右美托咪定激活Akt通路对缺氧复氧肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 观察右美托咪定对缺氧复氧诱导肾小管上皮细胞凋亡的作用,并探讨其作用机制。方法 将人肾小管上皮细胞分五组干预：对照组(C组),常氧环境中培养28 h;缺氧复氧组(HR组),低氧环境中培养24 h后常氧环境中培养4 h;右美托咪定处理组(D组),复制缺氧复氧模型前以右美托咪定处理2 h;Akt阻断剂Uprosertib处理组(U组),复制缺氧复氧模型前以Akt阻断剂Uprosertib处理1 h;右美托咪定复合Akt阻断剂Uprosertib处理组(DU组),复制缺氧复氧模型前先以Akt阻断剂Uprosertib处理1 h,再以右美托咪定处理2 h。采用Ellsa法检测细胞上清中TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、p-Akt蛋白含量。结果 与C组比较,HR组、D组、U组和DU组TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度、细胞凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白含量明显升高(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2、p-Akt蛋白含量明显降低(P<0.05)。与HR组比较,D组和DU组TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度、细胞凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白含量明显降低(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2、p-Akt蛋白含量明显升高(P<0.05);U组TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度、细胞凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白含量明显升高(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2、p-Akt蛋白含量明显降低(P<0.05)。与D组比较,U组和DU组TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度、细胞凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白含量明显升高(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2、p-Akt蛋白含量明显降低(P<0.05)。与U组比较,DU组TNF-ɑ、IL-6、IL-1β浓度、细胞凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9蛋白含量明显降低(P<0.05),细胞存活率、Bcl-2、p-Akt蛋白含量明显升高(P<0.05)。结论 右美托咪定可通过激活Akt信号通路,抑制缺氧复氧造成的肾小管上皮细胞凋亡,发挥保护作用。     

小檗碱预先给药对缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨小檗碱预先给药对缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响.方法 培养人肾小管上皮细胞(HK-2),以1×106个/ml密度接种于培养皿(2 ml/皿)和96孔培养板(200μl/孔),采用随机数字表法,将其分为4组(n=30):正常对照组(C组)、小檗碱组(B组)、缺氧/复氧组(H/R组)和缺氧/复氧+小檗碱组(H/R+B组).B组和H/R+B组加入10 μmol/L小檗碱孵育2h,随后H/R组和H/R+B组进行缺氧24h复氧3h.测定细胞活力、细胞凋亡率、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、caspase-3、活化caspase-3、细胞色素c、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)表达,并计算Bax表达与Bcl-2表达的比值(Bax/Bcl-2).结果 与C组比较,H/R组和H/R+B组细胞活力、SOD活性和caspase-3表达降低,细胞凋亡率、MDA浓度和Bax/Bcl-2升高,活化caspase-3、细胞色素c、GRP78和CHOP表达上调(P＜0.05),B组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与H/R组比较,H/R+B组细胞活力、SOD活性和caspase-3表达升高,细胞凋亡率、MDA浓度和Bax /Bcl-2降低,活化caspase-3、细胞色素c、GRP78和CHOP表达下调(P＜0.05).结论 小檗碱预先给药可抑制缺氧/复氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡,其机制与抑制线粒体应激通路和内质网应激通路有关.     

骨形态发生蛋白-7基因转染对新生大鼠心肌细胞缺氧-复氧时凋亡的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白-7(BMP-7)基因转染对新生大鼠心肌细胞缺氧-复氧时凋亡的影响.方法 体外培养的新生大鼠心肌细胞分为3组:正常对照组(C组)、缺氧-复氧组(HR组)培养的心肌细胞置于95%N2-5%CO2混合气体饱和的缺氧罐中缺氧2 h后,放回孵育箱中继续培养4 h;BMP-7基因转染组(BT组)将含pcDNA3.1-BMP-7基因的质粒在转染试剂作用下转染心肌细胞后72 h再行缺氧2 h,复氧4 h.每组重复8次.计数心肌细胞搏动次数,采用全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)活性.倒置显微镜下观察心肌细胞形态.采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况,免疫细胞化学方法测定Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 与c组相比,HR组和BT组心肌细胞LDH活性、细胞凋亡率增加,Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调(P＜0.05);与HR组相比,BT组心肌细胞LDH活性、细胞凋亡率降低,Bax蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调(P＜0.05).结论 BMP-7基因转染可减轻新生大鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤,其机制可能与调控Bcl-2、Bax蛋白的表达,抑制心肌细胞凋亡有关.     

丙泊酚对高糖环境下心肌细胞缺氧后损伤的保护作用

目的研究丙泊酚对高糖环境下心肌细胞缺氧后损伤的保护作用。方法培养大鼠原代H9C2心肌细胞,构建细胞缺氧-复氧模型。将这些心肌行实验分组:正常培养组(NC组)、高糖培养组(HG组)、高糖缺氧-复氧组(GR组),在高糖缺氧-复氧环境下,培养基中分别加入终浓度分别为12.5μmol/L(P12.5组)、25μmol/L(P25组)、50μmol/L(P50组)以及100μmol/L(P100组)的丙泊酚以及终浓度为100μmol/L的二甲基亚砜(DMSO)溶剂组(D100组)。检测各组的细胞活力、肌酸激酶-MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、乳酸脱氢酶(LDH)浓度以及细胞内氧化应激水平和线粒体依赖性细胞凋亡水平。结果与NC和HG组比较,其余组的细胞活力明显降低,LDH、MDA浓度、CK-MB和cTnI相对浓度明显升高,T-SOD、线粒体活性和ATP相对浓度明显降低(P0.05);与GR组比较,P12.5组、P25组、P50组细胞活力明显升高,LDH、MDA浓度、CK-MB和cTnI相对浓度明显降低,T-SOD、线粒体活性和ATP相对浓度明显升高(P0.05);与P25组比较,P50组、P100组以及D100组细胞活力明显降低,LDH、MDA浓度、CK-MB和cTnI相对浓度明显升高,T-SOD、线粒体活性和ATP相对浓度明显降低(P0.05)。结论一定浓度的丙泊酚可以通过减轻氧化应激,减少线粒体的损伤从而减轻高糖缺氧对心肌细胞的损伤。     

甘氨酸对大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡的影响

目的 明确甘氨酸对缺血缺氧致心肌细胞凋亡过程的影响.方法 建立SD乳鼠心肌细胞缺血缺氧模型,分为单纯缺血缺氧组和甘氨酸处理组(培养液中加入终浓度5 mmoL/L甘氨酸,其余处理同单纯缺血缺氧组).以SD乳鼠正常心肌细胞作为对照组.3组细胞培养6 h后,检测凋亡情况、线粒体跨膜电位及分布情况、线粒体通透性转换孔(mPTP)开放情况及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性变化.结果 (1)细胞凋亡程度:对照组和甘氨酸处理组荧光强度均明显低于单纯缺血缺氧组(P<0.01).(2)线粒体跨膜电位:对照组心肌细胞荧光强度为73±4,单纯缺血缺氧组荧光强度(32±7)明显较弱(P＜0.01),甘氨酸处理组荧光强度(52±4)强于单纯缺血缺氧组(P＜0.01).(3)mPTP开放情况:对照组心肌细胞线粒体荧光强度(90±7)较强,甘氨酸处理组荧光强度(62±8)明显强于单纯缺血缺氧组(27±4,P＜0.01).(4)caspase-3活性:对照组和甘氨酸处理组均显著低于单纯缺血缺氧组(P＜0.01).结论 甘氨酸对缺血缺氧心肌细胞具有抗凋亡作用,其机制可能与改变线粒体膜电位、减少mPTP开放、减轻钙超载、降低caspase-3活性有关.     

PI3K/Akt信号通路在异丙酚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在异丙酚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 体外培养SD乳鼠心肌细胞,接种于96孔板(细胞密度1×105/ml,200 μl/孔)或6孔板(细胞密度5×105/ml,2 ml/孔)中,采用随机数字表法,将细胞随机分为4组(n=24):常规培养组(C组)细胞常规培养6h;缺氧复氧组(H/R组)细胞行缺氧2h,复氧4h;缺氧复氧+异丙酚组(H/R+P组)于缺氧结束时行异丙酚(终浓度50 μmol/L)后处理;H/R+异丙酚+ PI3K抑制剂组(H/R+ P+W组)于缺氧结束时加入PI3K抑制剂渥曼青霉素(终浓度100nmol/L)和异丙酚(终浓度为50μmol/L).复氧结束时,采用MTT法测定细胞活力,应用生化自动分析仪测定培养液LDH活性;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot法检测心肌细胞磷酸化Akt(p-Akt)、Bcl-2及Bax表达水平.结果 与C组相比,H/R组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡率升高,p-Akt和Bax表达上调,Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax降低(P＜0.05).与H/R组比较,H/R+P组细胞活力升高,LDH活性和细胞凋亡率降低,p-Akt和Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax升高(P＜0.05).与H/R+P组比较,H/R+ P+W组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡率升高,p-Akt和Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax降低(P＜0.05).结论 异丙酚后处理减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的机制与激活PI3K/Akt信号通路有关.     

七氟醚后处理对大鼠心肌缺血-再灌注时AKT/GSK3β/mTOR表达的影响

目的观察七氟醚后处理对大鼠心肌缺血-再灌注时蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AKT/GSK3β/mTOR)表达的影响。方法雄性SD大鼠39只,体重200~250g,在体结扎左冠状动脉前降支30min建立心肌缺血-再灌注损伤模型。采用随机数字表法分为三组(n=13):假手术组(Sham组)、单纯缺血-再灌注组(IR组)、七氟醚后处理组(SPC组)。除Sham组,其余组均缺血30min后再灌注2h。SPC组进行七氟醚后处理:于缺血末至再灌注开始后15min持续吸入2.4%七氟醚,而其它二组吸入氧浓度33%的空气。再灌注2h时,二维心脏超声评估各组心功能,1%2,3,5氯化三苯基四氮唑测定心肌梗死范围,透射电镜观察心肌细胞超微结构,原位末端转移酶标记法测定心肌细胞凋亡,Western blot法测定蛋白表达,包括磷酸化AKT(pAKT)/总AKT(t-AKT),磷酸化GSK3β(p-GSK3β)/总GSK3β(t-GSK3β),磷酸化mTOR(pmTOR)/总mTOR(t-mTOR),B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)。结果与Sham组比较,再灌注未IR组心功能恶化,心肌梗死范围增加,心肌线粒体损伤加重,凋亡阳性细胞增多,Bcl-2表达明显下调,p-AKT/t-AKT、p-GSK3β/t-GSK3β、p-mTOR/t-mTOR和Bax表达明显上调(P0.05)。与IR组比较,再灌注未SPC组心功能明显改善,心肌梗死范围减少,心肌线粒体损伤减弱,凋亡阳性细胞减少,Bax表达明显下调,p-AKT/t-AKT、p-GSK3β/t-GSK3β、p-mTOR/tmTOR和Bcl-2表达明显上调(P0.05)。结论七氟醚后处理对在体大鼠心肌缺血-再灌注损伤具有明显的保护作用,能够减少心肌细胞线粒体损伤,抑制心肌细胞凋亡,且其机制可能与其激活AKT/GSK3β/mTOR信号分子有关。     

紫绀及非紫绀型先心病患者来源的人骨髓间充质干细胞抗凋亡能力的比较

目的对比紫绀型先心病(cyanotic congenital heart disease,C-CHD)和非紫绀型先心病(acyanotic congenital heart disease,A-CHD)患儿来源的骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)在乏氧环境下的抗凋亡能力并探讨其发生机制。方法 hMSCs取自C-CHD(C组)和A-CHD(A组)患儿(男女不限,0~5岁),于体外乏氧环境下(1%O_2,5%CO_2,94%N_2)培养。以Annexin V/PI双染结合流式细胞技术对比两组细胞抵御缺血缺氧诱导细胞凋亡的能力;以Western blot法检测两组细胞中B细胞淋巴瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的含量。结果 Annexin V/PI双染结合流式细胞检测结果显示:在缺血缺氧环境下,C组细胞的早期凋亡率(P0.01)和总体凋亡率(P0.05)低于A组细胞。Western-blot检测结果显示:C组细胞的凋亡抑制基因Bcl-2的含量高于A组细胞(P0.05),抗凋亡抑制基因Bax(P0.05)以及caspase-3(P0.05)的含量低于A组细胞。结论 C-CHD患者来源的hMSCs具有更好的抗缺血缺氧诱导的总凋亡及早期凋亡能力,这可能与其天然乏氧诱导的Bcl-2表达上调,Bax,caspase-3表达下调有关。     

异丙酚对急性肺栓塞大鼠肺细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚对急性肺栓塞大鼠肺细胞凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠40只,体重280～300 g,随机分为5组(n=8):假手术组(S组)、急性肺栓塞组(APTE组)、异丙酚4 mg·kg-1 ·h-1 组(P1组)、异丙酚8 mg·kg-1 ·h- 1组(P2组)和异丙酚16 mg·kg-1 ·h-1 组(P3组).取尾静脉血样0.2 ml,37℃水浴箱内过夜,分割成直径1 mm ,长5 mm的栓子,颈静脉注射混有15个栓子的2 ml生理盐水制备大鼠肺栓塞模型.S组静脉输注生理盐水2 ml/h 4 h;APTE组、P1组、P2组和P3组制备肺栓塞模型,然后APTE组静脉输注5%葡萄糖2 ml/h4 h,P1 组、P2组和P3组分别静脉输注异丙酚4、8、16 mg·kg-1 ·h-1 (用5%葡萄糖稀释至2 m1)4 h.给药结束后,处死大鼠,取肺组织,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测caspase-3、Bcl-2、Box、Fas和FasL的mRNA表达水平,采用Western blot法检测caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas和FasL的蛋白表达水平,计算Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值.结果 与S组比较,AVIE组、P1组、P2组和P3 组肺组织细胞凋亡率升高,caspase-3、Bax、Fas、FasL的mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2的mRNA和蛋白表达下调,Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值降低(P＜0.05或0.01);与APTE组比较,P1组、P2组和P3 组肺组织细胞凋亡率降低,caspase-3、Bax、Fas、FasL的mRNA和蛋白表达下调,Bcl-2的mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值升高(P＜0.05或0.01);P.组、P2组和P3组间肺组织细胞凋亡率、caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas、 FasL的mRNA和蛋白表达、Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚可抑制急性肺栓塞大鼠肺细胞凋亡,其机制与下调肺组织caspase-3、Fas和FasL的表达,调节Bcl-2/Bax的平衡有关.     

丙泊酚对2型糖尿病大鼠心肌缺血-再灌注损伤时凋亡蛋白Bax和Bcl-2的影响

目的观察丙泊酚对2型糖尿病大鼠心肌缺血-再灌注损伤时凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达的影响。方法雄性Wistar大鼠48只,随机均分为心肌缺血-再灌注组(CI组)、心肌缺血-再灌注+丙泊酚组(CP组)、假手术组(CC组),以及糖尿病心肌缺血-再灌注组(DI组)、糖尿病心肌缺血-再灌注+丙泊酚组(DP组)、糖尿病假手术组(DC组)。采用高脂高糖饮食复合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法制备2型糖尿病模型。DI组和CI组采用结扎左冠状动脉前降支30min再灌注2h的方法制备心肌缺血-再灌注模型。DP组、CP组在缺血前10min开始静脉泵注丙泊酚6mg·kg-1·h-1至再灌注2h结束,DI组、CI组给予等容量的生理盐水;DC组、CC组仅穿线不结扎。再灌注结束后,取病变部分心肌,光镜下观察缺血心肌形态学改变,免疫组化法测定心肌Bax和Bcl-2表达水平,并计算Bcl-2和Bax表达的比值。结果与CC组比较,CI组和CP组Bcl-2、Bax表达明显上调,CI组Bcl-2/Bax明显下降(P0.05)。与CI组比较,CP组Bax表达明显下调,Bcl-2表达明显上调,Bcl-2/Bax明显升高(P0.05),DI组Bcl-2、Bax表达明显上调(P0.05)。与DC组比较,DI组和DP组Bcl-2、Bax表达明显上调,DI组Bcl-2/Bax明显下降(P0.05)。与DI组比较,DP组Bax表达明显下调,Bcl-2表达明显上调,Bcl-2/Bax明显升高(P0.05)。结论丙泊酚可上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达、下调凋亡前蛋白Bax的表达,并减轻正常大鼠和2型糖尿病大鼠心肌缺血-再灌注损伤。     

七氟醚后处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤

目的分析七氟醚后处理对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响并探讨其机制。方法清洁级成年雄性SD大鼠72只,3月龄,体重180～230 g。采用随机数字表法分为四组:假手术组(S组)、单纯七氟醚组(Sev组)、缺血-再灌注组(IR组)和七氟醚后处理组(SP组),每组18只。S组:穿线不阻断左冠状动脉前降支(LAD);Sev组:穿线不阻断LAD,穿线稳定后60 min吸入2.4%七氟醚15 min; IR组:穿线稳定后30 min阻断LAD,缺血30 min,再灌注2 h; SP组:穿线稳定后30 min阻断LAD,缺血30 min,再灌注2 h,同时在穿线稳定后60 min吸入2.4%七氟醚15 min。于再灌注后2 h,采用ELISA法检测血清LDH浓度,Western Blot法检测心肌受体相互作用蛋白1(RIPK1)、p-RIPK1、受体相互作用蛋白3(RIPK3)、p-RIPK3、混合系激酶结构域样蛋白(MLKL)、p-MLKL含量,荧光显微镜观察程序性坏死心肌细胞的荧光强度,1%氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测心肌梗死面积百分比,HE染色后光镜下观察心肌病理学形态。结果与S组比较,IR组和SP组血清LDH浓度明显升高(P0.05),心肌RIPK1、p-RIPK1、RIPK3、p-RIPK3、MLKL、p-MLKL含量明显增加(P0.05),程序性坏死心肌细胞荧光强度明显增强(P0.05),心肌梗死面积百分比明显升高(P0.05),心肌细胞排列更为紊乱。与IR组比较,SP组血清LDH浓度明显降低(P0.05),心肌RIPK3、p-RIPK3、MLKL和p-MLKL含量明显减少(P0.05),程序性坏死心肌细胞荧光强度明显减弱(P0.05),心肌梗死面积百分比明显降低(P0.05),心肌细胞排列更为整齐。S组和Sev组间各指标差异无统计学意义。结论七氟醚后处理可通过升高血清LDH浓度、降低心肌梗死面积百分比、改善心肌病理学改变减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与抑制缺血-再灌注损伤后心肌细胞程序性坏死相关。     

缺氧复氧对H9C2心肌细胞凋亡、自噬和焦亡的影响

目的:探讨缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,HR)对H9C2心肌细胞凋亡、自噬和焦亡3种细胞死亡方式的影响。方法:将培养的H9C2心肌细胞按随机数字表法分为正常对照组(Ctrl组)和HR组,其中HR组H9C2心肌细胞在缺氧培养箱中进行氧糖剥夺8h,然后复氧12 h。通过检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量及四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrazolium bromide,MTT]比色法检测细胞活力来评估细胞损伤情况(每组6孔),Western blot检测(每组9孔)细胞凋亡相关蛋白[天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate-specific proteinase,caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia 2,Bcl-2)、Bcl相关蛋白(bcl-associate x protein,Bax)]、自噬相关蛋白[(轻链蛋白3(light chain 3,LC3)Ⅱ/Ⅰ、p62、Beclin-1、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of ra-pamycin,p-mTOR)]、焦亡相关蛋白[Nod样受体蛋白-3(nod-like receptor pyrin domain3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apopto-sis associated speck-like protein,ASC)、caspase-1p20、IL-1β、IL-18]。通过免疫荧光染色进一步评估细胞凋亡、自噬及焦亡情况(每组6孔)。结果:与Ctrl组比较,HR组H9C2心肌细胞HR后细胞活力降低(P<0.05),LDH释放增加(P<0.05),活化的cas-pase-3及Bax的表达上调(P<0.05),Bcl-2表达下降(P<0.05),TUNEL染色显示HR后细胞凋亡显著增加(P<0.05),提示HR后细胞凋亡及损伤增加;而p-mTOR、p62均表达增加(P<0.05),但LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1蛋白降低(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ免疫荧光染色显示HR后细胞内的自噬小体增加(P<0.05),表明HR后H9C2心肌细胞自噬受到明显抑制;同时炎性小体NLRP3、ASC、cas-pase-1p20蛋白均显著上调(P<0.05),活化的炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达增加(P<0.05),提示HR后NLRP3炎性小体活化,细胞焦亡增加。结论:H9C2心肌细胞在HR损伤过程中自噬被抑制,细胞焦亡及凋亡增加。     

丹酚酸A复合右美托咪定对脑缺血-再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨丹酚酸A复合右美托咪定对脑缺血-再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡及Sirt1-p53通路的影响。方法选择SD大鼠90只,体重160~230 g,随机分为五组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)、丹酚酸A干预组(A组)、右美托咪定干预组(D组)、丹酚酸A复合右美托咪定干预组(AD组),每组18只。采用线栓法建立大脑中动脉缺血-再灌注损伤模型。脑缺血-再灌注24 h后,检测大鼠血流动力学情况,Morris水迷宫实验观察第1、2、3、4、5天逃避潜伏期、穿越平台次数,评估神经功能缺损评分。采用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫化巴比妥酸法测定MDA含量,免疫组织化学法检测海马组织Bcl-2和Bax蛋白含量,Western blot法检测海马组织Sirt1和乙酰化p53蛋白含量。结果与S组比较,IR组、A组、D组和AD组第1、2、3、4、5天逃避潜伏期明显延长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05),HR明显减慢(P<0.05),MAP、CO明显降低(P<0.05),神经功能缺损评分明显升高(P<0.05),海马组织凋亡细胞百分比、MDA含量、Bax和乙酰化p53蛋白含量明显升高(P<0.05),海马组织SOD活力、Bcl-2和Sirt1蛋白含量明显降低(P<0.05)。与IR组比较,A组、D组和AD组第1、2、3、4、5天逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),穿越平台次数明显增多(P<0.05),HR明显增快(P<0.05),MAP、CO明显升高(P<0.05),神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),海马组织凋亡细胞百分比、MDA含量、Bax和乙酰化p53蛋白含量明显降低(P<0.05),海马组织SOD活力、Bcl-2和Sirt1蛋白含量明显升高(P<0.05)。与A组、D组比较,AD组第1、2、3、4、5天逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),穿越平台次数明显增多(P<0.05),HR明显增快(P<0.05),MAP、CO明显升高(P<0.05),神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),海马组织细胞凋亡百分比、MDA含量、Bax和乙酰化p53蛋白含量明显降低(P<0.05),海马组织SOD活力、Bcl-2和Sirt1蛋白含量明显升高(P<0.05)。结论丹酚酸A复合右美托咪定可显著降低脑缺血-再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡,其作用可能与Sirt1-p53通路有关。     

Cardioprotective effects of cyclosporine A in an in vivo model of myocardial ischemia and reperfusion

BACKGROUND: Recent evidence indicates that reperfusion of the heart after a period of ischemia leads to the opening of the mitochondrial permeability transition pore (MPTP). The aim of this study was to investigate cardioprotective effects of cyclosporine A (CsA), an inhibitor of the MPTP, in an in vivo model of myocardial ischemia and reperfusion. METHODS: Male Sprague-Dawley rats were subjected to occlusion of the left anterior descending coronary artery for 30 min followed by 180 min of reperfusion. CsA (10 mg/kg) or vehicle was given 10 min prior to ischemia via the femoral vein. Sham myocardial ischemia-reperfusion rats (sham-operation group) were used as controls. Infarct size was measured using the staining agent TTC (2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride) and myocardial apoptosis by caspase-3 activity was determined by fluorescent assay. The myocardium mitochondria ultrastructure was observed through a transmission electron microscope. RESULTS: CsA significantly reduced infarct size (48.8 +/- 5.8% of left ventricle in vehicle + I/R group and 30.3 +/- 2.7% of left ventricle in CsA + I/R, respectively) and decreased caspase-3 activity in the myocardium [(0.62 +/- 0.17)/microg of protein and (0.42 +/- 0.15)/microg of protein, respectively] and relieved the injury of mitochondria. CONCLUSION: CsA reduced the cardiac damage associated with ischemia-reperfusion injury of the heart. The cardioprotective effects of CsA might be associated with the protection of mitochondria and the inhibition of caspase-3 activity. It also suggests that the MPTP might play an important role in cardiomyocytes death after ischemia-reperfusion injury.     

心率和脉搏灌注变异指数对剖宫产脊麻后低血压的预测作用

目的探讨HR和脉搏灌注变异指数(PVI)对剖宫产脊麻后低血压的预测作用。方法选择择期脊麻下剖宫产的产妇80例,年龄18~40岁,BMI 20~40kg/m2,ASAⅠ或Ⅱ级。在L3-4间隙行硬腰联合麻醉。记录麻醉前后的HR、PVI、BP和MAP。探讨HR和PVI与脊麻后低血压的相关性。结果与未发生低血压的产妇比较,发生低血压的产妇HR基础值明显增快、PVI基础值明显增大(P 0.05)。HR基础值预测低血压的ROC曲线下面积为0.77(P 0.05),最佳阈值为≥84次/分,预测低血压的敏感度和特异度分别为70.7%和81.8%,阳性预测值和阴性预测值分别为91.1%和51.4%。PVI基础值预测低血压的ROC曲线下面积为0.74(P 0.05),最佳阈值为≥21%,预测低血压的敏感度和特异度分别为44.8%和95.5%,阳性预测值和阴性预测值分别为96.3%和39.2%。HR基础值联合PVI基础值预测低血压的ROC曲线下面积为0.86(P 0.05),最佳阈值为≥86次/分(HR)或≥21%(PVI),预测低血压的敏感度和特异度分别为82.8%和86.4%,阳性预测值和阴性预测值分别为92.5%和66.7%。结论脊麻前较大的心率基础值和脉搏灌注变异指数基础值与剖宫产脊麻后低血压相关,联合使用这两个指标可以用于临床预测剖宫产脊麻后低血压。     

Prognostic role of caveolin in breast cancer: A meta-analysis

IntroductionRecent studies have shown that Caveolin play a potential role as a prognostic biomarker of cancers. The aim of the present study was to clarify whether caveolin could be a prognostic factor for patients with breast cancer.Materials and methodsAll eligible studies were identified using Medline and EMBASE system. The patients' clinical characteristics and survival outcome were extracted. The meta-analysis was performed to clarify the prognostic role of caveolin and the correlation between the caveolin expression and clinical characteristics.ResultsAfter full text review, 19 articles were identified as eligible articles. We found that negative stromal Caveolin-1 (Cav-1) expression could predict the poor prognosis of breast cancer. The combined HR (95% CI) for OS was 4.12[2.05, 8.28], while the combined HR (95% CI) for DFS/PFS was 3.69[2.57, 5.31]. The combined HR (95% CI) of tumor epithelial Cav-1 for OS was 0.78[0.54, 1.12], and the combined HR (95% CI) for DFS/PFS was 1.32[0.76, 2.29]. The combined HR (95% CI) of tumor epithelial Cav-2 for CSS was 2.04[0.91, 4.56]. Odds ratios (ORs) showed that the stromal Cav-1 expression was associated with the AJCC stage, T status, lymph metastasis, distant metastasis, and histological grade (G grade) and many biomarkers. We found ORs of Cav-1 and Cav-2 expression in tumor epithelial cells varied in clinical characteristics and biomarkers.ConclusionOur results indicated that negative expression of stromal Cav-1 was associated with poor prognosis of breast cancer, while the detection of Cav-1 and Cav-2 in tumor epithelial cells was not.     

脂肪乳剂逆转布比卡因心肌毒性中线粒体凋亡途径相关蛋白的变化

目的检测脂肪乳剂逆转布比卡因心肌毒性作用中线粒体凋亡通路相关蛋白的变化,探讨脂肪乳剂逆转布比卡因心脏毒性的可能机制。方法日龄1~3d的健康SD大鼠乳鼠,取其心室肌进行体外原代培养,用含有布比卡因的培养基培养24h来建立心肌细胞布比卡因中毒模型。实验分组:空白对照组(C组)、布比卡因组(B组)、布比卡因+脂肪乳剂组(BL组)。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Western blot法检测细胞内细胞色素C(cytochrome C,Cyto-C)和活化的casepase-3蛋白含量。结果与C组比较,B组和BL组细胞凋亡率明显升高,且B组明显高于BL组(P0.05)。与C组比较,B组和BL组Cyto-C和活化的casepase-3含量均明显升高(P0.05),且B组明显高于BL组(P0.05)。结论脂肪乳剂可能通过抑制线粒体Cyto-C释放,降低casepase-3激活来调节细胞凋亡,从而发挥保护心肌细胞的作用。     

两种麻醉方法用于老年糖尿病患者胫骨横向骨搬移术的比较

目的比较两种麻醉方法在老年糖尿病患者胫骨横向骨搬移术中的效果。方法选择拟行单侧胫骨横向骨搬移术患者60例,男30例,女30例,年龄65～89岁,ASA II级,BMI 18～24 kg/m~2。随机分为腘窝处坐骨神经联合股神经阻滞组(NB组)和硬膜外麻醉组(EA组)。NB组在超声引导下正确定位坐骨神经和股神经后分别给予0.375%罗哌卡因各15～20 ml。EA组取L_(2～3)穿刺点行硬膜外麻醉,2%利多卡因3 ml试验剂量后,分次给予0.75%罗哌卡因10～15 ml。记录两组患者术中输液量、使用麻黄碱情况。记录两组患者阻滞前、阻滞后10、20、30、60 min和术后60 min的HR和MAP。记录两组患者感觉和运动神经阻滞起效时间、完善时间、持续时间。记录有无穿刺部位出血、局麻药不良反应、新发神经系统病变,记录尿潴留、恶心呕吐等不良反应发生情况。结果 NB组术中输液量、术中使用麻黄碱例数明显少于EA组(P0.05)。与阻滞前比较,阻滞后10、20、30、60 min和术后60 min EA组MAP明显降低(P0.05),阻滞后10、20、30、60 min和术后60 min NB组MAP明显高于EA组(P0.05),两组HR差异无统计学意义。两组患者感觉、运动神经阻滞起效时间和完善时间差异无统计学意义。NB组感觉神经阻滞持续时间明显长于EA组(P0.05),运动神经阻滞持续时间明显短于EA组(P0.05)。两组患者均无一例出现穿刺部位出血、局麻药中毒及新发神经系统病变。NB组尿潴留和恶心呕吐发生率明显低于EA组(P0.01)。结论与硬膜外麻醉相比较,坐骨神经联合股神经阻滞应用于老年糖尿病患者胫骨横向骨搬移术,对血流动力学影响小,阻滞效果好、术后镇痛时间长,不增加并发症发生。     

喉罩与气管插管在患儿全身麻醉气道管理中的安全性Meta分析

目的采用Meta分析比较喉罩与气管插管在患儿全身麻醉气道管理中的安全性及有效性。方法计算机检索Cochrane、Pubmed、Web of Science、Embase、万方和中国知网等数据库,检索时间从建库到2019年7月,纳入比较喉罩与气管插管在患儿全身麻醉气道管理中应用的临床随机对照试验(RCT)。由两位研究员按照纳入与排除标准选择试验、提取资料,并根据Cochrane系统手册提供的质量评价标准评价纳入研究质量,采用RevMan 5.2软件进行Meta分析。主要结局指标包括术后喉痉挛及咽喉疼痛的发生率,次要结局指标包括术后咳嗽、声嘶的发生率、MAP和HR的波动等。结果最终纳入35项RCT,共3 010例患儿,其中喉罩组1 502例,气管插管组1 508例。Meta分析结果显示:与气管插管组比较,喉罩组术后喉痉挛(RR=0.36,95%CI 0.24～0.54,P0.001)、咽喉疼痛(RR=0.32,95%CI 0.25～0.42,P0.001)的发生率明显降低;喉罩组支气管痉挛、术后咳嗽、低氧血症及术后声嘶的发生率明显降低(P0.005);喉罩组麻醉诱导期间MAP和HR的波动明显较小(P0.001)。两组术后黏膜损伤、恶心呕吐、反流误吸、胃肠胀气及一次置入成功率差异无统计学意义。结论患儿全身麻醉时选择喉罩可以有效降低喉痉挛和咽喉疼痛,且对患儿的血压、心率影响较小。     

参附注射液预先给药对心肌缺血再灌注大鼠线粒体通透性转换和跨膜电位的影响

目的 评价参附注射液预先给药对心肌缺血再灌注大鼠线粒体通透性转换和跨膜电位(△ψm)的影响.方法 健康成年SD大鼠30只,体重250～300 g,雌雄不拘,随机分为3组(n=10):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(IR组)和参附注射液预先给药组(SFI组).IR组和SFI组采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min制备心肌缺血再灌注模型;S组仅穿线,不结扎左冠状动脉前降支.缺血前15 min时,SFI组经颈内静脉输注参附注射液10 ml/kg,S组和IR组给予等容量生理盐水.再灌注120 min时,右颈内动脉取血样,测定血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnl)浓度.然后处死大鼠,取心脏,提取心肌线粒体,制备线粒体悬液,测定线粒体通透性转换孔(MPTP)的活性和△ψm.结果 与S组比较,IR组和SFI组血清cTnI浓度和MPTP活性升高,线粒体△ψm降低(P＜0.01);与IR组比较,SFI组血清cTnI浓度和MPTP活性降低,线粒体△ψm升高(P＜0.01).结论 参附注射液预先给药可抑制线粒体膜通透性转换,减少线粒体跨膜电位的耗散,减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.