33个肝癌高发家族及59个无癌家族成员作为研究对象;利用流式细胞术检测两组成员外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞的频数表达,采用SPSS16.0统计软件进行数据分析。结果与无癌家族相比,肝癌高发家族成员外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞、CD4+/CD8+比值、NK细胞明显降低;CD8+T淋巴细胞和B淋巴细胞明显升高;分层分析发现肝癌高发家族成员中肝癌患者、HBsAg阳性的家族成员的CD4+T淋巴细胞、CD4+/CD8+比值、NK细胞均低于对照组,而未患肝癌的高发家族成员和HBsAg阴性的高发家族成员的CD4+T淋巴细胞、CD4+/CD8+比值、NK细胞也低于对照组。结论肝癌高发家族成员存在细胞免疫功能低下,促进肝癌的发生并呈家庭聚集,这些变化在肝癌发生前已存在,可能为遗传因素引起。     

肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的研究肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群的水平及变化特点。方法采用流式细胞技术,对41例肺癌患者术前检测外周血T淋巴细胞亚群水平,并与50例健康献血者作对照研究。结果与对照组比较,肺癌患者CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞减少,CD4+/CD8+降低,差异均有统计学意义(P均<0.01)。淋巴细胞亚群变化与分期相关:Ⅰ期肺癌患者T淋巴细胞亚群未见明显抑制;Ⅱ期CD3+、CD4+、CD8+和NK细胞减少,但较Ⅰ期差异无统计学意义;Ⅲ期肺癌患者所有亚群均降低,分别与Ⅰ期和Ⅱ期比较,差异均有统计学意义;随着分期增加,CD4+/CD8+明显降低,各期之间差异均有统计学意义。淋巴结转移组NK细胞和CD4+/CD8+均明显低于无淋巴结转移组,差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论肺癌患者存在免疫功能低下,免疫功能随着肿瘤的进展进一步受到削弱。     

乳腺癌患者外周血T细胞亚群与NK、NKT细胞检测的临床意义

目的:检测乳腺癌患者外周血T淋巴细胞亚群及NK、NKT细胞表达率的变化,探讨乳腺癌患者免疫状况与肿瘤分期的关系以及免疫指标变化在治疗前后的临床价值。方法 :采用荧光标记法与多参数流式细胞仪检测40例正常女性和120例乳腺癌患者的总T淋巴细胞(CD3+)、T辅助/T诱导细胞(CD3+CD4+)、T抑制/细胞毒细胞(CD3+CD8+)、自然杀伤细胞(NK)、NK样T细胞(NKT)的表达率,并进行统计学分析。结果:无淋巴结转移组乳腺癌患者治疗前CD3+、CD3+CD4、CD3+CD8+、CD4+/CD8+与对照组比较无统计学意义,NK、NKT显著低于对照组(P<0.05)。淋巴结转移组乳腺癌患者CD3+、CD3+CD4、CD3+CD8+、NK、NKT表达率均明显低于对照组(P<0.05)。经过综合治疗后乳腺癌组各项免疫指标均恢复到正常值。结论:外周血T细胞亚群的检测对判断乳腺癌患者的病情、临床分期有一定意义;经过治疗后能够有效地改善乳腺癌患者的免疫状态。     

苯作业工人外周血淋巴细胞亚群分析

为了解长期低浓度苯作业对机体免疫功能的影响,笔者应用流式细胞术测定了苯作业工人外周血淋巴细胞亚群,包括T淋巴细胞、CD4+ -T 细胞(CD4+)、CD8+-T细胞(CD8+)、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)的绝对值及百分比含量,结果报告如下.     

手术前后卵巢癌患者外周血T细胞亚群及CD4~+CD25~+调节性T细胞表达及临床意义

目的:探讨手术前后卵巢癌患者外周血T细胞亚群及CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测80例卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及CD4+CD25+调节性T细胞水平。结果:与对照组相比,卵巢癌患者外周血中CD3+,CD4+,CD4+/CD8+比值及NK细胞含量均降低(P0.05),CD8+升高(P0.05);随着疾病进展Ⅲ期+Ⅳ期与Ⅰ期+Ⅱ期比较CD3+,CD4+,CD4+/CD8+比值及NK细胞含量均降低(P0.05),CD8+升高(P0.05)。卵巢癌患者外周血CD4+CD25+细胞比例高于正常对照组(P0.05);手术后卵巢癌患者T细胞亚群比例与术前比较并未明显恢复(P0.05),但CD4+CD25+调节性T细胞水平有所恢复(P0.05)。结论:卵巢癌患者免疫功能低下,术后短期并不能恢复,CD4+CD25+调节性T细胞水平升高,术后明显恢复,提示其在免疫耐受中起重要作用。     

HIV/AIDS患者T淋巴细胞HLA-DR抗原表达分析

目的:研究HIV/AIDS患者外周血T淋巴细胞HLA-DR抗原的表达,探讨其临床意义。方法:用流式细胞仪检测71例HIV/AIDS患者和40例健康体检者外周血T淋巴细胞亚群及各亚群HLA-DR抗原百分比(HLA-DR+CD3+/CD3+、HLA-DR+CD4+/CD4+、HLA-DR+CD8+/CD8+)。结果:①与对照组相比,HIV组和AIDS组的CD3细胞、CD4细胞、CD8细胞HLA-DR抗原百分比均显著高于对照组;AIDS组的CD3细胞、CD4细胞HLA-DR抗原百分比均显著高于HIV组。②HIV/AIDS患者CD3细胞、CD4细胞HLA-DR抗原百分比均与CD4细胞数负相关,相关系数分别为r=-0.392(P<0.01)、r=-0.619(P<0.01)。结论:HIV/AIDS患者T淋巴细胞持续紊乱,测定T淋巴细胞HLA-DR抗原表达有助于评价HIV/AIDS患者的免疫状况以及疾病的进程。     

急性氯化氢气体中毒患者外周血淋巴细胞亚群的变化

目的 探讨急性氯化氢气体中毒患者外周血淋巴细胞亚群的变化,为临床治疗提供依据.方法 采用美国BD公司生产的FACSCalibur流式细胞仪检测37例急性氯化氢气体中毒患者入院当日或次日淋巴细胞亚群总T细胞(CD3+CD19-)、CD4+T细胞(CD3+CD4+)、CD8+T细胞(CD3+CD8+)、B细胞(CD3-CD19+)和NK细胞(CD3-CD16+CD56+)百分数及CD4+/CD8+比值;并与健康体检的49名健康人进行对照分析,观察淋巴细胞亚群的变化.结果 急性氯化氢气体中毒患者总T细胞百分数及CD4+T细胞百分数明显低于健康组,差异有统计学意义(P＜0.05);CD8+T细胞百分数与健康组的差异无统计学意义(P＞0.05);NK细胞及B淋巴细胞百分数明显高于健康组,差异有统计学意义(P＜0.05);CD4+/CD8+比值明显低于健康组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 急性氯化氢气体中毒患者外周血淋巴细胞亚群水平存在异常,提示急性氧化氢气体中毒患者免疫功能受到影响.     

SLE患者外周血中淋巴细胞亚群的变化及临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中淋巴细胞亚群的变化及临床意义。方法采用流式细胞术检测30例活动期SLE患者、30例缓解期SLE患者及30名正常人的外周血T淋巴细胞(CD3+)及其亚群CD3+CD4+(CD4+)、CD3+CD8+(CD8+)、CD19+和CD16+56+(NK)细胞,并对结果进行比较。结果活动期SLE患者与对照组比较,CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+比值、NK细胞降低(P<0.05),CD8+、CD19+增高(P0.05)。缓解期SLE患者各亚群与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。活动期SLE患者与缓解期SLE患者比较,CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+比值、NK细胞降低(P<0.05),CD8+、CD19+增高(P0.05)。结论 SLE患者活动期淋巴细胞亚群存在异常,细胞免疫功能异常,外周血淋巴细胞亚群分析有助于了解SLE患者免疫功能紊乱的状况。     

食管鳞癌患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的 研究食管鳞癌患者外周血T淋巴细胞亚群的变化特点.方法 采用流式细胞技术,对108例食管鳞癌患者(食管鳞癌组)术前检测其外周血T淋巴细胞亚群水平,并与50例健康献血者(对照组)对比,分析食管鳞癌患者T淋巴细胞亚群的变化特点.结果 (1)与对照组比较,食管鳞癌组患者外周血CD3+、NK细胞水平差异无统计学意义(P=0.890;P=0.320);CD4+和CD8+水平显著增高(P=0.001;P《0.001),由于CD8+增高的程度大于CD4+增高的程度,使得CD4+/CD8+较对照组降低(P《0.001).(2)早期食管鳞癌患者外周血CD4+/CD8+低于对照组,但差异无统计学意义(P=0.112);中晚期食管鳞癌患者CD4+/CD8+进一步降低,与对照组比较差异有统计学意义(P《0.001),但与早期食管鳞癌患者相比,差异无统计学意义(P=0.218).(3)有淋巴结转移食管鳞癌患者CD4+和CD4+/CD8+均低于无淋巴结转移患者(P均《0.001),CD8+和NK细胞均高于无淋巴结转移患者,差异均有统计学意义(P=0.002;P=0.005).结论 食管鳞癌患者存在免疫功能低下,随着肿瘤的进展免疫功能进一步受到削弱;监测CD4+/CD8+的变化可作为食管鳞癌病情进展的标志之一.     

淋巴细胞亚群在肾病综合征外周血分布异常的临床研究

目的 探讨肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)患者与健康者外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及自然杀伤(NK)细胞的分布及临床意义。方法 收集2017年8月-2018年6月在浙江省人民医院住院的65例肾病综合征患者和65例体检健康者的外周血,采用外周血和荧光标记抗体共同孵育的方法,用流式细胞技术检测CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群、CD19+B淋巴细胞、NK细胞的分布频率。结果 65例NS患者中的CD3+、CD8+T淋巴细胞频率显著高于65例健康者(P 0. 05),NK细胞频率显著低于健康者,上述差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论 CD3+、CD8+T淋巴细胞及NK细胞在评估肾病综合征患者免疫功能中具有重要作用。     

痛风患者外周血淋巴细胞亚群分布异常的临床研究

目的研究痛风患者与健康人外周血中B淋巴细胞、T淋巴细胞及自然杀伤(NK)细胞有无差异及临床意义。方法收集浙江省人民医院2017年5月-2018年5月的57例痛风患者和57例体检对照组的流式抗凝血,采用外周血和荧光标记抗体共同孵育的方法,使用BD FACSCantoⅡ流式细胞仪检测CD4~+、CD3~+、CD19~+B淋巴细胞、NK细胞及CD8~+T淋巴细胞亚群的分布频率。结果痛风组中NK细胞频率明显低于对照组(P 0. 05),CD3~+T、CD4~+T淋巴细胞频率显著高于对照组(P 0. 05)。结论 CD3~+T、CD4~+T淋巴细胞及NK细胞在评估痛风患者免疫功能中差异有统计学意义。     

流式细胞术在保健食品功能评价中的应用

目的 建立保健食品增强免疫力功能评价指标的流式细胞术检测方法,并初步评价其应用价值。方法 3种受试物蛋白粉、参茸膏和灵芝虫草菌丝体小鼠实验模型的实验剂量组均按人体推荐量的5、10、30倍进行灌胃,阴性及阳性对照组均给予等量纯净水,阳性对照组为给药结束前3d开始每天灌胃给予25mg／kg左旋咪唑,并于给药结束当天用2％绵羊红细胞进行免疫;大鼠实验模型采用拌饲法按人体推荐量的25、50倍给予受试物;实验结束后同步检测以下指标：（1）传统指标：包括刀豆素A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、小鼠脾自然杀伤（NK）细胞活性测定、绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。（2）流式细胞仪检测指标：小鼠外周血淋巴细胞计数,大、小鼠T、NK细胞表面活化抗原检测以及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球功能。结果 给予受试物蛋白粉后,0．83、1．67、5．01g／kg剂量组小鼠T、B淋巴细胞的相对比例和绝对数量与阴性对照组间差异无统计学意义;给予受试物参茸膏后,3．75、7．50和15．0ml／kg剂量组的小鼠外周血T淋巴细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,与其他传统检测指标有良好一致性;蛋白粉0．83、1．67g／kg剂量组小鼠外周血NK细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,且与NK细胞活性测定结果有良好一致性;给予1．50g／kg剂量灵芝虫草菌丝体的大鼠外周血NK细胞CD25表达阳性比例较阴性对照组升高;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能实验：传统检测方法未发现对照组与剂量组有明显差别,而流式细胞术检测结果显示：灵芝虫草菌丝体0．15、0．30和0．90g／kg剂量组总吞噬比例增加,0．30、0．90g／kg剂量组吞噬指数均提高。结论 应用流式细胞术检测保健食品增强免疫力功能指标,与传统方法检测结果具有良好一致性,且具有更高的敏感性,在检测和评价保健食品增强免疫力功能方面具有良好的应用价值,值得进一步研究和推广。     

淋巴细胞亚群检测在重症肺炎治疗及预后评估中的意义

目的探讨淋巴细胞亚群检测在重症肺炎治疗及预后评估中的意义。方法采用多参数流式细胞术检测重症肺炎患者及对照组患者外周血T细胞(CD3~+)、Th细胞(CD3~+CD4~+)、Tc细胞(CD3~+CD8~+)、Th/Tc(CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+)、B细胞(CD19~+)、NK细胞(CD16~+56~+)的水平,并比较重症肺炎患者与对照组的差异以及好转患者治疗前后淋巴细胞亚群水平的变化。结果重症肺炎患者与对照组相比,T细胞、Th细胞及B淋巴细胞水平差异有统计学意义(P0.01);而Tc细胞、Th/Tc及NK细胞差异无统计学意义。在重症肺炎患者Th细胞治疗后水平增加,差异有统计学意义(P0.05);其他亚群变化差异无统计学意义。结论重症肺炎患者细胞免疫功能低下,体液免疫激活;监测重症肺炎患者淋巴细胞亚群水平,对评价患者的免疫功能及治疗和预后判断有指导意义。     

肺炎链球菌感染患儿细胞免疫功能分析

目的了解肺炎链球菌(SP)感染的肺炎患儿细胞免疫功能变化情况,以便临床合理使用免疫调节剂。方法采用流式细胞仪检测方法,对2012年1月-2013年2月本院小儿科收治的158例SP感染患儿的外周血进行T细胞亚群、B淋巴细胞以及NK细胞进行测定。另选同期来院做健康体检的儿童40例为对照组。结果 158名SP感染患儿外周血中CD3+、CD4+T淋巴细胞明显降低、CD8+T淋巴细胞明显增高、CD4+/CD8+比值明显下降,CD19+B淋巴细胞较对照组高,NK细胞则比对照组低,差异均有统计学意义(P0.01)。结论 SP感染的肺炎患儿体内细胞免疫功能降低,临床上治疗SP感染患儿时,在抗感染的同时适当应用免疫调节剂,可有效防止并发症的发生,提高疗效,缩短病程。     

复治结核病患者外周血中淋巴细胞亚群变化及其临床意义

目的 观察结核病患者外周血中T淋巴细胞亚群的数量变化,探讨其在结核病诊断和治疗中的价值.方法 采用流式细胞术检测80例复治肺结核患者外周血中T淋巴细胞亚群,并与正常健康人进行比较.结果 结核病患者CD3+、CD4+和CD8+T细胞绝对值明显低于正常人(P＜0.01).结论 复治肺结核病患者免疫功能低下,通过T淋巴细胞亚群的检测可以监控患者的免疫状态,从而对免疫治疗提供依据.