沙土鼠短暂性脑缺血后海马迟发性神经元死亡发生机制的探讨(摘要)

本实验通过结扎沙土鼠双侧颈总动脉20分钟再灌流2天或7天造成海马迟发性神经元死亡(DND)模型,检测背侧海马 Ca~(++)及脂质过氧化物含量的变化,并用海马 CA_1区神经元密度作为指标,观察     

迟发性神经元损伤的实验研究——沙土鼠脑组织水和离子含量的变化

本文以结扎沙土鼠双侧项总动脉5min,然后使血流再通的方法制作迟发性神经元损伤动物模型。用原子吸收分光光度法测定了沙土鼠脑6个分区水和离子含量在脑缺血及缺血后重灌流1～96h的经时变化。实验结果表明,至重灌流24h,海马CA_1区组织钙浓度开始明显增高;随后在48h,水和钠含量亦增多;到96h,钾含量才出现显著性降低。除CA_1区外其它部位的脑组织中则没有上述变化。从本实验可以得出结论,即钙的过负荷加速了迟发性神经元损伤现象的产生。     

绞股蓝总皂甙对沙土鼠短暂性脑缺血后海马DND的影响

本实验通过结扎沙土鼠双侧颈总动脉10分钟再灌流7天,造成海马迟发性神经元死亡(Delayed Neuronal Death,DND)模型,用海马CA_1区神经元密度作为指标,观察绞股蓝总皂甙(GPM)对海马DND的影响。NS组、GPM-I组和GPM-Ⅱ组的CA_1区神经元密度分别是107.50±6.63、146.18±19.75和165.30±9.24。GPM-I组、GPM—Ⅱ组与NS组比较P<0.01,P<0.0001。均有高度显著性差异。结果表明绞股蓝总皂甙对短暂性脑缺血后海马DND有明显保护作用。     

缝隙连接胞间通讯对大脑中动脉缺血后海马迟发性神经元死亡的影响

目的 观察探讨星型胶质细胞缝隙连接胞间通讯变化对大鼠大脑中动脉缺血再灌流后海马区迟发性神经元死亡(DND)的影响.方法 建立大鼠短暂性大脑中动脉缺血再灌流模型.利用尼氏染色、TUNEL方法 观察再灌流后星型胶质细胞缝隙连接蛋白抑制剂CBX对海马DND的影响.结果 大脑中动脉缺血再灌流后3 d、7 d海马神经元明显脱失,部分CA1、CA2区神经元凋亡;应用CBX后TUNEL阳性神经元数目明显减少,幸存神经元数目增加.结论 星型胶质细胞缝隙连接蛋白抑制剂CBX可有效抑制大鼠大脑中动脉缺血后海马神经元DND.     

兴奋性氨基酸、Ca~(2+)和乳酸在短暂性脑缺血后海马DND发生机制中的作用(摘要)

短暂性脑缺血后海马 CA_1区产生迟发性神经元坏死(DND),但是对海马 CA_1区DND 发生机制仍有争议。本实验目的是为了阐明兴奋性氨基酸、Ca~(2+)和乳酸在短暂性脑缺血后海马 DND 发生机制中的作用。首先,通     

迟发性神经元损害的超结构与生化改变对比研究及药物保护

80年代初,学者们发现暂短脑缺血后使血流再通,海马CA_1区神经元在血流再通后逐渐出现神经元坏死,这就是迟发性神经元坏死(DND)的提出。由于DND的发现,给传统的ICVD治疗提出了新的问题,即再灌流损伤问题。本研究的目的就是深入细致地研究DND的病理(光镜和电镜)和生化改变,并将病理变化与生化改变进行对比分析,以期进一步阐明DND的发病机理。在此基础上找出较为有效的抗再灌流损伤的药物。     

内侧隔区预毁损对海马CA1区迟发性神经元死亡的影响

目的 :探讨乙酰胆碱 (ACh)对短暂性全脑缺血再灌后海马CA1区迟发性神经元死亡 (DND)的作用。方法 :46只健康雄性Wistar大鼠随机分为 3组 :Ⅰ 手术对照组 ;Ⅱ MS假性损毁脑缺血再灌组 ;Ⅲ MS预损毁缺血再灌组 ,动物先行MS损毁 ,第 15天再行 4 VO ,使脑缺血 2 0min恢复灌注 72h后取材 ,采用NissleHE和TUNEL染色 ,在光镜下观测计数 ,经统计学处理。结果 :①Ⅱ、Ⅲ组缺血再灌后海马CA1出现迟发性神经元死亡 ;②Ⅲ组较Ⅱ组迟发性神经元损伤明显减轻。结论 :乙酰胆碱参与短暂性全脑缺血再灌后海马CA1区迟发性损伤过程 ,MS预毁损能使死亡细胞明显减少     

迟发性神经元损伤的实验研究沙土鼠脑海马区组织酶谱及同工酶谱的变化

本文用蒙古沙土鼠制作迟发性神经元损伤(DND)动物模型。在5min脑缺血及缺血后重灌流1～96h,测定了动物脑海马CA_1区组织乳酸脱氢酶(LDH)、α—羟丁酸脱氢酶(α—HBDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)和碱性磷酸酶(ALP)的活性以及LDH及CK同工酶分布的经时变化。本实验的结果进一步证实了能量代谢的变化是DND发生机理中最重要的因素。     

灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后迟发性神经元死亡的保护作用

目的观察灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区迟发性神经元死亡的保护作用。方法夹闭Wistar大鼠双侧颈总动脉20min造成脑缺血模型,再灌注7d后,观察灯盏花素低、高剂量对海马CA1区神经元组织病理学及神经元密度的影响。结果缺血再灌注后灯盏花素组海马CA1区组织学状况明显改善,神经元密度显著增加(与模型组比较P<0.01),且与剂量无明显关系(P>0.05)。结论蛋白激酶C抑制剂灯盏花素能减轻脑缺血再灌注后海马CA1区迟发性神经元死亡,具有脑保护作用。     

谷氨酸转运体抑制剂DHK抑制脑缺血预处理的保护作用

目的:观察谷氨酸转运体GLT1抑制剂二氢卡因酸盐(DHK) 对脑缺血预处理(CIP)诱导脑缺血耐受的影响.方法:采用四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型,右侧脑室注射DHK.脑组织切片硫堇染色法观察海马CA1区锥体神经元迟发性死亡(DND)程度,确定组织学分级.结果:假手术组和CIP组海马CA1区未见明显的DND;损伤性缺血组海马CA1区有明显的DND;CIP 损伤性缺血组海马CA1区DND不明显; DHK CIP 损伤性缺血组中,DHK阻断了CIP对海马CA1区锥体神经元的保护作用.定量分析发现,DHK CIP 损伤性缺血组较CIP 损伤性缺血组的保护效应明显降低.结论:DHK可抑制CIP诱导的脑缺血耐受.     

EFFECT OF VASOPRESSIN ON DELAYED NEURONAL DAMAGE IN HIPPOCAMPUS FOLLOWING CEREBRAL ISCHEMIA AND REPERFUSION IN GERBILS

Mongolian gerbils were used as delayed neuronal damage (DND) animal models.At the end of 15 minute cerebral ischermia and at various reperfusion time ranging from 1 to 96 hours,the content of water and arginine vasopressin (AVP) in the CA1 sector of hippocampus were measured by the specific gravity method and radioimmunoassy.Furthermore,we also examined the effect of intracerebroventricular (ICV) injection of AVP,AVP antiserum on calcium,Na^ ,K^ -ATP ase activity in the CA1 sector after ischemia and 96 hour reperfusion.The results showed that AVP Contents of CA1 sector of hippocampus during 6 to 96 hour recirculation,and the water content of CA1 sector during 24 to 96 hour were significantly and continuously increased.After ICV injection of AVP,the water content and calcium in CA1 sector of hippocampus at cerebral ischemia and 96 hour recirculation further increased,and the Na^ ,K^ -AT-tion of AVP antiserum,the water contenr and calcium in CA1 sector were significantly decreased as compared with that of control.These suggested that AVP was involved in the pathopysiologic process of DND in hippocampus following cerbral ischemia and reprfusion.Its mechanism might be through the change of intracellular action mediated by specific AVP receptor to lead to Ca inos over-load of neuron and inhibit the Na^ ,K^ -ATPase activity,thereby to exacerbate the DND in hippocampus.     

海马不同地区域缺血时损伤和hsp70mRNA表达差异

目的：探讨缺血再灌注后鼠脑海马CA1区选择性易损伤和迟发神经元死亡现象,以及hsp70mRNA差异表达的可能机制。方法：观察鼠前脑缺血再灌注时,海马CA1区、CA3区及齿状回锥体细胞在组织学变化;以及原位杂交技术检测各区hsp70mRNA的诱导表达。结果：缺血再灌注7d后海马CA1区锥体细胞缺失明显,而CA3区及齿状回未见明显形态学变化。CA1区hsp70mRNA的诱导较其余两区迟,而持续时间较长。结论：在缺血早期加强或在缺血后期抑制hsp70mRNA的诱导,有可能保护CA1区锥体细胞。     

硝普钠及脑缺血再灌流对海马本部cGMP 合成及分布的差异研究

目的探讨硝普钠及脑缺血再灌流对海马本部cGMP合成及分布差异研究。方法嵌夹沙土鼠的双侧颈总动脉制造脑缺血模型，应用免疫荧光组织化学染色方法。结果硝普钠及脑缺血再灌流后增加海马区cGMP合成，cGMP阳性细胞主要分布于海马本部放射层及腔隙分子层。硝普钠加脑缺血再灌流海马本部锥体细胞层有少量cGMP阳性细胞。结论硝普钠及脑缺血再灌流增加cGMP的合成。     

NGF对缺血性脑损伤引起的大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的作用

目的　研究神经生长因子 (NGF)对缺血性脑损伤引起的大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的形态学影响。方法　采用Pulsinelli闭塞大鼠四动脉全脑缺血模型 ,应用光镜、透射电子显微镜及原位末端标记法 (TUNEL染色法 )观察模型组和NGF治疗组动物脑缺血 30min再灌注 7d海马神经细胞凋亡的情况。所得数据应用SPSS软件包进行统计学分析。结果　TUNEL染色法显示模型组有大量凋亡细胞 ;给药B、C组的神经细胞凋亡数目接近正常组 ,明显少于模型对照组 ,其差异具有高度显著性P <0 0 1。结论　给予外源性神经生长因子能明显抑制海马神经细胞的凋亡 ,减少缺血再灌注对神经细胞的损害     

实验性海马急性缺血与再灌流损伤的电镜观察

本文迭用蒙古沙土鼠复制急性脑缺血再灌流模型,并动态观察海马CA,区锥体细胞在不同再灌流时间内超微结构的演变。发现再灌流损伤不同于传统的缺血病变,其形态改变至少需要6小时才开始出现,作者认为脑缺血病变与再灌流损伤同属细胞内氧的利用异常,但由于机制的不同,故病变各有特征。高氧性细胞内用氧异常致使超氧化物阴离子自由基(0_2~-)产生增多的理论能解释再灌流病变的实质。     

大鼠前脑缺血再灌注不同时间神经元损伤情况

目的：观察前脑缺血再灌注后海马，纹状体，皮层神经元损伤情况。方法：夹闭Wistar大鼠双侧颈总动脉5min制造脑缺血再灌注模型，应用电镜，Tunel染色观察前脑神经元损伤情况。结果：短暂性脑缺血再灌注第2d，纹状体和皮层神经元坏死，凋亡情况较明显，第4d，海马神经元坏死轻微，凋亡情况最明显，神经元凋亡形态学典型表现持续时间较短，呈色深浅不一。第2d后坏死神经元数量不再增加。结论：脑缺血可致神经元坏死和凋亡，凋亡持续时间较短，以后细胞的形态改变与坏死近似，不同神经元耐受缺氧能力差异很大。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤及相关分子表达的时间过程

目的：研究大鼠全脑缺血再灌注损伤的时间过程及相关分子的表达变化。方法：在四血管阻断法（4VO）诱导全脑缺血模型上观察脑组织病理改变；同时应用免疫印迹方法检测脑组织NMDA受体亚单位蛋白及VCAM－1水平。结果：全脑缺血再灌注后3－14d海马CA1区产生迟发性神经元死亡。皮层NR1和NR2A亚单位表达分别于再灌注后1和3d显著增加，NR2B亚单位在1－3d也显示较高水平；海马NR1亚单位表达在1d明显下降，以后呈进行性升高，于14d达高峰；NR2A和NR2B表达有相似的趋向并于7d明显增加。海马和皮层VCAM－1分别于再灌注后3和7d表达明显上调。结论：脑缺血再灌注过程中海马神经元数量减少，皮层和海马的NMDA受体亚单位蛋白（NR1、NR2A和NR2B）及粘附分子VCAM－1有不同变化；干预两者的表达可能减轻脑缺血再灌注损伤。     

急性脑缺血后脑隔——视前区内性功能调节相关神经元的变化

目的探讨急性脑缺血后出现性功能障碍的机理。方法应用蒙古沙土鼠急性脑缺血再灌注模型，对脑隔—视前区内性功能调节相关神经元光镜和电镜下的病理组织学和超微结构改变进行了观察。结果缺血５分钟再灌注造成的神经元密度和亚细胞水平的结构变化是暂时的，可在２周内恢复，１０分钟脑缺血再灌注后神经元的损害加重，且在２周后尚未恢复，损害主要为膜结构如线粒体、内质网等破坏。结论神经元损伤程度与缺血时间及再灌注时间长短密切相关，脑隔—视前区内神经元的病理损害是引起性功能障碍的重要形态学依据。     

间歇性低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再注后海马神经元的保护作用

目的 探讨间歇性低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再注后海马神经元的保护作用.方法 72只健康雄性Wistar大鼠,体重280～300g,随机分为6组,每组12只.分别为假手术组(Sham);间歇性低压缺氧预处理组(IHHP);缺血/再灌注组(I/R);间歇性低压缺氧预处理2次+全脑缺.血/再灌注组( IHHP2+ I/R);间歇性低压缺氧预处理4次+全脑缺血/再灌注组(IHHP4+I/R);间歇性低压缺氧预处理6次+全脑缺血/再灌注组(IHHP6+ I/R).采用四血管闭塞法复制大鼠全脑缺血/再灌注模型,全脑缺血后8 min行再灌注.硫堇染色观察海马CA1区组织学分级及锥体神经元密度;流式细胞技术检测海马神经元凋亡率.结果 与Sham组相比,单纯性间歇性低压缺氧预处理对海马组织形态和神经元凋亡率均无明显影响;I/R组大鼠海马CA1区组织损伤明显,存活的锥体细胞稀疏,排列紊乱,细胞明显缺失.I/R组与Sham组相比,组织学分级明显升高,神经元凋亡率明显增加;间歇性低压缺氧预处理2次、4次和6次+ I/R各组大鼠海马CA1区细胞损伤均明显改善,组织学分级明显降低,存活神经元密度值均明显增加,神经元凋亡率明显降低,其中IHHP4+ I/R组效果最为明显.结论 间歇性低压缺氧本身对大鼠海马神经元无明显损伤作用,但可对其后短期内发生的缺血/再灌注脑组织发挥保护作用,适当的预处理是诱导有效脑保护作用发生的必要条件.