红霉素逆转入肝癌细胞BEL—7402多药耐药性的研究

目的 研究红霉素（ERY）对BEL－7402细胞（人肝癌细胞）多耐药性的逆转作用。方法 将BEL－7402细胞连续培养在含阿霉素（ADM）的培养液中诱导耐药细胞株BEL－7402／ADM,用cell-ELASA法检测细胞膜表面P－gp的表达,细胞毒试验采用MTT法,用荧光分光光度法测定细胞内ADM浓度。结果 BEL－7402／ADM细胞表面P－gp高度表达,除对ADM耐药外,对长春新碱（VCR）和丝裂霉素（MMC）也有不同程度的交叉耐药;ERY可增强ADM、VCR、MMC对BEL－7402。／ADM细胞的增殖抑制作用,可增加BEL－7402／ADM细胞内ADM的浓度而对细胞表面P-gp的表达没有影响。结论 ERY通过竞争性地饱和BEL－7402／ADM细胞表面P-gp通道,使细胞内药物外排减少、浓度增加,从而发挥对BEL－7402／ADM细胞多药耐药性的逆转作用。     

红霉素逆转人肝癌细胞BEL-7402多药耐药性的研究

目的研究红霉素(ERY)对BEL-7402细胞(人肝癌细胞)多药耐药性的逆转作用.方法将BEL-7402细胞连续培养在含阿霉素(ADM)的培养液中诱导耐药细胞株BEL-7402/ADM,用cell-ELASA法检测细胞膜表面P-gp的表达,细胞毒试验采用MTT法,用荧光分光光度法测定细胞内ADM浓度.结果 BEL- 7402/ADM细胞表面P-gp高度表达,除对ADM耐药外,对长春新碱(VCR)和丝裂霉素(MMC)也有不同程度的交叉耐药;ERY可增强ADM、VCR、MMC对BEL-7402/ADM细胞的增殖抑制作用, 可增加BEL-7402/ADM细胞内ADM的浓度而对细胞膜表面P-gp的表达没有影响.结论 ERY通过竞争性地饱和BEL-7402/ADM细胞表面P-gp通道,使细胞内药物外排减少、浓度增加,从而发挥对BEL-7402/ADM细胞多药耐药性的逆转作用.     

板蓝根高级不饱和脂肪酸对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM逆转作用实验

目的：板蓝根高级不饱和脂肪酸对肝癌耐经细胞株BEL－7404／ADM耐药逆转作用主机制研究。方法：MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用；免疫组化法检测细胞P－糖蛋白（P－gp)和多药耐药相关蛋白（MRP）的表达；采用高效液相色谱法（HPLC）测定细胞内ADM的浓度。结果：耐药肝癌细胞株BEL－7404／ADM对多种化疗药物产生多药耐药性，耐药细胞P－gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞（P＜0．01）；板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转BEL－7404／ADM对ADM的耐药性；ADM与板蓝根高级不饱和脂肪酸合用时，其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论：肝癌细胞株BEL－7404／ADM对多种化疗药物具有多药耐药性，其多药耐药性与P－gp和MRP过量表达有关；板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时能逆转BEL－7404／ADM对ADM的耐药性，其逆转作用可能与降低P－gp药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关。     

板蓝根高级不饱和脂肪酸对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM逆转作用实验

目的:板蓝根高级不饱和脂肪酸对肝癌耐药细胞株BEL-7404/ADM耐药逆转作用及机制研究。方法:MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用;免疫组化法检测细胞P 糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)的表达;采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内ADM的浓度。结果:耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM对多种化疗药物产生多药耐药性,耐药细胞P-gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞(P<0.01) ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性;ADM与板蓝根高级不饱和脂肪酸合用时,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论:肝癌细胞株BEL-7404/ADM对多种化疗药物具有多药耐药性,其多药耐药性与P-gp和MRP过量表达有关;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时能逆转BEL-7404/ADM对ADM的耐药性,其逆转作用可能与降低P-gp药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关     

胡椒碱对乳腺癌阿霉素耐药细胞株 MCF -7/ADM 细胞的逆转作用

目的：探讨胡椒碱对人乳腺癌阿霉素（ADM）耐药细胞株 MCF -7/ ADM 的逆转作用及其机制。方法采用 CCK -8法观察胡椒碱联合阿霉素（ADM）对乳腺癌耐药株 MCF -7/ ADM 细胞生长增殖的影响;应用免疫印迹技术（Western - blot）测定胡椒碱联合 ADM 对MCF -7/ ADM 细胞表面 P -糖蛋白（P - gp）表达的影响。结果60,80,100μmol / L 胡椒碱试验组细胞耐药逆转倍数分别为1.62,2.08,3.78倍,差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。胡椒碱能显著抑制 MCF -7/ ADM 细胞膜 P - gp 蛋白的表达,其作用随浓度的增加而增强。结论胡椒碱与 ADM 共同作用于 MCF -7/ ADM 细胞,可使细胞对 ADM 的敏感性增强。胡椒碱具有部分逆转 MCF -7/ ADM 细胞耐药的作用,其逆转作用机制可能与通过下调 P - gp 的表达有关。     

三氧化二砷逆转乳腺癌细胞株MCF-7/ADM多药耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)体外逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用及机制。方法采用MTT法检测As2O3的细胞毒作用和处理前后耐药细胞对化疗药物的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度,通过RT-RCR检测MDR1基因的表达。结果 As2O3在0.25mg/L以下剂量时对MCF-7和MCF-7/ADM耐药细胞株的抑制率均小于15%,半数抑制率(IC50)分别为1.01m/L和1.28mg/L,无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能部分逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。同时无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能使MCF-7/ADM细胞内阿霉素浓度明显增加,MDR1表达下降。结论 As2O3具有体外部分逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用,可能与增加细胞内药物积累、下调MDR1表达有关。     

补骨脂素逆转多药耐药细胞系K562/ADR耐药性研究

目的　研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(K5 6 2 /ADR)多药耐药 (multidrugresistance,MDR)性的逆转作用及其机制。方法　采用MTT法检测药物细胞毒性作用 ,高效液相色谱法检测细胞内阿霉素 (ADR)的浓度 ,流式细胞术测定细胞P 糖蛋白 (P gp)的表达。 结果　补骨脂素 (1～ 2 0 μmol·L-1)能不同程度地降低ADR对K5 6 2 /ADR细胞的IC50 。 2 0 μmol·L-1能显著提高ADR在K5 6 2 /ADR细胞内的浓度 ,降低K5 6 2 /ADR细胞P gp的表达。 结论　补骨脂素能逆转K5 6 2 /ADR细胞的MDR ,其机制与抑制P gp的功能及其表达 ,增加细胞内ADR的积累有关     

ZNF300基因在肝癌耐药细胞HepG2/VCR中的表达及功能初探

目的建立人肝癌HepG2/VCR耐药细胞株,检测ZNF300基因在HepG2/VCR中的表达并初步分析其在肝癌多药耐药(MDR)中发挥的功能。方法采用体外低浓度梯度递增的诱导方法建立长春新碱(VCR)获得性HepG2/VCR耐药细胞株。MTT法检测确定HepG2/VCR耐药细胞株对VCR的耐药性,用Western blot方法检测人锌指蛋白ZNF300基因编码的ZNF300及多药耐药基因编码的P糖蛋白(P-gp)在HepG2和HepG2/VCR细胞中的表达差异;在HepG2/VCR细胞中转染ZNF300基因正向或反向cDNA质粒后,MTT法检测VCR对耐药细胞IC50值的变化,Westernblot方法检测细胞内P-gp表达的影响。结果 MTT检测确认HepG2/VCR耐药细胞构建成功,Western blot检测发现耐药细胞中ZNF300及P-gp的表达相对于HepG2细胞明显增高。在HepG2/VCR细胞中转染正向ZNF300 cDNA质粒后,MTT和Western blot检测发现ZNF300过表达可使VCR对耐药细胞的IC50值增高,并使细胞内P-gp表达上调;在转染反向cDNA质粒Knockdown ZNF300基因表达后得到相反的结果。结论 ZNF300基因在HepG2/VCR耐药细胞中表达明显增高,并能通过上调耐药蛋白P-gp的表达促进肝癌细胞耐药性,可以作为逆转肝癌多药耐药的分子作用靶点。     

姜黄素逆转人结肠癌细胞株HCT-8/VCR多药耐药的研究

目的探讨姜黄素对人结肠癌耐药细胞株HCT-8/VCR多药耐药性的逆转作用及可能机制。方法运用MTT法进行药敏试验,流式细胞仪检测细胞内罗丹明123(Rh123)的表达,RT-PCR法检测多药耐药基因mdr1 mR-NA水平的变化,Western blot法检测mdr1基因蛋白产物P糖蛋白(P-gp)表达水平的变化。结果经25μmol/L姜黄素处理后,增强了HCT-8/VCR细胞对VCR的敏感性,其逆转倍数为4.58倍,增加了细胞内Rh123的蓄积(P<0.05),明显抑制了多药耐药基因mdr1 mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论本研究结果提示姜黄素能抑制耐药基因的表达及功能,提高细胞对化疗药物的敏感性,从而逆转结肠癌细胞的多药耐药性。     

三氧化二砷对胃癌细胞SGC7901/ADR GST-π和TopoⅡ表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用和对GSTπ和TopoⅡ表达的影响。方法用MTT法检测As2O3的非细胞毒性浓度和SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内药物浓度及用免疫组织化学法检测细胞GSTπ和TopoⅡ的表达。结果与结论0.4~0.8μmol.L-1As2O3对耐药细胞SGC7901/ADR无明显毒性(P<0.01),As2O3可下调GSTπ表达,提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,部分逆转SGC7901/ADR细胞对ADM的耐药性。     

Reversal of P-glycoprotein and multidrug-resistance protein-mediated drug resistance in KB cells by 5-O-benzoylated taxinine K

A newly synthesized taxoid originally from the Japanese yew Taxus cuspidata, 5-O-benzoylated taxinine K (BTK) was examined for its ability to reverse P-glycoprotein (P-gp) and multidrug resistance protein (MRP)-mediated multidrug resistance. BTK reversed the resistance to paclitaxel, doxorubicin (ADM), and vincristine (VCR) of KB-8-5 and KB-C2 cells that overexpress P-gp by directly interacting with P-gp. BTK also moderately reversed the resistance to ADM of KB/MRP cells that overexpress MRP. However, BTK neither inhibited the transporting activity of MRP nor reduced intracellular glutathione levels in KB/MRP cells. BTK shifted the distribution of ADM in KB/MRP cells from punctate cytoplasmic compartments to the nucleoplasm and cytoplasm by inhibiting acidification of cytoplasmic organelles. These two functions of BTK make it able to reverse both P-gp- and MRP-mediated MDR. BTK in combination with ADM should be useful for treating patients with tumors that overexpress both P-gp and MRP.     

Effects of verapamil on the cellular accumulations and toxicity of several antitumor drugs in 9-hydroxy-ellipticine-resistant cells

9-OH-Ellipticine (9-OH-E)-resistant cells are not only resistant to the DNA topoisomerase II inhibitors, but also to some other antitumor agents, such as actinomycin D (AD), adriamycin (ADM), daunorubicin and vincristine. It was previously shown that a decreased uptake accounts for the cross-resistance of these cells to AD and ADM which then suggested that the 9-OH-E-resistant cells might display some of the properties usually associated with the multidrug resistance phenotype. In this work, we have examined the effects of verapamil, a drug which is known to overcome the multidrug resistance, on the toxicity and the cellular accumulation of four cytotoxic agents: 9-OH-E, 2N-methyl-9-hydroxy-ellipticinium (NMHE), AD and ADM, either on 9-OH-E resistant cells or on a multidrug resistant subline derived from the same sensitive parental cells. Verapamil inhibited the cellular accumulation of the ellipticine derivatives in the sensitive DC-3F cells, and the toxicity of these drugs on these cells was correspondingly decreased. On either one of the resistant cell lines, verapamil had no effect on the toxicity and the cellular accumulation of 9-OH-E. In contrast, in the presence of verapamil, the cellular accumulation of NMHE by the 9-OH-E and the multidrug resistant cells was about 50% and 300% increased, respectively. The increased NMHE cellular concentration in the multidrug resistant cells was associated with an 8-fold increased toxicity. The major structural characteristics which might account for this difference between the sensitivities of both ellipticine derivatives to the effects of verapamil on the multidrug resistant cells is the presence of a positive charge on the nitrogen in position 2 of the 6H-pyridocarbazole molecule. Finally, verapamil circumvented partially the cross-resistance of DC-3F/9-OH-E cells to AD and ADM by increasing the accumulation of these drugs inside the cells.     

野木瓜果实总皂苷对BEL-7402/5 FU细胞多药耐药性的逆转作用

目的 研究野木瓜果实总皂苷对人肝癌耐药细胞BEL-7402/5 FU多药耐药(MDR)的逆转作用,并初步探讨其耐药逆转机制.方法 采用MTT法测定5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)和野木瓜果实总皂苷对BEL-7402细胞、BEL-7402/5 FU细胞的毒性及野木瓜果实总皂苷逆转MDR的效果;利用蛋白质印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达情况.结果 BEL-7402/5 FU细胞对5-FU、ADM、MMC的耐药指数分别为21.71,2.73,2.11;野木瓜果实总皂苷能有效抑制BEL-7402/5 FU细胞增殖,无细胞毒性剂量为5,10 μg/mL,逆转耐药倍数分别为1.36、1.93;野木瓜果实总皂苷联合5-FU作用BEL-7402/5 FU细胞,可降低P-gp蛋白表达.结论 野木瓜果实总皂苷能部分逆转BEL-7402/5 FU细胞MDR,其机制可能是通过下调P-gp的表达而实现的.     

黄芪皂苷Ⅱ对人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/FU 的逆转耐药作用

摘要目的：探讨黄芪皂苷II（AstragalosideII,ASⅡ）对肝癌多药耐药性的逆转作用。方法：MTT法检测人肝癌多药耐药细胞BEL-7402／FU对化疗药物的敏感性和逆转耐药倍数,RT-PCR法检测多药耐药蛋白-1（MDRl）基因表达,免疫细胞化学法检测P一糖蛋白（P-gP）蛋白表达水平,流式细胞仪检测AS1I对细胞内Rhodaminel23的蓄积影响。结果：BEL-7402／FU细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）、阿霉素、丝裂霉素的耐药倍数分别为19．64、1．98、1．92。0．04、0．08mg／mL的ASⅡ能增强5-FU对BEL-7402／FU的细胞毒作用,逆转耐药倍数分别为1．49,1．81。0．08、0．16mg／mL的ASⅡ作用BEL-7402／FU细胞24h后,能下调MDRlmRNA和P-gP蛋白表达水平,提高细胞内Rhodaminel23的荧光表达率。结论：ASⅡ能部分逆转肝癌多药耐药性,其机制可能与下调MDRl1TIRNA表达及抑制P-gP的功能与表达有关。     

阿霉素对裸小鼠人肝癌原位移植瘤多药耐药性的影响

目的　探讨阿霉素对裸小鼠原位移植人肝癌多药耐药性的影响 ,并研究其耐药机制。方法　人肝癌 (BEL 740 2 )裸小鼠原位移植 ,用阿霉素腹腔注射诱导耐药 ,经MTT法检测原代培养的耐药细胞对抗癌药的敏感性 ,以流式细胞仪检测癌细胞表面mdr1基因产物P170的表达及功能。以裸小鼠原位移植人肝癌模型观察阿霉素对耐药组的疗效。结果　移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征 ,耐药细胞表面P170表达为 75 45 %± 5 6 7% ,而对照组表达仅 4 2 5 %± 1 2 8% (P <0 0 1) ,对阿霉素的耐药倍数提高了 16 7倍 ,对羟基喜树碱和表阿霉素具有交叉耐受性(13 7倍和 7 5倍 )。耐药细胞表面P170有较强的药物外排功能。诱导后的肝癌在体内对阿霉素获得了明显的抗性。结论　阿霉素较易诱导原位移植于裸小鼠的人肝癌多药耐药性的产生 ,耐药机制主要与P170的过度表达有关     

CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药

目的:探讨氯喹衍生物CQ11对耐长春新碱(vincristine,VCR)人胃癌多药耐药(multidrug resistance,MDR)细胞株SGC7901/VCR的耐药逆转作用。方法:将SGC7901和SGC7901/VCR细胞分别与各种浓度的多柔比星(doxorubicin,DOX)和/或CQ11在体外共同培养,采用MTT法检测其细胞毒作用;采用荧光分光光度计测定细胞内DOX蓄积量。结果:SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的37.5倍。1.0、2.5和5.0 mol/L的CQ11分别使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到2.2倍(P<0.01)、5.5倍(P<0.01)和14倍(P<0.01)。DOX蓄积实验表明,CQ11能显著增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积,而对SGC7901细胞内DOX蓄积无明显影响。结论:通过增加细胞内DOX蓄积量,CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性。     

洛美利嗪逆转K562/ADM细胞多药耐药性

目的研究洛美利嗪(lomerizine,Lom)逆转K562/ADM细胞多药耐药性的作用及机制。方法MTT法检测细胞毒作用,流式细胞仪研究Lom对ADM和长春新碱(vincristine,VCR)的K562/ADM细胞凋亡诱导作用的影响及对罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)外排和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的作用。结果Lom明显提高ADM对K562/ADM多药耐药细胞的细胞毒作用及ADM和VCR的凋亡诱导作用,3,10和30 μmol·L^-1 Lom使K562/ADM对ADM的IC₅₀值由79.03 μmol·L^-1分别降至28.14,8.16和3.16 μmol·L^-1。Lom增加胞内ADM的蓄积浓度并抑制Rh123外排;但作用72 h后对K562/ADM细胞P-gp表达无影响。结论Lom通过抑制P-gp的活性逆转K562/ADM细胞的多药耐药性。     

人肝癌Bel7402/5-FU耐药株多药耐药与凋亡关系的研究

目的　从凋亡的角度探讨人肝癌细胞Bel74 0 2 / 5 FU多药耐药的分子机制。方法　采用SRB法检测Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药性 ,用AnnexinV FITC/PI双标流式细胞术检测Bel74 0 2细胞及其耐药株的凋亡程度 ,PI单染检测细胞周期变化 ,RT PCR方法检测凋亡相关因子bcl 2、bcl xl、bcl xs、bax、fas、p5 3和cpp32的表达情况。 结果　Bel74 0 2 / 5 FU耐药株具有多药耐药性 ;相同剂量 30 μmol·L-1及 15 0 μmol·L-15 FU处理 ,Bel74 0 2细胞凋亡明显增加 ,G0 /G1期增加 ,S期、G2 /GM减少 ,耐药株不出现凋亡增加及细胞周期改变 ;耐药株凋亡相关因子bcl xl、bcl xs和bax表达上调 ,p5 3和cpp32表达下调。 结论　人肝癌Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药性可能和凋亡减少有关 ,抗凋亡因子bcl xl表达上调 ,促凋亡因子 p5 3和cpp32表达下调可能参与Bel74 0 2 / 5 FU耐药株的多药耐药。     

In vivo characterization of P388 leukemia resistant to mitomycin C

A line of P388 leukemia resistant to mitomycin C (MMC) was successfully developed in vivo by treating mice bearing parental P388 (P388/0) with MMC followed by serial passage of the surviving leukemic cells. From this P388/MMC line, a subline was derived by not treating the passage mice with MMC (P388/MMC-NP); resistance to MMC was stable for as many as 56 weeks of transplantation. The chemosensitivities of each P388 line to assorted anticancer drugs were compared in vivo. Both P388/MMC and P388/MMC-NP had similar patterns of drug cross-resistance and collateral sensitivity. With respect to alkylating agents (e.g. cyclophosphamide, Platinol and chlorambucil), there was generally a partial degree of cross-resistance, sometimes only detectable at suboptimal dose levels. With respect to DNA binders or intercalators (e.g. actinomycin D, luzopeptin A, amsacrine, doxorubicin), the extent of cross-resistance varied from none (dihydoxyanthraquinone) to marked (doxorubicin). Antimitotic inhibitors (vinblastine and vincristine) were completely cross-resistant, as were some miscellaneous natural agents (rebeccamycin, VP-16, sesbanimide, and elsamicin, a chartreusin analog). Antimetabolites (e.g. methotrexate and 6-thioguanine) showed no cross-resistance and even demonstrated some occasional evidence of collateral effectiveness.