天花粉蛋白体外抗人白血病和淋巴瘤细胞的作用机制

本研究的目的是探讨天花粉蛋白（TCS）对人白血病和淋巴瘤细胞系的杀伤作用机制。用台盼蓝染色法检测TCS对细胞生长的影响,应用流式细胞术检测TCS诱导细胞凋亡的情况及对细胞生长周期的影响。结果表明：12.5μg/ml浓度的TCS可以显著抑制各种白血病细胞系的增殖,但对T淋巴细胞系和巨噬细胞细胞系表现为诱导细胞凋亡的作用,而对B淋巴瘤细胞系则表现为生长抑制效应。通过细胞周期检测发现,TCS可以将B淋巴瘤细胞系细胞阻滞在S期,从而抑制细胞增殖,但对T淋巴细胞系则无明显影响。结论：TCS以不同的作用机制杀伤白血病细胞,根据不同的细胞类型分别表现为诱导细胞凋亡和阻滞细胞生长周期的作用。     

澜沧江-湄公河次区域HIV-1分子流行病学及跨境传播研究进展简

澜沧江-湄公河次区域是全球人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）感染最为严重的地区之一,流行多种HIV-1病毒亚型,并且存在跨境传播的现象。该文总结了近年来澜沧江-湄公河次区域各个国家（省）的HIV-1感染情况和流行亚型。另外,对该区域流行的主要HIV-1亚型：B亚型、C亚型和CRF01_AE的跨境传播以及CRF07_BC和CRF08_BC在中国境内的跨省传播进行了介绍,希望能为该区域,特别是云南省和我国HIV-1的病毒起源、传播路线等研究提供一定的参考,也为该地区艾滋病（AIDS）疫情的预防控制提供科学依据。     

抗HIV p24多肽单克隆抗体和抗血清的制备及初步应用

检测p2 4抗原的诊断试剂在AIDS研究和防治方面具有重要意义。为研制国产HIVp2 4抗原诊断试剂 ,根据国内外文献 ,合成了HIVp2 4抗原的六个肽段 :G -A 12 ,D -R 16 ,P -S 18,A -G 2 3(HIV - 2ROD) ,P -S 18,N -I 15以及D -C 2 2。六个肽段中 ,N -I 15肽和D -C 2 2肽用于制备McAb ,其余 4个用于制备山羊抗血清。除D -R 16肽的滴度较低 (1∶2 0 0 0 )外 ,其余三个肽的抗血清滴度都在 1∶10 0 0 0以上。McAb中 ,N -I 15肽的反应比D -C 2 2肽要强 ,但两者的腹水滴度相同 ,均为 1∶10 0 0。单抗铺板检测病毒 p2 4抗原的非特异性反应比较强。用山羊抗血清铺板 ,1∶80 0 0的稀释度检测效果最好。用我们研制的抗体检测不出裂解HIV - 1ⅢB中 p2 4 ,却能够测出Abbott公司p2 4抗原诊断试剂盒的阳性对照 (HIVAG - 1)。用北海道大学免疫科学研究所研制的单抗和人阳性血清做的交叉对照实验表明 ,可能是由于合成肽免疫产生的抗体与裂解病毒p2 4的亲和力较差引起     

狭叶五味子中化合物扁枝杉香豆素和(-)-表儿茶酸体外抗乙型肝炎病毒活性研究

目的 研究从狭叶五味子Schisandra lancifolia中分离化合物扁枝杉香豆素(phyllocoumarin)和(-)-表儿茶酸[(-)-epicatechin]的体外抗乙型肝炎病毒(HBV)活性.方法 为了筛选和确认扁枝杉香豆素和(-)-表儿茶酸体外抗HBV活性,以HepG2.2.15细胞为体外研究HBV模型,分别用RPMI 1640完全培养基稀释不同质量浓度的药物作用于细胞,培养3 d后收集上清,采用MTT法检测药物对HepG2.2.15细胞的生长影响和ELISA法检测培养上清中HBsAg和HBeAg的水平,评价扁枝杉香豆素和(-)-表儿茶酸对HBsAg和HBeAg的影响.结果 扁枝杉香豆素和(-)-表儿茶酸具有一定的体外抗HBV活性,其细胞毒性非常小,CC_(50)均大于200μg/mL.扁枝杉香豆素具有较强的抑制HBsAg和HBeAg分泌作用.阳性对照药物阿德福韦酯也抑制HBVHBsAg和HBeAg分泌,但在相同质量浓度(1.6μg/mL)下其抑制作用较扁枝杉香豆素弱.结论 狭叶五味子中化合物扁枝杉香豆素和(-)-表儿茶酸具有一定体外抑制HBV HBsAg和HBeAg分泌的作用,从而起到抗HBV作用.     

HIV-1慢性感染Jurkat细胞系的建立及其特性研究

目的建立艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）慢性感染Jurkat细胞系,研究其生物学特性。方法参照文献方法改良,建立HIV-1ⅢB慢性感染Jurkat细胞系。其细胞系特性采用以下方法检测：光学显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测HIV-1ⅢB感染细胞的阳性率;噻唑蓝（MTT）法检测抗病毒药物对慢性感染细胞的毒性作用;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测药物对慢性感染细胞中病毒复制的影响;合胞体形成方法检测药物对HIV-1ⅢB慢性感染细胞与正常细胞融合的阻断作用。结果成功建立了HIV-1慢性感染Jurkat细胞系（Jurkat/HIV-1ⅢB）,感染细胞阳性率〉90%。检测影响病毒复制各周期的抗病毒药物对Jurkat/HIV-1ⅢB细胞的作用,发现Jurkat/HIV-1ⅢB细胞具有HIV-1慢性感染细胞的生物学特征。结论成功建立Jurkat/HIV-1ⅢB细胞系,为抗HIV-1药物的研发和病毒感染机制研究提供了新的工具。     

重组腺病毒载体vAd-tat的构建及其在细胞中的表达

目的 构建含HIV-1 tat基因重组腺病毒,观察在不同细胞中外源蛋白Tat的表达,作为DC抗HIV疫苗的基础.方法 通过PCR扩增,获得HXB2 tat的cDNA片段,定向克隆入腺病毒转移载体pTrack-CMV,线性化后转化含有腺病毒骨架pAd-easy-1的大肠杆菌BJ5183,获得同源重组的质粒prAd-tat,Pac Ⅰ酶切纯化后转染293细胞,包装成具有感染力的复制缺陷型重组腺病毒vAd-tat.结果 经PCR、酶切及DNA序列测定,插入片段大小、方向正确,获得具有感染力的含有HIV-1 tat基因的重组腺病毒;通过Western blot方法 检测,重组腺病毒在293细胞中表达出Mr,为15 000的蛋白.结论 成功构建了含有HIV-1 tat基因的腺病毒,并观察到该基冈在细胞中的表达.     

HIV p24抗原的检测及意义

艾滋病 (ＡｃｑｕｉｒｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＳｙｎｄｒｏｍｅ ,ＡＩＤＳ)在全球广泛流行 ,亚洲是继北美、非洲之后成为全球ＨＩＶ (ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＶｉｒｕｓ)感染上升最迅速、流行最严重的地区之一。我国ＡＩＤＳ也呈加速流行的趋势 ,截止到 2 0 0 0年 9月 ,共报告ＨＩＶ感染者 2 0 711例。据专家估算 ,我国实际感染人数超过 60万人。ＨＩＶ主要通过性、母婴和血液三种途径传播。为监控流行情况 ,评价新的疫苗和药物 ,建立简便、灵敏、特异的检测方法特别关键。理想的检测试剂应该是拥有一套…     

Alpha momorcharin inhibits HIV 1 replication in acutely but not chronically infected T lymphocytes 1

目的：研究α苦瓜子蛋白（αＭＭＣ）在ＨＩＶ１急性和慢性感染Ｔ淋巴细胞中的抗ＨＩＶ１活性．方法：以合胞体抑制实验,ＨＩＶ１ｐ２４核心抗原表达水平和ＨＩＶ抗原阳性细胞的百分率检测了αＭＭＣ的抗ＨＩＶ活性．结果：αＭＭＣ对ＨＩＶ１ⅢＢ诱导Ｃ８１６６细胞形成合胞体有显著的抑制作用．αＭＭＣ显著地抑制了ＨＩＶ１急性感染Ｔ细胞中ｐ２４抗原的表达水平和减少了ＨＩＶ抗原阳性细胞的百分率．在上述三种测定中,αＭＭＣ的ＥＣ５０分别是００１６,００７和０３２ｍｇ·Ｌ－１．但是,αＭＭＣ不影响慢性感染ＨＩＶ１ⅢＢ／Ｈ９中ｐ２４抗原表达水平．结论：αＭＭＣ是苦瓜子蛋白中唯一的具有抗ＨＩＶ１活性的成份．αＭＭＣ抑制急性感染中ＨＩＶ１的复制而对慢性感染Ｔ细胞中的ＨＩＶ１复制无影响．     

天然罗汉松二萜体外抗登革病毒活性研究

登革病毒(dengue virus,DENV)是造成热带和亚热带地区登革热和登革出血热季节性大爆发的蚊媒病原体,可导致严重威胁生命的疾病,因此亟需研发DENV疫苗和药物。本研究发现从石栗枝叶中分离的罗汉松型二萜(3α,5β,10α)-13-methoxypodocarpa-8,11,13-triene-3,12-diol(MPTD)具有很强的体外抗DENV作用。噬斑抑制实验检测MPTD对4种不同血清型DENV的抑制作用;MTT实验检测其对Vero和Huh7两种细胞的毒性;qRT-PCR和Western blot实验分别在RNA和蛋白水平检测其抗DENV的活性。结果表明,MPTD处理可显著降低DENV感染Vero细胞的病毒滴度,其对4种DENV(1~4)的半数有效浓度(50%effective concentration,EC50)值分别为2.72±0.39、10.99±5.18、18.72±0.21和0.48±0.28μmol·L^-1。MPTD显著抑制DENV RNA的合成和E蛋白的表达,其可能抑制DENV复制的前期阶段而发挥抗病毒活性。进一步的研究显示,MPTD对DENV感染的抑制作用不是靶向病毒进入细胞阶段。MPTD对DENV具有显著抑制作用,是一种有潜在应用价值的抗DENV化合物。     

测定细胞存活和增殖的MTT方法的建立

MTT方法具有简便,灵敏,稳定可靠,不需要同位素等优点。为了摸索测定细胞存活和增殖的MTT方法的各种最适条件,我们以Raji细胞为对象,比较了十二种不同的MTT甲(月替)溶解缓冲液。实验结果表明,20％SDS-50％DMF效果最好,溶解力强,溶解甲(月替)所需时间短,背景低,OD值高,不会引起培养基中小牛血清的絮状沉淀。其溶解的甲(月替)产物吸收峰在550—600nm之间。测定细胞范围为每孔500—400 000,这一范围能满足生物学和医学研究中多种测定的需要。