自制外伤敷料对动物创伤的实验研究

我们在对甲壳素及壳聚糖的制法作了一些试验的基础上，用壳聚糖自制成外伤敷料用于动物外伤愈合方面的初步实验，观察其作用，以便应用于运动外伤治疗，现已得到较为满意的初步效果，报告如下。1 材料与方法材料：虾壳、蟹壳、12只SD大白鼠，雌雄各半，体重(200±25)g，喂养5d。方法：(1)甲壳素及壳聚糖的制备：经过挑选的虾、蟹壳，经洗净、干燥、粉碎后，按1：10w/v比例加入2N HCL中，反应5h后过滤；再加2N HCL在0℃左右继续反应10h，过滤，用水洗至中性；再按1：10w/v比例加入1N NaOH中，回流6h即得粗品。将此粗产品加入0.5％KMnO…     

壳聚糖作为药物载体及基因载体的临床应用前景

甲壳素是存在于自然界中惟一能被生物降解的阳离子高分子材料,近年研究表明,它在调节机体免疫功能,降低血脂、血糖、血压,保护胃肠道等方面发挥着巨大的作用.壳聚糖是甲壳素的N-脱乙酰基衍生物,具有组织相容性好、生物学活性多样、可生物降解、无毒性、易于吸收等特点.壳聚糖作为药物载体能提高药物吸收,稳定药物成分,增加药物靶向性,增强药物缓释;它作为基因载体对DNA有一定的保护,能提高基因的表达时间.在药物载体、基因载体等研究领域壳聚糖将具有广泛的应用前景.     

壳聚糖乙酰化甲壳素材料与许旺细胞的体外相容性

背景：天然甲壳素溶解性差，不易加工处理。传统工艺制备的甲壳素存在较多致炎性杂质蛋白。 目的：观察由高纯度壳聚糖乙酰化制备的甲壳素材料与许旺细胞的体外生物相容性。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2006—09／2007—10在南通大学医学院组织学与胚胎学教研室及江苏省神经再生重点实验室完成。 材料：新生一两天的SPF级SD大鼠坐骨神经和臂丛神经用于培养许旺细胞，自制壳聚糖膜，脱乙酰度为92．5％。 方法：将脱乙酰度92．5％的壳聚糖膜浸入5％的醋酐甲醇溶液中进行乙酰化反应后制备甲壳素膜。体外接种许旺细胞分别至壳聚糖膜和甲壳素膜上。 主要观察指标：共培养6d后通过抗S-100蛋白免疫细胞化学的方法鉴定，并进行光镜、扫描电镜观察细胞形态。CCK-8试剂检测在壳聚糖膜浸出液、甲壳素膜浸出液、L-15培养基、有机锡浸出液中生长2，4，6d许旺细胞的细胞活力。 结果：抗S-100蛋白免疫细胞化学的鉴定结果提示这类细胞为许旺细胞；光镜、扫描电镜观察均发现细胞能够在壳聚糖膜和甲壳素膜表面正常生长，细胞贴附牢固，外形饱满，大多数细胞呈长梭形，边缘清晰，细胞增殖情况良好。细胞活力检测的结果显示壳聚糖膜浸出液和甲壳素膜浸出液中生长的许旺细胞与L-15培养基中生长的细胞相比，细胞活力无明显差异（P〉0．05）。有机锡浸出液中生长的许旺细胞活力均低于其他浸出液，差异有显著性意义（P〈0．05）。 结论：壳聚糖乙酰化制备的甲壳素材料与许旺细胞体外生物相容性良好。     

甲壳素/壳聚糖生物抗菌敷料在皮肤组织工程中的应用

目的:探讨甲壳素,壳聚糖生物抗菌敷料的性能及其在皮肤组织工程中的应用.方法:由作者应用计算机检索中国知网(CNKI)与万方医学网中与生物抗菌敷料特性及临床应用有关的文献,检索时限为1996/2010.检索关键词:生物抗菌敷料,甲壳素/壳聚糖,皮肤组织工程,安全性,性能特点.纳入标准:①甲壳索/壳聚糖生物抗菌敷料的性能.②甲壳素/壳聚糖生物抗菌敷料在皮肤组织工程中的应用.③同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章.排除标准:排除重复研究和较陈旧文献.对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文.结果:根据纳入排除标准,共纳入20篇相关文献.甲壳素/壳聚糖安全性和可降解性良好,吸湿性、抑菌性强,并具有止血和止痛、抑制瘢痕形成、促进细胞生长、加速伤口创面愈合和促进机体非特异性免疫的功能.从其在皮肤组织工程中的应用研究来看,甲壳素/壳聚糖可有效促进烧伤创面的愈合和皮肤再生,且不增加创面感染的机率.结论: 甲壳素/壳聚糖生物抗菌敷料性能良好,能有效促进烧伤创面愈合和增强皮肤再生,在皮肤组织工程及其他医学领域中具有广泛常规应用的可能性.     

药用辅料壳聚糖的研究进展

壳聚糖（chitosan）系甲壳素脱乙酰化后的衍生物，又名甲壳胺、聚氨葡糖、脱乙酰壳多糖等。壳聚糖是二十世纪七十年代开始应用研究的药用辅料，目前已被公认为是很有发展前途的天然高分子化合物。壳聚糖口服完全无毒，无皮肤刺激性和眼粘膜刺激性，与人体有很好的相溶性，制药过程中可作为片剂的稀释剂，改善药物的生物利用度及压片的流动性、崩解性和可压性，作为控释制剂的赋形剂和膜材料，微囊和微球的囊材等，其应用的开发和研究已渗透到药剂学的多个领域。本文就药用辅料壳聚糖的研究进展作一简述。     

壳聚糖及其衍生物在骨组织工程中的应用

壳聚糖是天然多糖类高分子化合物甲壳素的脱乙酰产物,具有来源丰富、生物相容性好、可生物降解等优点,在骨组织工程中可以加工成用于细胞移植和组织再生的多孔支架、生长因子的缓释载体及外源基因的递送载体,也可加工成微球或水凝胶等形式用作骨组织工程的可注射性支架,在骨组织工程研究领域壳聚糖及其衍生物具有广阔的应用前景.但由于壳聚糖复合支架的机械性能较弱、在体内的降解时间难以精确控制、壳聚糖用作基因载体转率效率偏低等原因,目前大多研究只处于体外和动物体内实验阶段,随着材料科学与生命科学的发展,壳聚糖将广泛用于骨组织缺损的临床治疗实践中.     

添加羧化壳聚糖采血后即刻分离制备血小板可行性研究

目的探讨使用甲壳素衍生物—羧化壳聚糖即刻分离制备血小板的可行性,寻找血液成分分离新方向。方法随机选取大连地区献血者40名,当日成功献血时同步采集全血10 m L,分成实验组,自然沉降对照组和离心对照组进行实验。从阿拉丁试剂公司购买水溶性壳聚糖,用血液保存液Ⅱ配制成(0.25~2.0)mg/m L不同浓度溶液,按1∶4比例加入到2 m L全血中,静置4 h,观察血液分离速度,计数血浆中红细胞,白细胞及血小板,观察血小板聚集现象及红细胞形态变化;在最适壳聚糖添加浓度的红细胞中加入适量红细胞保存液予以4℃保存,35 d保存期内检测溶血率。结果加入1.0~2.0 mg/m L浓度壳聚糖的实验组血液分离速度均明显快于自然沉降对照组,血浆中均仅存微量红细胞,富血小板,35d时无明显溶血,同离心对照组。结论壳聚糖可以用于采血后即刻分离富血小板血浆。     

壳聚糖纳米粒的制备及体外抗幽门螺杆菌效果评价

背景:壳聚糖是甲壳素的脱乙酰产物,这种碱性氨基多糖具有天然抗菌活性,且抗菌广谱,但将其纳米化后抗幽门螺杆菌作用的报道较少.目的:制备壳聚糖纳米粒并评价其体外抗幽门螺杆菌的疗效.设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2008-03/10在中南大学湘雅医院卫生部纳米生物技术重点实验室完成.材料:采用聚合物分散法用脱乙酰度分别为88.5%和95%的2种壳聚糖粉末制各壳聚糖纳米粒.方法:取0.5mL.含幽门螺杆菌(NCTC11639和NCTC11637)5×108 CFU/mL 的布氏肉汤菌液均匀涂布于培养基上待干燥后,采用打孔法检验不同质量浓度(5,10,15,20 g/L),不同pH值(pH=6,5,4)和不同脱乙酰度(88.5%和95%)壳聚糖纳米粒溶液的抑菌效果.主要观察指标:抑菌环直径.抑菌环直径越大,说明该菌对此药敏感性越大,抗菌效果越好;反之越小,抗菌效果越差;若无抑菌环,则说明该菌对此药具有耐药性.结果:pH值在4～6时,壳聚糖纳米粒的抑菌作用与pH值呈负相关(P＜0.01),且在pH值为4时的抑菌效果最强.2种不同脱乙酰度壳聚糖对幽门螺杆菌的抑菌作用差异有显著性意义(P＜0.05),壳聚精纳米粒(脱乙酰度95%)的抑菌效果优于壳聚糖纳米粒(脱乙酰度88.5%),在质量浓度处于5～20 g/L时抗幽门螺杆菌的作用差异无显著性意义(P＞0.05).结论:壳聚糖纳米粒提高了在体外对幽门螺杆菌的抑菌作用,且此作用在酸性条件下明显增强.用脱乙酰度为95%的壳聚糖粉末制备的壳聚糖纳米粒具有更好的抑幽门螺杆菌的作用.     

甲壳素微结晶分散体系的研制：一种新的甲壳素溶解环试验

目的:鉴定细菌是否分泌甲壳素酶,并分解利用甲壳素的经典方法是甲壳素缺刻试验,但其需时较长,结果不明显,为解决以上缺点,研制甲壳素微结晶分散体系,拟创造一种新的实验方法甲壳素溶解环试验,并探讨其影响因素。方法:实验于2005-04/2006-12在浙江省医学科学院医学生物工程研究所完成。①通过高温高压、超声等综合手段,制备乳白色的甲壳素微结晶分散体系,并进行透射电镜观察。②采用制备的甲壳素微结晶分散体系,制造甲壳素培养基,取副溶血弧菌和致病性大肠杆菌44815菌悬液106cfu/mL各1μL,分别注入甲壳素培养基中,37℃培养72h,如接种点周围出现明显的透明环,即为阳性,反之为阴性。③制备2%,1%,0.5%3种不同浓度的NaCl及相应8.0,7.0和6.0不同pH值组合的3种甲壳素培养基,分别接种副溶血弧菌菌悬液106cfu/mL各1μL,37℃培养72h后测量溶解环直径。④菌量和培养温度的影响:将3种浓度菌悬液(108,106和104cfu/mL)各1μL注入甲壳素培养基中,37℃培养72h;固定菌量(2.8×106cfu/mL)接种后,分别在40℃、37℃和25℃培养72h,测量溶解环直径。结果:①成功制备了甲壳素微结晶分散体系,甲壳素浓度为4%,微粒粒径<0.5μm。②培养72h后,接种副溶血弧菌甲壳素培基上呈现阳性反应。③在NaCl浓度为2.0%,pH为8.0环境条件下,溶解环直径最大。④在菌量108￣104cuf/mL范围内,菌量与溶解环直径大小呈正比,但最适浓度为106cuf/mL;在37℃环境中溶解环直径最大。结论:①甲壳素溶解环试验是鉴定细菌能否分泌甲壳素酶、并分解利用甲壳素的一种直观、快速、准确的方法。②甲壳素培养基NaCl、pH值、培养温度及菌量等对甲壳素溶解环试验均有直接的影响。     

一种壳聚糖神经组织工程支架的制备及表征

目的:用自行研制的模具制备一种具有轴向排列多通道壳聚糖神经修复导管.方法:实验于2004-05/09在清华大学生物系生物材料与组织工程实验室完成.首先制备多孔或致密的壳聚糖空管,管内径为2～5 mm,壁厚0.2～1.0 mm.将一组不锈钢针平行贯穿于壳聚糖空管,用钢针固定片固定不锈钢针,然后在此壳聚糖空管中注入壳聚糖溶液,最后用冷冻干燥法成型.然后,对所得到的支架进行理化性能表征,评价多通道壳聚糖导管的溶胀性、体外降解情况,并用瑞氏染色与扫描电镜用来观察N2a细胞(Neuroblastoma cells, mouse)在导管内生长情况.结果:①在0.1 mol/L磷酸盐缓冲液中溶胀后,多通道壳聚糖导管的内径无显著性变化(P > 0.01),管壁厚度增大明显(P < 0.01).②导管在溶菌酶溶液中降解8周后,形态结构无明显变化,而且保持了足够的机械强度和韧性.③瑞氏染色显示N2a细胞核染成深蓝色,铺展在通道表面及成团分布在导管内基质之中.扫描电镜观察可清晰地显示出细胞的形态及在导管中的分布情况.结论:实验制备的多通道壳聚糖导管具有合适的溶胀性、机械强度以及神经细胞亲和性,有潜在的研究与应用价值.