染料木素对体外培养胎鼠海马神经元细胞活力及其形态的影响

目的:观察染料木素(Genistein,Gen)对正常胎鼠海马神经元细胞培养条件下的活力及其形态影响。方法:取16～18d孕龄SD胎鼠海马组织进行原代培养海马神经元。采用MTT比色法检测0.01μg/ml、0.02μg/ml、0.04μg/ml、0.08μg/ml、0.16μg/ml、0.32μg/ml、0.64μg/ml、1.28μg/ml、2.56μg/ml、5.12μg/mlGen组及空白组对海马神经元分别作用24h、48h、72h的细胞活力及其形态变化。结果:1Gen对海马神经元细胞活力的最佳剂量为0.32μg/ml;Gen在0.01μg/ml、0.02μg/ml、0.04μg/ml、0.08μg/ml、0.16μg/ml、0.32μg/ml呈剂量依赖性增强;而0.64μg/ml、1.28μg/ml、2.56μg/ml、5.12μg/mlGen各组的细胞活性呈剂量依赖性下降。2Gen各剂量度组对海马神经元细胞的最明显促进生长时间是24h;Gen作用48h和72h时细胞活力则呈下降趋势。30.32μg/mlGen干预24h海马神经元细胞的形态最佳;0.01μg/ml、0.02μg/ml、0.04μg/ml、0.08μg/ml、0.16μg/ml、0.32μg/mlGen各组随剂量的增加对海马神经元细胞的生长促进作用明显增强,细胞形态呈轴突树突明显连接成网,胞体折光性好,细胞碎片少;大于0.32μg/mlGen剂量的效应结果则反之,随剂量增大其作用明显呈副效应变化,其细胞形态的轴突树突网状结构不明显,胞体折光性差,且呈崩解趋势,细胞碎片明显增。结论:Gen对体外培养胎鼠海马神经元细胞生长活力作用的最佳剂量为0.32μg/ml,最佳效应时间是24h。     

细菌基序对黑素细胞及前列腺素E2的影响

目的：研究细菌基序（CpG-ODN）对黑素细胞形态、黑素生成及前列腺素E2（PGE2）的影响。方法：用CpG-ODN处理体外培养的B16黑素瘤细胞和melan-α黑素细胞,分别用MTT法、多巴氧化法、NaOH裂解法和ELISA法检测B16细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量以及上清中PGE2的水平,另外,观察CpG-ODN干预后melan-α细胞形态的变化。结果：干预24h后,5μg/mlCpG-ODN促进B16细胞增殖,10μg/ml对细胞增殖的影响与空白对照组无差异,而15μg/mlCpG-ODN则抑制细胞增殖。48h后,不同浓度CpG-ODN组的细胞增殖率趋于稳定,与正常对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。10μg/mlCpG-ODN提高酪氨酸酶活性和黑素生成,作用近似于α-MSH（P〉0.05）。另外,此浓度CpG-ODN作用48h后的细胞上清液中PGE2含量也有所升高,但与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）,推测为检测时间滞后所致。10μg/mlCpG-ODN作用于melan-α细胞24h后,细胞树突数目增加,并有二级以致三级树突出现。结论：CpG-ODN作用于鼠黑素细胞的适宜浓度为10μg/ml,此浓度对黑素细胞的作用有时间依赖性。该实验为CpG-ODN作用于正常人黑素细胞的研究奠定了基础。     

阿糖胞苷对新生Wistar大鼠海马神经细胞体外培养的影响

目的探讨阿糖胞苷对新生大鼠海马神经细胞培养的影响作用。方法利用高糖DMEM常规培养神经细胞，在不同的培养时间(0d，1d，3d，5d，7d)分别加入一定量(0．8μg/ml)的阿糖胞苷以及在培养一定时间(5d)时加入不同剂量的阿糖胞苷(0μg/ml，0．4μg/ml，0．8μg/ml，1．6μg/ml，3．21μg/ml)。结果一定浓度的阿糖胞苷对神经细胞生长有促进作用，对胶质细胞的生长有抑制作用。结论阿糖胞苷对神经细胞的抑制表现出时间依赖性和剂量依赖性，在诱导剂量下，可诱导神经细胞的分化增殖。     

灵芝多糖对小鼠黑素瘤B16F10细胞分泌VEGF的抑制作用

目的:探讨灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:用不同浓度的灵芝多糖处理B16F10黑素瘤细胞,以正常培养基代替灵芝多糖培养B16T10黑素瘤细胞为对照.分别采用Westem blot法和RT-PCR法检测灵芝多糖作用48h后B16F10黑素瘤细胞VEGF蛋白和mRNA表达的变化.结果:浓度为0.8μg/ml、3.2μ g/ml、12.8μg/ml的灵芝多糖处理B16F10细胞后,B16F10细胞VEGF蛋白和mRNA的表达水平均明显降低(P＜0.05).结论:灵芝多糖可能通过抑制B16F10黑素瘤细胞分泌EGF起到抑制肿瘤的作用.     

二十二碳六烯酸对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长的抑制作用

目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞增殖的影响。方法采用体外细胞培养的方法,在处于指数生长期的GBC-SD细胞培养剂RPMI 1640中分别添加12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的DHA,培养24～72小时后,采用噻唑蓝法（MTT法）检测GBC-SD细胞的增殖情况,光镜下观察细胞形态变化。采用DNA琼脂糖凝胶电泳、Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜检测GBC-SD细胞的凋亡情况。结果经12.5μg/ml的DHA作用24～72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别无统计学意义（P〉0.05）,光镜下细胞形态无明显改变.经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24～72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别有统计学意义（P〈0.05）,光镜下见细胞皱缩、核染色质凝聚、边集。细胞经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24小时后,DNA琼脂糖凝胶电泳显示DNA裂解片段出现阶梯状条带,经Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜下观察与对照组比较见较多绿色荧光。结论DHA可以抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系的增殖并诱导其凋亡。     

里拉京通过下调NOTCH1信号通路抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖的实验研究

【摘要】目的 探讨柯里拉京能否通过下调NOTCH1信号通路抑制胃癌SGC 7901细胞的增殖, 以及对Hes1表达的影响。方法〓使用不同浓度的柯里拉京(0μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)对胃癌SGC 7901细胞进行干预。在不同时间点(0、24和48h)使用MTT法对SGC 7901细胞活性进行检测。干预48h后, 使用qPCR和western blot对在不同浓度(0μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)柯里拉京干预后,细胞NOTCH1、Hes1 mRNA和蛋白的表达水平进行分析。结果〓使用不同浓度柯里拉京(0μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)对胃癌SGC 7901细胞进行干预后, 细胞活性呈时间依赖性和剂量依赖性下降, 差异均有统计学意义(P＜005)。不同浓度柯里拉京(0μg/ml、10μg/ml和100μg/ml)干预48 h后, 胃癌SGC 7901细胞NOTCH1及Hes1 mRNA和蛋白的表达水平呈剂量依赖性降低, 差异均有统计学意义(P＜005)。结论〓柯里拉京可通过下调NOTCH1/Hes1信号通路抑制胃癌SGC 7901细胞增殖, 同时为柯里拉京用于临床治疗胃癌等恶性肿瘤奠定了实验基础。
     

维生素K_3对人癌细胞的抑制作用

不同剂量的维生素K_3(5、10和20μg/ml)对体外人直肠癌细胞系(HR-8348)及早幼粒细胞白血病细胞株(HL-60)均显示明显抑制作用,且有剂量依赖性.随着维生素K_3与HL-60细胞接触时间的延长,抑制作用亦增强,维生素K_320μg/ml与细胞接触48h作用已近高峰.当5-氟尿嘧啶10μg/ml和维生素K_35μg/ml同时加入体外培养的HR-8348细胞后48h,未显示相加作用.     

10-HCPT对人肝癌细胞QGY和HepG2生长增殖的抑制作用

目的:探讨10-HCPT对人肝癌细胞QGY和HepG2生长增殖的影响.方法:分别用不同浓度10-HCPT作用QGY和HepG2细胞48h和相同浓度作用不同时间,以MTT法检测细胞生长指数(GI),软琼脂克隆形成试验检测细胞克隆形成率.结果:10～360μg/ml和30～360μg/ml 10-HCPT分别作用QGY和HepG2细胞48h后,均有显著性生长抑制作用(P＜0.05),且呈量效依赖关系.100μg/ml 10-HCPT作用24h、36、48和72h对两种细胞均具有显著性抑制作用(P＜0.05).实验组两种细胞克隆形成率较对照组均显著降低(P＜0.05).结论:10-HCPT对人肝癌细胞QGY和HepG2体外生长增殖均具有抑制作用.     

金雀异黄素联合顺铂对SK-OV-3人卵巢腺癌细胞生物学行为影响的研究

目的 观察金雀异黄素联合顺铂对SK-OV-3人卵巢腺癌细胞生物学行为的影响,探讨其可能的作用机制.方法 培养SK-OV-3人卵巢腺癌细胞,分别给予金雀异黄素(20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L、200μmol/L)、顺铂(1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16...     

亚甲蓝对体外培养C6细胞凋亡的实验研究

目的研究亚甲蓝(MB)对体外培养C6胶质瘤细胞的促凋亡作用及其对Caspase3mRNA水平的影响。初步探讨MB抗胶质瘤的作用机制,并为MB作为肿瘤的辅助治疗提供理论和实验依据。方法以0.1μg/ml MB处理0、6、12、24小时的C6细胞;以0μg/ml、0.05μg/ml、0.1μg/ml、0.15μg/ml MB处理24小时的C6细胞,通过流式细胞仪检测C6细胞的凋亡率;通过RT-PCR进行凋亡相关基因Caspase-3mRNA水平的检测。结果经流式细胞术检测,0.1μg/ml MB作用24小时后细胞大部分集中在G0/G1期,出现典型的凋亡峰。以同一浓度(0.1μg/ml)MB处理不同时间的C6细胞;以不同浓度MB处理同一时间(24小时)的C6细胞,经RT-PCR证实Caspase-3mRNA随MB作用时间延长和浓度增高而升高,各组间均有显著差异(P<0.01)。结论MB对C6细胞具有诱导凋亡的作用,此过程中伴有Caspase-3的升高,且Caspase-3的升高与MB作用时间的延长和作用浓度的增高相一致。提示MB可能通过Caspase-3途径诱导细胞凋亡,且MB的抗胶质瘤作用有明显的时间和浓度依赖性。     

积雪草甙、羟基积雪草甙对体外培养人胚胎成纤维细胞的影响

目的研究积雪草甙（asiaticoside,Ad）和羟基积雪草甙（madecassoside,Md）对体外培养人胚胎成纤维细胞（Human embryonic skin fibroblasts,HESFb）增殖过程的影响。方法在不同浓度（0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml）Ad和Md的环境下对人胚胎细胞进行体外培养,用CCK-8试剂盒通过酶标仪检测不同培养时间（0、1、2、3、4、5d）HESFb的OD值,用SPSS13.0统计软件进行统计分析。结果在实验时间内Ad和Md在10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml浓度时均对人胚胎成纤维细胞的增殖有促进作用,200μg/ml浓度时最明显,且Ad比Md作用强。两组在400μg/ml浓度时均有抑制作用。结论在一定浓度和培养时间内一定剂量的Ad和Md对体外培养的HESFb增殖有促进作用,同剂量相比Ad比Md明显。而较高剂量的时候均可出现抑制作用。     

微量元素硒对HL—60细胞凋亡的诱导及bcl—2／bax基因的表达调控

目的：研究微量元素硒诱导人类白血病细胞凋亡的作用及其相关的基因调控。方法：体外培养人急性早幼粒白血病细胞（HL－60）,加入硒使其终浓度分别为0、0．1μg/ml、1μg/ml、2μg/ml,作用48h后收集细胞,分别作形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度计分析、TUNEL及bcl-2/bax基因蛋白表达的细胞化学检测。结果：上述多项指标的分析结果均证明元素硒能诱导癌细胞凋亡。通过流式细胞光度计检测到对照组、0．1μg/ml、1μg/ml、2μg/ml加硒组的凋亡百分率分别为4．43％、8．36％、37．91％、63．47％。这说明浓度为0．1μg/ml的硒没有明显的诱导癌细胞凋亡的作用,而浓度为1μg/ml、2μg/ml时凋亡细胞显著增多并呈剂量依赖关系。随着凋亡细胞的增多,bcl-2基因表达相应减弱,而bax基因表达相应增强。结论：微量元素硒可诱导HL－60细胞凋亡,并且呈剂量依赖关系,凋亡的发生受bcl-2/bax基因调控。     

氯化锌对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的探讨氧化锌对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法采用细胞体外培养的方法,观察卵母细胞在分别含有低、中、高浓度(0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)氯化锌的M199培养液中体外成熟率和减数分裂的变化情况。结果1μg/mlZnCl2组GVBD发生率在4、8h明显高于对照组(P<0.01),16、24h高于对照组(P<0.05);而10μg/mlZnCl2组GVBD发生率在各时间点均明显低于对照组(P<0.01)。8h后,1μg/mlZnCl2组PB1排出率明显高于对照组(P<0.05),而10μg/mlZnCl2组PB1排出率明显低于对照组(P<0.05)。结论锌对体外小鼠卵母细胞成熟和减数分裂有重要的影响。     

人参皂甙Rb2对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的：研究人参皂甙Rb2(Ginsenoside-Rb2)对体外培养视网膜色素上皮细胞增生的直接抑制作用及可能机制。方法：通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度（250、200、120、100、50、10μg/ml）Rb2t Rb2 150μg/ml在不同作用时间（6－120h)对RPE细胞增生及代谢的影响。结果：Rb2组细胞增殖受到抑制并出现细胞脱落，Rb2 200μg/ml具有最强的抑制效应，其明显抑制效应在6h即出现，96h达高峰。Rb2组A值明显低于对照组，RPE细胞生存率下降。结论：Rb2可能通过阻滞钙通道降低细胞内钙浓度、干扰RPE细胞代谢对RPE细胞增殖具有剂量依赖和时间依赖方式的抑制作用。     

黄芪注射液对日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶活性作用的研究

目的：观察黄芪注射液作用后日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶活性的变化。方法：细胞接种后1周时，分别用浓度为2μg/ml、5μg/ml和8μg/ml的黄芪注射液处理24小时，然后用RPMI－1640加10％小牛血清的培养基培养。用分光光度法测定细胞鸟氨酸脱羧酶活性。结果：浓度为2μg/ml的黄芪注射液处理后第4周时细胞鸟氨酸脱羧酶活性显著增高。结论：黄芪注射液有增强日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶活性的作用。     

PHA诱导猪淋巴结细胞与脾细胞IL-2的产生

作者用人乙型肝炎疫苗免疫的猪淋巴结细胞与脾细胞在植物血凝素(PHA)的诱导下,观察白细胞介素Ⅱ(IL-2)的产生情况.实验采用50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml的PHA剂量,24,40,48或72 h的培养时间.结果表明,淋巴结细胞PHA用量以200μg/ml,脾脏细胞以100μg/ml为佳,培养时间均以40 h为宜.同样条件下,淋巴结细胞较脾细胞产量高,与人外周血白细胞IL-2的产生相比较,产量相近。而其作用有待进一步研究.     

TRAIL联合顺铂体外杀伤前列腺癌PC-3细胞株的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合化疗药物顺铂(DDP)对前列腺癌PC-3细胞株的体外杀伤作用. 方法 分别采用不同浓度的DDP(1.0μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml、20.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml)与TRAIL(10.0ng/ml、20.0ng/ml、50.0ng/ml、100.0ng/ml、200.0ng/ml)作用PC-3细胞株,24h后MTT法检测细胞的吸光度;DDP(5.0ng/m1)与TRAIL(50.0ng/ml)联合作用PC-3细胞4h、8h、12h、16h、20h、24h后,MTT法检测检测细胞的吸光度;并按细胞的抑制率(100%)=(1-实验组吸光度/阳性对照组吸光度)×100%计算DDP组、TRAIL组及两者联合应用对细胞的抑制率,比较组间细胞抑制率的差异. 结果 单独应用DDP或者TRAIL对PC-3细胞体外杀伤作用有浓度依赖性,浓度增高一定程度时对PC-3细胞的抑制作用会处于一个相对平台期;联合应用DDP+TRAIL组与单独应用同浓度的DDP及TRAIL组相比,其对PC-3细胞的体外杀伤作用明显增强,P<0.05,差异具有显著性意义;联合应用DDP与TRAIL对PC-3细胞的体外杀伤作用具有明显的时间依赖性. 结论 DDP能明显提高TRAIL对前列腺痛PC-3细胞株的杀伤作用,其机制与死亡受体DR5的表达上调有关.     

淋病奈瑟菌药物敏感性测定及头孢曲松耐药株的建立

目的应用琼脂糖稀释法测定奈瑟淋球菌（NG）药物敏感性,并建立体外NG头孢曲松耐药株。方法配置含有不同浓度的四环素、环丙沙星、壮观霉素、头孢曲松培养基并接种一定量的NG菌悬液,培养24h后观察药敏试验结果。采用头孢曲松次抑菌浓度对NG敏感株体外反复诱导。结果 NG诱导前四环素、环丙沙星、壮观霉素、头孢曲松最小抑菌浓度（MIC）值分别为16μg/ml、16μg/ml、16μg/ml、0.016μg/ml。经过连续120次诱导传代,NG对四环素、环丙沙星、壮观霉素、头孢曲松MIC值分别为32μg/ml、16μg/ml、16μg/ml、1.00μg/ml,耐药子代经过30d的无药传代后,MIC值无明显变化。结论琼脂糖稀释法是测定奈NG药物敏感性的有效、实用的方法 ;通过体外人工诱导可获得稳定性好的NG耐头孢曲松株。     

丙泊酚对人肾母细胞瘤细胞活性、凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨丙泊酚对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞活性和凋亡的影响及相关作用机制.方法 将SK-NEP-1细胞随机分为对照组C1(丙泊酚0μg/ml)、空白组、P1组(丙泊酚5μg/ml)、P2组(丙泊酚10μg/ml)、P3组(丙泊酚20μg/ml).采用CCK-8法检测不同浓度丙泊酚在不同时间点对肾母细胞瘤细胞活性的...     

柴胡皂甙d(SSd)对K562细胞凋亡及基因表达影响的研究

目的 :观察从柴胡中提取的单体成分柴胡皂甙d诱导白血病细胞株K562细胞凋亡及对其基因表达的影响。方法 :分别用 5μg/ml、7.5μg/ml、1 0 μg/ml浓度的SSd作用于K562细胞株 ,于药物作用后不同时间段 (1 2 ,2 4 ,36 ,48,60h) ,荧光染色法观察基凋亡状况、间接免疫荧光法测Bcl- 2表达情况。结果 :荧光染色结果显示 :K562在 1 0 μg/ml处理 2 4h后 ,开始出现凋亡小体 ,48h后出现大量死细胞。间接免疫荧光法测Bcl- 2表达 ;经SSd作用后K562细胞Bcl- 2基因表达下降