鲍曼不动杆菌OmpA经ROS/NLRP3信号通路调控THP 1细胞自噬和凋亡

目的: 探讨鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(outer membrance protein A, OmpA)对人单核巨噬THP-1细胞自噬和凋亡的影响及其可能机制。方法: 构建OmpA/pET-28a载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达纯化重组OmpA蛋白,并免疫家兔制备多克隆抗体;采用蛋白质印迹法检测呼吸机相关性肺炎患者发病前后血清中OmpA抗体水平变化。以不同浓度(1、10 μg/mL)重组OmpA蛋白分别刺激THP-1细胞1、3、6 h,采用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1表达,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧产生,荧光实时定量PCR检测细胞含NLR家族Pyrin域NOD样受体家族3(NLRP3)、Caspase-1和IL-1β等mRNA表达。结果： 自制多抗可以识别临床菌株OmpA蛋白。呼吸机相关性肺炎患者发病前后,血清中均可检出OmpA抗体(IgG型),且发病后OmpA抗体水平显著高于气管插管前(P<0.05)。重组OmpA蛋白刺激THP-1细胞后,细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1表达显著上升,细胞凋亡率显著升高,呈一定的时间和浓度依赖性(P<0.05)。与对照组比,在重组OmpA蛋白作用1 h时,细胞IL-1β mRNA表达和活性氧含量显著增加(P<0.05);3 h和6 h时,3种mRNA表达量和活性氧含量显著降低(P<0.05)。结论： OmpA通过激活THP-1细胞NLRP3炎症小体,释放活性氧和IL-1β等炎症介质,诱导THP-1细胞自噬和凋亡发生。     

生物膜与鲍曼不动杆菌耐药性的相关性研究

目的 通过研究鲍曼不动杆菌生物膜与耐药性的关系,为防治因鲍曼不动杆菌造成的感染提供理论依据.方法 对临床导管标本分离的鲍曼不动杆菌进行鉴定,采用刚果红培养基筛选鲍曼不动杆菌生物膜的模式菌株,并观察导管材料表面形成的生物膜结构.结果 刚果红法检测能够形成生物膜的鲍曼不动杆菌的模式菌株阳性率68.0%(17/25);扫描电镜观察到细菌聚集,由纤维素样物质交联,甚至堆积,耐药株发现温和噬菌体.结论 鲍曼不动杆菌在导管中因产生生物膜,形成屏障导致对抗生素耐药;耐药株菌体表面的温和噬菌体可在耐药性传递中发挥作用.     

血管紧张素Ⅱ对H9C2细胞中NLRP3炎性体的作用

【摘要】 目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对H9C2细胞中NLRP3的作用。方法 培养H9C2细胞株，选用对数生长期的H9C2细胞进行试验，用10 6mol/l的AngⅡ予以刺激，于不同的时间点收集细胞，通过实时荧光定量PCR（RT qPCR）及蛋白质印迹法（Western blot）分别检测细胞中NLRP3、ASC、Caspase 1、IL 1β的基因和蛋白水平；通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养液上清液中IL 1β的含量。结果 NLRP3、ASC、Caspase 1及IL 1β的基因相对表达量在各处理组与0h组相比差异有统计学意义（P＜005）。Caspase 1及IL 1β的蛋白相对表达量在各处理组与0h组相比差异有统计学意义（P＜005）。细胞培养液上清液中IL 1β的含量在各处理组与0h组相比差异有统计学意义（P＜005）。结论 血管紧张素Ⅱ可促使H9C2细胞中NLRP3、ASC、Caspase 1和IL 1β的基因及蛋白表达水平增加，同时也可使细胞培养液上清液中IL 1β的含量增加；AngⅡ可通过激活NLRP3炎性小体导致心肌细胞慢性炎症的发生而导致心肌重构，参与心肌病的发生发展过程。     

150mg/L～250mg/L含氯消毒剂在MDRAB感染消杀中的应用

目的 探讨150mg/L～250mg/L含氯消毒剂在多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)感染消杀中的应用价值。方法 选取我中心收集鲍曼不动杆菌分离株34株,采取100 mg/L、150 mg/L、200 mg/L、250 mg/L四种含氯消毒剂对MDRAB作用0.5 h、1 h、2 h消毒效果。结果 4种浓度含氯消毒剂作用0.5 h及1 h、2 h对鲍曼不动杆菌多重耐药菌株杀灭率均在99.9%以上,与标准菌株无显著差异(P＞0.05)。结论 150mg/L～250mg/L含氯消毒剂作用0.5~2 h可有效杀除临床分离出来的多重耐药鲍曼不动杆菌,且杀菌效果与标准菌株间无显著差异。     

多重聚合酶链反应技术快速鉴定鲍曼不动杆菌

目的 建立快速鉴定鲍曼不动杆菌菌株的方法.方法 本研究建立多重PCR实验技术快速鉴定170株醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体以及对照组的其他菌属14株.结果 138株菌的PCR产物扩增出2条条带,为鲍曼不动杆菌,另外32株只扩增出1条条带,为醋酸钙-鲍曼不动杆菌复合体的其他基因型,对照组的菌株没有扩增出条带.结论 多重PCR技术的建立为快速鉴定鲍曼不动杆菌提供了一个快速而简便的方式.     

烧伤患者气管套管内鲍曼不动杆菌生物膜形成及特征研究

目的 观察鲍曼不动杆菌在烧伤患者气管套管(ETT)内细菌生物膜(BF)的形成过程及其特征.方法 烧伤患者ETT内壁取样(临床菌株),Vitek2快速细菌自动鉴定仪分离鉴定9株鲍曼不动杆菌且均为泛耐药菌株.临床菌株分别于体外培养12、24、48、72 h,改良微孔法进行BF半定量黏附试验;FITC-ConA/PI荧光双染色后激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察并测定成熟BF厚度;以标准菌株鲍曼不动杆菌(ATCC19606)作为对照.于ETT拔除时收集并制备套管内壁标本,扫描电子显微镜观察.结果 BF半定量黏附试验结果显示,临床菌株黏附力在体外培养24～48 h时达到高峰,且各时相点均显著大于标准菌株(P<0.05);CLSM动态观察发现,临床菌株在体外培养48 h左右形成成熟BF,其厚度均显著大于标准菌株(P<0.05);ETT内壁扫描电镜观察可见成熟BF呈团状簇集,细菌被大量胞外多糖复合物包埋并融合呈片状.结论 鲍曼不动杆菌能在烧伤患者ETT内壁形成BF,且具有成熟早、数量多、黏附能力强的特点,是烧伤后ETT相关感染的重要原因.     

杜克雷嗜血杆菌与人类树突状细胞和巨噬细胞体外的相互作用

为探讨抗原呈递细胞 (APCs)在软下疳发病机制中的作用 ,将树突状细胞 (DCs)和巨噬细胞 (MQs)与流感嗜血杆菌、杜克雷嗜血杆菌及其纯化抗原脂寡糖 (LOS)、细胞致死性肿胀毒素 (HdCDT)共育 ,测定它们的吞噬活性及6、2 4h时前炎症细胞因子TNF α、IL 1 β、IL 6、IL 8的分泌情况 ;将抗原作用后的细胞与自体CD4 + T淋巴细胞共育 ,测定T淋巴细胞增生及 48h细胞上清液中的细胞因子IFN γ、IL 4、IL 1 3的水平。结果 :约 6%～ 2 7%的DCs和 1 4%～ 2 6%的MQs吞噬杜克雷嗜血杆菌的不同菌株及无荚膜流感嗜血杆菌、大肠杆菌。杜克雷菌的不同菌株诱导DCs、MQs分泌大量的TNF α、IL 6、IL 8(P <0 .0 5 ) ;LOS诱导的前炎症细胞因子水平比细菌低 5 0 %～ 67% ;HdCDT不诱导任何前炎症细胞因子的产生。 2种细菌作用后的DCs、MQs能激活T淋巴细胞产生高水平IFN γ ,并诱导产生相似的T淋巴细胞增生 ,HdCDT无此作用。提示 :杜克雷菌能影响APCs活化T细胞的能力 ,并有助于Th1型反应。     

新鱼腥草素钠对小鼠鲍曼不动杆菌肺感染模型的保护作用

目的 构建小鼠鲍曼不动杆菌诱导的肺炎模型,观察新鱼腥草素钠对鲍曼不动杆菌肺部感染的保护作用。方法 将小鼠分为对照组、肺炎模型组、低剂量新鱼腥草素钠组和高剂量新鱼腥草素钠组。术前4 d和1 d利用环磷酰胺预处理各组C57BL/6小鼠,从术前3 d开始,低剂量新鱼腥草素钠组和高剂量新鱼腥草素钠组每天给予新鱼腥草素钠治疗,使用重症监护病房分离的鲍曼不动杆菌菌株制备新鲜菌液,通过气道接种方法接种至小鼠制备鲍曼不动杆菌肺感染模型,分别于接种后24、72 h进行小鼠肺及血液细菌计数,苏木精-伊红染色观察肺组织炎症变化,检测支气管肺泡冲洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）白细胞、中性粒细胞数量以及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的水平。结果 小鼠接种鲍曼不动杆菌后肺及血液中细菌数量增多（P＜0.05）;小鼠肺部有严重的炎性反应和组织损伤,BALF中白细胞计数升高（P＜0.05）,TNF-α、IL-1β含量增加。而经过新鱼腥草素钠治疗后,小鼠肺及血液中细菌数量显著低于肺炎模型组,肺组织损伤较轻, BALF中白细胞、中性粒细胞以及TNF-α、IL-1β水平均显著升高（P＜0.05）。结论 新鱼腥草素钠能够显著提高鲍曼不动杆菌感染小鼠的白细胞数量和活性,从而增强抗感染能力。     

非鲍曼的不动杆菌的临床分布特征及耐药机制分析

目的 分析临床分离的非鲍曼不动杆菌的临床分布特征及药敏情况;检测其金属β-内酰胺酶和整合酶基因。 方法 用K-B法对安徽省2家教学医院病房及门诊收集的各种标本分离出的非鲍曼不动杆菌进行药物敏感试验,按CLSI 2016版判断结果。用聚合酶链式反应(PCR)对其进行扩增金属β-内酰胺酶基因及Ⅰ~Ⅲ类整合子的整合酶基因,分析结果。 结果 44株非鲍曼不动杆菌(洛菲不动杆菌29株、琼氏不动杆菌9株、醋酸钙不动杆菌3株、溶血不动杆菌2株及不动杆菌基因型13TU 1株),来源于心内科、呼吸内科等临床科室,分离于痰液、尿液、分泌物及其他标本。其中3株为多药耐药菌株(2株洛菲不动杆菌及1株溶血不动杆菌),17株仅对β-内酰胺类抗生素耐药,余24株为完全敏感菌株。金属β-内酰胺酶SIM-1阳性率为20.45%(7株洛菲不动杆菌、2株琼氏不动杆菌);VIM-2阳性率为9.09%(2株洛菲不动杆菌、1株溶血不动杆菌及1株琼氏不动杆菌);IMP-4、NDM-1均未检测出。IntI-1阳性率为11.36%(3株洛菲不动杆菌、1株溶血不动杆菌及1株琼氏不动杆菌);IntI-2阳性率为13.64%(3株洛菲不动杆菌、1株溶血不动杆菌及2株琼氏不动杆菌);IntI-3未检测出。 结论 非鲍曼不动杆菌的耐药率相对较低,但已经发现多药耐药菌株;其耐药机制可能与金属β-内酰胺酶及整合酶有关。      

IntI 1基因突变致鲍曼不动杆菌耐药性丢失

目的 探究鲍曼不动杆菌耐药性丢失与基因组序列的相关性。 方法 临床分离78株鲍曼不动杆菌，按CLSI进行药敏性实验，以PCR方法对IntI 1、ADC基因进行检测，并选择部分菌株进行测序分析。 结果 78株鲍曼不动杆菌中，有3株完全不耐药，而相关基因PCR检测的阳性率均为100%。基因测序分析表明，在3株耐药性丢失的鲍曼不动杆菌中，IntI 1基因均发生DNA突变。 结论 IntI 1基因对于鲍曼不动杆菌耐药性起着重要作用，相关位点突变将导致耐药性丢失。     

鲍曼不动杆菌荚膜通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进鼠巨噬细胞自噬和凋亡

[Abstract\]Objective: To study the capability of Acinetobacter baumannii with different thickness capsules induce Raw 264.7 cell autophagy and apoptosis, and its potential mechanisms. Methods: A baumannii was isolated from the sputum of patients with pneumonia. The bacterial capsule was stained by Congo red staining, and the bacterial strains with significantly different capsule thickness were selected for subsequent study. Raw 264.7 cells were infected with thick capsular strain (Ab H strain) or thin capsular strain (Ab B strain), and the cells were harvested at 1 h, 3 h and 6 h after infection. The expression of autophagy related proteins LC 3 and Beclin 1, as well as the phosphorylation levels of PI3K, Akt and mTOR were determined by Western blotting. Flow cytometry was used to determine the reactive oxygen species(ROS) production and apoptosis rate. Results: After A. baumannii was stained with Congo red, the cells were shown purple black, the background was red, and the capsule was not stained. The bacterial capsule thickness was clearly judged. Two strains with significant differences in capsular thickness were grouped, namely thick capsular strain (Ab H strain) and thin capsular strain (Ab B strain). The expression of autophagy related protein Beclin 1 of Raw 264.7 cells induced by Ab H strain were significantly higher than that of Ab B strain (P<0.05), and the apoptosis rate of Raw 264.7 cells induced by Ab H strain was also significantly higher than that of Ab B strain (P<0.05). Two strains of A. baumannii could induce a significant increase in the production of ROS in Raw 264.7 cells (P<0.05), and the ability of Ab H strain to induce ROS production was significantly higher than that of Ab B strains (P<0.05). After Raw 264.7 cells were infected with two strains respectively, the phosphorylation levels of PI3K, Akt and mTOR were significantly inhibited, and the inhibition increased when the time prolonged (P<0.05). Conclusion: A. baumannii could induce autophagy and apoptosis of Raw 264.7 cells, and the induction ability is positively correlated with bacterial capsule thickness. A. baumannii with thick capsule has a stronger ability to induce ROS production in Raw 264.7 cells and inhibit the activation of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway, which ultimately enhances autophagy and apoptosis of Raw 264.7 cells.     

NLRC4在具核梭杆菌诱导巨噬细胞焦亡中发挥调控作用

目的 探讨具核梭杆菌感染引起巨噬细胞焦亡的作用及机制。方法 巨噬细胞RAW264.7与具核梭杆菌共同培养,设置未感染组和具核梭杆菌感染组（以MOI和感染时间设置梯度）。乳酸脱氢酶和荧光双染检测细胞坏死率;Western blot检测焦亡相关蛋白caspase-1、GSDMD和IL-1β的活化情况;qRT-PCR分析NLRP3、NLRC4、AIM2、NLRP1炎症小体激活情况,采用siRNA敲低可能参与调控的关键分子,分为siRNA敲低组与阴性对照组,比较两组细胞在具核梭杆菌感染时的焦亡和坏死率,验证其调控作用。结果 具核梭杆菌感染组的细胞肿胀破碎、胞内出现空泡,乳酸脱氢酶释放增加,PI阳性细胞数增多,坏死率升高（P<0.05）;Western blot结果显示caspase-1、GSDMD和IL-1β被活化且呈MOI和时间依赖性升高（P<0.05）;qRT-PCR筛选出NLRC4可能参与调控,siRNA敲低NLRC4可抑制具核梭杆菌引起的caspase-1/GSDMD通路的激活,减少细胞坏死率和炎症因子IL-1β的表达（P<0.05）。结论 具核梭杆菌感染能够诱导巨噬细胞RAW264.7经caspase-1/GSDMD信号通路发生焦亡并释放炎症因子,且NLRC4炎症小体发挥关键的调控作用。     

NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞EMT中的作用

目的:观察NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞上皮间质转化(EMT)中的作用.方法:以小鼠肾小管上皮细胞为研究对象,高糖处理24 h后,采用real-time PCR法检测细胞表型标志分子(E钙粘素和α-SMA)和NLRP3炎症小体mRNA的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β含量.采用NLRP3炎症小体特异性抑制剂MCC950探讨NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞ETM中的作用.结果:高糖处理24 h可降低小鼠肾小管上皮细胞E钙粘素mRNA表达,上调α-SMA mRNA表达;同时上调NLRP3、pro-IL-1β和pro-caspase-1 mRNA表达,以及IL-1β分泌;抑制NLRP3炎症小体可部分逆转高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞EMT.结论:高糖应激可能通过激活NLRP3炎症小体促进IL-1β分泌诱导肾小管上皮细胞发生EMT.     

抑制线粒体活性氧自由基可减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡和铁死亡

目的 探讨抑制线粒体氧化应激和炎症小体减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞焦亡和铁死亡的作用,分析线粒体活性氧自由基（ROS）和炎症小体之间可能的上下游关系。方法 将H9C2心肌细胞按照随机数字表法随机分为5组。正常对照组（CON）：含25 mmol/L浓度葡萄糖的DMEM完全培养基;高糖损伤组（HG）：含35 mmol/L浓度的高糖完全培养基;高糖+线粒体抗氧化剂Mitoquinone（MitoQ）组（HG+MitoQ）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为0.5 μmol/mL的MitoQ;高糖+ NLRP3抑制剂MCC950组（HG+MCC950）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950;高糖组+MCC950+线粒体电子传递抑制剂Rotenone（ROT）组（HG+MCC950+ROT）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950和0.5 μmol/mL的ROT。各组心肌细胞干预24 h后,CCK-8法测定细胞活性;CellRox和MitoSox荧光探针分别测定心肌细胞内和线粒体氧化应激水平变化;免疫荧光法检测细胞内NLRP3炎症小体水平;Western blot检测心肌细胞中NLRP3、GSDMD和Cleaved-GSDMD（GSDMD-NT）等焦亡相关重要因子的蛋白表达和铁死亡相关因子GPX4蛋白表达。结果 与CON组相比,HG组细胞活性明显下降（P<0.01）,心肌细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及焦亡相关因子NLRP3,GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达（P<0.01）均明显升高,铁死亡相关因子GPX4蛋白表达下降（P<0.01）。与HG组相比,HG+MitoQ和HG+MCC950组细胞活性明显升高（P<0.01）,细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及 NLRP3、GSDMD 和 GSDMD-NT 的蛋白表达明显降低（P<0.05）,GPX4 蛋白表达增高（P<0.01）。与HG组相比,HG+MCC950+ROT组细胞活性和NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达无明显差异（P>0.05）;但与HG+MCC950组相比,HG+MCC950+ROT组细胞活性明显降低（P<0.01）,ROS荧光强度、NLRP3炎症小体免疫荧光以及NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达均明显升高,GPX4蛋白表达降低（P<0.05）。结论 MitoQ直接抑制线粒体ROS的产生减轻了高糖诱导的心肌细胞NLRP3炎症小体的生成,减少焦亡和铁死亡的发生;抑制NLRP3炎症小体减少线粒体ROS的产生;线粒体ROS和NLRP3之间可能存在着相互影响。     

NLRP3炎症小体介导血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉血管内皮细胞炎症因子IL-1β的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）NLPR3 炎症小体激活与炎症因子白介素-1β （IL-1β）表达的影响。方法体外培养HUVECs,用AngⅡ的不同浓度和刺激时间刺激HUVECs,找到最适合的AngⅡ刺激浓度 与时间。AngⅡ刺激HUVECs前,预用AngⅡ受体阻断剂氯沙坦阻断AngⅡ作用;NAD（P）H抑制剂DPI或H2O2清除剂CAT降 低胞内活性氧（ROS）含量;用caspase-1抑制剂YVAD阻断caspase-1作用;用NLRP3 siRNA沉默胞内NLRP3表达。运用蛋白 印迹法（western blot）分别检测细胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β含量。结果（1）HUVECs在浓度10-9MAngⅡ刺激 12 h后,胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β的蛋白表达显著增加;（2）氯沙坦、DPI、CAT、YVAD和NLRP3 siRNA都可减 轻AngⅡ诱导的上述反应。结论AngⅡ通过促进HUVECs活性氧生成,激活NLRP3炎症小体,促进胞内炎症介质IL-1β P17活 性片段生成增加,诱导血管炎症的发生。     

WP1130通过抑制NLRP3炎症小体活化缓解小鼠的感染性休克

目的 探究小分子化合物WP1130抑制NLRP3炎症小体活化并缓解感染性休克的作用机制。方法 细胞生物学水平：WP1130预处理小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）或人THP-1细胞后,利用多种NLRP3炎症小体活化剂（Nigericin、ATP、MSU、胞内LPS转染）活化NLRP3炎症小体,使用poly A:T活化AIM2炎症小体,通过Western blot和ELISA检测细胞培养上清中caspase-1和IL-1β的分泌水平,确定WP1130对NLRP3炎症小体的抑制效果及其特异性。利用激光共聚焦显微镜观察Nigericin诱导的线粒体损伤情况,探究WP1130是否影响NLRP3炎症小体组装活化的上游信号。动物水平：将SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,即空白对照组（Control组）、感染性休克组（LPS组）、WP1130治疗组（WP1130+LPS组）,ELISA检测小鼠血清和腹腔液中IL-1β、TNF-α的分泌水平。结果 WP1130可剂量依赖性的抑制多种激动剂诱导的NLRP3炎症小体活化（P<0.05）,但对非炎症小体相关炎性因子IL-6、TNF-α的分泌无显著影响（P>0.05）。此外,WP1130对AIM2炎症小体的活化无显著影响（P>0.05）。机制研究表明,WP1130并不影响NLRP3炎症小体组装活化的上游信号线粒体损伤。动物实验结果表明,相较感染性休克组（LPS组）,WP1130治疗组（WP1130+LPS组）小鼠血清和腹腔液中IL-1β的水平显著降低（P<0.05）,而TNF-α的分泌水平无统计学差异（P>0.05）。结论 WP1130能够特异性抑制NLRP3炎症小体活化并缓解LPS诱导的小鼠感染性休克。     

可溶性尿酸通过下调UCP2蛋白激活心肌细胞中NLRP3炎性小体的实验研究

目的 观察尿酸处理下大鼠心肌细胞系H9C2的损伤和NLRP3炎性小体的活化情况,探讨可溶性尿酸活化NLRP3炎性小体的机制。 方法 采用不同质量浓度的尿酸处理H9C2 12 h、24 h和48 h,通过MTS和乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞活力,以反映细胞损伤情况,同时采用流式细胞术（FCM）分析H9C2凋亡情况。通过Western blot检测NLRP3炎性小体相关分子[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和Caspase-1]的蛋白水平。分离线粒体和胞质,Western blot检测细胞色素C的释放情况,评价线粒体损伤情况。MTS和LDH检测活性氧（ROS）抑制剂N-乙酰基-L-半胱氨酸（NAC）对细胞活力的影响,real time-PCR及Western blot检测NAC对NLRP3炎性小体活化的改善情况。最后采用Western blot和免疫荧光检测解偶联蛋白2（UCP2）蛋白的表达。 结果 随着尿酸浓度的增加,细胞损伤和凋亡加剧,且具有时间依赖性;尿酸可上调NLRP3炎性小体相关分子的表达,并导致线粒体受损;NAC可改善细胞损伤并抑制NLRP3炎性小体相关mRNA和蛋白的活化;尿酸还可下调UCP2的表达。 结论 尿酸下调UCP2蛋白的表达,诱导线粒体损伤,激活NLRP3炎性小体,导致心肌细胞损伤。     

金欣口服液对呼吸道合胞病毒感染的肺巨噬细胞及BALB/c小鼠IL-1β表达的调控作用

[目的]探讨金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染肺巨噬细胞(Raw264.7)及BALB/c小鼠白介素-1β(IL-1β)表达的调控作用。[方法]体外实验:培养Raw264.7细胞,共分4组(n=6),分别是正常细胞组,RSV感染模型组,利巴韦林注射液组,金欣口服液组。进行含药血清干预,收集24h的上清以酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组IL-1β的含量;体内实验:分为A组(感染前高剂量及等效剂量给药)、B组(感染前感染后高剂量及等效剂量给药)、C组(感染后高剂量及等效剂量给药)三大组,观察金欣口服液不同剂量、不同给药时间对RSV感染BALB/c小鼠24h、72h、144h时IL-1β表达的调控作用。[结果]RSV感染Raw264.7细胞后24h上清中未检测到IL-1β的表达。其中RSV感染BALB/c小鼠24h后IL-1β的表达量显著增加,A组中金欣口服液高预防组和等效预防组均能下调其表达且以等效预防组的下调作用明显;RSV感染BALB/c小鼠72h后IL-1β的表达量也显著增加,但较RSV感染24h时的表达量稍有减少,B组中金欣高预防组和治疗组IL-1β的表达均下调;RSV感染BALB/c小鼠144h后IL-1β的表达量显著减少,而C组中的金欣治疗组均能上调其表达。[结论]金欣口服液预防和治疗组在RSV感染BALB/c小鼠早期能显著下调其表达,防止机体因过度免疫而致肺损伤,随着感染时间持续延长IL-1β的表达开始急剧下降,而金欣口服液又能将其恢复到合适的水平,以增强机体的免疫力。     

NLRP3的炎性反应在2型糖尿病中的作用

白细胞介素1β(IL-1β)、活性氧和硫氧还原蛋白相互作用蛋白(TXNIP)都与2型糖尿病的发病机制有关.其中IL-1β的产生及其在慢性高血糖时胰岛功能障碍中的发病机制尤为重要.为了使2型糖尿病患者中IL-1β、活性氧、TXNIP完全不同的驱动机制成为一个统一的模式,NLRP3的炎性反应起了核心作用,所以NLRP3炎性...     

shRNA干扰NLRP3对晚期糖基化终末产物诱导的心肌细胞炎症反应的影响

目的  探讨沉默NOD 样受体家族pyrin域3 (NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3, NLRP3)炎性小体对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)诱导的心肌细胞损伤的调节作用及机制。 方法  H9c2心肌细胞分为4组:对照组、 AGEs组、AGEs+sh-Ctrl组、 AGEs+sh-NLRP3组,后两组细胞首先将短发夹RNA（shRNA）对照（sh-Ctrl）和shRNA干扰NLRP3（sh-NLRP3）质粒分别转染入H9c2细胞,然后后3组细胞用100 mg/L AGEs处理24 h,建立H9c2损伤模型,对照组细胞用溶剂处理24 h。Western blot检测NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC)、 Caspase-3、 Caspase-9、核转录因子κB(nuclear factor κB, NF-κB) P65和磷酸化P65（p-P65）的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-18和IL-1β的水平,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光染色检测细胞核中NF-κB P65的水平。结果  AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组NLRP3、 ASC、Caspase-3和Caspase-9的表达均高于对照组( P<0.05)。与AGEs组相比,AGEs+sh-NLRP3组NLRP3、ASC、Caspase-3和Caspase-9的表达均下降( P<0.05)。与对照组相比,AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组IL-6、IL-18、IL-1β水平升高,细胞凋亡率上升(P<0.05)。AGEs+sh-NLRP3组IL-6、IL-18、IL-1β水平和细胞凋亡率低于AGEs组( P<0.05)。AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组NF-κB P65磷酸化水平及细胞核的NF-κB P65水平高于对照组(P<0.05)。与AGEs组相比,AGEs+sh-NLRP3组NF-κB P65磷酸化水平及细胞核的NF-κB P65水平降低( P<0.05)。结论  沉默NLRP3可通过抑制NF-κB P65的活化减轻AGEs诱导的心肌细胞凋亡及炎症反应。