B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台的搭建及BALB/c小鼠感染模型的建立

【摘要】 目的 本研究利用基因工程技术全基因合成B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88的8个基因节段,并利用反向遗传技术从体外拯救B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88,同时建立BALB/c小鼠感染模型,为下一步研究B型流感病毒致病机制、传播机制以及开发新型疫苗奠定基础。方法 通过基因合成和反向遗传技术体外拯救B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88。全基因组测序验证拯救病毒基因组序列与Genbank序列的一致性。将拯救病毒以105EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒复制等方面进行致病性分析,建立小鼠感染模型。结果 成功从体外拯救出B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88,命名为B-S9。全基因组测序结果表明,B-S9基因组序列与Genbank公布序列一致。B-S9能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性; 攻毒后第3天,B-S9感染小鼠体重出现下降,攻毒后第8天,小鼠体重开始回升;攻毒后第3天和第6天,B-S9感染小鼠的肺脏内均能检测到病毒复制,且攻毒后第3天的小鼠肺脏病毒滴度比攻毒后第6天的小鼠肺脏滴度高132倍。结论 成功搭建B型流感病毒冷适应株B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台,并建立BALB/c小鼠感染模型。目前国内外对B型流感病毒的研究还较少,该反向遗传操作平台的建立为B型流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定了基础,同时也为包括B型流感病毒减毒活疫苗在内的新型疫苗的研制开辟了新途径。     

乳晕皮肤菱形切除乳晕缩小术

目的:寻求一种乳晕缩小术的新方法。方法:自2007年6月～2011年6月应用乳晕皮肤菱形切除行乳晕缩小术。女性35例,年龄19～33岁,平均26.7岁,乳晕单纯性增大,不伴有巨乳症或重度乳房下垂。在乳晕内设计3～4个菱形切口,切除切口内乳晕皮肤后,在整个乳晕区皮下做潜行分离,将菱形皮肤切口行"十"形缝合,以缩小乳晕。结果:临床应用于35例乳晕单纯性增大的患者,术后随访6～12个月,效果满意,无明显瘢痕,无并发症发生。结论:本方法对于单纯性乳晕增大的治疗是一种理想的、简单易行的手术方法,术后效果满意,可以达到"无痕"的效果。     

4种有囊膜RNA病毒形态发生的比较观察

目的从形态结构及形态发生角度准确区分和确认流感病毒、犬冠状病毒、狂犬病毒和新城疫病毒。方法将感染4种RNA病毒的体外培养细胞用戊二醛、锇酸固定,制成超薄切片,透射电镜观察。结果4种病毒子代病毒的核衣壳或完整病毒粒子的装配都在胞浆中进行,子代病毒装配的前体物质的形态结构不同。4种病毒子代病毒的完整病毒粒子装配的形式不同,其中流感病毒和新城疫病毒只在细胞膜以向胞外出芽的方式装配成完整病毒粒子;狂犬病毒在细胞浆膜相结构和细胞膜表面以出芽方式装配成完整病毒粒子;冠状病毒在细胞浆膜相结构以出芽方式装配成完整病毒粒子。流感病毒子代病毒装配完即离开细胞膜;新城疫病毒的子代病毒不易离开细胞膜。多数狂犬病毒和冠状病毒的子代病毒要待细胞破碎后才能释放到细胞外。结论利用病毒培养物的超薄切片进行电镜观察,可根据其形态发生准确区分4种RNA病毒。     

狂犬病病毒弱毒疫苗株反向遗传操作系统的建立

目的构建狂犬病病毒弱毒疫苗株SRV9全长cDNA感染性克隆,并建立其反向遗传操作系统。方法通过DNAStar对狂犬病病毒SRV9株全长基因组序列进行分析,利用单一的酶切位点,将SRV9全长cDNA分为4段,根据每段重叠区域的酶切位点拼接全长,分别连入pCI和pCDNA3.1(+)载体,并通过PCR方法分别在全长序列的3′端和5′端引入核酶HamRZ和HdvRZ序列,构建全长真核表达质粒pCI-SRV9和pD-SRV9。同时构建能表达狂犬病病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)、糖蛋白(G)和聚合酶蛋白(L)的4个辅助质粒。分别将pCI-SRV9或pD-SRV9与辅助质粒通过脂质体共转染BSR细胞,拯救重组病毒。结果两种质粒表达系统均可拯救到有感染活性的病毒粒子,但pD-SRV9表达质粒的拯救效率(8/8)较pCI-SRV9表达质粒拯救效率3/30高;重组病毒与母本野生病毒的体外生长动力学曲线相一致,相同培养时间的病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了狂犬病病毒弱毒疫苗株的反向遗传操作系统,为进一步研究狂犬病病毒致病机理、筛选新型狂犬病疫苗或开发基于狂犬病病毒载体的其他疾病疫苗奠定了基础。     

模型动物在动物流感病毒传播机制研究中的应用

动物流感(influenza)不仅会对畜禽养殖业造成巨大的经济损失,而且可以跨越种间障碍进入人群,引发全球性的公共卫生危机和灾难性后果.模型动物是研究流感传播机制的重要基础.模型动物的使用有助于我们对流感病毒传播机制的深入了解.本文从流感病毒的宿主范围、常用模型动物的宿主限制因素和模型动物在流感病毒跨种传播机制中的选择与应用等三个方面进行了综述.     

雷公藤多苷对慢性肾脏病大鼠血管内皮损伤的保护作用及其机制

探讨雷公藤多苷（GTW）对慢性肾脏病（CKD）大鼠血管内皮损伤的保护作用,并阐明其作用机制。     

威麦宁胶囊联合放疗治疗老年晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的观察威麦宁胶囊联合三维适形放疗（3DCRT）治疗老年晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的临床疗效及不良反应。方法168例老年NSCLC患者随机分为治疗组和对照组。每组84例,行3DCRT治疗,总剂量60～66Gy／30～33F／6—6．6W。治疗组3DCRT治疗同时予威麦宁胶囊口服,8粒／次,3次／日,服用至放疗结束后2周。2组放疗结束后60天评价疗效。结果治疗组患者的生活质量评分提高率明显高于对照组（P〈0．05）。治疗组有效率86．9％,对照组有效率73．8％（P〉0．05）;局部症状缓解改善率治疗组均明显高于对照组。治疗组放射性肺炎、放射性食管炎等放疗不良反应发生率明显低于对照组（P〈0．05）。结论威麦宁胶囊联合3DCRT治疗老年晚期NSCLC能提高临床疗效,并能减轻放射治疗不良反应,提高患者生存质量。     

PB2 E627K对A/H6N1亚型禽流感病毒的致病性的影响分析

目的 本研究利用A/H6N1亚型禽流感病毒的反向遗传平台,评估PB2 E627K对A/H6N1亚型禽流感病毒的致病性,探究A/H6N1流感病毒的致病性分子基础。方法 通过A/H6N1亚型禽流感病毒A/Mallard/SanJiang/275/2007株反向遗传操作系统和点突变技术拯救病毒rA/H6N1和PB2 E627K位点发生突变的 rA/H6N1-627,两株拯救病毒分别以101EID50~106EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、死亡率、病毒滴定等方面进行致病性分析。结果 成功构建A/H6N1亚型禽流感病毒的反向遗传平台,rA/H6N1的8个基因片段完全源于A/H6N1的基因组,核苷酸序列及生物学特性与A/H6N1完全一致。rA/H6N1能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性(MLD50>106.5EID50),病毒在小鼠体内的分布情况及各个脏器中的病毒滴度与A/H6N1保持一致; rA/H6N1-627能感染小鼠,引起小鼠体重下降,但不能引起所有106EID50组小鼠死亡,病毒能在小鼠的肺脏和脑部进行增殖。结论 实验结果表明,在H5N1禽流感中发挥重要作用的PB2-E627K位点并非A/H6N1流感病毒的毒力决定因子。A/H6N1流感病毒致病性的分子基础还有待继续研究,该反向遗传操作系统和点突变技术的建立为研究该亚型流感病毒致病机制、传播机制及病毒基因功能奠定了基础,同时也为A/H6N1亚型禽流感病毒新型疫苗的研制开辟了新途径。     

调强放疗联合同期亚叶酸钙方案对食管鳞癌IGF-1、血管内皮生长因子的影响

目的分析调强放疗联合同期亚叶酸钙（CF）方案对食管鳞癌胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子水平变化及预后的影响。方法选取2015年1月~2018年1月我院肿瘤科收治的110例食管鳞癌患者,随机分为放疗组（采用调强放疗进行治疗）与放化疗组（采用调强放疗联合同期CF方案化疗进行治疗）,55例/组,比较两组患者治疗后近期疗效、血清肿瘤标记物、毒副反应以及生存情况的变化情况。结果放化疗组治疗后近期疗效和放疗组差异无统计学意义(P>0.05);两组治疗后胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子、鳞状细胞癌抗原、癌胚抗原水平明显降低(P < 0.05),放化疗组低于放疗组(P < 0.05);两组毒副反应发生率差异无统计学意义(P>0.05);放化疗组2年、3年生存率明显高于放疗组(P < 0.05),两组中位无进展生存时间、总生存时间差异均有统计学意义(P < 0.05)。结论调强放疗联合同期CF方案化疗治疗食管鳞癌患者近期疗效较好,可降低血清肿瘤标记物水平,不增加毒副反应发生,提高患者生存率,延长患者生存时间。