Establishment of rats model of preeclampsia

目的 研究子痫前期的病因、发病机理、治疗及预防方法,建立大鼠子痫前期动物模型.方法 将孕鼠随机分为两组,两组自妊娠第12天起皮下分别注射生理盐水和亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME),共7d.妊娠第10天起测量大鼠尾动脉收缩压,1次/d,直至分娩.同时,检测两组孕鼠的尿蛋白、肝、肾功能,观察仔鼠和胎盘的异常改变,并进行组织病理学检查.结果 对照组孕鼠尾动脉收缩压随着妊娠进展有逐渐下降趋势,而子痫前期组孕鼠尾动脉收缩压在妊娠第13天后显著升高.同时子痫前期组孕鼠出现蛋白尿、肝肾功能和组织结构改变、胎鼠发育迟缓等情况.结论 注射L-NAME可导致孕鼠产生类似人类子痫前期的表现,而且在病理生理方面也与人类子痫前期极其相似,是一个较为理想的子痫前期动物模型.     

子痫前期大鼠胎盘细胞自噬水平变化及黄芩苷的干预作用

目的：研究胎盘细胞自噬在大鼠子痫前期发生发展中的作用及黄芩苷的干预作用。方法：48只Wistar孕鼠随机分成4组,每组12只。正常妊娠组大鼠自妊娠13 d起连续皮下注射0.9%氯化钠溶液1.5 mL/d至妊娠21 d;子痫前期组大鼠自妊娠13 d起连续皮下注射亚硝基左旋精氨酸甲酯100 mg/（kg·d）至妊娠21 d;黄芩苷组和自噬抑制组大鼠除了子痫前期组处理外,同时从妊娠16 d起,每天分别给予腹腔注射黄芩苷50 mg/（kg·d）和3-甲基腺嘌呤15 mg/（kg·d）至妊娠21 d。在妊娠21 d测量大鼠尾动脉血压及24 h尿蛋白水平,Western blot测定胎盘细胞Beclin 1、LC3-II和P62蛋白表达水平。结果：子痫前期组较正常妊娠组大鼠胎盘细胞Beclin 1和LC3-II蛋白表达水平显著增高（P ＜0.05）,尾动脉收缩压和舒张压及24 h尿蛋白水平显著升高（P ＜0.05）,而P62蛋白表达水平显著减少（P ＜0.05）;黄芩苷组和自噬抑制组较子痫前期组大鼠胎盘细胞Beclin 1和LC3-II蛋白表达水平显著减少（P ＜0.05）,尾动脉收缩压和舒张压及24 h尿蛋白水平显著减少（P ＜0.05）,而P62蛋白表达水平显著升高（P ＜0.05）。结论：胎盘细胞自噬可能参与大鼠子痫前期的发生发展过程,而黄芩苷腹腔注射可显著抑制子痫前期大鼠胎盘细胞自噬,从而发挥对子痫前期的治疗作用。     

神经肽Y在L-NAME致孕鼠高血压中的作用

目的研究神经肽Y（NPY）在一氧化氮（NO）合酶抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯（L-NAME）致孕鼠高血压中的变化与作用。方法妊娠大鼠随机分为L-NAME组1、L-NAME组2、生理盐水组1、生理盐水组2（上述4组用于不同时间点的NPY含量检测）、NPY抗血清组、无抗体血清组和正常妊娠组（上述3组用于不同时间点的动脉血压观察）,每组各6只。通过腹腔注射L-NAME形成晚期妊娠大鼠高血压,应用放射免疫分析法测定血浆和部分脑区NPY免疫活性物质（ir-NPY）含量的变化;通过静脉注射NPY抗血清（每只5μL,3次）观察其对孕鼠平均动脉压的影响。结果给予L-NAME后孕鼠平均动脉压显著升高;与注射等量生理盐水的孕鼠相比,L-NAME高血压孕鼠血浆ir-NPY的含量于妊娠后d21,下丘脑的含量于妊娠后d21、分娩后d2,延髓的含量于妊娠后d21均显著升高。静脉给予NPY抗血清后,L-NAME高血压孕鼠平均动脉压显著低于无抗体血清组,但仍显著高于正常妊娠组。结论外周与中枢NPY同时参与L-NAME致孕鼠高血压的病理生理过程,其水平的升高是形成和维持孕鼠高血压的因素之一。     

改良法建立妊娠期高血压疾病大鼠模型

目的 寻找理想的妊娠期高血压疾病动物模型.方法 60只雌性Wistar大鼠分为六组,分别为正常妊娠组(A组)、左旋亚硝酸精氨酸甲酯 (L-NAME) 腹腔注射组 (B组)、生理盐水注射组 (C组)、假手术组 (D组)、双侧子宫动脉结扎术组 (E组) 以及L-NAME腹腔注射联合腹主动脉缩窄术组 (F组),对大鼠血压、尿蛋白值以及胎鼠、胎盘、胎鼠头的重量进行监测并观察肾脏、胎盘的病理改变.结果 F组孕鼠于孕13 d即出现了蛋白尿、血压升高,较B组及E组出现时间早 (P＜0.05),其胎鼠体重、胎头重量下降较各组更明显 (P＜0.05),肾小球小动脉管壁增厚、管腔狭窄;胎盘出现血管间膜增厚、纤维蛋白沉积等妊娠高血压疾病的典型病理改变.结论 L-NAME腹腔注射联合腹主动脉缩窄术是更为理想的建立妊娠高血压疾病动物模型的方法.     

辛伐他汀治疗子痫前期大鼠的疗效观察

目的探讨辛伐他汀对子痫前期大鼠的治疗效果。方法选取SD雌性孕鼠共30只,随机分为正常组、子痫前期组和辛伐他汀组（每组10只）。于孕14d,分别给子痫前期组和辛伐他汀组大鼠尾静脉注入内毒素（1．0μg／,kg）,建立子痫前期模型,辛伐他汀组大鼠同时给予灌胃给药辛伐他汀片[40mg／（kg·d）]治疗;正常组大鼠尾静脉注入等量生理盐水。孕第8、15、19天测定各组大鼠24h尿蛋白含量;孕第10、15、19天测定各组大鼠心率、血压;孕第21天用硝酸还原酶法测定各组大鼠血浆一氧化氮（NO）浓度。结果①辛伐他汀组、子痫前期组、正常组大鼠24h尿蛋白含量（孕第19天尿蛋白含量-孕第8天尿蛋白含量）分别为（734-20）、（464±57）、（1404-12）μg,3组两两比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。②3组大鼠血压（孕第19天血压-孕第10天血压）比较,差异也有统计学意义（P〈0．01）。③3组大鼠心率（孕第19天心率-孕第10天心率）比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。④孕第21天,血浆NO浓度正常组为（158±31）mmoL/L,子痫前期组为（49±36）mmol／L,辛伐他汀组为（162±14）mmol／L,子痫前期组分别与其他两组比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论辛伐他汀可以提高子痫前期模型大鼠体内NO水平,降低低血压和尿蛋白含量,对心率没有明显影响。     

一种新的妊娠高血压综合征动物模型的建立

亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)是一氧化氮合成酶抑制剂,竞争性抑制体内一氧化氮(NO)合成。选择清洁级Wistar大鼠,随机分为3组,自妊娠第14天起分别皮下注射生理盐水、L-NAME 125mg/kg·d和L-NAME 250mg/kg·d,直到分娩,观察对孕鼠及胎鼠胎盘的影响。结果显示:皮下注射L-NAME可导致高血压、蛋白尿、肝肾功能及组织结构改变、胎鼠发育迟缓等妊娠高血压综合征的类似特征,并伴胎鼠后肢畸形,说明妊娠期NO合成减少可能是妊娠高血压综合征发病的一个重要因素。本方法为进一步研究建立了一个较理想的妊娠高血压综合征动物模型。     

妊高征心肌损伤的实验研究

目的:构建大鼠模型证实妊高征可引起心肌细胞受损。方法:采用注射一氧化氮合成酶抑制剂(L-NAME)构建妊高征大鼠模型,电镜下观察心肌细胞超微结构的变化,同时监测血清cTnT、Myo含量的改变。结果:1通过注射L-NAME成功构建妊高征大鼠模型,妊高征组收缩压及尿微量蛋白持续升高,并逐日递增;2电镜下见妊高征孕鼠心肌细胞间质水肿,点状出血;3妊高征孕鼠血清cTnT、Myo均明显高于正常妊娠孕鼠。结论:注射L-NAME是构建妊高征大鼠模型的有效手段,妊高征可引起大鼠模型的心肌细胞损伤。     

低分子肝素抑制子痫前期样大鼠胎盘细胞凋亡

目的研究低分子肝素(LMWH)对子痫前期样大鼠胎盘组织的抗细胞凋亡作用。方法将孕鼠随机分为正常孕组、子痫前期组(PE组)及LMWH治疗组,每组10只。PE组及LMWH治疗组孕鼠均于妊娠第13天开始给予左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)200 mg(/kg.d)皮下注射,共4 d,建立子痫前期样孕鼠模型。PE组于妊娠第15~20天给予生理盐水0.5 ml皮下注射,LMWH治疗组于妊娠第15~20天给予LMWH 40μl(/kg.d)皮下注射。检测各组血压、尿蛋白、鼠胎数、鼠胎质量及胎盘质量,对LMWH疗效进行评价;采用TUNEL法检测胎盘细胞凋亡率,Western blotting法检测胎盘组织中活化caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果 PE组大鼠血压及尿蛋白均显著高于正常孕组(P<0.05),鼠胎数及鼠胎质量显著降低(P<0.05)。LMWH治疗组血压及尿蛋白较PE组明显降低(P<0.05),但仍显著高于正常孕组(P<0.05),鼠胎数及鼠胎质量较PE组显著增高(P<0.05),鼠胎质量显著低于正常孕组(P<0.05),而鼠胎数与正常孕组无显著差异(P>0.05)。与正常孕组相比,PE组胎盘组织细胞凋亡率显著升高(P<0.05),活化caspase-3及Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达则显著降低(P<0.05);LMWH治疗组胎盘凋亡率及活化caspase-3蛋白表达较PE组显著降低(P<0.05),Bcl-2显著升高,而Bax则显著降低(P<0.05),与正常孕组比均无显著差异(P>0.05)。结论 LMWH可以有效改善子痫前期样症状,减少子痫前期样大鼠胎盘细胞凋亡,这一作用可能通过调节Bcl-2/Bax平衡抑制细胞凋亡。     

大鼠子痫前期模型实验研究

目的:目前子痫前期是产科的主要疾病之一和孕产妇主要死亡原因之一。为研究子痫前期的病因、发病机制、治疗及预防方法,需建立子痫前期的实验动物模型。方法:用5 8只雌性Wistar大鼠采用机械缩窄子宫动脉的方法,经过9 0天观察,对大鼠血压值、24小时尿蛋白、血液生化、肾脏组织病理学改变等相关指标的观察分析。结果:大鼠子痫前期模型组(D组)血压描记曲线明显比B、C、A组增高而且脉压差大。D组平均动脉压(MAP)与B、C、A组比较均增高有非常显著差异(P<0.01)。B、C、A组比较无显著差异(P>0.05)。D组孕鼠胎仔及胎盘重量较B、C、A组明显减轻(P<0.01),死胎率显著增加(P<0.01)。D组24小时尿蛋白、CRE、BUN、NA+浓度与B、C、A组比较明显增高,有显著性差异(P<0.05)。本实验所显示孕鼠的高血压、24小时蛋白尿、IUGR、肾脏组织病理学改变,说明大鼠子痫前期模型与人类的子痫前期相似性。结论:成功的建立了Wistar大鼠子痫前期模型,为子痫前期病因学和临床治疗的研究提供了实验动物模型。研究初探为本实验研究积累了丰富资料,尤为在今后实验中应注意的细节问题,实验中大鼠子宫动脉狭窄范围与子痫前期疾病严重程度关系有待进一步探讨。     

血管内皮生长因子在大鼠子痫前期模型中的作用

目的:探讨血管内皮生长因子在大鼠子痫前期模型中的作用。方法:选择清洁级W istar大鼠,随机分为两组,每组14只。对照组于妊娠第7天皮下注射生理盐水;亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAM E)组于妊娠第7天皮下注射一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂L-NAM E,每日125 m g/kg体重。两组均于妊娠第8天每天测量大鼠尾动脉血压,若血压增高合并尿蛋白大于或等于( )时,大鼠子痫前期模型确立。同时,测定两组大鼠血小板数值和血清VEGF浓度后,立即处死大鼠测胎鼠及胎盘重量;采用免疫组化法检测胎盘VEGF表达量。结果:L-NAM E组孕鼠出现类似子痫前期特征,表现为血压明显升高至(145.3±4.6)mmHg,尿蛋白含量增加为(814.3±57.5)m g/L,血小板数显著减少至(467.1±76.3)×109/L及胎鼠胎盘重量明显减轻;对照组孕鼠血压(101.4±7.6)mmHg,尿蛋白(398.2±82.3)m g/L,血小板计数(837.20±71.4)×109/L。两组比较差异均有显著性(P均<0.05)。对照组血清VEGF浓度明显大于L-NAM E组[(13.62±3.33 vs 8.71±2.42)ng/L],胎盘中的VEGF表达量对照组也明显高于L-NAM E组[(0.89±0.19 vs 0.58±0.12)OD],差异均有显著性(P<0.01)。结论:大鼠血清VEGF水平降低和胎盘表达VEGF量下降参与子痫前期的发生。     

寒冷刺激诱发孕鼠妊娠高血压综合征动物模型研究

目的　探讨寒冷刺激是否能诱发孕鼠妊娠高血压综合征样的改变。方法　将成年Wistar雌鼠随机分为 4组 :非孕对照组 (NN)、非孕寒冷组 (NC)、妊娠对照组 (PN)、妊娠寒冷组 (PC) ,从妊娠第 1天至妊娠第 19天每天分别置于 (4± 2 )℃ 4h(寒冷组 )及 2 5℃ (对照组 ) ,测定大鼠血压、尿蛋白、体重、红细胞压积 ,测量胎盘重量、胎鼠重量及身长 ,观察胎盘、肾脏组织学改变。结果　NC及PC组刺激两周后血压升高、尿蛋白增加 ,与NN及PN组相比 ,均有统计学意义。PC组与PN组相比 ,胎盘重量、胎鼠重量及身长均显著降低 ,其肾脏及胎盘各层均有明显的缺血、缺氧的组织学表现。结论　反复寒冷刺激可诱发孕鼠妊娠高血压综合征样的改变 ,为妊娠高血压综合征的动物模型制作提供了一种新的非侵袭性方法。     

Effect of high-fat diet on liver and placenta fatty infiltration in early onset preeclampsia-like mouse model

Background  Preeclampsia, especially early onset of preeclampsia (PE), is a common and serious disorder with high maternal and perinatal morbidity and mortality. Dietary factor is one of the most important factors which may affect the occurrence and development of the disease. The aim of this study is to investigate the effects of dietary factors on pathological changes of liver and placenta in preeclampsia-like mouse model by establishing the model at multiple stages of gestation.

Methods  Wild-type (WT) mice were injected subcutaneously with nitric oxide synthase (NOS) inhibitor L-arginine methyl ester (L-NAME, 50 mg×kg^–1×d^–1) to establish PE-like model (L-NAME group) at early-, mid-, and late- pregnant periods respectively; simultaneously, the control mice were injected with normal saline (NS group). All the groups were divided into subgroups, standard chow group (SC), and high-fat diet group (HF). ApoE^–/– pregnant mice served as a control group. Systolic blood pressure (SBP), urine protein, and histopathologic changes of placenta and liver in all groups were observed and statistically analyzed.

Results  In WT and apoE^–/– L-NAME subgroups, blood pressure and urine protein were significantly higher than those in all the gestational age matched NS groups (P <0.05). Compared to other groups, remarkable liver fatty infiltration and lipid storage in placenta were found in early- and mid-L-NAME subgroups in apoE^–/– mice (P <0.05), especially in the early- and mid-HF+L-NAME subgroups in apoE^–/– mice (P <0.05). More lipid storage droplets both in liver and placenta were found in ApoE^–/– mice than that of WT groups (P <0.05). Morphology histopathologic examination of placentas showed varying degrees of fibrinoid necrosis and villous interstitial edema in early- and mid-L-NAME both in HF and SC of apoE^–/– and WT subgroups compared to NS controls (P <0.05). But there was no significant difference between HF and SC subgroups (P >0.05), and no difference between apoE^–/–and WT groups (P >0.05).

Conclusions  Preeclampsia-like conditions could be induced by L-NAME in mice at different gestational stages. Both WT and apoE^–/– genotype mice with preeclampsia-like symptoms in early and mid stages of pregnancy presented lipid deposition in the placenta and hepatic fatty infiltration. To alter the environmental condition by feeding high-fat diet was harmful to the mother and the fetus. High-fat diet aggravated the impact of liver fatty infiltration at early and mid gestational stages especially in the apoE^–/– mouse model. These results further revealed the association between early-onset preeclampsia and the dysoxidation of fatty acids.

     

腰段连续硬膜外阻滞对大鼠妊娠期高血压疾病防治作用的研究

目的:观察连续硬膜外阻滞对大鼠妊娠期高血压疾病的防治作用。方法:Wistar大鼠40只复制妊娠期高血压疾病模型,分为4组,于妊娠14d开始,A组皮下注射生理盐水;B组皮下注射左硝基精氨酸甲酯(L-NAME);C组硬膜外腔置管,但不给药;D组硬膜外腔注入布比卡因。监测妊娠13,20d的体质量、食量、尿量、入水量;从妊娠的13d起,应用鼠尾动脉仪每日监测血压;以磺柳酸法检测孕鼠第13,20日尿蛋白浓度;硝酸还原酶法检测子宫、胎盘组织的一氧化氮(NO)含量。结果:孕20dB、C组与A、D组比较体质量增加(P<0.01),食量下降(P<0.01),入水量无差别(P>0.05),尿量下降(P<0.01);孕20dB、C组与A、D组比较收缩压、心率均显著增高(P<0.01),A组与D组比较心率显著增快(P<0.01);孕20dB、C、D组与A组比较尿蛋白含量明显增加(P<0.01),D组与B、C组比较明显减少(P<0.01);孕20dB、C组与A、D组比较存活率明显下降(P<0.01);孕20dA、D组与B、C组比较NO浓度明显增加(P<0.01)。结论:腰段连续硬膜外阻滞可能对大鼠妊娠期高血压疾病具有防治作用。     

阻断子宫动脉建立FGR大鼠模型的研究

目的通过暂时阻断妊娠期大鼠子宫血供的方法建立子宫缺血引起胎儿生长受限的动物模型。方法根据大鼠子宫动脉是卵巢动脉的一个分支的解剖特点,于孕鼠妊娠第15天时施行手术暂时阻断卵巢动脉并于第21天行剖宫产术,术后称量新生胎仔体重及胎盘、脑、心、肝、肺、肾等重要脏器重量,对比各组间新生胎仔的预后的不同,并对照研究阻断血供10、20、30及40 min对胎仔的不同影响。结果妊娠晚期阻断孕鼠卵巢动脉20min可成功构建胎儿生长受限模型,这种方法与阻断动脉血流30或40 min相比,手术时间短,技术要求不高,胎仔死亡率与对照组差异无显著性(P>0.05)。各实验组较对照组新生胎仔体重及胎盘、各重要脏器重量均明显降低(P<0.05)。结论通过阻断卵巢动脉从而阻断子宫动脉血流,成功建立缺血缺氧性FGR孕鼠模型。该模型重复性好,操作简便,并可成功设立同体对照,为进行FGR相关的产科理论研究提供了一个有利的技术平台。     

雷公藤治疗子痫前期孕鼠蛋白尿实验研究

目的研究雷公藤多甙对于子痫前期孕鼠蛋白尿的治疗作用。方法采用皮下注射亚硝酸左旋精氨酸甲酯(LNAME)125mg·(kg·d)-1建立大鼠子痫前期模型。将造模后的大鼠随机分为3组:即大、小剂量治疗组和对照组。2个治疗组分别给予6mg·(kg·d)-1或3mg·(kg·d)-1灌胃,对照组给予0.9%氯化钠注射液灌胃。另设一健康大鼠对照组即D组。测量孕鼠尾动脉收缩压、蛋白尿浓度、肾功能、胎盘质量、仔鼠体长、体质量及肝、脑质量。结果与对照组相比,雷公藤多甙治疗组的尿蛋白明显降低,胎盘质量、仔鼠体长及体质量增加,仔鼠死亡率明显降低。3组之间畸形率无显著性差异。结论雷公藤多甙可以显著降低子痫前期孕鼠的蛋白尿水平,增加胎盘质量、仔鼠体长及体质量,降低死胎率,而未增加仔鼠的畸形率。     

妊娠期肝内胆汁淤积症对胎鼠生长发育影响的实验研究

目的：了解大鼠肝内胆汁淤积症对胎鼠生长发育的影响。方法：给妊娠第16天的大鼠分别于颈后皮下注射苯甲酸雌二醇(5mg／kg)和尾静脉注射游离胆酸(2．4mg／kg)，连续5天，制造两种妊娠期肝内胆汁淤积症模型，将该孕鼠于妊娠第21天在麻醉状态下剖腹，取胎鼠血、羊水、胎肝、胎盘。结果：雌激素组晚期死亡胚明显增高(15．66％)，21日龄胎鼠体重明显降低，胎血总胆酸(TBA)明显升高。胆酸组羊水中的TBA明显高于对照组，胎鼠体重与对照组差异不明显。病理学显示，两模型组胎盘水肿明显，绒毛变性坏死，并有大量中性粒细胞渗出。结论：雌激素组可引起胎儿的高胆酸血症；胆酸组羊水中的TBA高于对照组，胎盘水肿、坏死明显，提示胆酸可影响胎盘功能。     

一氧化氮合成酶抑制剂对孕鼠及胎鼠胎盘的影响

研究一氧化氮（NO）合成酶抑制剂对孕鼠及胎鼠胎盘的影响，探讨NO在妊娠高血压综合征（妊高征）发病机制中的作用。选择清洁级Wistar大鼠，随机分为3组，自妊娠第14d开始皮下注射生理盐水、NO合成酶抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯（L－NAME）每天125mg／kg或L－NAME每天250mg／kg，直到分娩。测量孕鼠尾动脉收缩压及胎鼠胎盘重量，测定孕鼠尿蛋白浓度及相关血液指标。结果：L－NAME使孕鼠产生剂量依赖性高血压和血细胞比容增加，并伴尿蛋白浓度及血尿素氮、肌酐、尿酸增加，血小板数减少。同时，L－NAME使胎鼠胎盘重量明显减轻、死胎增加，并见胎鼠后肢畸形，但不影响分娩时间。结论：NO合成酶抑制剂可使孕鼠产生妊高征的类似表现，表明妊娠期NO合成减少可能是妊高症发病机制中的一个重要因素。