壳聚糖生物流体敷料膜细胞毒性研究

壳聚糖为天然的海洋生物活性材料，具有良好的生物相容性，是一种应用前景十分看好的生物材料。近年来我们采用壳聚糖为主要原料研究的新型生物功能敷料（下称流体膜），不但具有较好的体外抗菌活性，而且又有止血、促上皮细胞生长及加速创面愈合等多种生物活性，为使临床应用更具安全性，特对其细胞毒性进行试验。     

壳聚糖纳米粒制备及表征与其抗肿瘤的生物学效应

目的:近期研究发现,壳聚糖纳米化后,不仅可改善其溶解性,还可提高其生物学功能。拟建立壳聚糖纳米粒的制备方法,并对壳聚糖纳米粒的表征及抗肿瘤生物学效应进行初步研究。方法:实验于2006-08/2007-05在浙江省医学科学院生物工程所完成。①建立壳聚糖纳米粒的制备方法:将壳聚糖粉末溶于乙酸溶液,用NaOH调节其pH为5,采用三聚磷酸钠为凝聚剂,进行离子交联来制备壳聚糖纳米颗粒。通过离心和冷冻干燥得到壳聚糖纳米粒粉末。②纳米粒的表征:经超声得到壳聚糖的悬浊液,用透射电镜来观察纳米颗粒的外观形态;用动态光散射仪来测定纳米颗粒的粒径大小与分布。③采用MTT法对壳聚糖纳米粒体外抗肿瘤生物学效应进行了初步研究。结果:①透射电镜下观测到了稳定、均一的颗粒;激光粒度分析仪测量发现纳米粒粒径大小在300nm左右,粒径分布较窄。②500mg/L的壳聚糖纳米粒对Hela细胞的抑制率为27%;对SMMC-7721细胞的抑制率为23%;对BGC-823细胞的抑制率为29%;对MCF-7细胞的抑制率最高,达55%。结论:建立的壳聚糖纳米粒的制备方法可靠,并证明其体外具有较好的抗肿瘤作用。     

杭州湾霍乱弧菌(Eltor生物型)的越冬与浮游生物桡足类之间生态学关系的研究

第七次世界霍乱大流行至今已近30年,在世界上形成了某些地方性疫源地。为了探索地方性副霍乱的形成条件,近年来我们对Eltor弧菌(ETV)的生态学进行了研究,发现ETV流行株可在河口水中越冬,且与蟹壳几丁质密切相关。由于蟹壳几丁质在自然水体中的分布极少     

壳聚糖纳米混悬剂抗突变生物学效应:原核细胞基因突变试验

背景：抗突变剂能有效阻止化学致癌物对遗传物质的损害，因此，积极寻找具有抗突变作用的生物资源具有重要的意义。目的：系统评价壳聚糖纳米混悬剂对多种强阳性诱变剂的抗突变效应。设计、时间及地点：体外对照观察试验，于2007—03/2008-03在浙江省医学科学院生物工程研究所完成。材料：自制壳聚糖纳米混悬剂（平均粒径25．3nm，占总粒子数99．1％），8种诱变剂均购自美国Sigma公司。方法：用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验），将壳聚糖纳米混悬剂设定为高、中、低（2500，1250，625μg/Ⅲ）3个剂量组，分别对NaN3、MMC、9-AA、2,7-AF、NQNO、Dexon、CP、2-AF等8种常用诱变剂进行抗突变作用观察。主要观察指标：根据平均回变菌落数计算抑制率，用抑制率判断其抗突变作用程度。结果：高、中剂量组壳聚糖纳米混悬剂对NaN3、MMC、9-AA、2,7-AF、NQNO、CP和2-AF分别呈中度抑制和弱抑制，低剂量组无抑制作用。壳聚糖纳米混悬剂对诱变剂Dexon显示出较强的抗突变效应，3个剂量组对Dexon诱发的回变菌落数均显著下降（P〈0．01）。随着壳聚糖纳米混悬剂浓度的增加，对不同致突变剂产生的诱发回变菌落数明显下降，抑制率上升，呈现量效关系。结论：壳聚糖纳米混悬剂对多种诱变剂具有不同程度抗突变效应，并呈现量效关系。     

几丁聚糖生物流体敷料膜治疗压疮

生物流体敷料膜的主要成分——几丁聚糖，是一种广泛存在于蟹、虾外壳中的天然高分子化合物，由壳多糖经脱乙酰化后衍生而成。经过多年的努力，开发成功的该生物敷料，经动物学试验、体外抗菌活性试验及安全性评价等生物学功能的研究证明，其具有良好的生物相容性和天然的抗菌活性，并能促进创面局部免疫，加速愈合。以28例压疮患者46处压疮创面作为观察对象，在患处涂敷生物敷料1次／d，然后用红外线照射5～10min。治愈82．6％(38／46)，有显著疗效8．7％(4／46)，无效8．7％(4／46)，总有效率91．3％。证明几丁聚糖生物流体敷料膜治疗压疮具有良好的疗效，建议治疗时间不少于20d。     

几丁聚糖纳米混悬剂研制及其表征

目的运用理化手段，进行几丁聚糖纳米（nanoparticles）混悬剂制备及其表征。方法2006年07月-2007年06月运用化学酸解、Co-60γ射线辐照、高压、超声波及稳定剂等综合理化手段制备几丁聚糖纳米粒子。应用透射电镜（TEM）和激光动态光散射仪（Zetasizer3000HS）进行几丁聚糖纳米粒子尺寸、形貌及分布的表征。结果制备的几丁聚糖纳米粒子为类圆球形；平均粒径25．3nm，占总粒子数99．1％，粒径分布图形较窄，表明颗粒大小均匀。结论运用以Co-60γ射线辐照为主要手段进行几丁聚糖纳米混悬剂的制备，是一种简便、快速、无污染、重复性好的方法，具备可行性。     

几丁聚糖纳米微粒分散体系应用于烧伤创面的实验

目的:制备以几丁聚糖为主要原料纳米微粒分散体系,并通过动物烧伤实验进行医学应用效果观察。方法:实验于2003-05/2004-05在浙江省医学科学院医学生物工程研究所及浙江省动物实验中心完成。首先运用物理和化学综合手段,制备几丁聚糖纳米微粒分散体系,用透射电镜观察法进行纳米微粒尺寸测定评估;其次采用制备的几丁聚糖纳米微粒分散体系进行动物烧伤实验,①烧伤动物模型建立:选择体质量2.5～3.0kg健康兔子8只,雌雄对半,脱毛并麻醉后,在实验兔子背部,以脊椎为对称轴,用盛装100℃开水的人工烧伤器(质量500g),紧贴兔子皮肤3s,制成浅Ⅱ度烧伤创面24个,5s制成深Ⅱ度创面24个,每个创面平均面积16cm2,左侧创面为实验组,右侧为对照组。②治疗方法:左侧实验组创面涂敷几丁聚糖纳米体系,右侧创面涂敷凡士林,2次/d,上下午各1次,连续3d后停止涂敷,每日观测记录创面的渗出液、创面大小、结痂时间、脱痂愈合时间等临床指标。结果:①几丁聚糖纳米微粒分散体系颗粒粒径平均为(36.40±5.14)nm。②治疗动物烧伤实验第7天的烧伤创面平均面积试验组小于对照组[浅Ⅱ度:(2.29±0.51)和(4.28±0.45)cm2;深Ⅱ度:(2.15±0.34)和(4.39±0.52)cm2,P<0.01]。③烧伤创面结痂平均时间试验组短于对照组[浅Ⅱ度:(6.45±0.58)和(10.5±0.75)d;深Ⅱ度:(7.5±0.66)和(10.6±0.78)d,P<0.01]。④几丁聚糖纳米体系对烧伤创面脱痂愈合的平均时间试验组短于对照组[浅Ⅱ度:(14.36±0.58)和(16.27±0.75)d;深Ⅱ度:(22.0±1.33)和(29.88±1.86)d,P<0.01]。结论:几丁聚糖纳米微粒分散体系对动物Ⅱ度烧伤具有明显的缩小创面、提早结痂、促进愈合之疗效,提示具有临床功能敷料的开发应用前景。     

几丁质溶解环试验在细菌学鉴定中的应用

目的研制几丁质微结晶分散体系，创造一种几丁质溶解环试验来替代传统的几丁质缺刻试验，用于鉴定细菌是否分泌几丁质酶，分解利用几丁质的一种新的实验方法。方法运用物理和化学综合手段，制备几丁质微结晶分散体系，几丁质浓度为4％，微结晶粒径〈0．8μm。采用制备的几丁质微结晶分散体系，进行几丁质溶解环试验和影响因子的研究。在几丁质培养基接种点周围出现明显的透明环，即为实验结果阳性，说明该细菌具有几丁质酶，对几丁质具有生物降解作用，反之为阴性。结果副溶血弧菌具有几丁质酶，能降懈、利用几丁质，而大肠杆菌则无此生物学功效。NaCl、pH、温度及菌量等因子对几丁质溶解环试验有直接的影响作用。结论几丁质溶解环试验是鉴定细菌能否分泌几丁质酶，并分解利用几丁质的一种直观、快速、准确的方法，在细菌学鉴定中具有实际意义。