SET7/9介导的内质网应激对砷致肝细胞凋亡的影响

目的:通过研究SET7/9(SET domain containing 7/9)对内质网应激(ERS)的蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)信号通路的影响,探讨其在砷致肝细胞凋亡机制中的作用。方法:把人肝细胞LO2分为对照组、砷染毒模型组、阴性转染组和SET7/9 siRNA转染组。流式细胞术检测各组细胞凋亡的变化;Western blot方法观察各组LO2细胞SET7/9、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、PERK和p-PERK表达水平的变化。结果:抑制SET7/9表达可降低砷染毒LO2细胞的凋亡率(P 0.05)。砷染毒可以使LO2细胞SET7/9表达水平升高,上调LO2细胞GRP78和p-PERK的蛋白水平(P 0.05)。砷染毒LO2细胞经SET7/9 siRNA转染后可下调其GRP78和p-PERK的蛋白水平。结论:砷可以通过上调SET7/9激活了ERS的PERK信号通路,从而导致肝细胞凋亡。     

带组氨酸标签的癌蛋白SET真核表达载体的构建及其表达

目的为研究三氯乙烯诱导的差异蛋白SET在肝细胞L-02中的相互作用,构建了癌蛋白SET和His标签融合表达的真核表达载体pcDNA3．1（＋）／SET—His。方法从L-02肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增SET—His基因并进行双酶切,序列纯化后定向克隆至pcDNA3．1／zeo（＋）载体,阳性克隆载体进行双酶切和测序鉴定．阳性克隆载体瞬时转染入L-02肝细胞,利用Western blotting检测SET—His融合蛋白的表达。结果利用RT—PCR从L-02细胞总RNA中成功克隆出SET基因,经双酶切和测序鉴定证实pcDNA3．1（＋）／SET—His真核表达载体构建成功。经Western blotting验证表明,SET—His融合蛋白在肝细胞中获得高效表达。结论该结果为研究SET蛋白相互作用以及三氯乙烯致机体损伤的机理奠定了基础。     

颗粒酶A介导的凋亡机制研究现状

目的:CTL细胞杀伤靶细胞有两个重要方式:即分泌型和非分泌型杀伤。前者指的是如穿孔素/(颗)粒酶类介质使靶细胞裂解,后者主要指通过FAS-FASL结合等一类途径诱导凋亡。(颗)粒酶A是(颗)粒酶家族中含量较多、作用方式较独特、且相当重要的一种物质。穿孔素/(颗)粒酶A/SET复合物介导的凋亡途径是一条重要的途径,它通过引起单股DNA链缺刻和DNA修复障碍导致细胞凋亡。其在杀伤肿瘤细胞、病毒感染细胞及异体移植物细胞有重要意义,近年来对穿孔素/(颗)粒酶A/SET复合物介导的细胞凋亡途径研究比较多,本文拟在这方面作一些综述。     

SMYD2特异性抑制剂对高糖环境下大鼠肾成纤维细胞活化的影响及其机制

目的：明确赖氨酸甲基转移酶SMYD2(SET and MYND domain containing 2)特异性抑制剂对体外高糖（HG）环境下大鼠肾成纤维细胞（NRK-49F）活化的影响并探索其可能机制。方法：采用CCK-8法检测SMYD2特异性抑制剂LLY507对体外培养的NRK-49F细胞活力的影响。实验分组为正常糖（NG；含5.5 mmol/L葡萄糖）组、HG（含30 mmol/L葡萄糖）组、NG+LLY507(1.5μmol/L)组和HG+LLY507(1.5μmol/L)组，37℃培养48 h后收集各组细胞蛋白。采用Western blot实验检测SMYD2、组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）、纤维连接蛋白（fibronectin）、I型胶原蛋白（Col I）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1(TGF-β1)、p-Smad3、Smad3、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB) p65、NF-κB p-p65、白细胞介素6(IL-6)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)及p-STAT3蛋白水平。结果：LLY507浓度低于1.6μ...     

SET基因家族研究进展

SET基因家族是一组含有高度保守SET结构域蛋白的统称。其成员具有共同的结构特征,即由SET—N区、SET-C区、SET—I区组成。按照整体基因组序列比较分析方法,该基因家族可进一步被分为SU(VAR)3-9、SET1、SET2和RIZ 4个亚家族。大部分SET基因家族成员通过“假结”样结构发挥组蛋白甲基转移酶的作用,参与染色体的调节、基因的表达、细胞生长周期的控制,细胞的分裂、分化及发育。SET基因的突变、缺失、重排还经常引起多种肿瘤的发生。     

体外定量测定细胞迁移方法的建立及应用

目的 :在体外细胞划痕损伤模型中建立定量测定ECV - 30 4细胞迁移的方法。方法 :改良了体外细胞划痕损伤模型。用显微电视图像定量处理系统定量测定细胞迁移。在体外细胞划痕损伤模型中观察了肝素 (hep arin)和凝血酶敏感蛋白 - 1(thrombospondin - 1)对ECV - 30 4迁移的影响。结果 :12 0次划痕模型中划痕损伤的平均宽为 (0 95± 0 0 8)mm ,长 (5 1 2 0± 3 4 0 )mm ,迁移细胞可在 4 8h - 72h内完全覆盖划痕区。 2 4h左右细胞迁移达高峰。在体外损伤划痕损伤模型中与对照组比 ,肝素对ECV - 30 4迁移起明显促进作用 ,TSP - 1起明显抑制作用。结论 :建立了一种在体外细胞划痕损伤模型中进行细胞迁移的定量测定方法。用此方法证明 ,肝素能促进ECV - 30 4细胞迁移 ,TSP - 1抑制迁移。     

IL-18对系统性红斑狼疮患者淋巴细胞凋亡和P53蛋白表达的影响

目的　研究系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血淋巴细胞在体外IL 1 8刺激培养下细胞凋亡及P53蛋白表达情况。方法　AnnexinV联合PI染色定量法及免疫荧光染色法 ,分析了 44例SLE患者和 30例正常人外周淋巴细胞在体外IL 1 8刺激培养后凋亡发生率 ,凋亡相关基因P53蛋白的表达以及淋巴细胞凋亡发生与疾病活动性的相关性。结果　在IL 1 8刺激培养作用下 ,活动期SLE淋巴细胞凋亡发生率较正常人显著增高 (P <0 .0 1 ) ,而静止期则无明显变化 (P >0 .0 5)。P53蛋白表达在活动期SLE较正常人显著性下降 (P <0 .0 1 ) ,静止期无明显变化 (P >0 .0 5)。P53的表达与疾病活动指数SLEDAI之间有明显的相关性 (P <0 .0 1 )。结论　IL 1 8可引起SLE患者PBL凋亡率的增高 ,表明IL 1 8在体内凋亡或凋亡相关性免疫机制中起着一定的作用     

细胞毒性颗粒蛋白和细胞毒性淋巴瘤

细胞毒性颗粒蛋白为细胞毒细胞———自然杀伤细胞(ＮＫ细胞 ) ,细胞毒性αβ和γδ Ｔ淋巴细胞 (ＣＴＬ)———合成分泌的一组蛋白质 ,包括穿孔素 (ｐｅｒｆｏｒｉｎ)、颗粒酶(ｇｒａｎｚｙｍｅｓ)及Ｔ细胞限制性细胞内抗原 1(Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｎｔｉｇｅｎ 1,ＴＩＡ 1)等。它们的单克隆抗体的成功获取 ,使人们得以通过免疫组织化学法对表达这些颗粒的细胞毒性细胞进行研究。同时 ,对细胞毒细胞起源的淋巴瘤的研究也日益受到关注。一、细胞毒性颗粒蛋白1.组成 :细胞毒性颗粒蛋白包括穿孔素 ,…     

SMYD3过表达对人肝内胆管癌细胞miR-124表达及细胞增殖的影响

 目的：探讨肝内胆管癌细胞HCCC-9810中SET和MYND结构域含有蛋白3（SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3）过表达对miR-124表达及细胞增殖能力的影响。方法：瞬时转染 SMYD3 真核表达质粒后, Western blotting 检测细胞中SMYD3 蛋白水平的变化;qRT-PCR 检测细胞中SMYD3 mRNA 和miR-124 表达;甲基化特异性PCR检测miR-124-1、miR-124-2和miR-124-3基因启动子甲基化水平;CCK-8 和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力。结果：以空白组为对照,肝内胆管癌细胞HCCC-9810在转染pEGFP-SMYD3质粒后,SMYD3蛋白及 mRNA 表达均显著上升（P＜0.05）,miR-124-1、miR-124-2和miR-124-3基因启动子甲基化显著增加（P＜0.05）,miR-124表达明显下降（P＜0.05）,细胞增殖能力显著提高（P＜0.05）。结论：过表达 SMYD3可引起miR-124基因启动子甲基化增加,导致胆管癌细胞中miR-124 的表达下降,同时过表达SMYD3可增强细胞增殖能力。     

抗人CD20单克隆抗体诱导Daudi细胞凋亡的功能研究

目的　观察由基因重组抗原制备的抗人CD2 0单克隆抗体 (CD2 0 McAb) 1- 2 8对B淋巴瘤细胞的促凋亡作用 ,并探讨其作用机理。方法　利用流式细胞术测定所获 1- 2 8单抗对标准CD2 0 FITC单抗的竞争抑制作用及对胞内游离钙的影响 ;通过电镜观察其诱导Daudi细胞凋亡后形态上的改变 ,免疫印迹实验显示Daudi细胞凋亡后功能上的变化。结果　 1- 2 8能明显竞争标准CD2 0 FITC单抗与Daudi细胞表面CD2 0分子的结合。电镜结果证实了 1- 2 8能够促进Daudi细胞发生凋亡的结论 ;实验结果显示Daudi细胞与 1- 2 8作用后胞内游离钙浓度明显升高 (P <0 .0 5 ) ,细胞内Bcl 2蛋白和caspase酶原的表达量下降 ,而Bax蛋白和caspase酶原降解的活性产物表达增加。结论　 1- 2 8能竞争结合Daudi细胞表面的CD2 0分子并诱导其发生凋亡     

下调YAP1蛋白对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨下调YAP1蛋白对子宫内膜癌细胞增殖的影响和其相关的机制。方法运用慢病毒载体建立YAP1缺失的细胞株(HEC-1-B-shYAP)和阴性对照(HEC-1-B-NC),分别采用Real-time PCR及Western blot法检测细胞YAP1的表达。CKK-8方法检测细胞增殖能力的改变,Western blot法检测Wnt信号通路相关蛋白β-catenin的表达。结果成功构建YAP1稳定缺失的卵巢癌细胞株(HEC-1-B-shYAP1),与阴性对照组和空白对照组细胞相比,HEC-1-B-shYAP组细胞增殖能力明显减弱(P<0.01),同时β-catenin的表达明显降低(P<0.01)。结论 YAP1可促进子宫内膜癌的增殖,其机制可能Wnt-β-catenin信号通路有关。     

上调SMYD3对人胆管癌FRH0201细胞中DNMT3B表达及细胞增殖的影响

目的: 研究人胆管癌细胞株FRH0201中SET和MYND结构域含有蛋白3(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)过度表达对DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达及细胞增殖能力的影响。方法: 瞬时转染SMYD3真核表达质粒后, RT-PCR检测细胞中DNMT3B mRNA水平的变化;Western blotting检测细胞中DNMT3B蛋白水平的变化;CCK-8检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期的改变。结果: 以未处理组为对照,胆管癌细胞FRH0201在转染pEGFP-C3-SMYD3质粒后,DNMT3B蛋白及mRNA表达均显著上升(P<0.01);细胞的增殖能力显著提高、细胞增殖速度加快(P<0.05);进入G₂/M期的细胞明显增多(P<0.05)。结论: 过度表达SMYD3,可引起细胞中DNMT3B的表达上调并增强细胞增殖能力。     

氟伐他丁对ACS患者CRP及sICAM-1、sVCAM-1的影响

目的:研究氟伐他丁对急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清C-反应蛋白(CRP)及可溶性细胞黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)的影响.方法:采用随机、对照的方法将109例ACS患者分为氟伐他丁组(55例)和常规治疗组(54例),另选50例健康人为对照组,测定治疗前、治疗8周后血清CRP、sICAM-1、sVCAM-1的变化.结果:①ACS患者血清CRP、sICAM-1、sVCAM-1水平明显高于对照组(P＜0.01).②氟伐他丁组治疗8周后血清CRP、sICAM-1、sVCAM-1水平显著降低(P＜0.01).而常规治疗组治疗后无显著变化.结论:氟伐他丁对ACS患者有抗炎抗细胞黏附作用.     

丙型肝炎患者血清HSP70水平的检测及HSP70-HCV肽诱导CTL作用

目的 :检测丙型肝炎患者及正常人血清中HSP70的水平 ,探讨HSP70 HCV肽体外诱导特异性CTL的作用。方法 :先用ELISA法筛选出丙型肝炎患者及正常人血清 ,再用双夹心ELISA法检测血清HSP70 ,并分析抗HCV抗体和HSP70之间的关系。用HSP70 HCV肽激活外周血单个核细胞后 ,通过51Cr释放试验测定CTL的杀伤活性。结果 :76份血清 (抗HCV抗体阳性 2 8例 ,正常人血清 4 8例 )中 ,抗HCV抗体阳性患者HSP70的检出率为 82 .1% ,正常人血清中HSP70的检出率为18.8%。HSP70的检出率与HCV感染呈显著相关 ( χ2 =2 8.77,P <0 .0 1)。HCV感染者血清HSP70的含量显著高于正常人。HSP70与HCVC区肽 (DLMGYIPAV)的混合物 ,可诱导 1例患者的CTL对自体HCV肽致敏靶细胞的杀伤率达 37.8% ,而用HCV肽单独作用则不显著。结论 :HCV感染可刺激机体过表达HSP70 ,同时HSP70可能有增强HCV表位肽递呈促进CTL特异性杀伤HCV感染细胞的作用     

细胞角蛋白和Ret蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达

目的　探讨甲状腺乳头状癌中细胞角蛋白 (CK)和ret的表达及其在病理诊断中的价值。方法　分别采用免疫组织化学EnVision法及LSAB法检测CK19、CK17、CK8、CK2 0及ret在 6 9例甲状腺乳头状癌、14例结节性甲状腺肿和 4 2例癌旁正常滤泡中的表达。结果　CK19、ret在乳头状癌组织的阳性率 (85 5 %、6 8 1% )明显高于结节性甲状腺肿和正常滤泡组织阳性率 (2 5 0 %、5 4 % ) ,二者差异有统计学意义 (P <0 0 1)。CK17在乳头状癌中有少量表达 (15 9% ) ,主要集中在鳞化及分化差或小灶浸润区域。分别有 75 4 %及 2 6 8%的乳头状癌及良性区域CK8染色阳性 ,所有病例CK2 0阴性。结论　CK19、CK17及ret在甲状腺乳头状癌中表达增加 ,在病理诊断中有一定价值。     

实验性糖尿病大鼠海马星形胶质细胞形态和凋亡的研究

目的:研究糖尿病高血糖大鼠海马星形胶质细胞形态和凋亡改变。方法:采用链脲佐菌素(STZ)诱导Ⅰ型糖尿病SD大鼠模型,并以正常SD大鼠作对照。分别于1、2、4周和8周用组织学、免疫组织化学、免疫荧光和Western Blot等方法对比研究糖尿病高血糖对大鼠海马区星形胶质细胞形态和凋亡的作用。结果:与正常对照比较,大鼠糖尿病高血糖1~2周,脑组织结构基本正常,海马区固缩神经元偶见,4~8周固缩神经元数明显(P0.05),出现轻微脑水肿,星形胶质细胞胞体轻度肿胀;免疫荧光和免疫组织化学检测显示,糖尿病高血糖1~2周,星形胶质细胞胞体增大和突起增粗,4~8周时突起增粗变长,星形胶质细胞数量减少(P0.05);Western Blot结果表明,大鼠糖尿病高血糖4~8周时,脑组织胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)含量明显升高(P0.05);免疫组化双标显示,糖尿病高血糖大鼠1~2周偶见cleavedcaspase-3阳性标记的星形胶质细胞(P0.05),4~8周海马区双标阳性细胞数明显增多(P0.01)。结论:大鼠糖尿病高血糖早期对星形胶质细胞可能有激活作用,而持续的糖尿病高血糖则可抑制海马区星形胶质细胞,并可能导致星形胶质细胞凋亡。     

LRP在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

笔者应用免疫组织化学方法对 2 7例非小细胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)组织进行观察 ,探讨肺耐药相关蛋白 (ｌｕｎｇｒｅｓｉｓ ｔａｎｃｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ ,ＬＲＰ)表达与肺癌耐药性的关系。1　材料与方法1 .1　材料　 2 7例肺癌均未经化疗。 (1 )鳞癌 :男 1 0例 ,女 2例 ,平均年龄 62 8岁。 (2 )腺癌 :男 1 1例 ,女 4例 ,平均年龄55 7岁。1 .2　免疫组化染色　ＬＲＰ试剂由福州迈新生物技术开发公司提供 (克隆号 1 0 32 ) ,操作按试剂盒说明进行。1 .3　ＬＲＰ阳性判断标准　胞膜和胞质出现棕黄色颗粒着色为阳性 ,按高倍镜下阳性细胞…     

CIRBP对小鼠血管平滑肌细胞增殖及迁移的调控及机制研究

目的：探讨冷诱导RNA结合蛋白(CIRBP)对小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及迁移过程的调控及机制。方法：将雄性C57BL/6J小鼠分为假手术对照组、假手术干扰组、颈总动脉损伤对照组和颈总动脉损伤干扰组，每组5只。造模后按照组别分别用阴性对照腺病毒(AD-NC)和沉默CIRBP腺病毒(AD-CIRBPI)转染，28 d后观察CIRBP表达及血管内膜的增生情况。将小鼠VSMCs分为对照组和腺病毒沉默组，分别用AD-NC和AD-CIRBPI转染细胞48 h，然后加入激活雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)活性的胰岛素。通过RT-qPCR检测CIRBP的mRNA表达，Western blot检测CIRBP、磷酸化核糖体蛋白S6(p-S6^Ser235/236)和磷酸化4E结合蛋白1(p-4EBP1^Thr37/46)蛋白水平变化，Ki67免疫荧光染色和CCK-8实验检测细胞增殖，划痕实验检测细胞迁移，HE染色检测颈动脉内膜增生程度。结果：沉默CIRBP后，VSMCs的活力下降，Ki67阳性细胞比率降低，细胞迁移速度减慢，同时mTORC1活性下降...     

TRIM8在高糖高脂诱导的小鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨含三基序蛋白8(TRIM8)对高糖高脂(HGHF)诱导的小鼠心肌细胞(MCMs)凋亡的影响及机制。方法:将MCMs分为正常糖(NG)组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)、高糖(HG)组(葡萄糖浓度为33 mmol/L)、高脂(HF)组(软脂酸钠浓度为300μmol/L)和HGHF组(葡萄糖浓度为33 mmol/L,软脂酸钠浓度为300μmol/L);用siRNA沉默MCMs中TRIM8的表达后,再将MCMs分为对照(control)组(仅给予转染试剂)、Scra-siRNA/PBS组(转染scrambled siRNA)、TRIM8-siRNA/PBS组(转染TRIM8特异性siRNA)、Scra-siRNA/HGHF组和TRIM8-siRNA/HGHF组;为探索TRIM8在HGHF诱导的MCMs损伤中的可能作用机制,将MCMs分为HGHF/DMSO组、HGHF+TRIM8-siRNA+DMSO(HGHF+Ts/DMSO)组、HGHF/ML385组和HGHF+TRIM8-siRNA+ML385(HGHF+Ts/ML385)组。采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;流式细胞术及DHE染色法检测心肌细胞活性氧簇(ROS)的水平;qPCR及Western blot检测TRIM8、核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、血红素加氧酶1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO-1)的表达水平。结果:HGHF可增加MCMs中TRIM8的表达,同时减少Nrf2及其下游基因GCLC、HO-1和NQO-1的表达(P<0.05)。进一步研究发现,与Scra-siRNA/HGHF组相比,TRIM8-siRNA/HGHF组ROS含量和MCMs凋亡率降低(P<0.05),相应的,抗氧化分子Nrf2及其下游基因GCLC、HO-1和NQO-1的表达增高。与此相反,在此基础上加用Nrf2抑制剂ML385能够部分逆转下调TRIM8对HGHF诱导MCMs凋亡的抑制作用(P<0.05)。结论:TRIM8能够通过调节Nrf2抗氧化途径加剧HGHF诱导的小鼠心肌细胞凋亡。     

蛋白转导域介导BCR/ABL抗原对CML患者T细胞的活化作用

目的：研究蛋白转导域(PTD)介导的BCR／ABL抗原对慢性髓细胞白血病(CML)患者T细胞的特异性活化作用。方法：利用基因工程技术，将PTD基因与CML b3a2 bcr／abl基因融合并原核表达。将纯化的PTD—BCR／ABL融合蛋白与CML患者外周血单个核细胞(PBMC)体外共孵育，用流式细胞仪分别检测CD4^ 、CD8^ T细胞上活化抗原CD25的表达。结果：终浓度为100mg／L的PTD—BCR／ABL抗原体外刺激4d后，10例CML患者中，5例表现为CD8^ T细胞活化，2例表现为CD4^ T细胞活化，其中有1例CD8^ 和CD4^ T细胞同时活化；而作为对照的BCR／ABL抗原刺激组无一例表现为CD8^ 或CD4^ T细胞活化。结论：PTD能将外源性BCR／ABL抗原转导入抗原呈递细胞内，加工呈递后激活抗原特异性CD8^ 及CD4^ T细胞，为CML特异性CD8^ 、CD4^ T细胞的体外活化及细胞免疫治疗开辟一条新的途径。