大鼠慢性脊髓受压及减压后骨骼肌细胞的凋亡

目的：研究大鼠慢性脊髓损伤受压及减压后骨骼肌细胞的凋亡。方法：45只SD大鼠分成3组：①受压组15只，作成慢性脊髓受压损伤模型；②减压组25只，在压迫模型作成10d后取出压迫装置；③正常对照组5只，不做任何处理。应用HE染色、TUNEL和原位杂交技术研究慢性脊髓受压及减压后肌细胞的萎缩和凋亡。结果：正常组鲜见凋亡细胞，受压组出现骨骼肌细胞凋亡，bcl-2 mRNA表达减弱，BaxmRNA表达增强；减压后肌细胞凋亡数量明显减少，bcl-2 mRNA表达增强而Bax mRNA表达减少。结论：慢性脊髓受压肌细胞凋亡是失神经骨骼肌萎缩的机制之一，bcl-2和Bax基因参与肌细胞的凋亡。     

阿司匹林对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的保护作用

目的 观察阿司匹林对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡及神经功能恢复的影响。方法选择65只体重为220～250g的Wistar大鼠（雌雄不限），于T10部位置入后路渐进式压迫装置，制作成慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为阿司匹林治疗组（A组，30只）、生理盐水对照组（B组，30只）和假手术组（C组，5只）。应用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记技术，分别于慢性压迫性脊髓损伤后1、3、7、14、28d做行为学评价，并取材对脊髓损伤区进行细胞凋亡检测。结果A、B组均发现细胞凋亡，A组与B组细胞凋亡率相比差异有显著性（P〈0．05），A组与B组行为学评价相比差异有显著性（P〈0．05），神经细胞凋亡情况与运动功能改变具有相关性。结论 阿司匹林对慢性脊髓压迫损伤后所导致的神经细胞凋亡产生抑制作用。     

慢性脊髓损伤及减压对转化生长因子β1表达的影响

目的研究大鼠慢性脊髓损伤及减压后转化生长因子β1及其mRNA的表达变化.方法健康Wistar 大鼠36只,制备慢性脊髓压迫中、重度及减压后3、7、14 d模型,以正常大鼠作对照组.用免疫组织化学和原位杂交技术,观察各组压迫段压迫邻近(距压迫边缘5 mm)段脊髓组织TGF-β1及其mRNA的分布和含量变化.用改变Tarlov评分和斜坡实验观察大鼠慢性脊髓压迫及减压后神经功能的相关变化.结果正常大鼠脊髓不表达TGF-β1.慢性脊髓压迫中、重度及减压后3、7 d出现大量的TGF-β1阳性细胞;脊髓重度压迫组TGF-β1表达强度达高峰,阳性细胞的灰度为120.33±10.97.脊髓重度压迫组TGF-β1mRNA表达阳性细胞的灰度为86.51±11.75.减压14 d组TGF-β1阳性细胞偶见.脊髓的神经功能于中、重度压迫组显著下降,减压后逐渐恢复.结论大鼠慢性脊髓损伤及减压后,TGF-β1表达显著增加,有一定的保护作用.     

大鼠脊髓急性损务后神经细胞凋亡及相关基因表达

目的：研究脊髓急性损伤后神经细胞的凋亡及相关基因的表达,方法：大鼠脊髓（T8、T9）经中度压迫损伤后,分别在30min,2h,4h,8h,24h,48h,72h,7d,14d和21d处死取材（各间组n=4)。应用HE染色、免疫组化及凋亡细胞原位未端标记法对脊髓组织进行标记。结果：损伤4h后,在损伤段及邻近段可见末端标记阳性神经元,损伤段灰质中阳性细菌数8h达高峰,24h白质中阳性胶质细胞数量达高峰。相邻节段阳性细胞数72h达高峰。损伤后P53及Bax大量表达,而Bcl-2仅少量表达。结论：脊髓损伤后神经细胞的凋亡发损伤期的重要病理变化。     

颈髓慢性受压与减压对神经细胞凋亡的影响

目的：观察脊髓慢性受压不同时间以及手术减压后不同时间受压节段神经细胞凋亡的变化。方法：将56只雄性山羊随机分为对照组（8只）、颈脊髓受压3个月组（24只）和6个月组（24只），同时将受压迫3、6个月组再分为减压术前及术后1、3个月组（每组8只）。实验动物通过颈椎前路钛合金螺钉和后路钢板置入产生慢性压迫。各组在相应时间点处死动物后取压迫节段脊髓标本，应用TUNEL技术和免疫组织化学方法检测受压脊髓不同部位神经细胞的凋亡情况。结果：脊髓慢性受压3、6个月后在受压节段不同区域均可见凋亡细胞，受压6个月组较受压3个月组有更多的凋亡细胞数（P〈0．05）。后角胶质细胞凋亡变化幅度最大，而后角神经元凋亡变化幅度最小。减压手术后1个月脊髓各区凋亡细胞均减少，减压后3个月时减少更为明显（P〈0．05）。结论：颈脊髓慢性受压后不同时间在脊髓不同区域出现不同数量的凋亡细胞，压迫时间越长凋亡细胞数越多；减压手术后脊髓受压区域凋亡细胞数目开始减少，术后时间越长凋亡细胞数目越少。     

大剂量甲基强的松龙对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡影响的实验研究

目的:观察大剂量甲基强的松龙对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡及神经功能恢复的影响。方法:将60只同龄Wistar大鼠,置入后路渐进式压迫装置,制作成中度慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为大剂量甲基强的松龙治疗组(A组,30只)和单纯慢性压迫性脊髓损伤组(B组,30只)。应用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术,分别于慢性压迫性脊髓损伤后1、3、7、14、28d对脊髓损伤区进行细胞凋亡检测。结果:A、B两组均发现细胞凋亡,两组细胞凋亡率比较,差异有显著性(P<0.01和0.05)。治疗组细胞凋亡的减少与神经功能的恢复相一致。结论:慢性压迫性脊髓损伤可导致细胞凋亡,大剂量甲基强的松龙对神经细胞凋亡可起到抑制作用。     

损伤控制手术治疗兔脊髓压迫性损伤的效果

目的:探讨损伤控制手术(damage control operation)治疗兔脊髓压迫性损伤的效果。方法:应用球囊压迫法制备新西兰大白兔脊髓压迫损伤模型45只,造模术后2d随机取5只完成行为学观测、评分后取出损伤区脊髓组织进行流式细胞仪凋亡细胞检测、病理学观察、免疫组化染色检测兔损伤区脊髓组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达(对照组),剩余40只随机分为两组,每组20只,一组采用损伤控制手术(A组),即减压术前先将球囊内压力减为原来一半,使椎管内有效容积增加后再自远离脊髓压迫较重的一侧进行全椎板减压;另一组直接予全椎板切除减压,减压自压迫最严重部位开始(B组),两组减压完毕后均取出球囊,并在减压术后1d、3d、7d、14d分别随机取5只实验兔完成以上检测内容。结果:对照组造模术后48h的Tarlov评分为1.20±0.45分,A、B组减压术后1d时Tarlov评分与对照组比较均无统计学差异(P0.05);A、B组减压术后1d、3d、7d时的Tarlov评分均无统计学差异(P0.05),减压术后14d时A组高于B组(P0.05)。对照组脊髓细胞凋亡率为(2.66±1.40)%,A、B组减压术后1d时脊髓细胞凋亡率均低于对照组(P0.05);减压术后1d、3d时A、B两组损伤区脊髓细胞凋亡率无统计学差异(P0.05);A、B组减压术后1d与3d、7d与14d损伤区脊髓细胞凋亡率无统计学差异(P0.05);A、B组减压术后3d与7d损伤区脊髓细胞凋亡率均有统计学差异(P0.05);减压术后7d、14d时A组损伤区脊髓细胞凋亡率均低于同时间点B组(P0.05)。病理学观察显示对照组白质轻度脱髓鞘、部分轴突空泡样变,灰质内细胞水肿,A、B组减压术后1d、3d、7d、14d白质弥漫性脱髓鞘改变及散在点状出血,灰质内细胞水肿伴神经细胞变性逐渐加重,至减压术后7d时灰质内广泛神经细胞变性,并持续到术后14d。对照组MMP-2表达阳性细胞率为(45.76±0.75)%,A、B组减压术后1d时MMP-2表达阳性率均低于对照组(P0.05);减压术后1d、3d、7d、14d时B组MMP-2表达阳性细胞率均高于同时间点A组(P0.05),A、B组减压术后1d、3d比较均无统计学差异(P0.05),3d、7d,7d、14d比较均有统计学差异(P0.05)。结论:损伤控制手术治疗兔脊髓压迫性损伤较直接减压效果好,建议对胸腰椎爆裂骨折合并脊髓压迫损伤的治疗采用损伤控制手术方案。     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

[目的]探讨大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素（minocyc line）对Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。[方法]成年大鼠脊髓损伤后应用二甲胺四环素的治疗组（A组）和应用生理盐水对照组（B组），于损伤后不同时点取材，用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，用免疫组化染色检测Caspase-3表达阳性细胞，原位末端标记法（TUNEL法）标记凋亡细胞。[结果]HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及Caspase-3表达，神经细胞凋亡指数及Caspase-3表达均B组〉A组（P〈0．01）。[结论]二甲胺四环素能抑制大鼠脊髓损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡。     

米诺环素对大鼠脊髓损伤后线粒体细胞色素C的释放及神经细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后应用米诺环素（minocycline）对线粒体细胞色素C的释放及神经细胞凋亡的影响。方法：成年大鼠脊髓损伤后分为应用米诺环素腹腔注射的治疗组（A组）和应用生理盐水的对照组（B组），于损伤后不同时间点取材，采用流式细胞仪磷脂结合蛋白V，碘化丙啶（AnnexinV／PI）双标检测凋亡细胞，HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，免疫组化染色检测胞浆中细胞色素C表达阳性的神经细胞以及BBB运动评分观察术后动物行为学。结果：HE染色镜检发现损伤脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组；免疫组化染色A、B两组均发现凋亡的神经细胞以及胞浆中细胞色素C的阳性表达，神经细胞凋亡率及细胞色素C表达的阳性细胞率B组均〉A组（P〈0．01）；术后动物行为学观察显示，与B组比较A组大鼠后肢的运动功能显著增强，后肢反射的恢复较快。BBB运动评分B组明显小于A组（P〈0．05）。结论：米诺环素能有效抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡以及线粒体中细胞色素C的释放，促进神经功能的恢复。     

不同时间点减压对环扎法所致损伤脊髓Bcl-2、Bax蛋白的表达及意义

目的:探讨不同时间点减压环扎法所致损伤脊髓中神经细胞凋亡及Bax、Bcl-2的表达及其意义。方法:成年SD大鼠84只,随机分为4组:A组,仅行椎板减压及硬脊膜囊周长测量;采用环扎法建立大鼠脊髓损伤模型,B组于环扎术后8h行脊髓减压;C组于环扎术后72h行脊髓减压;D组环扎术后不行脊髓减压。各组分别于术后1d、7d、14d、21d取材,所得脊髓标本行HE染色、Tunel染色及免疫组化法检测Bax、Bcl-2阳性细胞数等情况,并采用BBB评分评价大鼠后肢神经功能变化。结果:Bax染色:B组和C组术后1d开始阳性细胞数增加,7d时达高峰,14d时仍较明显,21d降低;D组术后阳性细胞数持续升高。Bcl-2染色:B组和C组术后阳性细胞数持续升高;D组术后1d阳性细胞数最多,之后持续降低。Tunel染色:B、C及D组术后1d开始出现凋亡细胞,7d时达高峰,以后逐渐减少,21d时仍可见。Bcl-2/Bax值与Tunel阳性细胞数关系:B组和C组二者存在负相关;D组二者呈正相关。BBB评分:A组术后1周后肢运动功能恢复正常;B组和C组术后逐渐升高(P<0.05);D组术后1天开始逐渐降低,7天时最低,然后逐渐升高。结论:环扎法可以建立稳定的大鼠脊髓损伤模型;早期减压能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡,有利于神经功能恢复。     

早期手术减压对损伤脊髓caspase-3表达的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后不同减压时间对大鼠脊髓细胞caspase-3表达的影响。方法将动物分为:大鼠脊髓挫伤即刻手术减压组(A组),大鼠脊髓挫伤2小时手术减压组(B组),大鼠脊髓挫伤8小时手术减压组(C组),大鼠脊髓挫伤24小时手术减压组(D组)。手术后1、3、7、14、28天对脊髓损伤区进行细胞凋亡caspase-3蛋白表达的测定(免疫组化法),采用计算机图像分析技术,进行定量分析。并用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况。结果A、B、C、D四组中均发现凋亡caspase-3蛋白阳性表达细胞,图象分析发现,各组凋亡细胞caspase-3免疫反应阳性细胞表达顺序为D>C>B>A,与大鼠后肢功能恢复有平行的变化趋势。结论大鼠脊髓损伤早期手术减压能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡,促进大鼠后肢功能恢复。     

慢性脊髓压迫减压后的缺血再灌注损伤

目的探讨缺血再灌注损伤是否为慢性脊髓压迫症减压后不明脊髓功能丧失的致伤因素。方法成年新西兰白兔96只,随机分为A组（假手术组）,B组（缺血再灌注组）,C组（慢性压迫减压组）。于0h、0.5h、6h、12h、24h,48h各时间点每组分别取4只动物,检测MDA、CAT、SOD、GSH-Px表达水平;每组于0h及48h时各取4只动物取材行凋亡细胞计数。结果B组MDA、CAT、SOD、GSH-Px于0.5h、6h、12h、24h表达水平明显高于A组;C组MDA、CAT、SOD、GSH-Px于各时间点表达水平均明显高于A组,且C组组间各时间点表达水平无明显区别;C组0h及48h时TUNEL阳性细胞数量无明显差异。结论慢性脊髓压迫减压后减压局部并无明显缺血再灌注损伤标志,缺血再灌注并非减压后脊髓功能丧失的原因。     

体外转基因成肌细胞移植对大鼠损伤脊髓细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓和腺病毒介导的脑源性神经生长因子（AxCA-BDNF)体外转基因成肌细胞移植对大鼠脊髓细胞凋亡的影响。方法：将动物分为：大鼠脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组（A组）,大鼠脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组（B组）,脊髓半切洞损伤损伤AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（C组）大鼠脊髓半切洞损伤后应用胚胎脊髓和AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（D组）。手术后1、3、7、14、28d应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（TUNEL）以及Bcl-2蛋白表达的测定（免疫组化法）。采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果：A、B、C、D四组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达细胞,图像分析发现,各组凋亡细胞核为A＞B＞C＞D;Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为D＞C＞B＞A,Bcl-2免疫反应阳性细胞的表达与大鼠后肢功能恢复有同样的变化趋势。结论：大鼠胚胎脊髓和体外转基因成肌细胞移植能抑制脊髓损伤后的细胞凋亡。     

脑源性神经生长因子转基因细胞移植和大剂量甲基强的松龙对脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后腺病毒介导的脑源性神经生长因子（AxCA-BDNF）体外转基因成肌细胞移植和静脉内注射大剂量甲基强的松龙（MP）对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法：120只Wistar大鼠分为：脊髓挫伤组（A组），脊髓挫伤后AxCA-BDNF基因转染的成肌细胞移植组（B组），脊髓挫伤后静脉内注射大剂量MP治疗组（C组），脊髓挫伤后同时应用AxCA-BDNF和MP组（D组）。手术后1、3、7、14、28d用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况，并用计算机图像分析技术对脊髓损伤区细胞凋亡（TUNEL法）和Bcl-2蛋白表达（免疫组化法）进行定量分析。结果：四组中均发现凋亡细胞及Bcl-2蛋白阳性表达细胞．图像分析发现四组凋亡细胞核数为A组〉B组〉C组〉D组；Bcl-2免疫反应阳性细胞表达顺序为D组〉C组〉B组〉A组。大鼠后肢功能恢复和电生理检查也有类似的变化趋势。结论：体外转基因成肌细胞移植和大剂量MP都能抑制大鼠脊髓损伤后的细胞凋亡，促进大鼠后肢功能恢复，两者联合应用具有协同作用。     

带血运的组织移植对损伤脊髓细胞凋亡的影响

目的：探讨带蒂的大网膜和椎旁肌移植覆盖脊髓对脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法：应用改良的Ａｌｌｅｎ‘ｓ法致伤脊髓,将动物分为单纯脊髓损伤组（Ａ组）,损伤＋椎旁肌组（Ｂ组）,损伤＋大网膜组（Ｃ组）。移植后１、３、７、１４、２８天对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（ＴＵＮＥＬ）以及Ｂｃｌ－２蛋白表达的测定（免疫组化法）。结果：Ａ、Ｂ、Ｃ组中均发现凋亡细胞及ＢＣＬ－２蛋白阳性表达,图象分析发现,细胞凋亡率为Ａ     

颈髓挥鞭样损伤的回顾性研究

目的通过对临床资料的回顾性分析,探讨颈髓挥鞭样损伤病例手术的必要性。方法根据治疗方式和损伤后MR I所示脊髓受压程度的不同,将2004年4月～2006年4月收治的36例过伸性颈椎损伤患者分成3组：非手术治疗组（8例）、受压不明显者手术组（10例）、受压明显者手术组（18例）;比较3组间治疗前后的ASIA评分及Frankel分级改变。结果所有患者获得12～24个月随访,神经功能行ASIA评分及Frankel分级,手术组均高于非手术治疗组（P〈0.05）。结论过伸性颈脊髓损伤尽早手术减压是最大限度恢复神经功能的关键。凡存在明显神经功能障碍、MR I提示有颈髓损伤,无论是否有明显脊髓受压者都应早期手术。手术可避免因颈椎管高压和颈椎不稳造成的继发性脊髓损伤,保证其远期疗效。     

Effect of fetal spinal cord graft with different methods on axonal pathology after spinal cord contusion

ＡＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃＣｅｎｔｅｒｏｆＰＬＡ ,88ｔｈＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉｎａｎＭｉｌｉｔａｒｙＣｏｍｍａｎｄ ,Ｔａｉ ａｎ 2 710 0 0 ,Ｃｈｉｎａ (ＺｈａｎｇＱ)ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｉｅｌｄＳｕｒｇｅｒｙ/ＤａｐｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ,ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ,Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ 40 0 0 42 ,Ｃｈｉｎａ (ＬｉａｏＷＨ ,ＷａｎｇＺＧａｎｄＷｕＹＭ)ｘｏｎａｌｉｎｊｕｒｙａｎｄｌｏｓｓｏｆｗｈｉｔｅｍａｔｔｅｒ (ＷＭ )ａｒｅｔｈｅｍａｊｏｒｃａｕｓ…     

急性脊髓损伤后手术减压时限的临床研究

目的探讨急性脊髓损伤后在不同时间点行手术减压对患者神经功能恢复的影响。方法回顾2005年1月~2009年12月收治的胸椎骨折合并脊髓不完全损伤的89例,按照手术减压时限分为3组:A组,伤后24 h内手术减压(25例);B组,伤后1～3 d内手术减压(47例);C组,伤后3～7 d内手术减压(17例)。根据ASIA残损分级比较术前和术后1年的神经功能情况,比较3组的神经功能恢复情况,分析不同的减压时间疗效有无统计学差异。结果治疗前3组的ASIA残损分级,差异无统计学意义。治疗后3组ASIA残损分级较治疗前提高,A组高于B组和C组(P<0.05),B组高于C组(P<0.05)。结论脊髓不完全损伤后手术减压可以改善神经功能,且手术越早,神经功能恢复越好。