加味当归补血汤对TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞JNK1信号转导通路的调控作用

目的：观察加味当归补血汤对转化生长因子β_1(TGFβ_1)刺激的小鼠肾小管上皮细胞丝裂原活化蛋白激酶信号C-Jun N端激酶1(JNK_1)的影响,探讨该方防治肾间质纤雏化的部分细胞生物学机制。方法：取原代培养的BALB/C小鼠肾小管上皮细胞,用TGβ_1刺激24小时,不同剂量组加味当归补血汤(中药)及洛汀新含药血清干预。观察各组细胞形态学变化,PT-PCR、Westem-Blotting技术检测细胞JNK_1 mRNA的和蛋白质表达情况。结果：①TGFβ_1刺激后,肾小管上皮细胞部分形态发生变大,伸长,呈梭形,经中药和洛汀新血清干预后,细胞形态又恢复为正常的鹅卵石样形态特征,②模型组肾小管上皮细胞JNK_1 mRNA和蛋白表达水平显著上调,各浓度中药能显著下调细胞JNK_1基因和蛋白表述(P＜0．01～0．05),洛汀新仅能显著下调JNK_1蛋白水平,对JNK_1 mRNA下调不显著。结论：加味当归补血汤防治肾间质纤维化可能与调控肾小管上皮细胞TGFβ1—JNK_1信号转导途径相关。     

复肾颗粒对人肾小管上皮细胞TAK1表达的影响及其机制探讨

目的:探讨复肾颗粒对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响及其可能机制.方法:体外培养HK-2细胞,分为对照组,TGF-β1诱导组(5μg· L-1)、干预1组(TGF-β1 5μg· L-1+复肾颗粒100 μg·L-1)、干预2组(TGF-β1 5μg,L-1+复肾颗粒500 μg·L-1)、干预3组(TGF-β15μg· L-1+复肾颗粒1g·L-1).培养12,24,48 h以MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)含量,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的相对含量,Western印迹法检测TAK1蛋白表达.结果:①TGF-β1组细胞的增殖及Col Ⅳ的表达显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),复肾颗粒干预后细胞增殖和Col Ⅳ的表达显著低于TCF-β1组(P＜0.05,P＜0.01).②TGF-β1诱导12 h细胞TAK1表达开始上调,且各时间点表达量均高于对照组(P＜0.01),复肾颗粒干预后,与同时间点TGF-β1组比较显著下调(P＜0.01),尤以干预3组为甚.结论:在体外,复肾颗粒对TGF-β1诱导HK-2细胞增殖过程中TAK1蛋白及mRNA的表达有下调作用,其可能是通过激活肾小管上皮细胞某些抑制因子抑制TAK1转录和表达.     

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素的干预研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化中的作用及大黄素的干预效应。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)分为对照组、IL-1β诱导组、IL-1β+SB 203580组和IL-1β+大黄素组。培养48 h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、角蛋白(CK)、p38MAPK及磷酸化-p38MAPK(p-p38MAPK)的表达情况。结果IL-1β可诱导部分NRK52E由卵圆形转变为梭形,同时CK表达减弱,α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达增强。SB 203580阻断p38MAPK通路后可显著抑制IL-1β诱导的细胞形态改变,同时上调CK表达,下调α-SMA及p-p38MAPK的表达。大黄素对IL-1β诱导的细胞形态改变及α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达也有明显抑制作用,其抑制作用与SB 203580的阻断作用相比无显著性差异。结论p38MAPK参与介导IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化过程,大黄素可通过干扰p38MAPK信号通路抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

复肾颗粒对人肾小管上皮细胞TAK1表达的影响

目的:探讨复肾颗粒(生黄芪、丹参、川芎、大黄和鳖甲)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖时转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响.方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为对照组、TGF-β1诱导组(5ng/mL)、干预1组(TGF-β1 5ng/mL+复.肾颗粒100 μg/mL)、干预2组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒500 μg/mL)、干预3组(TGF-β1 5 ng/mL+复肾颗粒1 mg/mL).培养12、24、48h以MTT法检测细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清IV型胶原蛋白(Col IV)含量,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的相对含量,Western-bloting法检测TAK1蛋白表达.结果:TGF-β1组细胞的增殖及Col IV含量、TAK1蛋白及mRNA的表达显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),复肾颗粒含药血清干预后细胞增殖和Col IV的含量、TAK1表达显著低于TGF-β1组(P<0.05,P<0.01).结论:在体外试验中,复肾颗粒含药血清对TGF-β1诱导HK-2细胞增殖过程中TAK1蛋白及mRNA的表达有下调作用,其可能是通过激活肾小管上皮细胞某些抑制因子抑制TAK1转录和表达.     

青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及基质金属蛋白酶-3表达的影响

目的观察青藤碱对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖以及基质金属蛋白酶-3（MMP-3）mRNA含量的影响。方法培养人成纤维样滑膜细胞，分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组，经青藤碱干预后，用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞增殖情况，用半定量RT-PCR方法检测成纤维细胞中MMP-3mRNA的表达。结果经青藤碱干预后的人成纤维样滑膜细胞的增殖率受到显著抑制（P〈0．05），其中高剂量组的改变差异尤为显著（P〈0．01）。MMP-3的mRNA表达水平较之空白对照组有显著下降（P〈0．05），且高剂量纽的差异尤为显著（P〈0．01）。结论青藤碱可以抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞的增殖并下调MMP-3的表达，推断这可能是青藤碱治疗类风湿关节炎的一种机理。     

养阴润目丸对干眼症大鼠结膜上皮细胞IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK的影响

目的:探讨养阴润目丸对干眼症大鼠结膜上皮细胞白介素-1β(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p-p38MAPK)的影响。方法:将健康雄性SD大鼠60只随机分成正常组、假手术组、养阴润目丸组、新泪然组、模型组,分别用A、B、C、D、E组表示,每组12只。A组不作处理;B组只切开阴囊,不切除睾丸;C、D、E 3组切除睾丸及附睾制备干眼症大鼠模型。造模成功7d后,各组分别给药治疗。采用Western blot方法观察给药3个月后干眼症大鼠结膜上皮细胞IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK的表达。结果:A、B组结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、pp38MAPK蛋白含量低,即无阳性表达,而C、D、E组结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK蛋白含量较多,呈阳性表达;C、D组结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK蛋白含量明显低于E组(P0.01);C、D组两组间差异不显著(P0.05)。结论:养阴润目丸能够下调干眼症大鼠结膜上皮细胞中IL-1β、ICAM-1、p-p38MAPK蛋白含量;干眼症的发病机制与炎症及p38MAPK信号通路相关。     

青藤碱对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用

目的:研究青藤碱对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法:以不同浓度青藤碱处理体外培养的A549细胞,采用MTT法检测24h、48h、72h后HepG2细胞的增殖状态;流式细胞仪测定青藤碱处理过的细胞凋亡、细胞周期分布及凋亡率,相对定量RT-PCR测定Cox-2mRNA的表达、Western blot检测细胞凋亡相关基因Cox-2的表达。结果:青藤碱能显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖,并具有时间和剂量依赖性。青藤碱处理组细胞早期凋亡率较对照组升高,呈时间剂量依赖性。相对RT-PCR结果显示其能下调HepG2细胞Cox-2mRNA的表达。Western blot检测Cox-2蛋白表达明显抑制。结论:青藤碱在体外能有效抑制肝癌细胞增殖。     

复方积雪草含药血清对肾小管上皮细胞Activin A和TGF-β1 mRNA表达的调节作用

目的：探讨复方积雪草对炎症因子刺激下肾小管上皮细胞生物活性改变的干预作用。方法：实验用IL-β1刺激肾小管上皮细胞，用不同剂量复方积雪草含药血清进行干预。用福辛普利（血管紧张素转换酶拮抗剂）含药血清作为对照。TGF-β1、ActivinA和ActivinA受体ActR Ⅰ等基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）方法。结果：IL-1β诱导可使肾小管上皮细胞TGF-β1和ActivinA的基因表达较正常对照细胞显著增高。各浓度复方积雪草含药血清干预均可下调ActivinA及其受体的基因表达，但仅高浓度复方积雪草含药血清对TGF-β1的基因表达有显著下调作用。结论：复方积雪草对肾小管上皮细胞ActivinA及其受体ActRⅠ的基因表达有下调作用，可能是其抑制炎症因子诱导的肾小管上皮细胞发生细胞活性改变，降低肾小管间质进一步炎症损伤的重要机制之一．福辛普利亦有相似作用．但机制可能不完全相同．     

参地补肾胶囊对高糖培养的肾小管上皮细胞TGF-β1、α-SMA和E-cadherin mRNA表达的影响

目的:观察参地补肾胶囊对高糖培养下肾小管上皮细胞TGF-β1、α-SMA、E-cadherin mRNA表达的影响,探讨参地补肾胶囊抗肾间质纤维化的作用机制。方法:以高糖培养的人肾小管上皮细胞作为研究对象,采用血清药理学研究方法和Real-time PCR检测技术,观察空白对照组、高糖模型组、参地补肾胶囊组和贝那普利组的TGF-β1、α-SMA、E-cadherin mRNA的表达,采用SPSS19.0统计软件进行统计分析。结果:高糖培养下的人肾小管上皮细胞TGF-β1、α-SMA mRNA的表达与空白对照组比较明显增加(P0.05),E-cadherin mRNA的表达与空白对照组比较明显降低(P0.05);参地补肾胶囊组能够下调肾小管上皮细胞对TGF-β1、α-SMA mRNA的表达,上调E-cadherin mRNA的表达,与高糖模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:本研究表明参地补肾胶囊通过下调高糖刺激的人肾小管上皮细胞对TGF-β1、α-SMA mRNA的异常表达,上调E-cadherin mRNA的异常表达,从而发挥抗肾间质纤维化的作用。     

人参皂苷Rg1对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞红细胞生成素受体表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与该细胞血红细胞生成素受体(EPOR)表达变化的关系。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组、5μg/L TGF-β1刺激组,人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5μg/L TGF-β1的基础上分别加入10,20,40 mg/L的人参皂苷Rg1)。每组细胞干预72 h后,在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定细胞培养上清液中胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的含量。实时荧光定量PCR方法检测EPOR mRNA转录水平,免疫细胞化学法检测各组表达EPOR细胞的阳性率。结果 TGF-β1诱导NRK52E细胞形态变化,从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞形态,并抑制细胞增殖(P<0.05),增加细胞表达Col-Ⅰ和FN,抑制EPOR mRNA及其蛋白的表达(P<0.05);人参皂苷Rg1以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞形态的改变,减少Col-Ⅰ和FN的表达,上调EPOR mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT具有一定的抑制作用;该作用可能与人参皂苷Rg1上调肾小管上皮细胞EPOR的表达有关。     

八棱丝瓜蛋白1的体外抗HIV-1活性

目的：研究八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-1活性。方法：通过实验株HIV-1ⅢB诱导合胞体形成抑制实验、HIV-1ⅢB和临床分离株HIV-1KM018急性感染细胞以及HIV-1ⅢB慢性感染细胞的p24抗原表达抑制实验检测八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-1活性。结果：八棱丝瓜蛋白1抑制HIV-1ⅢB诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为0．025μmol·L^-1，治疗指数为76。八棱丝瓜蛋白1抑制HIV-1ⅢB感染C8166和HIV-1KM018感染PBMC的p24抗原表达的EC50分别为0．033和0．207μmol·L^-1。八棱丝瓜蛋白1不抑制HIV-1ⅢB在慢性感染H9细胞中的复制。结论：首次发现八棱丝瓜蛋白1是一种具有抗HIV-1活性的核糖体失活蛋白。     

有机阴离子转运多肽1B1的研究进展

 目的介绍有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)的研究进展。方法查阅国外有关文献,并对其进行分析、归纳和总结。结果OATP1B1存在遗传多态性,且不同等位基因所表达的OATP1B1的转运能力具有显著性差异,进而会对多种药物的药动学及药效学产生影响;OATP1B1还与药物不良反应及药物相互作用有关。结论基于OATP1B1对药物体内过程的重要作用,关注OATP1B1遗传多态性对药动学、药效学的影响,及其与不良反应及药物相互作用的关系具有一定临床意义。     

桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞MMP-1和TIMP-1表达的影响

目的探讨桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞(ESF-1)基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-1抑制剂(TIMP-1)表达的影响及其对光老化ESF-1细胞的保护作用。方法以不同浓度桃叶珊瑚苷处理用20 J/cm2的UVA照射建立的光老化ESF-1细胞。MTT法检测细胞活力,分别检测细胞中SOD活性、GSH-Px活性和MDA水平。RT-PCR法检测细胞中ERK1、ERK2、MMP-1及TIMP-1 mRNA的表达水平。酶联免疫法检测细胞上清液中MMP-1和TIMP-1的水平。结果 UVA照射ESF-1细胞后,其细胞活力、SOD和GSH-Px活性降低、MDA水平升高,ERK1、ERK2、MMP-1 mRNA的表达水平升高,TIMP-1 mRNA的表达水平降低、MMP-1水平升高、TIMP-1水平降低(P<0.01);1×10-5mol/L和1×10-6mol/L桃叶珊瑚苷能够显著改善ESF-1细胞的光损伤(P<0.05或P<0.01)。结论桃叶珊瑚苷能调节光老化ESF-1细胞MMP-1和TIMP-1的表达,减轻UVA对ESF-1细胞的损伤。     

甲型H1N1流感的应对措施

目的：探讨甲型H1N1流感的应对措施。方法：对符合诊断标准的57例甲型H1N1流感患者分别从医院、病区、患者3个角度给予制定岗位责任制、成立发热门诊、成立隔离病区、合理公布病区、医务人员自身防护、病区消毒处理、健康宣教、饮食指导等应对措施。结果：57例患者经治疗全部痊愈,痊愈率达100.00%。住院天数最短为5天,最长为11天,平均6.8天;病毒转阴天数最短为3天,最长7天,平均5.3天。结论：从医院、病区、患者3个角度给予甲型H1N1流感有针对性的应对措施有助于患者康复。     

1-羟基茚-2-甲酸的合成△

目的：Knoevenagel反应合成1-羟基茚-2-甲酸。方法：以邻苯二甲醛和丙二酸为原料，以三乙胺或哌啶为催化剂，进行合成反应。结果：合成反应产物经1H—NMR和13C-NMR波谱测定，确定其化学结构为1-羟基茚-2-甲酸。结论：以邻苯二甲醛和丙二酸为原料，以三乙胺或哌啶为催化剂，反应产物是1-羟基茚-2-甲酸。     

除湿化瘀方对高尿酸血症内皮素-1及血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

目的:通过临床观察除湿化瘀方对高尿酸血症患者血尿酸、内皮素-1(ET-1)及血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响,探讨除湿化瘀方的作用机制。方法:本研究选择60例高尿酸血症患者,采用随机对照的原则分为中药治疗组和西药对照组,分别予除湿化瘀方和别嘌呤醇片,8周为1个疗程。观察治疗前后血尿酸(sUA)、内皮素-1(ET-1)及血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)。结果:两组sUA、ET-1及PAI-1较治疗前明显降低(P<0.01),且治疗后两组sUA、ET-1及PAI-1水平无明显差异(P>0.05)。结论:除湿化瘀方可降低sUA、ET-1及PAI-1水平。     

HPLC-ELSD法测定通迪胶囊中三七皂苷R_1和人参皂苷Rg_1、Rb_1的含量

目的:采用HPLC-ELSD法测定通迪胶囊中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Rb1的含量。方法:色谱柱DiamonsilC18(150mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水,梯度洗脱0～5min,乙腈20%～25%;5～20min,乙腈25%～45%;流速:1.0mL.min-1;柱温:25℃;漂移管温度:70℃;载气流速2.0L.min-1。结果:三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Rb1进样量分别在0.3～1.5μg(r=0.9997),1.5～7.5μg(r=0.9998)和1.5～7.5μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为101.8%、102.1%、103.6%;RSD分别为1.6%、2.1%、1.8%。结论:HPLC-ELSO法结果准确,便于操作,可用于通迪胶囊的质量控制。     

新疆克孜勒苏自治州甲型H1N1流感中医药防治特色浅谈

新疆克孜勒苏自治州地处中国最西部,是一个偏远落后地区。2009年全球暴发甲型H1N1流感,本州也有421例报告病例。甲型H1N1流感在本州暴发过程中,结合本地特点应用中医药防治,取得了良好效果。     

Pharmacokinetic study of ginsenosides Rb1 and Rg1 in rat by ELISA using anti-ginsenosides Rb1 and Rg1 monoclonal antibodies

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) systems using anti-ginsenoside Rb1 (G-Rb1) and Rg1 (G-Rg1) monoclonal antibodies (MAbs) were established for pharmacokinetic investigations of G-Rb1 and G-Rg1 in rat serum. The systems not only allowed sensitive detection of G-Rb1 at the level as low as 20 ng/ml and of G-Rg1 at 300 ng/ml, but showed strong capacity for detecting the two agents in a broad concentration range (20 to 400 ng/ml for G-Rb1 and 0.3 to 10 microg/ml for G-Rg1, respectively). In this respect, these assay systems are superior to other methods using thin-layer chromatography (TLC) or high-performance liquid chromatography (HPLC). In addition, another advantage of these immunoassays is the comparably low quantities of specimen required; as little as 5 microl of serum suffices the need for determination of ginsenosides. We report in this article the application of this immunoassay in pharmacokinetic study of G-Rb1.     

款冬润肺膏镇咳祛痰作用的实验研究

目的:研究观察款冬润肺膏镇咳祛痰的作用。方法:镇咳试验采用氨水致咳法,祛痰试验采用小鼠酚红排泌法。结果:款冬润肺膏可明显抑制氨水所致小鼠咳嗽反应,对小鼠气管痰液分泌具有明显的促进作用。结论:款冬润肺膏具有一定的止咳、化痰作用。