银花平感颗粒和三拗汤体内抗甲型流感病毒的免疫机制研究

为探讨银花平感颗粒和三拗汤体内对流感病毒肺炎小鼠免疫调节机制的影响及不同方剂配伍对流感病毒的药效异同。采用滴鼻感染建立小鼠甲型流感病毒(H1N1)肺炎模型,随机分为正常对照组、病毒模型组、达菲组、银花平感颗粒组、三拗汤组,灌胃给予相应药物5 d后,处死动物。酶联免疫吸附法(ELISA)检测流感病毒感染小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量,荧光定量PCR法检测肺组织中Toll样受体3/7(TLR3/7)、髓样分化因子88(MyD88)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、转录因子-κB(NF-κB p65)基因的表达,免疫组化法检测JNK,p38MAPK,NF-κB p65蛋白的表达。结果显示,银花平感颗粒和三拗汤均显著降低肺组织血清中TNF-α和IL-6水平及升高IFN-γ水平,显著下调流感病毒感染小鼠肺组织中TLR3/7,MyD88,JNK,p38MAPK,NF-κB p65基因的表达水平,显著降低肺组织中JNK,p38MAPK,NF-κB p65蛋白的表达水平,且银花平感颗粒对其调控效果优于三拗汤。结果表明,银花平感颗粒和三拗汤对流感病毒肺炎小鼠有一定的治疗作用,其抗流感病毒的作用机制可能是通过调节流感病毒感染小鼠的免疫功能和调控TLR3/7信号通路多个环节的基因和蛋白表达相互作用的结果,兼有清热解毒与宣肺解表疏邪之法的辛温与辛凉合用药银花平感颗粒比辛温单用药三拗汤配伍更全面,疗效更好。     

喘可治注射液对甲型H1N1流感病毒FM1株感染免疫低下小鼠肺炎的影响

目的:观察喘可治注射液对甲型H1N1流感病毒感染免疫低下小鼠肺炎模型的预防和治疗作用。方法:采用腹腔注射环磷酰胺联合甲型H1N1流感病毒FM1株滴鼻感染ICR小鼠造成免疫低下小鼠肺炎模型,分别经治疗性给药4 d和预防性给药5 d后,取各组小鼠肺组织称重,计算肺指数、肺指数抑制率, RT-PCR法检测各组小鼠肺组织中相对病毒载量。结果:采用甲型H1N1流感病毒FM1株感染免疫低下小鼠后,肺指数明显增高,脾、胸腺指数降低,三者与环磷酰胺对照组比较差异有显著统计学意义(P0.01)。治疗性给予喘可治注射液4d后,小鼠肺指数有所降低,与模型对照组比较差异无统计学意义(P0.05);脾指数和胸腺指数均升高,其中脾指数与模型对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。预防性给予喘可治注射液5 d,肺指数明显降低,与模型对照组比较差异有显著统计学意义(P0.01);小鼠肺组织中FM1株流感病毒病毒载量也明显降低,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.05),病毒载量抑制率可达58.68%。结论:喘可治注射液对流感病毒感染免疫低下小鼠肺炎模型有较好的防治作用。     

银花平感颗粒体内抗甲型H1N1流感病毒作用

为探讨银花平感颗粒(YHPG)体内抗甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)作用及其对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响,采用滴鼻感染ICR小鼠建立流感病毒肺炎模型,感染后第3天和第7天测定各组动物肺指数并观察肺组织病理变化;采用实时荧光定量RT-PCR和流式细胞技术,观察各组肺组织病毒载量以及外周血T细胞亚群(CD4⁺,CD8⁺,CD4⁺/CD8⁺)的变化。结果表明,YHPG(15,30 g·kg^-1)剂量组在感染后第3天和第7天均能显著降低流感病毒感染小鼠肺指数和肺组织病毒载量,减轻肺组织病理变化,同时还可显著提高外周血CD4⁺ T细胞水平和CD4⁺/CD8⁺比值,降低CD8⁺ T细胞水平。说明YHPG可抑制流感病毒复制、减轻流感病毒感染小鼠肺部损伤以及调节流感病毒小鼠免疫功能下降,对甲型H1N1流感病毒感染小鼠有一定的治疗作用。     

喘可治注射液对甲型H1N1流感病毒FM1株致小鼠肺炎的影响

目的:评价喘可治注射液对甲型H1N1流感病毒FM1株致小鼠肺炎模型的药效作用。方法:将ICR小鼠随机分为正常组、模型组、达菲组(27.5 mg·kg~(-1)·d~(-1))、喘可治注射液组(1.5 m L·kg~(-1)·d~(-1))。除正常组外,其余各组采用甲型H1N1流感病毒FM1株滴鼻感染ICR小鼠造成病毒性肺炎模型,分别进行死亡保护实验、治疗性给药实验和预防性给药实验。死亡保护实验中每组20只小鼠,以2倍半数致死量(LD_(50))流感病毒液滴鼻感染,感染后当天开始给药,每天1次,连续4 d,观察感染后14 d内动物的死亡情况,并计算死亡率、死亡保护率;治疗性给药实验中每组10只小鼠,以0.8倍LD_(50)流感病毒液滴鼻感染,感染后当天开始给药,每天1次,连续4 d,于实验第5天处死小鼠,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织中白细胞介素-8(IL-8)含量及脑组织内发热介质前列腺素E_2(PGE_2),精氨酸加压素(AVP)的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织内相对病毒载量;预防性给药实验中每组10只小鼠,分组当天开始给药,每天1次,连续5 d,末次给药1 h后,除正常组外,其余各组以0.8倍LD_(50)流感病毒滴鼻感染ICR小鼠,感染后第4天称重后处死小鼠,计算各组肺指数、脾指数、胸腺指数及肺指数抑制率,Real-time PCR检测肺组织内相对病毒载量。结果:与正常组比较,模型组小鼠IL-8,PGE2含量,肺指数及肺组织内流感病毒株病毒载量均显著升高(P0.01);与模型组比较,治疗性给予喘可治注射液可明显降低感染后小鼠的死亡率、肺组织内IL-8含量、脑组织内PGE_2含量及肺组织中流感病毒病毒载量(P0.05,P0.01);预防性给予喘可治注射液可显著提高感染小鼠的胸腺指数(P0.01),明显降低感染小鼠肺指数及肺组织中流感病毒病毒载量(P0.05);两种给药方式均可明显减轻支气管、血管周围及肺泡间质等组织炎性细胞浸润,减少管腔内红细胞渗出。结论:喘可治注射液对甲型H1N1流感病毒感染所致病毒性肺炎小鼠模型有较好的治疗和预防作用,其作用机制可能与减轻炎症反应和抑制病毒复制有关。     

金柴抗病毒胶囊对甲型H1N1流感病毒FM1株感染免疫低下小鼠肺炎的影响

目的 :观察金柴抗病毒胶囊对H1N1流感病毒FM1感染免疫低下动物的防治作用。 方法 :采用环磷酰胺注射造成免疫低下模型,经滴鼻感染甲型H1N1流感病毒FM1株造成肺炎模型,分别经预防给药5 d和治疗4 d,取各组小鼠肺组织,称重,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肺组织中相对病毒载量,观察金柴抗病毒胶囊对小鼠肺指数、病毒载量的影响。 结果 :模型组小鼠经流感病毒FM1株感染后,肺指数明显升高,肺组织中相对病毒载量显著高表达,金柴抗病毒胶囊各剂量组均可明显降低流感病毒感染免疫低下小鼠肺指数以及肺组织中相对病毒载量,降低动物模型肺指数、相对病毒载量的作用与达菲比较无显著性差异。 结论 :金柴抗病毒胶囊对流感病毒感染免疫低下小鼠有较好的治疗和预防作用。     

石荠苧总黄酮治疗流感病毒性肺炎小鼠的实验研究

目的 观察石荠苧总黄酮对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠肺炎的影响.方法 滴鼻感染小鼠建立流感病毒性肺炎模型,采用预防性给药,以利巴韦林为阳性对照,观察给药后各组对小鼠死亡率、生存时间、肺指数的影响.结果 石荠苧总黄酮给药后能明显降低流感病毒PR8株感染后小鼠的肺指数、减少死亡率并延长生存时间（P＜0.05或0.01）.与阳性组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 石荠苧总黄酮在体内对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠造成的病毒性肺炎具有明显的治疗作用.     

热毒宁注射液抗甲型H1N1流感病毒作用机制研究

目的 研究热毒宁注射液体内抗甲型H1N1流感病毒的作用及其机制。方法 采用甲型H1N1流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠制备肺炎模型,观察热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒感染小鼠平均存活时间、存活率、肺指数、病毒载量及细胞因子的影响。结果 与模型组比较,热毒宁注射液显著提高病毒感染小鼠的存活率、延长小鼠平均存活时间（P＜0.05、0.01）;显著降低病毒感染小鼠肺指数、肺组织病毒载量（P＜0.05、0.01）;提高肺组织γ干扰素（IFN-γ）水平,降低白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结论 热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒感染小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与提高IFN-γ水平,降低IL-6、TNF-α水平有关。     

扶正除疫颗粒抗甲型H1N1流感病毒感染作用评价

目的 评价扶正除疫颗粒抗甲型H1N1流感病毒感染的效果。方法 将112只小鼠随机分为正常对照组、病毒模型组、达菲对照组、扶正除疫组,每组28只。正常对照组和病毒模型组以生理盐水灌胃,每次0.4 ml/只;达菲对照组以达菲水溶液0.025 g/(kg·d)灌胃,扶正除疫组以扶正除疫颗粒水溶液12 g/(kg·d)灌胃,均每日1次,共连续灌胃7天。给药第3天,除正常对照组外其余3组以H1N1亚型季节性流感病毒鼠肺适应株FM1-6-E2滴鼻造模,攻毒剂量为5LD50,50μl/只,造模后1h各组继续给药。从攻毒后感染之日起,每组取10只,连续观察14天,观察小鼠死亡情况;各组余18只于攻毒后3天、6天、9天计算肺指数,检测病毒滴度,观察肺组织病理变化。结果 病毒模型组10只小鼠全部死亡;达菲对照组和扶正除疫组死亡率均为0。攻毒后第9天,达菲对照组、扶正除疫组与病毒模型组比较,肺指数明显降低(P<0.05或P<0.01);攻毒后第3天、6天,达菲对照组、扶正除疫组与病毒模型组比较,肺组织病毒滴定度明显降低(P<0.05或P<0.01)。达菲对照组与扶正除疫组小鼠肺脏病理变化较为轻微,炎症反应程度明显弱于病毒模型组。结论 扶正除疫颗粒对小鼠感染甲型H1N1流感病毒后具有死亡保护作用,对流感病毒在宿主体内复制有抑制作用。     

菘蓝有效成分抗流感病毒作用的实验研究

目的研究菘蓝有效成分在体内外抗甲型流感病毒的作用。方法体外用MTT法检测菘蓝有效成分对传代狗肾细胞(MDCK)的毒性浓度,观察菘蓝有效成分抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用(CPE),MTT法检测菘蓝有效成分对流感病毒的抑制率;建立在体流感病毒感染小鼠肺炎模型,通过观察小鼠肺病变程度指标,测定肺组织内流感病毒血凝滴度判定菘蓝有效成分对小鼠肺炎的治疗作用。结果菘蓝有效成分在体外主要抑制甲型流感病毒在细胞内的复制,其对病毒的半数抑制率浓度为64μg.mL-1,治疗指数达28.88;口服菘蓝有效成分能明显减轻小鼠肺组织病变程度,对肺组织内病毒的增殖有明显抑制作用。结论菘蓝有效成分具有较好的抗甲型流感病毒的作用,且呈剂量效应关系。     

小儿肺热咳喘口服液防治甲型H1N1流感病毒感染免疫低下小鼠的研究

目的:评价小儿肺热咳喘口服液对免疫低下小鼠感染甲型H1N1流感病毒的防治作用。方法:ICR小鼠sc环磷酰胺造成免疫低下,以甲型H1N1流感病毒滴鼻感染造成肺炎模型,造模同时及造模前ig 20,10,5 mL·kg-1小儿肺热咳喘口服液4 d后观察肺部炎症、计算肺指数,死亡率和生命延长率,Real-time RT-PCR法检测肺组织中病毒载量,酶联免疫法检测血清中免疫因子的含量。结果:小儿肺热咳喘口服液治疗性给药或预防性给药后能明显降低流感病毒FM1株和PR8株感染后免疫低下小鼠的肺指数、降低死亡率、延长平均存活天数、显著降低小鼠肺组织中的病毒载量,明显升高小鼠血清中CD4/CD8的比值。结论:小儿肺热咳喘口服液对甲型H1N1流感病毒感染免疫低下小鼠造成的病毒性肺炎具有明显的防治作用。     

清解防感颗粒对流感病毒A/PR/8/H1N1感染小鼠的死亡保护及肺脏保护作用

目的:研究清解防感颗粒抗流感病毒的作用。方法:采用亚洲甲型鼠肺适应株(A/PR8/H1N1)滴鼻感染小鼠制作小鼠病毒性肺炎模型,观察药物延长感染小鼠生命的作用以及光学显微镜下观察小鼠肺组织的病变程度并评分,计算小鼠肺指数,比较组间肺指数的变化趋势及评分差异。结果:清解防感颗粒8g/kg、4g/kg剂量组可显著延长感染小鼠生命、降低死亡率,降低感染小鼠的肺指数,明显增加体重并降低小鼠肺部病变指数。结论:清解防感颗粒对小鼠感染流感病毒PR8有明显的死亡保护及肺脏保护作用。     

广豆根种子的显微鉴别

目的 :观察金柴抗病毒胶囊对H1N1流感病毒FM1感染免疫低下动物的防治作用。 方法: 采用环磷酰胺注射造成免疫低下模型,经滴鼻感染甲型H1N1流感病毒FM1株造成肺炎模型,分别经治疗和预防给药,观察对小鼠肺指数、病毒载量的影响。 结果: ①金柴抗病毒胶囊所试3个剂量可明显降低免疫低下小鼠感染后肺指数、病毒载量,②金柴抗病毒胶囊所试3个剂量组在降低动物模型肺指数、病毒载量的作用与达菲比较无显著性差异。 结论: 金柴抗病毒胶囊对流感病感染有较好的治疗和预防作用。     

抗病毒口服液防治甲型流感病毒感染的药效学研究

目的:观察抗病毒口服液对体内外感染甲型H1N1流感病毒模型的防治作用.方法:体内实验采用甲型H1N1流感病毒FM1及PR8株经滴鼻感染的70只ICR小鼠来制备肺炎模型,随机分为正常组,模型组,利巴韦林组,双黄连组,抗病毒口服液2倍量、1倍量、1/2倍量组,每组10只.经预防给药后,计算各组小鼠肺指数;经治疗给药后计算各组小鼠死亡率和平均存活时间.体外采用甲型H1N1流感病毒及H3N2病毒感染MDCK细胞致细胞病变CPE模型,经治疗给药后,计算半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)及治疗指数(therapeutic index,TI).结果:体内实验中,抗病毒口服液各剂量组与模型组、正常组比较,能明显降低流感病毒感染后小鼠肺指数,降低死亡率,延长平均存活时间(P<0.05).体外感染实验中,抗病毒口服液给药后可明显降低病毒感染后细胞的病变情况.结论:抗病毒口服液对甲型H1N1流感病毒体内外感染有较好的治疗和预防作用.     

蜜炼川贝枇杷膏对甲型H1N1 流感病毒性肺炎小鼠的影响及相关机制研究

目的研究蜜炼川贝枇杷膏对甲型H1N1 流感病毒性肺炎小鼠的影响及其机制。方法将BABL/c 小鼠 随机分为正常对照组、病毒对照组、利巴韦林组（0.10 g·kg-1）和蜜炼川贝枇杷膏高、中、低剂量组（6.60、 3.30、1.65 g·kg-1）,灌胃7 d 后经滴鼻感染复制甲型H1N1 流感病毒性肺炎小鼠模型。继续给药5 d,感染后第 5 天测定肺指数和肺病毒载量,计算小鼠死亡保护率、平均生存时间和延长生命率,观察肺组织病理并评分, 酶联免疫吸附试验测定呼吸道和肠道黏膜中分泌性免疫球蛋白A（Secretory immunoglobulin A,sIgA）和血清中免 疫球蛋白G（Immunoglobulin G,IgG）的含量。结果蜜炼川贝枇杷膏预防给药能明显降低肺炎小鼠的肺指数和 肺病毒载量（P＜0.05,P＜0.01）;高、中剂量组能明显减轻肺部炎症程度（P＜0.01）;一定程度上改善肺炎小 鼠的死亡保护率和延长生命率（P＞0.05）;高、低剂量组能提高肺泡灌洗液、鼻咽冲洗液、肠道冲洗液中sIgA 和血清中IgG 的含量（P＜0.01）。结论蜜炼川贝枇杷膏对甲型H1N1 流感病毒性肺炎小鼠有预防保护作用, 其机制可能与抑制病毒复制和激发黏膜免疫有关。     

金银花水煎液抗流感病毒作用的研究

目的探究金银花水煎液对小鼠体内抗流感病毒的作用效果。方法将小鼠随机分成四组,每组12只小鼠,包括正常组、模型组、水煎液组、利巴韦林组。鼻腔接种甲型H1N1流感病毒制备小鼠病毒模型,检测肛温,胸腺、脾脏、肺指数,血清IFN-γ含量,计算死亡率。结果金银花水煎液可以提高病毒小鼠的胸腺、脾脏、肺指数抑制率,增加血清IFN-γ含量,降低肺指数,有助于肛温回升,降低死亡率。结论金银花水煎液对小鼠体内抗流感病毒的作用效果显著。     

银翘散不同煎煮时间对甲型流感病毒感染小鼠肺组织病毒载量的影响

目的 研究银翘散的抗病毒作用及最佳煎煮时间。方法 72只BALB/c小鼠随机分为银翘散3、6、12分钟组及空白对照组、模型对照组、阳性对照组,每组12只。除空白对照组外,其他各组小鼠以15LD50甲型流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻感染,每只0.05 ml。银翘散3、6、12分钟组在感染当天灌胃给予相应的银翘散煎煮液(分别煎煮3、6、12分钟),每天1次,每次0.5 ml,给药7天;阳性对照组灌胃给予磷酸奥司他韦胶囊27.5 mg/(kg·d);空白对照组、模型对照组小鼠灌胃给予0.2 ml/10 g蒸馏水。比较各组小鼠第3、7天时肺指数、肺指数抑制率及脾指数,并检测小鼠肺组织中相对病毒载量。结果 与空白对照组比较,模型对照组第3天、第7天时肺指数及肺组织病毒载量均明显升高(P0.05);与模型对照组比较,第3天时阳性对照组和银翘散3、6分钟组肺指数均明显降低,第7天时阳性对照组和银翘散各组小鼠肺指数、病毒载量明显降低(P0.05)。各组小鼠第3天和第7天脾指数比较差异均无统计学意义(P0.05)。第3天和第7天,银翘散3分钟组肺指数抑制率、病毒抑制率与阳性对照组最为接近。结论 银翘散对甲型流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠具有较好的抗病毒作用,煎煮时间以3~6分钟效果最佳。     

防感颗粒抑制甲型流感病毒作用的实验研究

目的:观察防感颗粒抑制甲型流感病毒作用,并进行了防感冲剂的最大给药量测定,综合评估防感颗粒对流感的防治作用,为将其研发为中药新药提供实验基础。方法:①最大给药量实验:取小鼠20只,一日内最大浓度、最大量给予防感冲剂,观察其急性毒性反应。②抑制甲型流感病毒实验:采用甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)感染的小鼠肺炎模型,观察防感冲剂对流感病毒肺炎小鼠的死亡保护、肺指数和肺指数抑制率作用。结果:①防感冲剂一日内小鼠灌胃给药最大量为100ml/kg,相当于生药量为25％/kg,未见中毒症状及死亡。②防感冲剂对流感病毒感染导致的小鼠死亡有很好的保护作用,明显延长流感病毒感染小鼠的平均存活时间,降低流感病毒肺炎小鼠的肺指数,提高肺指数抑制率。结论:防感冲剂无明显的毒副作用,口服安全。防感冲剂具有明显的抑制甲型流感病毒作用。     

金振口服液抗甲型H1N1流感病毒作用实验研究

目的 观察金振口服液对甲型H1N1流感病毒抑制作用.方法 采用体外抗病毒实验,观察金振口服液对流感病毒的抑制作用;采用体内实验,以流感病毒感染小鼠,观察小鼠生存时间、死亡率及肺组织病变程度.结果 金振口服液体外对甲型H1N1流感病毒有一定抑制作用,体内则能明显延长感染小鼠的生存时间,显著降低肺湿质量(P＜0.05、0.01),减轻肺组织病变程度.结论 金振口服液体内外均有一定的抗甲型H1N1流感病毒作用.     

防感颗粒抑制甲型流感病毒作用的实验研究

目的：观察防感颗粒抑制甲型流感病毒作用，并进行了防感冲剂的最大给药量测定，综合评估防感颗粒对流感的防治作用，为将其研发为中药新药提供实验基础。方法：①最大给药量实验：取小鼠20只，一日内最大浓度、最大量给予防感冲剂，观察其急性毒性反应。②抑制甲型流感病毒实验：采用甲型流感病毒鼠肺适应株A／PR／8／34(HINI)感染的小鼠肺炎模型，观察防感冲剂对流感病毒肺炎小鼠的死亡保护、肺指数和肺指数抑制率作用。结果：①防感冲剂一日内小鼠灌胃给药最大量为100ml／kg，相当于生药量为250g/kg，未见中毒症状及死亡。②防感冲剂对流感病毒感染导致的小鼠死亡有很好的保护作用，明显延长流感病毒感染小鼠的平均存活时间，降低流感病毒肺炎小鼠的肺指数，提高肺指数抑制率。结论：防感冲剂无明显的毒副作用，口服安全。防感冲剂具有明显的抑制甲型流感病毒作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抗流感病毒作用的研究

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在体内外抗甲型流感病毒的作用。方法：在体外用MTT法检测EGCG对狗肾传代MDCK细胞的毒性浓度，用CPE法观察EGCG抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用；在体内建立流感病毒感染小鼠模型，通过观察小鼠病死率、生命延长率及肺病变程度指标判定其对小鼠肺炎的抑制作用和染毒小鼠的死亡保护作用。结果：EGCG在体外能有效抑制甲型流感病毒CPE的产生；口服EGCG能减少流感病毒A H1N1病毒株感染小鼠的病死率，延长存活时间，减轻小鼠肺组织病变程度。结论：EGCG具有很好的抗甲型流感病毒的作用，呈剂量效应关系。