小鼠H22皮下移植肝肿瘤模型构建及干预效果与分子机制初探

目的:观察雷氏大疣蛛毒素、抗癌中药和有氧运动,对小鼠皮下移植H22肝肿瘤的干预效果及p53/p21信号通路及相关细胞因子的差异表达与分子机制探讨。方法:40只KM小鼠,以皮下移植法构建H22小鼠肝肿瘤模型。建模成功鼠随机分为4组:模型组,雷氏大疣蛛毒素组,中药组,有氧运动组。各干预组于动物建模成功后第三天进行雷氏大疣蛛毒素、中药和运动干预。HE染色法对各组小鼠肝肿瘤组织进行显微结构形态学观察;免疫组化技术检测肿瘤组织中突变型P53、P21、Bax及Survivin蛋白水平的差异表达;实时荧光定量PCR技术检测肿瘤野生型p53、p21、Bax、Survivin mRNA表达水平。结果:①HE染色显示结果:雷氏大疣蛛毒素组,可见较大坏死区;中药组,细胞核较小,可见坏死区;运动组细胞排列疏松欠规则,出现坏死区和免疫细胞;模型对照组,无明显组织坏死,可见丰富的血管。②免疫组化检测显示:p21、Bax免疫组化中雷氏大疣蛛毒素组阳性表达最高,而突变型p53、Survivin蛋白表达最低,中药组、有氧运动组表达均低于模型对照组。③Real-time PCR检测显示:与模型对照组相比,有氧运动组、中药组、雷氏大疣蛛毒素组野生型p53、p21和Bax mRNA表达量提高,而有氧运动组、中药组、雷氏大疣蛛毒素组Survivin mRNA表达均低于模型对照组。结论:雷氏大疣蛛毒素与抗癌中药、有氧运动三种干预手段,能有效提高野生型P53、P21、Bax相关蛋白和mRNA的含量,降低突变型P53、Survivin蛋白和mRNA含量,发挥抑制H22肝肿瘤增殖的作用。其具体机制还有待进一步研究证实。     

雷氏大疣蛛毒素对人肝癌细胞SMMC-7721 细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨雷氏大疣蛛Macrothele raveni毒素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及细胞周期的抑制作用，进一步探讨其作用的分子机制。方法 采用MTT法测定雷氏大疣蛛毒素对SMMC一7721细胞增殖作用的影响；采用[^3H]TdR掺入法检测雷氏大疣蛛毒素作用前后SMMC7721细胞DNA合成的变化；采用流式细胞术（FCM）探讨雷氏大疣蛛毒素对SMMC-7721细胞凋亡率和细胞周期的影响；采用Western Blot方法研究雷氏大疣蛛毒素对细胞周期相关c-myc蛋白表达的影响。结果 MTT方法表明雷氏大疣蛛毒素对SMMC-7721细胞增殖有较强的抑制作用（P〈0．05），时效和量效关系良好。雷氏大疣蛛毒素可以抑制SMMC-7721细胞DNA的合成。流式细胞仪检测结果发现雷氏大疣蛛毒素作用后SMMC-7721细胞凋亡率增加，细胞周期阻滞在G2／M期。Western Blot方法进一步检测到雷氏大疣蛛毒素作用SMMC7721细胞72h后，c-myc蛋白表达减弱。结论 雷氏大疣蛛毒素可以抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和DNA的合成，其机制可能是诱导细胞凋亡，使细胞周期相关c-myc蛋白表达减弱，导致细胞周期的变化。     

Rho／Rho激酶在哮喘小鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的研究Rho／Rho激酶（ROCK）信号通路在哮喘小鼠气道中的表达及其对气道重塑的作用。方法清洁级BALB／c雄性小鼠39只,随机分为对照组、哮喘组、Y-27632干预组、地塞米松干预组,每组10只（其中对照组9只）。建立哮喘小鼠模型,并应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632进行干预,光镜观察肺组织结构,Image—proplus图像分析软件测量支气管壁厚度（Wat）和平滑肌厚度（Wam）,免疫组化法测定肺组织ROCKⅡ蛋白含量,RT—PCR法测定RhoA、ROCKⅡ mRNA含量。结果（1）哮喘组小鼠RhoA、ROCKⅡ表达明显增高,应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达。（2）Y-27632干预组小鼠Wat和Wam均明显低于哮喘组小鼠。结论哮喘小鼠肺组织RhoA及ROCKⅡ表达增多,ROCKll受体拮抗剂Y-27632能够下调RhoA、ROCKⅡ的表达,明显抑制哮喘小鼠Wat和Wam。     

miR-34b-5p上调抑制弥漫大B细胞淋巴瘤的侵袭及RhoA/ROCK信号通路

目的 研究miR-34b-5p过表达对弥漫大B细胞淋巴瘤的生长和运动以及RhoA/ROCK信号通路的影响.方法 选择弥漫大B细胞淋巴瘤系中SU-DHL-4细胞进行研究.建立空白对照组、空载体转染组、miR-34b-5p转染组,采用qRT-PCR检测miR-34b-5p的表达量,采用菌落形成实验、流式细胞术和Transwell试验检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力;采用Western blot检测E-cadherin、N-cadherin Vimentin、RhoA和ROCK蛋白的表达量.结果 在转染miR-34b-5p的细胞内,miR-34b-5p的表达量上调.miR-34b-5p过表达能抑制弥漫大B细胞淋巴瘤SU-DHL-4细胞增殖,促进细胞凋亡,减轻细胞侵袭,抑制RhoA/ROCK信号通路.结论 miR-34b-5p过表达可以抑制弥漫大B细胞淋巴瘤的生长和运动以及RhoA/ROCK信号通路.     

BKca下调RhoA/ROCK信号通路改善糖尿病大鼠阴茎勃起功能

目的：观察大电导钙激活钾通道（big conductance Ca2+-activated K+ channel,BKca）对糖尿病勃起功能障碍（diabetes mellitus-induced erectile dysfunction,DMED）大鼠阴茎海绵体平滑肌RhoA/ROCK信号通路的影响。方法：实验大鼠分为空白对照组8只,DMED组8只,NS1619组（DMED治疗组）7只,NS1619组大鼠采用特异性BKca激活剂（NS1619）阴茎海绵体注入2周。观察各组勃起行为,并电刺激检测阴茎海绵体内压（intracavernous pressure,ICP）/平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）,取各组阴茎海绵体平滑肌检测肌张力,采用Western blot和定量PCR（real-time PCR）方法检测RhoA、ROCK1、ROCK2表达,反应RhoA/ROCK信号通路差异,同时检测MYPT-1表达反应肌球蛋白轻链磷酸酶（myosin light chain phosphatase,MLCP）磷酸化程度。结果：成功构建DMED大鼠模型,NS1619组大鼠与DMED组大鼠比较,勃起次数和ICP/MAP明显改善（P=0.025、0.024）,阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性提高（P=0.031、0.024）并且RhoA、ROCK2以及肌球蛋白磷酸酶靶向结合亚基（myosin phosphatase target subunit,MYPT）-1蛋白和mRNA表达水平下调（P=0.029、0.003、0.002）,但仍未达到正常对照组大鼠水平（P=0.018、0.040、0.003）,ROCK1表达无明显差异（P=0.533）。结论：DMED大鼠因RhoA/ROCK信号通路上调和MLCP磷酸化增强导致阴茎海绵体平滑肌舒缩顺应性降低以致勃起功能障碍发生,激活BKca可以通过下调RhoA/ROCK信号通路和抑制MLCP磷酸化,改善勃起功能。     

青光安Ⅱ号方有效组分对青光眼模型DBA/2J小鼠视网膜中RhoA、ROCK及Caspase-3蛋白表达的影响

目的观察青光安Ⅱ号方有效组分对青光眼模型DBA/2J小鼠视网膜中RhoA、ROCK及Caspase-3蛋白表达的影响。方法将8只(16只眼)雌性C57BL/6小鼠设为空白组(A组),48只(96只眼)雌性DBA/2J小鼠随机分成6组,每组8只(16只眼),分别为:模型组(B组)、益脉康分散片组(C组)、青光安II号汤剂组(D组)、青光安Ⅱ号有效组分低浓度组(E组)、青光安Ⅱ号有效组分中浓度组(F组)、青光安Ⅱ号有效组分高浓度组(G组),B、C、D、E、F、G组DBA/2J小鼠喂养38周龄建立青光眼模型后开始干预,干预4周后Western blot法检测DBA/2J小鼠视网膜中RhoA、ROCK及Caspase-3蛋白的相对表达量。结果干预4周后,与A组比较,B组RhoA、ROCK、Caspase-3蛋白相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);与B组比较,C、D、E、F、G组RhoA、ROCK、Caspase-3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P0.05);与C组比较,D、E、F组RhoA、ROCK、Caspase-3蛋白相对表达差异无统计学意义(P0.05);与C、D组比较,G组RhoA、ROCK、Caspase-3蛋白表达减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论青光安Ⅱ号方有效组分能抑制Rho/ROCK信号通路及凋亡相关蛋白Caspase-3的表达,其中高浓度青光安Ⅱ号方有效组分效果优于益脉康分散片和青光安Ⅱ号方汤剂,推测青光安Ⅱ号方及其有效组分治疗青光眼的机制可能与其抑制Rho/ROCK信号通路及视网膜细胞凋亡相关蛋白表达有关。     

RhoGDI1在TNF-α诱导内皮细胞损伤中的作用研究*

目的：阐明Rho特异鸟苷酸解离抑制因子1（RhoGDI1）和Rho/ROCK信号通路在肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导内皮细胞损伤中的作用机制。方法：采用siRNA技术干扰人脐静脉内皮细胞RhoGDI1表达,实验分为正常对照组,10μg·L-1 TNF-α处理组和RhoGDI1干扰组。MTT法检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测RhoGDI1、RhoA、ROCK表达及活化。结果：TNF-α处理和RhoGDI1干扰均显著降低内皮细胞存活率,提高内皮细胞的凋亡。TNF-α处理后RhoGDI1表达显著下降,TNF-α处理和RhoGDI1干扰均可显著提高RhoA表达以及ROCK活化。结论：TNF-α可能通过抑制RhoGDI1促进Rho/ROCK信号通路的活化,最终引起内皮细胞凋亡。     

当归芍药散含药血清抑制内皮素-1介导的肝星状细胞收缩的机制研究

目的 探讨当归芍药散（Danggui Shaoyao San,DSS）含药血清对内皮素-1（endothelin,ET-1）介导的肝星状细胞内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）和RhoA/ROCKⅡ蛋白表达的影响。方法 将实验动物分为空白组和给药组,分别提取血清,－20 ℃冻存备用。细胞实验分为6组：空白组,模型组,DSS含药血清高、中、低剂量组,Y-27632抑制剂组。肝星状细胞培养24 h后,采用Western blot法检测细胞内RhoA、ROCK Ⅱ、eNOS蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,模型组RhoA、ROCK Ⅱ蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）,细胞内eNOS蛋白表达水平明显下降（P<0.05）;与模型组比较,DSS含药血清各剂量组RhoA、ROCKⅡ蛋白表达水平减少（P<0.05）,DSS含药血清高、中剂量组细胞内eNOS蛋白表达水平增多（P<0.05）。结论 DSS可通过抑制肝星状细胞RhoA、ROCK蛋白的表达,上调eNOS蛋白的表达,抑制ET-1诱导的肝星状细胞收缩。     

Rho／Rho激酶在COPD大鼠气道的表达及其对气道重塑的影响

目的探讨Rho／Rho激酶信号通路在慢性阻塞性肺疾病大鼠气道中的表达及其对气道的影响。方法清洁级相同重量级Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组、COPD组、Y-27632干预组,每组20只。分析各组大鼠的支气管壁厚度（War）和平滑肌厚度（Warn）,以及RhoA,ROCKlImRNA的表达。结果与对照组相比,COPD组大鼠RhoA,ROCK1ImRNA表达明显增高,wat、wam也明显增加（P〈0．05）;与C（）PD组相比,Y-27632干预组大鼠RhoA,ROCKIImRNA的表达明显降低,Wat、wam也明显降低（P〈0．05）。结论COPD组大鼠RhoA,ROCKⅡmRNA表达明显增高;应用ROCKⅡ特异性拈抗剂Y一27632能够明显控制RhoA,ROCKⅡmRNA的表达,从而抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠的气管壁增厚和平滑肌增殖。     

基于Rho/ROCK信号通路的麦粒灸对自发性高血压大鼠主动脉血管内皮功能保护作用机制探讨

目的 观察麦粒灸对自发性高血压大鼠(SHR)降压作用及主动脉血管内皮功能的保护并探讨其可能的机制`。方法 将SHRs随机分为模型组和麦粒灸组,WKY大鼠设为空白组。模型组、空白组不施灸,麦粒灸组实行麦粒灸治疗。观测各组大鼠血压、血清一氧化氮（NO）含量、主动脉形态学改变。采用Western blot法和qPCR法测定各组大鼠主动脉组织中RhoA、ROCK1和RhoA、ROCK1 mRNA表达水平。结果 与模型组相比,麦粒灸组血压下降,主动脉内膜增生不明显,仅部分内膜脱落,血清NO含量明显上升,主动脉RhoA、ROCK1和RhoA、ROCK1 mRNA含量显著下降,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 麦粒灸能有效降低SHR血压,保护主动脉血管内皮功能,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路表达相关。      

RhoA和ROCK蛋白在高脂饮食幼鼠肾小球中的表达及其意义

目的：探讨RhoA和ROCK蛋白在高脂饮食（HFD） C57BL/6J幼鼠肾小球中的表达,阐明RhoA/ROCK通路是否与HFD诱导的肾小球损伤有关。方法：36只雄性C57BL/6J幼鼠随机分为正常对照组和HFD组,每组18只,正常对照组幼鼠给予标准饲料,HFD组幼鼠给予高脂饲料,分别饲养12周。检测幼鼠体质量和血清总胆固醇（TC）及甘油三酯（TG）水平。HE染色、PAS染色和Masson染色观察2组幼鼠肾组织病理形态表现、肾小球系膜和基底膜相对面积以及肾间质纤维组织相对面积,免疫组织化学法检测2组幼鼠肾小球中RhoA和ROCK蛋白表达水平,免疫蛋白印迹法检测2组幼鼠肾小球中RhoA、ROCK和Vimentin蛋白的表达水平。结果：与正常对照组比较,HFD组小鼠体质量、血清TC和TG水平明显升高（P<0.01）。HE染色,HFD组小鼠肾小球内出现明显脂肪变性;PAS染色,HFD组小鼠出现肾小球系膜基质轻度增生;Masson染色,HFD组小鼠肾小球内蓝色胶原纤维染色物质比正常对照组增多;与正常对照组比较,HFD组小鼠肾小球系膜和基底膜相对面积明显增加（P<0.05）,肾间质纤维组织相对面积增加（P<0.05）;免疫组织化学检测,与正常对照组比较,HFD组幼鼠肾小球中RhoA的ROCK蛋白表达水平升高（P<0.05）;免疫蛋白印迹法检测,与正常对照组比较,HFD组幼鼠肾小球中RhoA、ROCK和Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：给予HFD的C57BL/6J小鼠肾小球中RhoA和ROCK蛋白高表达可能是诱发肾小球损伤的原因之一。     

培元抗癌汤通过PI3K-AKT-mTOR信号通路调节Lewis肺癌自噬抑制肿瘤生长和转移的实验研究

目的 观察培元抗癌汤对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及肿瘤肺转移的抑制作用,探讨培元抗癌汤对自噬及PI3K-AKT-mTOR信号通路的影响.方法 Lewis肺癌细胞接种在C57BL/6小鼠右腋皮下,制成Lewis肺癌荷瘤小鼠模型.将荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、培元抗癌汤组、培元抗癌汤-顺铂组,分别给予中药灌胃、顺铂腹腔注射,进行药物干预后,观察各组小鼠生存质量;观察肺转移灶、计算肺转移抑制率;称取各组荷瘤小鼠肿瘤的质量、计算抑瘤率;透射电镜观察自噬泡的形成;Western blot法检测肿瘤组织中自噬因子LC3 Ⅰ及LC3 Ⅱ蛋白的表达,检测肿瘤组织中PI3K、p-PI3 K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达.结果 模型组、顺铂组小鼠生存质量差,小鼠有聚集、毛发脱落、反应迟缓等现象,培元抗癌汤组、培元抗癌汤-顺铂组小鼠生存质量较好.与模型组比较,培元抗癌汤组、培元抗癌汤-顺铂组能明显抑制肺转移(P＜0.05),顺铂组有抑制肺转移趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05);培元抗癌汤-顺铂组肺转移抑制率则明显高于培元抗癌汤组.与模型组比较,顺铂组、培元抗癌汤组、培元抗癌汤-顺铂组能明显抑制肿瘤生长,差异有统计学意义(P＜0.05),顺铂组高于培元抗癌汤组(P＜0.05),培元抗癌汤-顺铂组明显高于培元抗癌汤组和顺铂组.与模型相比,顺铂组、培元抗癌汤组、培元抗癌汤-顺铂组自噬泡明显增多,提示自噬增强.各用药组肿瘤组织中LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ均明显高于模型组(P＜0.05);与培元抗癌汤组比较,顺铂组、培元抗癌汤-顺铂组的LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ表达更高(P＜0.05),而培元抗癌汤-顺铂组的LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ表达最高.与模型组比较,各用药组肿瘤组织中PI3K、AKT、mTOR的表达无明显差异(P＞0.05),各用药组肿瘤组织中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达均明显低于模型组(P＜0.05);与培元抗癌汤组比较,顺铂组、培元抗癌汤-顺铂组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达更低(P＜0.05),而培元抗癌汤-顺铂组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达最低.结论 培元抗癌汤能明显改善小鼠生存质量及抑制肿瘤生长及转移,其机制可能是抑制PI3K-AKT-mTOR信号通路,增强肿瘤自噬.     

红景天苷对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠RhoA/Rho激酶信号通路的影响

目的:探讨红景天苷对肺动脉高压大鼠的肺组织病理与RhoA/Rho激酶信号通路的影响。方法:将30只6~8周龄雄性SD大鼠随机分为五组:正常对照组、模型对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组;除正常对照组注射对照溶剂外,其余组皮下注射60 mg/kg野百合碱,2~28d后,对低、中、高浓度组分别注射50、100、200mg/(kg·d)红景天苷,对照组注射生理盐水;实验结束,分别检测各组右心室收缩压(RVSP)及右心室肥厚指数;HE染色检测大鼠肺组织病理变化,RT-PCR检测肺组织ROCK1、RhoA mRNA表达水平,Western blot检测肺组织RhoA、ROCK1、p-MYPT1蛋白表达及磷酸化水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组RVSP及右心室肥厚指数显著上升,肺组织RhoA、ROCK1mRNA显著上调,ROCK1、RhoA、p-MYPT1蛋白表达及磷酸化水平显著上调;不同浓度红景天苷干预后,各组RVSP及右心室肥厚指数出现变化,高浓度组显著下调;肺组织RhoA、ROCK1mRNA逐渐下调,RhoA、ROCK1、p-MYPT1蛋白表达及磷酸化水平逐渐下调,呈浓度依赖,中、高浓度组变化显著。结论:一定剂量红景天苷能够缓解野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压,可能与其对RhoA/Rho激酶信号通路抑制有关。     

补肾益髓方及其拆方调控实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠轴突再生抑制信号通路相关分子的实验研究

目的 观察补肾益髓方（Bushen Yisui formula,BSYSF）及其拆方补肾方（Bushen formula,BSF）和化痰活血方（Huatan Huoxue formula,HTHXF）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠轴突再生抑制信号通路NogoA/NgR/RhoA/ROCK的调控作用。方法 将雌性C57BL/6小鼠采用数字表法随机分为正常对照组（normal control,NC）、模型组（model,MO）、醋酸泼尼松组（prednisone acetate,PA,6 mg/kg）、梓醇组（catapol,CA,40 mg/kg）、BSYSF组（生药3.02 g/kg）、BSF组（生药1.44 g/kg）、HTHXF组（生药1.57 g/kg）,每组16只。用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白_35-55（myelin oligodendrocyte glycoprotein_35-55,MOG_35-55）免疫小鼠制备EAE模型。NC和MO组小鼠灌服蒸馏水,各治疗组予相应药物灌胃,每日1次,共40 d。免疫第25天和40天,分别取小鼠脑和脊髓。应用实时荧光定量-PCR（quantitative real time-PCR,qRT-PCR）检测NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA表达;免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）和蛋白质印迹（Western blotting,WB）法测定上述指标蛋白的表达。结果 MO组小鼠脑和脊髓NogoA、NgR、RhoA和 ROCKⅡmRNA和蛋白表达较NC组明显上调（P<0.05,P<0.01,P<0.001）。经BSYSF及其拆方BSF和HTHXF治疗后,NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA和蛋白的表达均有不同程度的降低,BSYSF组的上述指标差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01,P<0.001）。结论 BSYSF及其拆方BSF和HTHXF均具有调节EAE小鼠轴突抑制因子NogoA/NgR及其信号通路RhoA/ROCK作用,并且BSYSF作用明显。上述结果为阐释BSYSF促进轴突再生的作用机制提供了实验依据。     

基于RhoA/ROCK通路研究天麻素对高血压病左心室肥厚大鼠心室重构的影响

目的 观察天麻素对高血压病左心室肥厚大鼠心室重构的影响,从Ras同族体基因家族成员A（Ras homolog gene family member A,RhoA）/Rho激酶（Rho-associated kinase,ROCK）通路探究其作用机制。方法 将100只SD雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,天麻素低剂量（16 mg/kg）、中剂量（24 mg/kg）、高剂量（32 mg/kg）组和依那普利组（1.5 mg/kg）,每组15只。采用腹主动脉缩窄法复制左心室肥厚模型。采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）和白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）水平,计算左心室肥厚指数（left ventricular hypertrophy index,LVHI）;苏木精-伊红染色和Masson染色观察心肌的组织形态学变化;qRT-PCR和Western blot法检测心肌组织RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠尾动脉收缩压、LVHI及血清AngⅡ、IL-6水平显著升高（P＜0.05）,心肌组织纤维化程度升高,RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,天麻素低、中、高剂量组和依那普利组尾动脉收缩压、LVHI及血清AngⅡ、IL-6水平均显著下降（P＜0.05）,心肌纤维程度降低,RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。依那普利组大鼠心肌组织RhoA、ROCK mRNA及蛋白表达水平最低,天麻素的作用具有剂量依赖性。结论 天麻素能有效降低高血压病大鼠尾动脉血压、LVHI和血清AngⅡ、IL-6水平,改善其心室重构,其机制与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。     

Rho/ROCK激酶信号通路在大鼠宫腔粘连中的作用

目的 复制宫腔粘连大鼠模型,探讨Rho/ROCK信号通路相关蛋白的表达及其在宫腔粘连中的作用机制。方法 SD大鼠宫腔注入0.5?ml 95%乙醇,复制宫腔粘连模型;对照组注入等量生理盐水。术后15?d观察两组子宫内膜形态学变化,免疫组织化学法检测子宫内膜角蛋白、波形蛋白、Rho（RhoA、RhoB、RhoC）、Rho激酶（ROCKI、ROCKII）及TGF-β1表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜厚度变 薄（P?<0.05）;两组腺体数目比较,模型组腺体数目减少（P?<0.05）;两组角蛋白比较,模型组表达下降（P?<0.05）;两组波形蛋白比较,差异无统计学意义（P?>0.05）;两组大鼠子宫内膜RhoA、RhoB、RhoC、ROCKI、ROCKII的表达比较,差异有统计学意义（P?<0.05）,模型组均高于对照组;模型组大鼠子宫内膜TGF-β1的表达高于对照组（P?<0.05）。结论 注射无水乙醇可复制稳定的大鼠宫腔粘连动物模型,其Rho/ROCK信号通路处于激活状态,TGF-β1通过激活Rho/ROCK信号通路促使子宫内膜损伤后组织纤维化,参与宫腔粘连的发生、发展。     

MYPT1通过RhoA/ROCK信号通路抑制结直肠癌细胞增殖和迁移

目的 探讨实肌球蛋白磷酸酶靶亚基1（MYPT1）在结直肠癌发生发展中的作用及其可能的作用机制。方法 RT-PCR检测mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测结直肠癌细胞迁移能力,生物信息学软件筛选可与MYPT1相互作用的蛋白质,通过TCGA数据库分析MYPT1表达水平及与RAS同源基因家族成员A（RhoA）和锌离子相关的RhoA蛋白1（ROCK1）的相关性。根据实验方案进行分组,分为空白对照组、阴性对照组、MYPT1过表达组、RhoA过表达组、MYPT1过表达+RhoA空载组和MYPT1过表达+RhoA过表达组。结果 和癌旁正常组织及正常肠粘膜细胞相比,MYPT1在结直肠癌组织和细胞中低表达（P＜0.05）。过表达MYPT1可抑制结直肠癌细胞增殖和迁移（P＜0.05）。MYPT1负调控RhoA和ROCK1的表达（P＜0.05）。过表达RhoA促进结直肠癌细胞增殖和迁移（P＜0.05）。MYPT1通过下调RhoA的表达抑制ROCK1表达（P＜0.05）。MYPT1通过负调控RhoA抑制细胞增殖和迁移（P＜0.05）。结论 MYPT1在结直肠癌组织和细胞中低表达,其通过RhoA/ROCK信号通路调控结直肠癌细胞增殖和迁移。     

法舒地尔对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:观察法舒地尔对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响,探讨其作用机制.方法:用0.1%的Ⅰ型胶原酶消化分离HUVECs,加入内皮细胞完全培养基中培养,采用胰蛋白酶进行消化传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态并进行免疫组织化学鉴定.将HUVECs随机分为对照组(内皮细胞培养基培养)、LPS组(内皮细胞培养基+0.1 μg/mL LPS)和法舒地尔组(内皮细胞培养基+0.1 μg/mL LPS+3.275 μg/mL法舒地尔),Western blot法检测RhoA、ROCK2、p-ERM蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测RhoA、ROCK2和p-ERM mRNA表达量.结果:原代培养的内皮细胞在接种后24 h后完全贴壁生长,第3天融合呈铺路石样镶嵌排列,免疫组织化学检测可见第Ⅷ因子相关抗原阳性反应,证实为内皮细胞.LPS组RhoA、ROCK2和p-ERM蛋白及基因表达水平均显著高于对照组(P<0.01);而法舒地尔组ROCK2和p-ERM蛋白及基因表达均低于LPS组(P<0.05~P<0.01),但2组RhoA蛋白和基因表达水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论:Rho/ROCK/ERM通路在LPS诱导的HUVECs细胞骨架改变中起重要作用,法舒地尔可拮抗LPS诱导的骨架蛋白重排等HUVECs损伤,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路活化有关.     

α受体介导的雌二醇对大鼠结肠平滑肌细胞RhoA/ROCK通路的影响

目的：探讨17β?雌二醇（17β?estraial,E2）对大鼠结肠平滑肌细胞（smooth muscle cell,SMC）RhoA/ROCK通路的影响。方法：体外分离培养Sprague?Dawley（SD）大鼠结肠SMCs。细胞免疫荧光双标法观察ROCK1、雌激素受体（ER)α与α肌动蛋白（α?SMA）共表达。不同浓度和不同时间E2刺激后,以反转录实时荧光定量qRT?PCR、Western blot检测RhoA、ROCK1表达。不同浓度ROCK抑制剂Y27632刺激后,Western blot检测E2对其下游蛋白表达情况。观察ER阻断剂ICI182780、牛血清白蛋白结合的E2（BSA?E2）、ERα激动剂PPT及ERβ激动剂DPN在E2影响RhoA、ROCK1表达的作用。构建ERα、ERβ的siRNA,观察E2刺激对转染后SMC中RhoA、ROCK1表达的影响。结果：细胞免疫荧光示结肠SMC上 ROCK1与α?SMA共表达。50 nmol/L E2刺激24 h可显著抑制大鼠结肠SMC上RhoA、ROCK1表达（P < 0.05）。Y27632可浓度依赖性抑制下游蛋白p?MYPT1、p?CPI17、p?MLC表达。E2组及PPT组RhoA、ROCK1表达显著低于其他各组（P < 0.05）。ERα siRNA组可上调RhoA、ROCK1表达（P < 0.05）。结论：大鼠结肠SMC上存在ROCK1,E2可抑制RhoA/ROCK通路表达,该作用由雌激素α受体介导。     

鳖甲煎丸通过RhoA/ROCK信号通路抑制肝癌细胞血管形成拟态的生成

目的观察鳖甲煎丸对肝癌细胞血管生成拟态（VM）形成的作用及其对RhoA/ROCK通路信号分子和VE-cadherin、PI3K 表达的影响,探讨鳖甲煎丸抑制肝细胞肝癌（HCC）转移侵袭的分子机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组,分别以鳖甲 煎丸高（H）、中（M）、低剂量（L）及生理盐水（N）灌胃,4 d后采血,制备药物血清。肝癌HepG2细胞体外Matrigel三维培养,药物 血清及RhoA/ROCK抑制剂Y-27632（P）干预24 h后,应用图像采集和分析系统检测各组VM形成情况,采用Western blotting技 术检测各组细胞RhoA和ROCK1的表达水平,ELISA法检测各组细胞培养上清中VE-cadherin、PI3K的含量。结果鳖甲煎丸 可显著抑制HepG2 细胞VM的生成,且VM管径显著高于阴性对照组（P<0.01）,Y-27632 完全抑制了HepG2 细胞VM的生成 （P<0.01）;同时,鳖甲煎丸和Y-27632 都能够抑制HepG2 细胞中RhoA、ROCK1 的表达（P<0.05）,降低细胞培养上清中VEcadherin 、PI3K的表达水平（P<0.05）。结论鳖甲煎丸可抑制肝癌细胞VM的形成,其作用机制可能与其能抑制三维培养的 HepG2细胞中RhoA/ROCK通路信号分子及VE-cadherin、PI3K的表达有关。