木豆叶中黄酮微波提取工艺研究

目的选取适合提取木豆叶中黄酮的方法,并优化提取工艺参数。方法以木豆叶中荭草苷、木犀草素和总黄酮的提取率及提取物抗氧化活性为指标,将微波辅助提取与热回流、超声波及浸泡提取方法相比较,并采用中心组合设计对影响荭草苷和木犀草素提取效果的微波辅助提取工艺参数进行了优化。结果通过比较确定微波辅助提取法较为适合木豆叶中黄酮的提取;优化得到荭草苷和木犀草素最佳微波提取工艺参数为:木豆叶粒径为50目,乙醇体积分数为80%,料液比1∶20,提取温度60℃,提取次数4次,提取时间10 min,微波功率500 W;荭草苷和木犀草素的提取率分别为(4.42±0.01)、(0.10±0.01)mg/g。结论采用微波辅助提取木豆叶中的黄酮具有提取时间短、提取率高、产物抗氧化效果好的特点,优化的工艺参数具有可行性和实际应用价值。     

制备色谱分离竹叶黄酮中异荭草苷和荭草苷

目的建立制备型高效液相色谱(PHPLC)分离竹叶黄酮中异荭草苷和荭草苷的方法。方法竹叶黄酮经AB-8树脂吸附洗脱纯化后,采用PHPLC分离异荭草苷和荭草苷,制备色谱条件:流动相为甲醇-0.3%乙酸水溶液(32∶68),体积流量为5 mL/min,柱温为20℃,检测波长330 nm,进样体积为400μL,上样质量浓度为15.3 mg/mL。结果 HPLC检测表明,异荭草苷的质量分数>99%,荭草苷的质量分数>93%,加样回收率分别为(92.7±2.92)%和(85.1±3.45)%。单体结构通过核磁共振碳谱和氢谱鉴定,确定为异荭草苷和荭草苷。结论该法分离效果较好,低毒,回收率高,可用于竹叶黄酮中2种黄酮苷的分离制备。     

胡芦巴大孔吸附树脂提取物中荭草苷的含量测定

目的：测定胡芦巴树脂提取物中荭草苷的含量。方法：采用高效液相色谱法,色谱柱为C18色谱柱（150mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈——0.2%磷酸水溶液（15∶85）,检测波长为350nm。结果：荭草苷在进样量0.023~0.279μg（r=0.9999）范围内线性关系良好;平均回收率为100.1%;所测三批样品荭草苷含量分别为1.30%、1.41%、1.34%。结论：此方法简便、快速、准确,适用于胡芦巴树脂提取物中荭草苷的含量测定。     

RP-HPLC同时测定淡竹叶中4种黄酮苷的含量

目的：建立RP-HPLC同时测定不同产地、不同采收期淡竹叶中荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷的含量。方法：采用高效液相色谱法，Waters XBridge C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇-0.05%冰醋酸(35∶65)为流动相洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长340 nm，柱温25 ℃。结果：4种成分均达到基线分离，线性关系良好。方法的平均回收率及RSD分别为荭草苷103.2%，2.1%；异荭草苷101.6%，2.7%；牡荆苷98.4%，2.3%；异牡荆苷99.2%，1.8%。结论：本研究所建立的HPLC方法操作简便、结果准确可靠，为该类药材的入药及资源利用提供了依据。     

RP-HPLC法测定竹叶提取物中黄酮类和酚酸类成分

目的建立一种RP-HPLC法同步测定竹叶提取物中特征性的4个黄酮碳苷和4个酚酸的方法。方法采用RP-HPLC法。Luna C18ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-1%乙酸水溶液(B);体积流量:1.0 mL/min;进样量:10μL;柱温:40℃;检测波长:330 nm。结果异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸和阿魏酸在1.875~290.0μg/mL线性关系良好,回收率在96.13%~102.81%,RSD在1.10%~1.66%。结论本方法简便、灵敏、准确,可普遍应用于竹叶提取物的质量研究和品质控制。     

HPLC法同时测定15个产地浮萍中4种黄酮类成分

目的建立HPLC法同时测定15个产地浮萍Spirodela polyrriza(L.)Schleid.中4种黄酮类成分(荭草苷、牡荆苷、木犀草素、芹菜素)的含有量。方法分析采用Waters XBridge C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相甲醇-0.5%磷酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温25℃;检测波长350 nm。结果荭草苷在0.228 0~5.700 0μg(R~2=0.999 7)、牡荆苷在0.086 4~5.400 0μg(R~2=0.999 8)、木犀草素在0.132 0~5.500 0μg(R~2=0.999 8)、芹菜素在0.026 4~6.600 0μg(R~2=0.999 9)范围内具有良好的线性关系,平均加样回收率为100.31%~104.58%,其含有量依次为荭草苷牡荆苷木犀草素芹菜素。结论不同产地浮萍中荭草苷和牡荆苷的含有量有明显差异,而木犀草素和芹菜素比较稳定。     

UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中异荭草素, 野黄芩苷和木犀草苷及其药代动力学研究

目的:建立利用UPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中异荭草素、野黄芩苷和木犀草苷等3种黄酮的分析方法,并研究大鼠静脉注射3个剂量的注射用复方荭草后的药代动力学特征。方法:血浆样品采用酸化后甲醇沉淀蛋白,采用WatersAcquity BEH C18色谱柱,流动相为0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应离子监测(MRM)。结果:3种黄酮成分在大鼠血浆中线性关系良好,提取回收率78.56%～101.91%,日内、日间精密度和准确度良好,各物质在大鼠体内的平均滞留时间均较短(<22 min)。结论:该方法特异、快速、准确和灵敏,可用于注射用复方荭草在大鼠体内的药动学研究。     

一测多评法同时测定肾舒颗粒中9种成分

目的建立一测多评法同时测定肾舒颗粒(淡竹叶、大青叶、茯苓等)中鸡屎藤次苷甲酯、车叶草苷酸、车叶草苷、异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸的含有量。方法该药物甲醇提取液的分析采用Thermo ODS BP C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.05%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长210、238、340 nm。以牡荆苷为内标,建立其他8种成分的相对校正因子,测定含有量。结果 9种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 1),平均加样回收率96.98%～99.96%,RSD 0.76%～1.65%。一测多评法所得结果与外标法接近。结论该方法稳定可靠,可用于肾舒颗粒的质量控制。     

HPLC同时测定短瓣金莲花中4种成分含量

目的:建立同时测定短瓣金莲花中荭草苷、牡荆苷、藜芦酸及槲皮素4种成分的方法。方法:采用Agilent Analytical C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1%冰醋酸溶液(24∶76),流速为1.0 m L/min,检测波长为254 nm,柱温为25℃。结果:荭草苷、牡荆苷、藜芦酸及槲皮素分别在34.32~205.92μg/m L、41.28~247.68μg/m L、17.84~107.04μg/m L和33.60~201.60μg/m L浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999),平均加样回收率分别为99.43%、101.94%、100.72%、100.28%,RSD分别为1.17%、1.62%、0.93%、1.65%。结论:该方法操作简便、灵敏、重复性好,可用于短瓣金莲花中上述4种成分的含量测定。     

竹叶提取工艺的综合性评价

目的:建立竹叶的指纹图谱及其多指标成分的含量测定方法,采用主成分分析(PCA)和聚类分析对6种竹叶提取物的特征图谱进行综合性评价。方法:采用Diamonsil Plus C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相0.025%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速1 mL·min~(-1),柱温30℃,检测波长350 nm,进样量10μL。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2012版)和SPSS 22.0软件对6种竹叶提取物样品的监测结果进行分析。结果:6种竹叶提取物样品中4种成分(绿原酸、异荭草苷、荭草苷、异牡荆素)的质量浓度分别为0.08~0.30,0.24~1.64,0.26~0.79,0.16~0.79 g·L~(-1)。HPLC指纹图谱共标定了11个共有峰,样品S1~S6的指纹图谱相似度均0.89。聚类分析将6种竹叶提取工艺聚为3类;PCA提取出了2个主成分,其累计贡献率达98.9%。结论:6种竹叶提取物中绿原酸、异荭草苷、荭草苷和异牡荆素的含量差异性较大。聚类分析和PCA相互补充、互为佐证,二者与竹叶提取工艺指纹图谱的相似度评价相结合可用于竹叶提取工艺的优化,可为竹叶的工业开发提供参考。     

薄层色谱法鉴别荭草中的黄酮类化学成分

目的：建立荭草中黄酮类化学成分的鉴别方法.方法：利用酸水解得到黄酮苷元的提取条件,以槲皮素和山奈酚为对照品,增加了荭草中黄酮类化学成分的薄层色谱鉴别.结果：在供试品色谱与两种对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的清晰荧光斑点,分离度高.结论：所建立的方法 能很好地对荭草中的黄酮类成分进行质量控制.     

不同采收期金莲花中3种碳苷黄酮成分动态变化

目的:通过研究不同采收期金莲花3种碳苷黄酮成分的动态变化,确立金莲花的最佳采收期,为金莲花取得最大药用价值提供科学依据。方法:采用高效液相色谱法,以乙腈-0.35%磷酸溶液(14∶86)为流动相,在345 nm波长处同时测定不同采收期金莲花中荭草苷、牡荆苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷3种碳苷黄酮成分的含量。结果:金莲花中3种碳苷黄酮成分的含量不同时期存在差异,均以开花后3～6 d为最高。结论:开花后3～6 d为金莲花的最佳采收时期,方法简便、精密度高、重复性好,为金莲花取得最大药用价值提供科学依据。     

高速逆流色谱分离纯化白芍中芍药苷的研究

目的 建立了微波提取与高速逆流色谱纯化白芍中芍药苷的方法.方法 实验采用90%乙醇、微波功率850 w的条件下对白芍提取25 min,提取物在正丁醇一醋酸乙酯-水(2:3:5)的溶剂体系下进行高速逆流色谱纯化,纯化物在高效液相色谱流动相甲醇-水(70:30);色谱柱Shim-pack VP-Ods(150 mm×4.6 mm,3.5 μm);体积流量1.0 mL/main;检测波长230 nm.结果 200 mg的白芍提取物,芍药苷质量分数10.62%.经逆流色谱分离制备得到20.52 mg质量分数为98.8%的芍药苷,芍药苷的回收率为96.6%.结论 高速逆流色谱是分离与纯化白芍中芍药苷的有效方法.     

微波萃取法提取桑叶和桑白皮的黄酮类成分

目的:微波萃取法提取桑叶和桑白皮中黄酮类成分。方法:采用正交试验设计优选出微波萃取的最佳工艺条件,并与传统醇提法相比较,同时比较桑的不同部位药材的黄酮含量。结果:微波萃取黄酮类成分的最佳工艺条件为:70%乙醇12倍量,于60℃萃取20 m in,其中提取溶剂对结果有显著影响。桑叶中的黄酮含量约为桑白皮中的9倍,且应用微波萃取法比传统醇提法分别高55%和32%。结论:微波萃取法在提取时间、溶剂用量及得率等方面明显优于传统的醇提法,适于工业生产。     

3种竹叶抗氧化有效成分分析

目的研究3种竹叶中有效成分含有量与其提取物抗氧化活性差异的相关性及其抗氧化活性基础物质。方法采用HPLC法分别测定了7批淡竹叶、10批苦竹叶、9批竹叶中7种成分的含有量;DPPH法、ABTS法及FRAP法测定其抗氧化活性。以清除DPPH自由基的能力评价3种竹叶提取物的抗氧化活性,并利用多元相关与回归分析方法探讨各成分含有量与提取物活性的关系。结果淡竹叶的抗氧化活性最弱,且与苦竹叶、竹叶比较均具有显著性差异(P0.05)。芹菜素、异荭草苷、荭草苷含有量分别与淡竹叶、苦竹叶、竹叶抗氧化活性呈显著性正相关(P0.05)。回归分析结果与相关性分析结果基本一致。结论芹菜素、异荭草苷、荭草苷分别是淡竹叶、苦竹叶、竹叶中的主要抗氧化有效成分。     

HPLC-MS-MS同时检测大鼠血浆中荭草素、牡荆素和槲皮苷

目的:建立一种用于同时检测大鼠血浆中荭草素、牡荆素和槲皮苷3种黄酮成分的准确、灵敏的超高液相色谱-串联质谱分析方法,并研究其在大鼠体内的药代动力学.方法:大鼠静脉注射注射用复方荭草后,采用甲醇沉淀血浆蛋白,通过BEH C18柱分离,乙腈-0.1％甲酸水梯度洗脱,采用电喷雾离子化三重四极杆串联质谱,以多反应监测(MRM)方式进行正离子检测.用于定量分析的二级碎片离子分别为449.2～329.2(荭草素)、433.2～313.0(牡荆素)和449.2～303.4(槲皮苷).结果:3种黄酮成分在大鼠血浆中线性关系良好,日内、日间精密度(RSD)均＜15.71％,准确度在86.25％～112.44％之间.3种黄酮成分在大鼠体内的平均滞留时间均较短在21 min以内.结论:本方法快速、专属性强、灵敏度高,适用于注射用复方荭草临床前药代动力学研究.     

平衡透析法、超滤法结合液质联用技术比较测定注射用复方荭草中黄酮类成分的血浆蛋白结合率

目的:测定注射用复方荭草中黄酮类成分的人血浆蛋白结合率,为临床安全用药及血浆蛋白测试方法研究提供依据。方法:以超高效液相色谱-质谱联用为检测手段,采用平衡透析法、超滤法考察荭草素、牡荆素、木犀草苷、槲皮苷等黄酮类成分与血浆蛋白的结合情况,并比较二者的差异。结果:注射用复方荭草在人血浆中质量浓度为5～100 mg.L-1时,荭草素、牡荆素、木犀草苷、槲皮苷等黄酮的结合率较强且无浓度依赖性,两种测定方法牡荆素和木犀草苷存在统计学差异(P<0.01)。结论:建立的平衡透析法、超滤法均能够满足血浆蛋白结合率测定的要求,两种方法所测定的部分指标存在差异。     

竹叶超声提取工艺的优化

目的优化竹叶超声提取工艺。方法以提取时间、乙醇体积分数、料液比为影响因素,荭草苷、异荭草苷总含有量为评价指标,HPLC指纹图谱结合正交试验优化提取工艺。结果最佳条件为提取时间30 min,乙醇体积分数80%,料液比1∶25,荭草苷、异荭草苷总含有量1.78 mg/g。结论该方法简便快速,可用于超声提取竹叶。     

微波协助提取在中药饮片含量测定中的应用(1)——微波法与药典法测定黄芩中黄芩苷含量比较研究

目的:建立微波协助提取法提取黄芩中有效成分黄芩苷,比较微波协助提取法与药典法提取黄芩苷优势。方法:采用Dikma Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2),检测波长280nm,柱温30℃,流速1 mL.min-1。结果:微波提取时间15 min,提取温度120℃,提取溶剂30%乙醇。黄芩苷在0.059～0.59μg呈良好线性关系,r=0.999 9。平均回收率99.36%(n=6)。结论:微波提取法较药典法提取黄芩苷更简便快速、结果准确,为一种符合环保绿色理念的含量测定方法,可用于检测黄芩饮片中有效成分黄芩苷含量。     

反相高效液相色谱法测定人字草中异荭草素的含量

目的 建立人字草中异荭草素含量测定方法.方法 采用反相高效液相色谱法测定,色谱柱为Welchrom-C18柱(4.6 mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%磷酸(15∶85),检测波长为360nm,柱温30℃,流速1.0mL/min,进样量10L.结果 异荭草素的回归方程为Y=2595.05X+34.57,在8.08-40.4μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为100.5%(n=5),RSD为0.93%.结论 该方法简便可行,重复性好,适合于人字草中异荭草素的含量测定,为其质量标准的制订提供参考.