骨髓间充质干细胞旁分泌HGF体外调控肝星状细胞

目的 探讨大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）与肝星状细胞（HSCs）体外共培养体系中,BMSCs旁分泌肝细 胞生长因子（HGF）对 HSCs 增殖、凋亡、活化的影响。方法 全骨髓贴壁法分离、培养、纯化大鼠 BMSCs,另培养 HSCs。6 孔板半透膜建立上下两层细胞非直接接触共培养体系,实验设 H 组（HSCs 单独培养）、H-H 组（HSCs 与 HSCs共培养）、M-H组（BMSCs与HSCs共培养）、M-H-C组（BMSCs与HSCs共培养并加c-met抑制剂）,各组细胞培 养48 h后,流式细胞仪鉴定BMSCs,检测HSCs凋亡率,MTT法检测HSCs的增殖,免疫荧光共聚焦定量检测HSCs中 α-肌动蛋白（α-SMA）的表达量,ELISA法检测共培养体系上清液中HGF的浓度。结果 MSCs高表达阳性表面分子 CD29、CD90,低表达造血细胞表面标记CD45;BMSCs能明显抑制HSCs的增殖、活化并促进其凋亡,且M-H组上清液 中HGF的浓度明显高于其他组。结论 BMSCs与HSCs共培养过程中,BMSCs通过旁分泌HGF促进HSCs的凋亡,抑 制HSCs的增殖、活化。     

红景天苷对转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞逆向分化的影响

目的：阐释红景天苷对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HKC）表型转分化的效应,探讨其对I型（colⅠ）和Ⅲ型（ColⅢ）胶原蛋白表达的影响。方法：体外培养HKC,应用不同浓度红景天苷处理经TGF-β1诱导活化的HKC细胞,显微镜观察细胞形态改变,免疫组化法检测角化蛋白-18和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达：应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测ColⅠ型和ColⅢ型胶原蛋白表达。结果：HKC细胞经过TGF-β1诱导,细胞角化蛋白．18表达明显下调,α-SMA、ColⅠ、ColⅢ型胶原表达明显上调,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。经红景天苷干预后,其表达有所下降,与TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：红景天苷可抑制TGF-β1诱导的HKC表型转分化,同时可以抑制肾小管上皮细胞外基质成分ColⅠ、ColⅢ型胶原的合成,在一定程度上具有阻止肾小管间质纤维化的作用。     

枇杷叶三萜酸对TGF-β_1刺激的人胚肺成纤维细胞转分化及ERK通路的影响

目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR检测每组中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(CⅠ)、Ⅲ型胶原(CⅢ)mRNA的水平,Western blot检测各组细胞中p-ERK1/2和ERK1/2表达水平。结果 TAL呈剂量和时间依赖性抑制HFL-Ⅰ细胞的增殖(P<0.05),并能够降低CⅠ、CⅢ、α-SMA、CTGF的过度表达(P<0.05);Western blot结果显示TAL能降低TGF-β1刺激组p-ERK1/2的表达,而对ERK1/2的表达没有差异。结论 TAL能抑制HFL-Ⅰ的增殖,同时也能使活化后HFL-Ⅰ中的α-SMA生成减少,CTGF、胶原和p-ERK1/2表达降低。     

生长抑制因子AcSDKP对转化生长因子β1促活化肝星状细胞合成和分泌细胞外基质的影响

目的:观察生长抑制因子N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β(1TGF-β1)促活化肝星状细胞(HSC)合成和分泌细胞外基质(ECM)的影响,探讨其抗纤维化作用机制。方法:大鼠HSC经原代分离培养活化后,分为空白对照组、TGF-β1组(5μg.L-1)、AcSDKP组(1nmol.L-1)、混合处理组(AcSDKP1nmol.L-1+TGF-β15μg.L-1),每组6个复孔,加入相应药物培养72h后,观察各组HSC形态学变化,检测其中Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达及HSC上清液中玻璃酸(HA)的含量。结果:与空白对照组比较,TGF-β1组HSCColⅠmRNA表达、HA含量均明显升高(P<0.05),AcSDKP组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比较,混合处理组ColⅠmRNA表达、HA含量、α-SMA蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:AcSDKP可能通过抑制TGF-β1介导的活化HSC合成和分泌ECM,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

高迁移率族蛋白B1与晚期糖基化终末产物受体结合对激活肝星状细胞的作用

目的探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)激活肝星状细胞(HSC)中的作用。方法大鼠HSC-T6细胞系培养至对数生长期,分为5组,对照组加DMEM培养液1ml;HMGB1组加0.1μg/ml的HMGB11ml;抗RAGE组将20μg/mlRAGE抗体加入培养板2h后,再加0.1μg/mlHMGB1;sRAGE组将20μg/mlsRAGE加入培养板2h后,再加0.1μg/mlHMGB1;AGE组:将160μg/mlAGE加入培养板2h后,再加0.1μg/mlHMGB1。刺激24h后,收集各组上清培养液酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测透明质酸(HA)、Ⅲ型胶原(PⅢP)和Ⅳ型胶原(CⅣ)的含量;小心取出六孔板内载玻片,免疫组织化学法检测α-SMA、转化生长因子(TGF)-β1的表达。结果抗RAGE组、sRAGE组与HMGB1组相比,HSC细胞质中的α-SMA和TGF-β1表达水平和培养液中HA、PⅢP和CⅣ的含量均显著下降(P<0.05);AGE组与对照组相比,HSC细胞质中的α-SMA和TGF-β1表达水平和培养液中的HA、PIIIP和CⅣ含量均明显增高(P<0.05)。结论 HMGB1与RAGE结合,使HSC活化,合成释放细胞外基质增加。     

华蟾素对转化生长因子-β1诱导肝星状细胞激活的作用及机制研究

目的 研究华蟾素对人肝星状细胞(HSCs)LX-2活化的影响及其可能的分子机制。方法 将LX-2细胞分为空白组,对照组和华蟾素低、中、高实验组。空白组予以完全培养基进行培养,对照组予以含10 ng·mL^-1转化生长因子-β1(TGF-β1)的培养基处理,华蟾素低、中、高实验组在对照组的基础上分别予以0.5,1和2 mg·mL^-1华蟾素处理。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测华蟾素对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖的影响;以蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞中α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原(Collagen-Ⅰ)蛋白的表达;以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测α-SMA和Collagen-ⅠmRNA的表达情况;以免疫荧光法检测各组细胞α-SMA蛋白的表达。结果 Western blot和RT-PCR结果显示随着TGF-β1浓度的递增,α-SMA、Collagen-Ⅰ在LX-2细胞中的表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);表明TGF-β1可诱导LX-2细胞活化增殖。CCK-8实验测得华蟾素...     

罗格列酮对大鼠肺纤维化细胞模型干预治疗的疗效观察

目的采用转化生长因子（TGF-β1）诱导大鼠肺成纤维细胞,给予罗格列酮干预,明确其对大鼠肺纤维化的影响。方法以组织贴块法培养肺成纤维细胞,分为0.4%血清对照组（空白对照组）、TGF-β1模型组（模型组）、TGF-β1＋不同浓度罗格列酮干预组（干预组）,分别检测大鼠肺纤维化细胞代谢活性及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成情况。结果不同浓度罗格列酮干预组OD值与模型组比较都有所下降（P〈0.05）,其中罗格列酮浓度在10μmol/L时OD值与模型组比较下降最为明显,不同罗格列酮浓度组间OD值差异无显著性（P〉0.05）。10μmol/L罗格列酮干预组与模型组相比较,Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达下降,差异具有显著性（P〈0.05）。结论罗格列酮可以抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和Ⅰ型、Ⅲ型胶原的合成。     

参麦开肺散对NIH/3 T3成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：探讨参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞(FB)增殖及体外纤维化细胞模型胶原合成的影响。方法 NIH/3T3 FB常规培养后分为正常对照组、模型组和处理组,正常对照组加入含1%胎牛血清(FBS)的细胞培养液500μl,模型组加入使用含1% FBS细胞培养液配制的5 ng/mlβ型转化生长因子( TGF-β)溶液500μl,处理组加入含5 ng/ml的TGF-β+1 mg/ml的参麦开肺散混合溶液500μl,培养24 h。分别采用实时定量聚合酶链反应( PCR)、蛋白免疫印迹( Western blot)和Sircol assay检测细胞内胶原及细胞外基质( ECM)相关基因表达水平、Ⅰ型胶原表达情况以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量。结果参麦开肺散显著降低胶原及其相关基因、Ⅰ型胶原蛋白的表达以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量(P<0．05,P<0．01)。结论参麦开肺散可明显抑制TGF-β诱导的NIH/3T3 FB胶原的合成,其发挥抗纤维化作用可能与其抑制FB增殖及胶原合成相关。     

基于TGF-β/Smad2/3信号通路探讨鸢尾素对哮喘气道重塑的实验研究

目的 探究鸢尾素（Irisin）对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的调控及机制。方法 体外培养人胚肺成纤维细胞HFL-1,用10 ng/mL TGF-β1诱导HFL-1细胞,同时用不同浓度(25、50、100、200) ng/mL的irisin干预细胞24 h、48 h和72 h。利用CCK8试剂盒检测细胞增殖率。随后,将细胞分为空白对照组（NC组）、TGF-β1组（10 ng/mL）、TGF-β1+irisin组（10 ng/mL TGF-β1和100 ng/mL irisin）。采用细胞划痕实验检测不同组细胞的迁移能力。通过免疫荧光法检测不同处理组细胞α-SMA蛋白的表达情况。Western blot法检测不同处理组细胞α-SMA、胶原蛋白I (collagen I)、Smad2、pSmad2、Smad3、p-Smad3的蛋白表达水平。结果 与NC组相比,TGF-β1能有效促进HFL-1细胞的增殖和迁移（P<0.05）;与TGF-β1组相比,加入irisin进行干预后能有效抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞的增殖和迁移（P<0.01）。与NC组相比,T...     

参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞(FB)增殖及体外纤维化细胞模型胶原合成的影响。方法NIH/3T3 FB常规培养后分为正常对照组、模型组和处理组,正常对照组加入含1%胎牛血清(FBS)的细胞培养液500μl,模型组加入使用含1%FBS细胞培养液配制的5 ng/mlβ型转化生长因子(TGF-β)溶液500μl,处理组加入含5 ng/ml的TGF-β+1 mg/ml的参麦开肺散混合溶液500μl,培养24 h。分别采用实时定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)和Sircol assay检测细胞内胶原及细胞外基质(ECM)相关基因表达水平、Ⅰ型胶原表达情况以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量。结果参麦开肺散显著降低胶原及其相关基因、Ⅰ型胶原蛋白的表达以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量(P<0.05,P<0.01)。结论参麦开肺散可明显抑制TGF-β诱导的NIH/3T3 FB胶原的合成,其发挥抗纤维化作用可能与其抑制FB增殖及胶原合成相关。     

姜黄素衍生物对原代大鼠肝星状细胞作用的体外研究

目的：观察姜黄素衍生物（Curc-OEG）抑制原代肝星状细胞（HSC）增殖、活化以及诱导其凋亡的作用,探讨其可能的作用机制。方法：采用IV型胶原酶、DNA酶消化SD雄性大鼠肝脏,percoll梯度离心得到纯化的肝星状细胞。细胞分离后1d分别加入0、6.25、12.5μg/mL的姜黄素衍生物,作用7d后用RT-PCR及Western blot检测细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2的mRNA水平和蛋白表达量。活化的肝星状细胞在第14天分别加入0、6.25、12.5、25、50、75μg/mL的姜黄素衍生物,作用24h后RT-PCR检测凋亡基因Bax、Bcl-2的mRNA水平和纤维化相关基因TGF-β1、collagen I、NF-κB及TIMP-1的mRNA水平。结果：药物作用7d后,6.25μg/mL和12.5μg/mL浓度药物处理组与对照组相比,细胞数目分别减少了56%和86%。在12.5μg/mL浓度药物作用下,原代肝星状细胞α-SMA、TGF-β1及Smad2的mRNA表达水平分别下调83%、85%及75%,蛋白表达水平分别下调94%、92%及73%（P〈0.05）。25μg/mL浓度药物作用24h后,细胞凋亡明显。在50μg/mL浓度药物作用下,活化的肝星状细胞Bax的mRNA表达水平上调约2.3倍,Bcl-2的mRNA表达水平下调约5.6倍;TGF-β1、collagen I、NF-κB及TIMP-1的mRNA表达水平分别下调90%、83%、74%、65%（P〈0.05）。结论：姜黄素衍生物可以明显抑制原代肝星状细胞的增殖和活化,促进活化的肝星状细胞凋亡及减少细胞外基质的沉积。     

丹酚酸B对转化生长因子β1诱导人肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的：观察丹酚酸B（Sal B）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人肺成纤维细胞增殖及分化的影响。方法：将人胚肺成纤维细胞（MRC-5）随机分为6组：对照组（未加入TGF-β1或Sal B）;1μmol/L Sal B组;10μmol/L Sal B组;10ng/mL TGF-β1组;TGF-β1（10ng/mL）＋1μmol/L Sal B组;TGF-β1（10ng/mL）＋10μmol/L Sal B组。采用MTT法观察各组细胞增殖情况;RT-PCR和Western blot方法分别检测各组细胞α-SMA mRNA和蛋白的表达情况;免疫荧光方法检测细胞内纤维形肌动蛋白（Factin,Fibrous Actin）重组及观察细胞形态变化。结果：与对照组比较,TGF-β1组细胞增殖率、α-SMA mRNA和蛋白的表达水平均明显增加,细胞形态发生明显改变,胞内可见大量F-actin聚合形成的应力纤维（stress fiber）（P〈0.01）;与对照组比较,单纯加入Sal B对细胞增殖、α-SMA表达、细胞形态和F-actin重组均未产生影响（P〉0.05）;与单纯TGF-β1组比较,TGF-β1＋Sal B两组细胞增殖率、α-SMA mRNA和蛋白表达水平均下降,发生形态改变的细胞减少,胞内F-actin聚合形成的stress fibers减少（P〈0.05）,且10μmol/L Sal B对TGF-β1抑制效应优于1μmol/L Sal B,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：Sal B体外能够抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞增殖和向肌纤维母细胞分化。     

转化生长因子β1和α-平滑肌肌动蛋白在肾间质纤维化小鼠肾组织的表达

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化模型中肾组织的表达。方法 36只小鼠平均分为假手术组与模型组,术后3、7、14d处死小鼠,取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色、免疫组化与RT-PCR检测。结果与假手术组比,模型组TGF-β1及α-SMA表达呈进行性升高,肾间质纤维化程度明显增高(P<0.O1)。结论 TGF-β1及α-SMA在肾间质纤维化过程中发挥重要作用。     

贝那普利对肝纤维化大鼠TGF-β1和α-SMA影响的研究

目的研究贝那普利对大鼠肝纤维化程度及对肝纤维化大鼠TGF～β1和α-SMA表达的影响。方法建立40％CCL诱导的大鼠肝纤维化模型,42只大鼠分为对照组（n=10）、模型组（n=16）、观察组（n=16）。对3组大鼠肝组织进行HE染色、网状纤维染色、免疫组织化学染色,观察肝组织病理变化、纤维增生及TGF—β1和α-SMA的表达情况。结果模型组的肝纤维化程度、TGF—β1阳性表达、α-SMA阳性表达计分明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）;观察组的肝纤维化程度、TGF—β1阳性表达、α-SMA阳性表达计分明显低于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论贝那普利可有效降低肝组织TGF—β1和α—SMA的表达,从而抑制大鼠肝纤维化的进程。     

TGF—β1对人牙周膜成纤维细胞合成胶原的影响

目的：观察不同浓度的转化生长因子β1对体外培养的人牙周膜成纤维细胞合成胶原的影响。方法：采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养,采用羟脯氨酸试剂盒来观察细胞合成胶原的情况。结果：0．1、1．0、10．0、50．0ng／ml的转化生成因子β1可以促进牙周膜成纤维细胞合成胶原,其中10ng／ml的TGF—β1在48h促胶原合成作用最明显,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：转化生长因子β1有促进人牙周膜成纤维细胞合成胶原的作用。     

Evodiamine ameliorates liver fibrosis in rats via TGF-β1/Smad signaling pathway

Liver fibrosis is considered to be a result of chronic liver pathological changes, and hepatic stellate cells (HSCs) play an important role during this process. Evodiamine, an indole alkaloid derived from Evodia rutaecarpa, exhibits pharmacological activities. This study focused on the effects of evodiamine on carbon tetrachloride (CCl₄)-induced liver fibrosis in rats and HSCs in vitro via the TGF-β1/Smad signaling pathway. A liver fibrosis rat model was established by the intraperitoneal injection of CCl₄ (3 ml/kg, 30% in olive oil). Evodiamine (15 and 25 mg/kg) was administered orally for 8 weeks. HSCs were treated with different evodiamine concentrations. The results indicated that evodiamine could improve the histopathological abnormalities in liver tissues and decrease the level of aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), hydroxyproline, and total bilirubin (TBIL). Concentrations of IL-6, tumor necrosis factor-α (TNF-α), collagen-I (COL-I), and collagen-III (COL-III) were reduced by evodiamine. Western blotting and real-time PCR showed that protein expression of transforming growth factor-β (TGF-β1), p-Smad 2/3 (phosphorylation of Smad 2/3), and smooth muscle alpha-actin (α-SMA) as well as mRNA expression of TGF-β1 and α-SMA in liver tissues were downregulated by evodiamine. The cell proliferation, production of hydroxyproline, and the protein expression of TGF-β1, p-Smad 2/3, and α-SMA in HSCs were dose-dependently reduced by evodiamine. Collectively, evodiamine had an antifibrosis effect in CCl₄-induced liver fibrosis, and reduced HSCs proliferation and collagen metabolism in vitro. The major mechanism was downregulation of relative expression of TGF-β1, p-Smad 2/3, and α-SMA.     

KATP通道开放剂对气道平滑肌细胞增殖表达及SOCS3/5免疫失衡的影响

目的 研究ATP敏感性钾通道（KATP通道）开放剂对气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖过程的影响,以及细胞因子信号转导抑制蛋白3/5 （SOCS3/5）表达变化与转化生长因子-β1（TGF-β1）分泌释放水平的关系.方法 体外构建增殖型ASMCs原代培养细胞模型,分为ASMCs组、AngⅡ.ASMCs组、淋巴细胞（L）组、ASMCs＋L组和AngⅡ.ASMCs＋L组.Real-time PCR检测细胞中SOCS3 mRNA及SOCS5 mRNA表达的差异;ELISA法检测上清液中TGF-β1的释放水平.观察KATP通道开放剂尼可地尔（NCR）干预的影响.结果 与ASMCs组比较,AngⅡ.ASMCs组TGF-β1的表达水平明显升高（P＜0.01）;NCR作用于细胞后各组ASMCs表达TGF-β1与格列本脲（GLI）比较明显减少（P＜0.05）.与ASMCs＋L组比较,AngⅡ·ASMCs＋L组SOCS3 mRNA表达增加,而SOCS5 mRNA表达减少（P＜0.05）.NCR可以下调SOCS3的表达,上调SOCS5的表达.结论 KATP通道开放可以通过抑制ASMCs增殖而调控TGF-β1分泌表达;SOCS3和SOCS5可能是哮喘气道重塑的特异性免疫治疗中的重要靶点.