HPLC法测定稳心颗粒中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd与党参炔苷的含量

[目的] 建立高效液相法（HPLC）同时测定稳心颗粒中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd与党参炔苷的含量。[方法] 采用Agilent1260 DAD高效液相色谱仪,Amethyst C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,4μm）,乙腈-水为流动相,检测波长为210 nm,流速1 mL/min。[结果] 三七皂苷R₁对照品在8~247 mg/L线性关系良好,平均回收率为102.69%,RSD=2.74%（n=6）;人参皂苷Rg₁对照品在14~422 mg/L线性关系良好,平均回收率为98.72%,RSD=1.85%（n=6）;党参炔苷对照品在1.5~42 mg/L线性关系良好,平均回收率为97.69%,RSD=1.94%（n=6）;人参皂苷Rb₁对照品在2.65~847 mg/L线性关系良好,回收率为102.11%,RSD=1.96%（n=6）;人参皂苷Rd对照品在8~255 mg/L线性关系良好,平均回收率为99.66%,RSD=2.49%（n=6）。[结论] 本实验中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd和党参炔苷的含量测定方法稳定可靠,可作为稳心颗粒中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、Rb₁、Rd与党参炔苷含量测定方法。     

RP-HPLC测定活血止痛片中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1含量

[目的]建立活血止痛片中三七皂苷R₁和人参皂苷Rg₁的含量测定方法。[方法]采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。[结果]三七皂苷R₁的线性范围为0.207~1.036μg,人参皂苷Rg₁的线性范围为0.829~4.148μg,样品平均回收率分别为96.1%,97.3%,RSD分别为2.02%,2.34%。[结论]本方法可准确测定活血止痛片中三七皂苷R₁和人参皂苷Rg₁的含量。     

人参皂苷的药动学研究进展

综述了人参皂苷的药动学研究进展,分别介绍了人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Re、人参皂苷RG₁、人参皂苷Rg₂、人参皂苷Rg₃、人参皂苷Rh₂的药物动力学的研究和人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷RG₁、人参皂苷Rg₂、人参皂苷Rg₃的代谢研究,并对人参的药动学进行了展望。     

西洋参不同器官中皂苷量与鲨烯合成酶和鲨烯环氧酶基因表达的相关性

目的 探讨西洋参不同组织器官中总皂苷和单体皂苷量的差异及其与人参皂苷合成途径中鲨烯合成酶（SQS）和鲨烯环氧酶（SQE）基因表达量之间的关系。方法 以4年生西洋参的14个组织器官为材料,索氏回流法提取总皂苷,采用HPLC法测定6种单体皂苷（人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁、Rc、Rb₂和Rd）的量,用香草醛-硫酸比色法测定总皂苷量。通过实时荧光定量PCR分析SQS和SQE基因在西洋参14个组织器官中的表达量。结果 总皂苷和单体皂苷量在西洋参不同组织器官中差异非常显著（P＜0.01）。除人参皂苷Rb₂外,各单体皂苷及总皂苷之间均呈非常显著的正相关关系（P＜0.01）。SQS和SQE基因在14个组织器官中的表达量具有非常显著的差异（P＜0.01）并与人参皂苷Re、Rg₁、Rb₁、Rd和总皂苷量之间有显著的正相关关系（P＜0.05）。结论 西洋参不同组织器官中皂苷的量存在差异,SQS和SQE基因在人参皂苷合成途径中起着极其重要的作用。     

人参皂苷对人参幼苗生长发育的影响

目的 考察人参总皂苷（total ginsenosides,TGS）和人参皂苷Rg₁、Rb₁、Re的生态活性。方法 从四年生的人参根中提取TGS并进一步分离出3种单体皂苷,考察了不同质量浓度（25、50、100 mg/L）的TGS和人参皂苷Re、Rg₁、Rb₁对人参幼苗生长发育的影响。结果 TGS和人参皂苷Rb₁处理对人参的幼苗和幼根的生长发育表现出明显的高质量浓度抑制而低质量浓度促进作用,而人参皂苷Rg₁和Re却对人参幼苗的各项生长指标总体表现为微弱的促进作用,4种化合物的抑制效应依次为人参皂苷Rb₁＞TGS＞人参皂苷Rg₁＞人参皂苷Re,其中TGS和人参皂苷Rb₁处理组人参生长的变化趋势相近。人参幼苗叶绿素的合成随着各皂苷质量浓度的升高而降低,但高质量浓度处理的叶绿素量仍然都高于对照。透射电镜观察到人参幼根细胞在100 mg/L TGS和人参皂苷Rb₁处理后,发生了质壁分离和细胞器降解,液泡膜也逐渐分解,核膜变得模糊不清。人参根尖在高质量浓度的人参皂苷处理后因细胞功能受损而不能完成正常的生理活动。结论 TGS和3种单体皂苷对人参幼苗生长发育的作用效应不同,TGS和人参皂苷Rb₁有较明显的化感活性。     

人参皂苷Rb1在林可霉素诱导的菌群失调大鼠体内的药代动力学

肠道菌群介导的脱糖基代谢在人参皂苷Rb₁代谢及药代动力学中起着重要作用,本文对人参皂苷Rb₁在林可霉素诱导的菌群失调大鼠体内的药代动力学及脱糖基代谢特征进行研究。基于UPLC-MS/MS建立同时测定大鼠血浆中人参皂苷Rb₁及其脱糖基代谢物Rd的分析方法,并对线性、专属性、回收率、准确度、精密度进行方法学考察。结果发现,所建立的分析方法符合生物样本中Rb₁和Rd测定的要求。然后采用林可霉素(5 000 mg/kg)造模1周,诱导菌群失调大鼠模型。体外和体内研究结果均显示,在林可霉素诱导的菌群失调大鼠粪便中β-葡萄糖苷酶活性显著降低,进而使人参皂苷Rb₁在肠道菌群中的脱糖基代谢生成Rd的速率显著降低,导致人参皂苷Rb₁及其脱糖基代谢产物Rd吸收入血后药代动力学行为发生改变。     

LC-ESI-MSn法鉴定心悦胶囊中西洋参皂苷类成分

目的 建立LC-MS法确定心悦胶囊的主要组成成分。方法 采用LC-ESI-MS负离子检测模式对心悦胶囊中的皂苷类成分进行分析,通过与胶囊辅料提取物比较,筛选胶囊的主要成分,对其进行多级质谱裂解分析。以对照品及文献数据为对照,通过对各成分的MS²谱图和MS³谱图的解析对各成分进行指认。结果 从心悦胶囊中发现包括原人参二醇型、原人参三醇型和奥寇梯木醇型皂苷在内的18种人参皂苷类成分,采用对照品对其中的人参皂苷Re(ginsenoside Re,G-Re)、Rg₁(G-Rg₁)、拟人参皂苷F₁₁(pseudoginsenoside F₁₁,P-F₁₁)、人参皂苷Rg₂(G-Rg₂)、人参皂苷Rc(G-Rc)、Rb₂(G-Rb₂)、Rb₃(G-Rb₃)、Rd(G-Rd)、F₂(G-F₂)、20(S)-人参皂苷Rg₃［20(S)-G-Rg₃］等10个成分进行了结构确证。结论 所建立的LC-MSⁿ法可同时对奥寇悌隆型人参皂苷、原人参二醇型和原人参三醇型人参皂苷进行分析,方法灵敏、快速、简单,适用于心悦胶囊和西洋参皂苷类成分的分析和结构鉴定。     

三七总皂苷的大孔吸附树脂纯化工艺和质量分析研究

目的 建立三七总皂苷的大孔吸附树脂纯化工艺方法,并对总皂苷进行质量分析。方法 以三七总皂苷中4种主要皂苷类成分的转移率为评价指标,优选大孔吸附树脂纯化工艺条件;采用RP-HPLC法测定总皂苷中4种主要皂苷类成分的量,并建立HPLC指纹图谱;色谱条件：Kromasil C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,乙腈-水线性梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温30 ℃,检测波长203 nm。结果 三七总皂苷得率约10%,其中含三七皂苷R₁,人参皂苷Rg₁、Re和Rb₁的总量大于69%。HPLC指纹图谱中共确定14个特征峰,主要色谱峰分离良好。以峰1为参照峰（S）,计算14个特征峰的相对保留时间和相对峰面积,各色谱峰精密度、稳定性和测定重复性RSD均小于1.64%。结论 本工艺皂苷类成分转移率高,工艺简便,提取物得率高、纯度好;HPLC定量测定和指纹图谱测定方法准确,重现性良好,可用于准确评价总皂苷提取物的质量。     

人参皂苷Rb1对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及凋亡的影响

目的 研究人参皂苷Rb₁对小鼠T淋巴细胞体外活化及增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法 分离制备小鼠淋巴结细胞悬液;以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A（ConA）的刺激下,人参皂苷Rb₁对早期活化标志CD3/CD69和调节T淋巴细胞标志CD4/CD25表达的影响;用羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色结合流式细胞术和MTT法检测在ConA的刺激下,人参皂苷Rb₁对T淋巴细胞增殖的影响;DIOC/PI双染技术检测在H₂O₂作用下,人参皂苷Rb₁对淋巴细胞凋亡进程的影响。结果 终浓度为5、10、20 μmol/L的人参皂苷Rb₁对ConA刺激的调节T淋巴细胞CD4^＋/CD25^＋的表达具有促进作用,而CD3^＋/CD69^＋的表达明显下调（P＜0.01）;对ConA刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;人参皂苷Rb₁显著抑制H₂O₂诱导的淋巴细胞的凋亡进程（P＜0.05）。结论 人参皂苷Rb₁对小鼠淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

林下参的化学成分研究

目的 对林下参Panax ginseng的化学成分进行研究。方法 采用硅胶柱色谱法及制备HPLC法进行分离纯化，根据理化性质和光谱方法鉴定化合物的结构。结果 从林下参乙醇提取物中分离得到10个单体化合物，并鉴定为20(S)-人参皂苷Rg₃(Ⅰ)、20(S)-人参皂苷Rh₁(Ⅱ)、20(R)-人参皂苷Rh₁(Ⅲ)、20(S)-人参皂苷Rg₂(Ⅳ)、20(S)-人参皂苷Rh₂(Ⅴ)、人参皂苷Rb₃(Ⅵ)、豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅶ)、5，6-二氢豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅷ)、β-胡萝卜苷(Ⅸ)、β-谷甾醇(Ⅹ)。结论 10个化合物均为首次从林下参中分离得到。     

一测多评法在复方血栓通胶囊8种成分检测中的应用

目的 建立一测多评法同时测定复方血栓通胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd、哈巴俄苷、隐丹参酮和丹参酮Ⅰ等8种成分的含量,验证该方法在制剂中应用的准确性和可行性.方法 以复方血栓通胶囊为研究对象,203 nm测定波长下以三七皂苷R1为内参物,通过测定该成分与人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd间的相对校正因子,计算成分的含量;270 nm测定波长下以隐丹参酮为内参物,通过测定该成分与哈巴俄苷和丹参酮Ⅰ间的相对校正因子,计算成分的含量,实现一测多评,同时对一测多评的计算值与外标法实测值进行比较,以验证一测多评法的准确性和可靠性.结果 20个批次复方血栓通胶囊中各成分采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间无显著性差异.结论 在对照品缺乏的状况下,采用一测多评法可实现复方血栓通胶囊多个成分的含量测定,但复方血栓通胶囊中的8个成分需要选择2个内参物才能准确定量.     

三七总皂苷中活性单体的检测及体内代谢研究进展

现代药理学研究证实三七总皂苷具有抗自由基、抗血小板聚集、扩张血管、改善微循环及抗炎等作用,其有效成分三七总皂苷（panax notoginsengsaponins,PNS）中主要含有三七皂苷R1（notoginsenoside R1,R1）、人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1,Rg1）、人参皂苷Rb1（ginsenoside Rb1,Rb1）、人参皂苷Rd（ginsenoside Rd,Rd）、人参皂苷Re（ginsenoside Re,Re）等单体皂苷。PNS口服难以被直接吸收,必须经过体内代谢才能发挥生物活性。然而迄今国内尚未检索到PNS体内代谢过程比较系统的研究报道。故该文对PNS的检测方法及5种活性单体在生物样品中的吸收分布及代谢等药动学研究进展进行了分析和综述。     

冰片对三七皂苷R1和人参皂苷Rg1,Re家兔组织分布的影响

目的：建立三七皂苷R1和人参皂苷Rg1,Re家兔组织中的固相萃取-高效液相色谱（SPE-HPLC）分析方法,并研究冰片对三七中三七皂苷R1,人参皂苷Rg1,Re在家兔体内组织分布的影响.方法：空白组、三七组、配伍组家兔于服药后30 min处死,取心、肝、大脑、肺、肾组织,匀浆后取上清液2.0 mL,固相萃取法去除干扰物质,收集70%甲醇洗脱液,HPLC测定三种指标成分在各组织中的含量.结果：三种皂苷在各组织中的含量均有增加,三七皂苷R1的变化最为显著.结论：冰片可显著提高三七皂苷R1、人参皂苷Rg1,Re的在脏器组织中的分布,从而提高三七的疗效.     

三七总皂苷的抗糖尿病机理及其降血糖成分研究

目的 采用遗传性2型糖尿病KK-Ay鼠探讨三七总皂苷（PNS）的降糖、减肥作用机理及其降血糖的主要有效成分。方法 空腹血糖(FBG)≥13.89 mmol/L的KK-Ay鼠分别注射PNS（200 mg/kg体质量）,人参皂苷Re（14 mg/kg体质量）、人参皂苷Rd（15 mg/kg体质量）、人参皂苷Rg1（40 mg/kg体质量）、人参皂苷Rb1（60 mg/kg体质量）,三七皂苷R1（6 mg/kg体质量）及生理盐水(10 mL/kg体质量,模型组) ,共7组,每组6只,以健康C57鼠为正常对照（6只,10 mL/kg体质量生理盐水 ）。正常对照、模型及PNS组腹腔注射给药30 d,人参皂苷各组及三七皂苷R1组腹腔注射给药12 d,测定FBG、糖耐量、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数(IRI)、瘦素、体质量、摄食量、脂肪组织及血脂水平。结果 PNS、Rb1组12 d时FBG较模型组下降（P <0.05）,余各实验组FBGL与模型组比较差异无统计学意义（P >0.05）。PNS连续给药30 d后,FBG较模型组进一步降低（P <0.01）,而血清胰岛素水平（P <0.05）和IRI（P <0.01）也明显下降;体质量增长率、摄食量、脂肪质量均较模型组降低（P均<0.05）,瘦素水平也较模型组下降（P <0.05）。结论 PNS通过提高KK-Ay鼠对胰岛素和瘦素的敏感性,发挥抗高血糖、抗肥胖作用,Rb1可能为PNS提取物中的降血糖成分。     

针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca2+]i的影响

[目的]研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca²⁺浓度[Ca²⁺]_i及醒脑开窍针刺对其影响,探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。[方法]建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血(MCAO)模型,采用醒脑开窍针刺法治疗,采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CA1区锥体细胞[Ca²⁺]_i在不同时间点的变化。[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca²⁺]_i(以细胞内Ca²⁺相对荧光强度表示)在局灶性脑缺血1 h时升高,持续升高至缺血24 h时(P<0.05)。假手术组与正常组相比[,Ca²⁺]_i变化差异无统计学意义(P>0.05)。相应时间点非穴位针刺组与模型组[Ca²⁺]_i比较,无统计学意义(P>0.05)。在相应时间点,醒脑开窍针刺组[Ca²⁺]_i低于模型组(P<0.01)。[结论]急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[Ca²⁺]_i随缺血时间的延长而持续升高,提示细胞内钙超载;醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的[Ca²⁺]_i,提示在缺血后针刺治疗效果越早越好,为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。     

人参皂苷Re对ADP、PAF、AA诱导家兔血小板聚集功能的影响

[目的]研究人参皂苷Re对血小板聚集功能的影响。[方法]采用体外实验通过Born法观察人参皂苷Re对二磷酸腺苷钠盐(ADP)、血小板活化因子(PAF)、花生四烯酸(AA)诱导的家兔血小板聚集率的影响。[结果]人参皂苷Re体外抑制ADP、PAF、AA诱导的家兔血小板聚集差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。半数抑制浓度(IC50)分别为0.197、0.242、0.443 g/L。[结论]人参皂苷Re呈剂量依赖性抑制体外ADP、PAF、AA诱导的血小板聚集,且抗ADP诱导的血小板聚集作用强于PAF、AA。     

Comparative pharmacokinetics of five saponins after intravenous administration of TSFS injection and TSFS injection plus TFFG in rats under different physiological states

Sanqi is a popular traditional Chinese medicine and commonly used for promoting blood circulation and removing blood stasis. Notoginsenoside R1, ginsenoside Rg1, Re, Rb1 and Rd are the major active constituents of Sanqi. The purpose of the study was to investigate the pharmacokinetic behavior of the five active constituents from total saponin from Sanqi when it was used in the blood stasis animals or in combination with Gegen. The concentrations of the five active constituents in rat plasma were determined by an ultra-HPLC–ESI–MS/MS method. The main pharmacokinetic parameters were calculated and statistically analyzed using the unpaired student's t-test. It was found that the pharmacokinetic parameters of notoginsenoside R1, ginsenoside Rg1 and Rb1 represented a statistically significant difference (P<0.05) between the normal rats and the blood stasis rats after administration of total saponin from Sanqi (TSFS). And there were statistically significant differences (P<0.05) in the pharmacokinetic parameters of all the five constituents between administration of TSFS alone and combined with total flavonoid from Gegen (TFFG) in blood stasis rats. It suggested that the pharmacokinetic behavior of the active constituents from TSFS could be changed when it was used in blood stasis animals or in combination with TFFG.     

Effect of Ginsenoside—Rb1 on Cardiomyocyte Apoptosis after Ischemia and Reperfusion in Rats

Summary The effect of ginsenoside Rb₁ on cardiomyocyte apotosis after ischemia (30 min) and reperfusion (6 h) in rats was observed. The ischemia/reperfusion heart model was established by ligating left anterior descending branch of coronary artery in Wistar rats. The apoptotic cardiomyocytes were examined under transmission electron microscopy and counted byin situ nick end labeling (TUNEL) method and light microscopy. Results showed that (1) The apoptotic cardiomyocytes were found in ischemic regions in the ischemia/reperfusion group, but not in the sham-operating group under transmission electron microscopy; (2) The number of apoptotic cells were 134.45±45.61/field in the ischemia/reperfusion group, 0/field in the sham-operating group and 51.65±13.71/field in the ginsenoside Rb₁-treated group. The differences were significant among the three groups (P<0.01). It was concluded that myocardial ischemia-reperfusion could induce cardiomyocyte apoptosis, and ginsenoside Rb₁ could significantly inhibit cardiomyocyte apoptosis induced by ischemia-reperfusion in rats, indicating that ginsenoside Rb₁ could inhibit cardiomyocyte apoptosis induced by ischemia-reperfusion, thus alleviating ischemia-reperfusion injury. GUAN Li, female, born in 1967, Doctor in Charge This project was supported by a grant from the Natural Science Foundation of Hubei Province (Serial No. 2000J050).     

不同孕期妊娠女性甲状腺激素TSH、FT3、FT4、TT3、TT4水平的变化与临床分析

目的 探究不同孕期妊娠女性甲状腺激素TSH、FT₃、FT₄、TT₃、TT₄水平的变化。方法 收集2016年1月~2017年1月无甲状腺相关病史的106例妊娠女性的临床资料,对不同孕期妊娠女性的TSH、FT₃、FT₄、TT₃、TT₄水平给予化学发光微粒子免疫分析法检测,并将同期在笔者医院行常规体检的100例健康非孕女性性作为对照组,比较上述水平变化情况。结果 与正常对照组比较,早、中、晚期妊娠组女性的TSH、FT₃、FT₄、TT₃等甲状腺激素水平明显偏低（P<0.05）,3组组间比较差异有统计学意义（P<0.05）,早期、中期、晚期妊娠组女性TSH、TT₃、TT₄水平呈现上升趋势,FT₃、FT₄水平则逐渐下降;妊娠组女性甲状腺疾病发生率达到9.73%,明显高于正常对照组的6.0%,差异有统计学意义（P<0.05）;晚期妊娠组女性ATG、TPOAb阳性率分别为4.8%、3.6%,显著低于中期与早期妊娠组（P<0.05）,差异有统计学意义。结论 不同孕期妊娠女性甲状腺激素水平呈现出明显的差异性,应加强对孕产妇血清甲状腺激素水平的检查,及时筛查甲状腺功能,确保优生优育。