重组腺病毒载体vAd-tat的构建及其在细胞中的表达

目的 构建含HIV-1 tat基因重组腺病毒,观察在不同细胞中外源蛋白Tat的表达,作为DC抗HIV疫苗的基础.方法 通过PCR扩增,获得HXB2 tat的cDNA片段,定向克隆入腺病毒转移载体pTrack-CMV,线性化后转化含有腺病毒骨架pAd-easy-1的大肠杆菌BJ5183,获得同源重组的质粒prAd-tat,Pac Ⅰ酶切纯化后转染293细胞,包装成具有感染力的复制缺陷型重组腺病毒vAd-tat.结果 经PCR、酶切及DNA序列测定,插入片段大小、方向正确,获得具有感染力的含有HIV-1 tat基因的重组腺病毒;通过Western blot方法 检测,重组腺病毒在293细胞中表达出Mr,为15 000的蛋白.结论 成功构建了含有HIV-1 tat基因的腺病毒,并观察到该基冈在细胞中的表达.     

氯喹/羟氨喹在艾滋病治疗中的应用研究进展

联合抗逆转录疗法(cART)能有效抑制HIV复制和增加CD4+细胞数量,但对HIV引起的免疫活化则无明显抑制作用,持续免疫活化目前已经成为治疗AIDS的一大难题.氯喹/羟氯喹具有免疫调节功能,能抑制浆细胞样树突状细胞(pDC)活化进而有效降低免疫活化水平.此外,氯喹/羟氯喹还可通过干扰HIV包膜糖蛋白gp120糖基化抑制病毒复制及通过抑制记忆性T细胞自噬而诱导其凋亡,安全性高、毒性低,可作为一种辅助治疗药物用于HIV治疗.     

槐花提取化合物K3体外抗HIV-1活性的研究

目的:研究槐花提取化合物K3的体外抗H IV-1活性,并对其抗H IV-1机制进行初步探讨。方法:采用MTT比色法检测化合物对各种细胞的毒性。用合胞体形成计数法,p24抗原捕获ELISA法及RT-PCR等多种方法研究化合物体外抗H IV-1活性。结论:槐花提取化合物K3体外有较好的抗H IV-1活性,能够抑制病毒实验株(H IV-1ⅢB,耐药株(H IV-174V)和临床分离株(H IV-1KM018)等多种病毒株的复制,且其作用机制是多靶点的,不仅可以抑制病毒的进入,还可以抑制H IV-1逆转录酶活性。     

两种AZT-氟喹诺酮偶联物体外抗HIV-1及抗菌活性的研究

目的体外测定两种AZT-氟喹诺酮偶联物SRLZ和SROZ的抗HIV-1活性及抗菌活性。方法通过合胞体抑制、HIV-1感染细胞保护、HIV-1 p24抗原测定等方法检测急性感染中化合物对HIV-1实验株、临床分离株的抑制作用和对慢性感染细胞中的病毒复制影响;通过体外金黄色葡萄球菌的抑制实验检测化合物的抗菌活性。结果AZT-氟喹诺酮偶联物SRLZ和SROZ能抑制HIV-1实验株诱导的合胞体形成,减少病毒感染细胞的死亡和抑制病毒在细胞内的复制;SRLZ和SROZ对HIV-1临床分离株也有较好的抑制作用;SRLZ和SROZ对HIV-1的抑制活性与AZT相近;AZT-氟喹诺酮偶联物也能抑制金黄色葡萄球菌,其MIC值与其相应的阳性药物相近。结论SRLZ和SROZ有很好的抗HIV-1活性和抗菌活性。     

大动物生物安全三级实验室的生物安全隐患与对策

<正>生物安全即避免危险生物因子所造成的实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施[1]。随着近些年科学技术的迅速发展及新发传染病(如SARS、禽流感、甲型H1N1流感等)的不断暴发和流行,各国对生物安全实验室安全重要性的认     

HIV-1 C亚型密码子优化gp120基因重组腺病毒载体的构建及表达

目的 构建含有HIV-1 C亚型gp120基因重组腺病毒载体,并在293细胞中表达gp120蛋白.方法 PCR扩增,获得HIV-1 C亚型gp120片段,定向克隆入腺病毒转移载体pTrack-CMV,线性化后转化至含有腺病毒骨架载体pAd-easy-1的大肠埃希菌BJ5183,获得重组子prAd-gp120,PacⅠ酶切纯化后转染293细胞,包装成复制缺陷型重组腺病毒vAd-gp120.结果 经PCR、酶切及DNA测序,插入片段大小、方向正确,获得了具有感染力的vAd-gp120重组腺病毒;通过Western 印迹检测,重组腺病毒在293细胞中表达出分子量为120 kD的蛋白.结论 成功构建了含有HIV-1 C亚型gp120基因重组腺病毒载体,并获得该基因的表达.     

蛋白激酶C在H IV复制中的作用与药物发现

蛋白激酶C(PKC)是一类磷脂依赖的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,PKC在中枢神经系统疾病及心血管紊乱等多种人类疾病中都发挥了重要作用。研究发现,PKC可以通过多种途径刺激H IV病毒的活化,并磷酸化病毒复制周期中的多种蛋白,如P17gag、Nef、Rev和V if等,这些蛋白的磷酸化在病毒复制周期中起到了不可忽视的作用。了解PKC与H IV及细胞间的复杂关系,开发抑制PKC蛋白激酶的药物从而达到抑制H IV复制的目的,或激活PKC从而减少或消除体内潜伏的H IV病毒库是对PKC在抗H IV研究中应用提出的两个主要方向,对于开发新型抗H IV药物有重要意义。     

雪胆素A和B的体外抗HIV-1活性

目的：研究从药用植物金佛山雪胆分离的雪胆素A和雪胆素B两个三萜类化合物的体外抗HIV活性。方法：应用合胞体抑制实验、p24抗原产生的抑制实验、慢性感染细胞和正常细胞间的细胞融合抑制实验等技术检测化合物的体外抗HIV-1活性；利用HIV-1逆转录酶、蛋白酶抑制实验，NCp7锌离子逐出实验探讨化合物的作用机制。结果：雪胆素A和雪胆素B在体外有较好的抑制HIV-1活性，其活性主要表现为：（1）抑制HIV-1诱导合胞体形成，EC50值分别为3．09μg·mL^-1和2．53μg·mL^-1；（2）抑制HIV-1急性感染的C8166细胞p24抗原产生，EC50值分别为3．97μg·mL^-1和18．90μg·mL^-1；（3）抑制HIV-1慢性感染H9与正常C8166细胞间融合，EC50分别为1．76μg·mL^-1和11．95μg·mL^-1。雪胆素A和雪胆素B对HIV-1逆转录酶、蛋白酶、NCp7锌离子逐出均没有抑制作用。雪胆素A对HIV-1整合酶有微弱的结合活性，而雪胆素B对HIV-1整合酶没有结合活性。在共培养实验中，雪胆素A和雪胆素B预处理C8166细胞组比未经预处理细胞组能够更有效的抑制HIV-1活性。结论：化合物雪胆素A和雪胆素B体外有较好的杭HIV-1活性，可能主要作用于HIV-1病毒进入细胞阶段。     

灵长类动物模型在抗艾滋病毒药物研究中的应用*

艾滋病(AIDS)灵长类动物模型广泛用于艾滋病毒(HIV)研究。较为常用的有猴免疫缺陷病毒(SIV)/猕猴模型和猴/人免疫缺陷嵌合病毒(SHIV)/猕猴模型,除了在发病机制和抗HIV疫苗研究中的重要作用外,这2种模型在抗HIV药物研究中同样显示出优越性和实用性,体现在药物疗效的研究、新药的开发、耐药性研究、机体免疫反应在药物治疗作用的研究中。通过这些体内抗病毒活性及机制的研究,可进一步揭示药物的抗HIV疗效,对AIDS的临床用药具有重要的指导作用,将使人们重新考虑抗HIV药物的用药原则和药效评价标准。