雷公藤内酯醇干预高糖诱导足细胞转分化作用机制的研究

目的 观察不同浓度雷公藤内酯醇（TP）体外干预高糖环境下小鼠足细胞上皮细胞向间充质细胞转分化（EMT）及TGF-β/Smad信号通路的调节作用,探讨其保护足细胞损伤的可能机制。方法 将培养成熟的小鼠足细胞随机分为25mmol/L葡萄糖培养液干预组（高糖组）,5mmol/L葡萄糖培养液干预组（对照组）和在25mmol/L葡萄糖培养液中分别加入浓度为8、16、32ng/ml的TP干预组（低、中、高TP组）。体外培养48h后,倒置显微镜下观察足细胞形态变化,采用RT-PCR和Western-blot技术分别检测各组足细胞NEPH1、desmin、TGF-β1和Smad7的mRNA和蛋白表达变化。结果高糖组和高、中、低TP组的小鼠足细胞NEPH1和Smad7mRNA和蛋白的表达水平均较对照组低,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均较对照组高,差异有统计学意义（P＜0.05或0.01）。高、中、低TP组足细胞NEPH1和Smad7的mRNA和蛋白的表达水平均高于高糖组,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均低于高糖组,差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）;中TP组NEPH1和Smad7的mRNA和蛋白的表达水平均高于低TP组和高TP组,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均低于低TP组和高TP组（均P＜0.01）。结论TP可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路缓解高糖诱导的足细胞转分化。     

雷公藤内酯醇对足细胞EMT相关蛋白mRNA表达的影响

目的通过观察雷公藤内酯醇(TP)对高糖刺激下ILK、MMP9、NEPH1蛋白表达的影响,探讨TP抑制足细胞上皮-间充质转分化(EMT)治疗糖尿病肾病的可能机制。方法将培养分化成熟的足细胞分为对照组(D-葡萄糖5 mmol/L)、高糖组(D-葡萄糖25 mmol/L)、低TP组(25 mmol/L D-葡萄糖+8 ng/m L TP)、中TP组(25 mmol/L D-葡萄糖+16 ng/m L TP)以及高TP组(25 mmol/L D-葡萄糖+32 ng/m L TP)。体外培养48 h后,倒置显微镜观察细胞形态,并采用PCR半定量分析技术检测ILK、MMP9、NEPH1的表达。结果高糖刺激下足细胞NEPH1的表达较对照组显著减少(P0.01),而ILK、MMP9的m RNA表达较对照组显著升高(P0.01)。各剂量TP组足细胞NEPH1 m RNA的表达均较高糖组明显上调(P0.01),ILK、MMP9 m RNA的表达较高糖组明显下降(P0.01),其中以中TP组的干预作用最显著(P0.01)。结论 TP可能通过抑制ILK信号通路来抑制足细胞EMT。     

缬沙坦抑制高糖环境下足细胞损伤的机制探究

目的通过观察缬沙坦对高糖环境下足细胞EMT过程中ILK、MMP9、NEPH1 mRNA表达的影响,探讨缬沙坦保护受高糖损伤足细胞的可能机制。方法将培养分化成熟的足细胞随机分为5 mmol/L葡萄糖培养组(对照组)和25 mmol/L葡萄糖培养组(高糖组),在25 mmol/L葡萄糖培养液中分别加入2×10~(-7)mol/L(低Val组)、2×10~(-6)mol/L(中Val组)和2×10~(-5) mol/L(高Val组)缬沙坦。体外培养48 h后,倒置显微镜观察细胞形态,并采用PCR半定量分析技术检测ILK、MMP9、NEPH1的表达。结果高糖组细胞NEPH1的表达较对照组显著减少(P0.01)。而各剂量缬沙坦干预组NEPH1的表达与高糖组相比均显著升高。与对照组比较,高糖组足细胞ILK和MMP9的表达显著升高,而各剂量缬沙坦干预组足细胞ILK和MMP9的表达对比高糖组均明显减少(P0.01),其中以高Val组的干预作用最显著(P0.01),高Val组ILK和MMP9的表达与对照组无明显差异(P0.05)。结论缬沙坦可能通过抑制ILK通路保护高糖环境下受损的足细胞。     

雷公藤甲素对高糖刺激足细胞synaptopodin和desmin表达影响

目的通过观察高糖刺激对小鼠足细胞synaptopodin和desmin表达影响及雷公藤甲素(TP)对其干预作用,探讨TP减少糖尿病肾病尿蛋白的分子机制。方法以体外培养小鼠永生化足细胞为研究对象,将其分为正常糖组、高糖刺激组、甘露醇对照组、低剂量TP干预组和高剂量TP干预组5组,分别加含有5.5mmol/L的D-葡萄糖、含有30.0mmol/L的D-葡萄糖、含有5.5mmol/L的D-葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇、含有30.0mmol/L的D-葡萄糖+3μg/L的TP、含有30.0 mmol/L的D-葡萄糖+10μg/L的TP培养液培养48h。应用荧光定量PCR法和Western Blot方法检测各组足细胞synaptopodin、desmin mRNA和蛋白的表达。结果与正常糖组相比,高糖刺激组足细胞synaptopodin mRNA和蛋白的表达增加,desmin mRNA和蛋白的表达减少;低剂量TP干预和高剂量TP干预组synaptopodin mRNA和蛋白表达水平均较高糖刺激组升高,而desmin mRNA和蛋白表达水平较高糖刺激组降低,且呈一定的剂量-效应关系,差异有显著性(F=25.919~551.012,P<0.05)。结论 TP可以改善高糖诱导的足细胞synaptopodin和desmin表达异常,这可能是TP减少糖尿病肾病尿蛋白的机制之一。     

高糖对小鼠足细胞(原)肾素受体表达的影响

目的 体外观察高糖刺激肾小球足细胞后(原)肾素受体(prorenin receptor,PRR)的表达变化,及PRR对足细胞凋亡的影响.方法 条件永生性小鼠足细胞用35mmol/L高糖刺激不同时间(0、1、3、6、12h),用不同浓度葡萄糖[35mmol/L甘露醇对照组、正常对照组(含5mmol/L葡萄糖)、10、20、35mmol/L组]刺激3h,Western blot及real-time PCR技术检测PRR的蛋白和mRNA表达;再将细胞分为35mmol/L高糖组、PRR的多肽阻断剂柄区肽(handle region peptide,HRP)(10-6mol/L)预处理组、氯沙坦(10-6mol/L)预处理组、HRP+氯沙坦预处理组,流式细胞仪法检测足细胞凋亡率.结果 (1)35mmol/L高糖刺激3、6、12h细胞PRR蛋白及mRNA表达较正常对照细胞显著上调(P＜0.05).(2)20mmol/L与35mmol/L浓度葡萄糖刺激足细胞PRR蛋白及mRNA表达较正常对照和甘露醇刺激细胞显著升高(P＜0.05).(3)氯沙坦、HRP及HRP+氯沙坦预处理细胞凋亡率较35mmol/L高糖刺激细胞显著降低(P＜0.05),HRP+氯沙坦预处理细胞凋亡率较氯沙坦预处理细胞降低(P＜0.05).结论 高糖刺激足细胞可通过上调PRR导致足细胞凋亡.     

PFT-α对高糖诱导的肾小球足细胞泛素化通路和细胞凋亡的影响

目的:观察p53抑制剂(Pifithrin-alpha,PFT-α)对高糖刺激后肾小球足细胞泛素化通路和细胞凋亡的影响.方法:体外培养小鼠肾小球足细胞,分为对照组、高糖组(30mmo1/L葡萄糖)、甘露醇组(30mmol/L葡萄糖+25mmoI/L甘露醇)、PFT-α 组(30mmol/L葡萄糖+10μmol/LPFT...     

法舒地尔对高糖培养肾小管上皮细胞增殖和纤维化的影响

目的：探讨法舒地尔（Fasudil）对高糖培养的肾小管上皮细胞（HK-2）增殖和纤维化的影响。方法：将HK-2细胞分为正常对照组（NG组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L）、高张组（HM组,葡萄糖浓度5.5 mmol/L＋甘露醇54.5 mmol/L）、高糖组（HG组,葡萄糖浓度60 mmol/L）、高糖＋小剂量法舒地尔干预组[FA（5）组,D-葡萄糖60 mmol/L＋法舒地尔5μmol/L]、高糖＋中剂量法舒地尔干预组[FA（10）组,D-葡萄糖60 mmol/L＋法舒地尔10μmol/L];6高糖＋大剂量法舒地尔干预组[FA（20）组,D-葡萄糖60 mmol/L＋法舒地尔20μmol/L]。四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定HK-2细胞增殖;免疫共沉淀法检测p-MYPT1-Thr853;Western印迹法检测结缔组织生长因子（CTGF）的表达;ELISA法检测细胞培养上清液转化生长因子β1（TGF-β1）和纤维连接蛋白（Fn）的含量。结果：与NG组比,HG组HK-2细胞出现增殖增加,p-MYPT1-Thr853、TGF-β1、CTGF和Fn的表达增加。与HG组比,FA（5）组、FA（10）组、FA（20）组均抑制了HK-2细胞的过度增殖,p-MYPT1-Thr853、TGF-β1、CTGF和Fn的表达均减少。结论：法舒地尔可能通过抑制Rho激酶活性抑制高糖培养的肾小管上皮细胞增殖和纤维化。     

白细胞介素-10对肾小管上皮细胞转分化的影响

目的研究白细胞介素-10（interleukin-10,IL-10）对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2细胞）转分化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）的影响。方法将培养的HK-2细胞通过完全随机设计分为5组：①对照组：5．5mmol／L的D-葡萄糖组;②高糖组：30mmol／L的D-葡萄糖组;③30mmol／L的D-葡萄糖＋1ng／ml IL-10组;④30mmol／L的D-葡萄糖＋5ng／ml IL-10组;⑤30mmol/L的D-葡萄糖＋25ng／ml IL-10组。培养48h后,RT-PCR法检测各组细胞CTGF mRNA的表达;免疫细胞化学法和Western blot法检测各组细胞α-SMA的表达;ELISA法检测各组细胞FN的分泌。结果在高糖中加入1、5、25ng／ml的IL-10作用后,与高糖组相比HK-2细胞CTGF、α-SMA和FN表达减少,且均有统计学差异（P〈0．05）。结论IL—10可以抑制高糖环境下的。肾小管EMT。     

高糖对小鼠足细胞TRPC6表达的影响

【摘要】 目的 研究高糖对小鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）表达的影响。方法 体外培养条件永生化小鼠足细胞，分为高渗对照组(甘露醇30mmol/L+葡萄糖5mmol/L)，正常对照组(葡萄糖5mmol/L)、实验组(葡萄糖浓度分别为15mmol/L、25mmol/L和35mmol/L)；高糖(葡萄糖25mmol/L)刺激足细胞，以刺激后0、12、24、48 h为时间观察点，光镜下观察足细胞形态变化，免疫细胞化学检测小鼠足细胞TRPC6表达及分布，RT PCR和Western Blot分别检测小鼠足细胞TRPC6 mRNA和蛋白的表达。结果 随着葡萄糖浓度的增加，光镜下足细胞胞体明显缩小，足突明显减少或消失，免疫细胞化学检测可见TRPC6主要表达于足细胞胞膜，沿足突分布明显增多，RT PCR和WB检测到TRPC6表达逐渐增加，以25mmol/L变化最明显。糖刺激足细胞后，与0h相比，随着刺激时间的延长，足细胞TRPC6蛋白和mRNA表达量明显增加（P＜005），在48h达到高峰，呈一定的时间依赖性。结论 高糖可导致足细胞形态学明显改变，引起细胞损伤，随着葡萄糖浓度增加和时间延长，均可导致足细胞TRPC6表达增加，呈一定的剂量依赖性和时间依赖性。     

特立帕肽通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控高糖微环境下的成骨细胞分化

目的 探讨特立帕肽对高糖微环境下小鼠胚胎成骨细胞（MC3T3-E1）分化的影响及作用机制。方法 将MC3T3-E1细胞分为正常糖组（NG,5.5 mmol/L葡萄糖）、NG+特立帕肽组（5.5 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽）、高糖组（HG,25 mmol/L葡萄糖）、HG+特立帕肽组（25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽）和HG+特立帕肽+PKA抑制剂组（25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽+20μmol/L H-89）。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA实验检测各组cAMP水平;试剂盒检测碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;鬼笔环肽染色后观察细胞骨架;Real-time PCR检测细胞中PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达水平。结果 各组细胞增殖能力差异无统计学意义（P>0.05）。与NG组相比,NG+特立帕肽组细胞cAMP水平升高（P<0.05）,ALP活性增强（P<0.05）,茜素红矿化结节生成能力增强（P<0.05）,细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、R...     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。