慢性肝病患者乙型肝炎病毒BCP变异对HBV DNA复制水平影响的研究

目的探讨乙型肝炎病毒慢性感染中C基因启动子(BCP)变异对HBV DNA复制水平的影响及其临床意义。方法采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,检测74例乙型肝炎病毒慢性感染者BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764碱基G→A联合突变。结果在74例乙型肝炎病毒慢性感染者中检出BCP区T1762 A1764突变24例(32.4％),BCP变异阳性组的HBV DNA含量(10~(8.2992±0.8665)拷贝/ml)显著高于BCP变异阴性组的含量(10~(7.1737±1.1539)拷贝/ml ) P<0.001)。结论 BCP变异可引起HBV致病力增强,复制水平提高。     

HBeAg阴、阳性慢乙肝患者细胞免疫状态及HBVDNA水平分析

目的 对比HBeAg阴性及HBeAg阳性慢性乙肝患者在细胞免疫状态及HBV DNA水平方面的差别,分析造成这种差别的可能原因.方法 应用流式细胞仪进行T淋巴细胞分类检测、荧光定量PCR测量血清中的HBVDNA.结果 在HBVDNA水平方面,HBeAg阴性慢性乙肝患者均值为(5.13±1.43)Log,显著低于HBeAg阳性组的(6.29±1.70)Log(P＜0.05);在T淋巴细胞分类方面,HBeAg阴性慢性乙肝患者CD8 T显著高于HBeAg阳性患者,分别是:23.25±3.79和20.69±3.30(P＜0.05),总T、CD4 T及CD8 /CD8 比值方面两组无明显差别(P＞0.05).结论 HBeAg阴性慢性乙肝患者HBV DNA水平低于HBeAg阳性患者,可能与HBeAg阴性慢性乙肝患者具有相对较强的细胞免疫状态有关.     

TGF-β1和smad 4mRNA在慢性病毒性肝炎、肝硬化组织中的表达及意义

应用免疫组化和原位杂交方法，对10例对照肝组织，70例慢性病毒性肝炎、肝硬化肝组织TGF-β1和smad4mRNA的表达进行检测，结果TGF-β1和smad4mRNA在慢性病毒性肝炎肝硬化中的表达明显增强，smad4mRNA阳性率分别为87．5％、82．6％，TGF-β1阳性率分别为83．33％、86．96％；TGF-β1和smad4mRNA阳性表达细胞在肝组织切片中的分布多集中在扩大的汇管区、中央静脉及窦周周围(间质细胞及肝细胞内均见有表达)，提示TGF-β1与smad4mRNA的表达与肝纤维化活动状态密切相关，TGF-β/smad通路在肝纤维化的形成和发展中具有重要意义。     

HLA-DRB1*07,13等位基因对乙肝疫苗免疫效果影响的研究

目的:探讨机体HLA-DRB1*07,13等位基因对基因重组乙肝疫苗免疫效果的影响.方法:选取完成基因重组乙肝疫苗全程接种(10 μg/次,0、1、6月)的广西籍汉族健康大学生896名,于末次接种疫苗后的第6个月采血检测血清抗-HBs水平,对无或低应答者再次接种基因重组乙肝疫苗20 μg,4周后筛选出无或低应答者99名及初次检测中或强应答者136名作为研究对象,应用PCR-SSP技术对研究对象外周血HLA-DRB1*07,13等位基因进行检测.结果:HLA-DRB107在无或低应答组中的表达频率为16.16%,显著高于中或强应答组的表达频率(4.41%)(P＜0.05);HLA-DRB1*13在无或低应答组和中或强应答组的表达频率分别为1.01%和3.68%,两组比较无统计学差异(P＞0.05).结论:基因重组乙肝疫苗无或低应答与HLA-DRB1*07基因密切相关;而HLA-DRB1*13对乙肝疫苗的免疫应答无明显影响.     

终末期肝病模型对肝衰竭的近期预后价值

目的探讨终末期肝病模型(model for end-stage liver disease,MELD)评分系统对急性肝衰竭患者近期预后的价值。方法检测115例急性肝衰竭患者的肝、肾功能及凝血项,计算MELD评分,并随访90d的生存率,比较存活组与死亡组MELD分值,并观察分析不同预后患者入选后30d时MELD分值的动态变化。结果 115例急性肝衰竭患者中,死亡组基线MELD分值明显高于存活组,且基线MELD分值越高,病死率越高。死亡组入选后30d的MELD分值较基线MELD分值升高,存活组入选后30d的MELD分值较基线MELD分值下降。结论 MELD评分系统可以作为预测急性肝衰竭患者预后较客观的指标。纵向评估MELD分值的动态变化可以较客观地反映急性肝衰竭的进展。     

HLA-DRB1*11、14等位基因对广西乙肝相关性肝病的影响

目的:探讨HLA-DRB1*11、14等位基因多态性与广西乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)感染相关性肝病的关系.方法:选取HBV感染相关性肝病患者320例作为研究对象,选择150例正常人作为对照组,应用聚合酶链反应/序列特异性引物(polymerase chain reaction/sequence specific primer,PCR-SSP)方法检测HLA-DRB1*11、14等位基因频率,分析其与HBV感染相关性肝病的关系.结果:在HBV携带者(chronic asymptomatic hepatitis B virus carrier,ASC)、慢性病毒性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)、肝炎肝硬化(liver cirrhosis,LC)、原发性肝细胞癌(hepatocellularcar cinoma,HCC)组中,HLA-DRB1*11的基因频率分别为4.0%、8.6%、18.9%、5.0%,与正常组(7.3%)比较,LC组P=0.009;HLA-DRB1*14的基因频率分别是36.0%、30.7%、32.2%、35.0%,与正常组(19.3%)比较,P值分别为0.016、0.025、0.024、0.035.结论:(1)HLA-DRB1*14是ASC、CHB、LC、HCC的易感基因;(2)HLA-DRB1*11是乙肝肝硬化的易感基因.     

一维凝胶电泳图谱数字化定量比较法的建立及验证

目的探讨凝胶定量软件Quantity One用于血清差异蛋白质组学研究的可行性。方法运用凝胶成像系统中的定量软件Quantity One对各电泳图上的各条带进行定量分析,将图形结果转换为数据结果;用上述技术分别对健康体检者和肝癌病人各32份除高丰度蛋白的血清电泳图进行分析,验证该研究方法的可行性。结果两组间有10个条带差异具有统计学意义（P〈0.05）。通过文献检索,其中9条找到相对应分子量的HCC标志物。结论凝胶定量软件QuantityOne可量化处理电泳条带的分子量和灰度;一维凝胶电泳技术可用于血清差异蛋白初期比较研究。     

IL-1β表达水平与广西肝癌家族聚集性的相关性

目的:探究血清中细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)含量与广西肝癌流行区壮、瑶族肝癌家族聚集性的关系。方法:在广西肝癌流行地域收集肝癌高发120例作为实验组,选择近似相同生活背景、民族、HBs Ag、性别、年龄相距±5岁的120例无癌家族成员为对照组,应用酶联免疫吸附(ELISA)技术检测两组共240例受检者外周血清IL-1β含量。结果:不管从总体水平还是从民族、HBs Ag携带情况、性别、年龄层面进行对比分析,实验组IL-1β含量均明显高于对照组,差异有统计学意义(P均0. 05)。实验组中,先证者不同级别亲属之间IL-1β的含量差别无统计学意义(Z=1. 648,P=0. 642)。实验组中有2～3个肝癌先证者与有4个及以上肝癌先证者的家族成员外周血IL-1β含量相比较,差异无统计学意义(Z=-1. 331,P=0. 183)。结论:实验组入选者血清IL-1β因子检测含量明显高于对照组,促炎因子IL-1β高水平表达与广西的壮、瑶族肝癌家族聚集性存在关联性,IL-1β过量表达可能是肝癌高发家族成员罹患肝癌的易感因素之一。     

慢性重型肝炎患者乙型肝炎病毒C基因启动子变异与病毒载量及细胞因子的关系

目的研究慢性重型肝炎患者乙型肝炎病毒C基因启动子(HBV BCP)变异与病毒载量(HBV DNA)及细胞因子关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)微板核酸杂交结合酶联免疫吸附测定(ELISA)检测显示技术,对156例HBV慢性感染者(慢性乙型病毒性肝炎轻、中、重度,肝炎肝硬化和慢性重型肝炎)血清进行检测HBV BCP区核苷酸(nt)1 762碱基A~T和1 764G~A联合突变的检测。采用PCR结合荧光探针检测技术,检测患者血清HBV DNA含量;采用双抗体夹心ELISA检测技术,检测患者血清细胞因子[白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素12(IL-12)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)]水平。结果HBV BCP变异在慢性重型肝炎组的阳性率为60.0%(15/25)显著高于非重型肝炎组的33.6%(44/131)(P=0.023);慢性重型肝炎组HBV DNA含量(107.3731±1.4381copies/ml)与非慢性重型肝炎组HBV DNA含量(106.6516±1.8046copies/ml)比较差异无统计学意义(P>0.05);慢性重型肝炎组与非慢性重型肝炎组血清IL-10和IFN-γ比较差异无统计学意义[(82.80±28.19)ng/L vs(74.60±26.87)ng/L,(22.00±16.41)ng/L vs(16.85±9.41)ng/L](均P>0.05),慢性重型肝炎组的血清IL-12和TNF-α水平明显高于非慢性重型肝炎组[(49.04±15.10)ng/L vs(36.81±14.41)ng/L,(60.68±30.83)ng/L vs(38.89±13.52)ng/L](均P<0.01)。结论HBV BCP变异与慢性重型肝炎关系密切,HBV DNA复制水平在慢性重型肝炎的发生中可能只起到启动的作用;细胞因子IL-12和TNF-α在慢性重型肝炎的发生中可能起主要的作用。     

乙型肝炎e抗原阴、阳性慢性乙型肝炎患者细胞免疫状态与乙型肝炎病毒DNA水平相关分析

目的 探讨乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性及HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者在细胞免疫状态及乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)水平之间的相关性.方法 分别应用流式细胞仪、荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法对HBeAg阴、阳性慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞亚群及HBV DNA进行检测.结果 HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者的HBV DNA水平与CD8 T淋巴细胞比例之间存在正相关,而与CD4/CD8比值之间存在负相关,γ值分别为0.567,-0.601,均P＜0.01;与总T、CD4 T淋巴细胞比例无相关关系.HBeAg阳性组患者的HBV DNA水平与总T、CD4 T、CD8 T淋巴细胞水平相关关系.结论 HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者HBV DNA水平与机体细胞免疫密切相关.