豚鼠发育过程前庭上皮ERK 1/2的表达

目的：检测胞外信号调控蛋白激酶1/2（extracellu-lar signal regulated kinase，ERK1/2）在豚鼠发育过程前庭上皮的表达和分布特点，并探讨其生物学特征及意义。方法：利用免疫组织化学的方法，以ERK1，ERK2抗体为标记物，检测发育期豚鼠前庭器中的表达情况及分布特点；利用West-ern bolt方法检测ERK1/2的活性变化。结果：ERK1/2可在豚鼠前庭上皮细胞中表达，随年龄增加而逐渐减少。ERK1/2的活性随年龄的增长而逐渐降低，且ERK2的活性高于ERK1。结论：正常豚鼠前庭上皮中有ERK1/2表达，其表达量及活性与细胞增殖、分化相一致，随发育过程而减少。     

慢性庆大霉素损伤后豚鼠前庭感觉上皮蛋白激酶C表达和活性

目的 研究庆大霉素慢性损伤后豚鼠前庭终器蛋白激酶C（PKC）活性的变化及其βⅠ，βⅡ，γ亚型的表达，探讨PKC与前庭损伤修复的关系。方法 采用免疫细胞化学法观察椭圆囊斑、球囊斑和壶腹嵴PKCβⅠ，Ⅱ，γ亚型的表达；应用γ－^32P示踪检测前庭终器PKC活性的变化。结果 PKCβⅠ，Ⅱ，γ亚型在前庭感觉上皮细胞均呈阳性表达，上皮下结缔组织呈阴性表达，βⅡ，γ亚型较βⅠ亚型表达稍弱，不同亚型抗原分布不安全相同，与对照组相比，PKCβⅠ，γ在停止注射庆大霉素后1d其表达明显减弱，随后其表达逐渐增加，至1wk其表达已高于对照组，3wk仍未恢复，PKCβⅡ表达各组变化不明显。豚鼠前庭终器PKC活性检测结果与PKCβⅠ，γ表达变化规律基本相似。结论 庆大霉素慢性中毒后逐鼠前庭感觉上皮PKCβⅠ，γ亚型表达及PKC活性均发生变化，且不同亚型抗原分布不安全相同，提示PKC在前庭感觉上皮损伤修复过程中发挥重要作用，不同亚型可能具有不同的作用。     

庆大霉素耳中毒后鸡前庭感觉上皮细胞再生的实验研究

为探讨氨基糖甙类药物损伤后，鸡前庭感觉上皮细胞是否与听觉毛细胞一样具有再生能力，按每ｄ６０ｍｇ／ｋｇ剂量给鸡肌注庆大霉素，共１０ｄ。然后，分别于庆大霉素注射结束后第１、７ｄ，经腹腔注射细胞增殖标记物５－溴脱氧尿核苷（５－ｂｒｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ，ＢｒｄＵ），６ｈ后处死动物，取颞骨制备石蜡切片，应用免疫细胞化学染色技术，观察损伤后前庭感觉上皮中的细胞增殖活动。结果发现：椭圆囊斑、球囊斑及壶腹嵴上均可见标记阳性细胞。从标记细胞核的解剖位置来看，标记支持细胞及标记毛细胞均可见。显示鸟纲动物前庭感觉上皮细胞具有较强的对抗病理损伤的再生修复能力     

人参皂苷Rg1对脑挫伤后大鼠脑内胰岛素样生长因子1表达的影响

目的：探讨人参皂苷Rg1对脑组织挫伤后大鼠脑中胰岛素样生长因子1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）表达的影响。方法：Wistar大鼠26只，分为正常对照组（2只），脑挫伤模型组（8只）及人参皂苷Rg1治疗组（16只），在损伤后不同时间点（损伤后6h、12h、2d及6d）分别处死大鼠，使用免疫组化方法观察并检测脑中IGF-1的表达。结果：与对照组相比，脑挫伤模型组损伤后各时间点脑组织中IGF-1的表达有所升高（P〈0．05）；与模型组比较，人参皂苷Rg1治疗组IGF-1的表达明显升高（P％0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过促进脑挫伤后脑组织IGF-1的表达，促进脑组织的功能恢复。     

人参皂苷Rg1对脑挫伤后大鼠脑内胰岛素样生长因子1表达的影响

目的：探讨人参皂苷Rg1对脑组织挫伤后大鼠脑中胰岛素样生长因子1（insulin—like growth factor-1，IGF-1）表达的影响。方法：Wistar大鼠26只，分为正常对照组（2只），脑挫伤模型组（8只）及人参皂苷Rg1治疗组（16只），在损伤后不同时间点（损伤后6h、12h、2d及6d）分别处死大鼠，使用免疫组化方法观察并检测脑中IGF-1的表达。结果：与对照组相比，脑挫伤模型组损伤后各时间点脑组织中IGF-1的表达有所升高（P〈0．05）；与模型组比较，人参皂苷Rg1治疗组IGF-1的表达明显升高（P％0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过促进脑挫伤后脑组织IGF-1的表达，促进脑组织的功能恢复。     

碱性成纤维细胞生长因子及成纤维细胞生长因子受体在豚鼠前 …

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）及成纤维细胞生长因子受体（ＦＧＦＲ）在豚鼠前庭终器的定位和表达。方法：免疫组织化学。结果：ｂＦＧＦ位于支持细胞和毛细胞的胞浆及胞核，ＦＧＦＲ位于支持细胞表面。ｂＦＧＦ及ＦＧＦＲ在成年豚鼠表达较弱，新生豚鼠及庆大霉素内耳损伤豚鼠表达较强。结论：提示ｂＦＧＦ在豚鼠前庭终器发育、结构功能维持及损害及修复中起重要作用。     

一氧化氮参与前庭代偿机制

目的 探讨一侧耳前庭功能丧失后,一氧化氮(NO)在中枢代偿机制中的作用。方法 将18只豚鼠双侧耳后造瘘,然后随机分为2组：a组6只,为对照组,给予左耳滴人生理盐水;b组12只,为实验组,给予左耳连续滴入庆大霉素。在5、10d时,两组各取一半动物处死,然后取听泡、脑干做冰冻切片进行免疫组织化学反应。结果a组豚鼠双侧壶腹嵴、前庭神经核皆有一氧化氮合酶(NOS)阳性表达。b组豚鼠5d后,右侧壶腹嵴、前庭神经核为NOS阳性,左侧皆为阴性;10d时,右侧壶腹嵴为NOS阳性,双侧前庭神经核、左侧壶腹嵴为NOS阴性。结论当一侧前庭损伤,对侧前庭神经核NOS表达的改变,可能是前庭代偿机制之一。     

AIF和PARP-1在庆大霉素致前庭毛细胞凋亡中的作用

目的 探讨凋亡诱导因子(AIF)和聚(ADP-核糖)聚合酶1(PARP-1)在庆大霉素损伤致前庭毛细胞凋亡中的作用及机制.方法 取出生后3 ～4d的大鼠球囊斑和椭圆囊斑行离体前庭器官培养,经培养过夜后再用2 mg/mL庆大霉素培养液继续培养72h.用流式细胞术检测前庭毛细胞凋亡,RT-PCR法检测AIF和PARP-1基因表达情况,Western blotting法分别检测AIF线粒体蛋白和胞浆蛋白的表达,Western blotting法检测PARP-1蛋白表达.结果 流式细胞术结果显示庆大霉素组前庭毛细胞凋亡率较对照组显著增加.RT-PCR显示庆大霉素损伤组AIF和PARP-1表达明显增加.Western blotting结果显示庆大霉素损伤组线粒体蛋白表达降低,而胞浆蛋白表达升高.庆大霉素损伤组PARP-1蛋白表达增加.结论 AIF介导的非Caspase依赖途径参与了庆大霉素损伤导致前庭毛细胞凋亡,PARP-1可能参与了AIF通路的激活.     

胎儿骨髓间充质干细胞EGF受体或IGF受体的表达与其向上皮细胞分化的关系

目的：观察骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）表达表皮生长因子受体（Epidermal growth factor-receptors,EGF-R）和胰岛素样生长因子1 受体（Insulin-like growth factor-1-receptors,IGF-1-R）与其向上皮细胞分化分化的关系。方法：取第3代（P3）-BMSCs分别用或不用含EGF、IGF-1的介质诱导培养;另取P5-BMSCs用EGF-R抗体或IGF-1-R抗体孵育4 h后,加入含或不含EGF、IGF-1的培养基培养。免疫组织化学SP法检测各组细胞表达EGF-R、IGF-1-R和细胞角蛋白（Cytokeratin,CK）的时间。结果：P3-BMSCs分别于无诱导培养的8 ～11 d、10～14 d和16～18 d首次表达EGF-R,IGF-1-R和CK;经EGF或IGF-1诱导后,EGF-R、IGF-1-R的表达较无诱导组提前2～4 d。P5-BMSCs经抗EGF-R或IGF-1-R抗体阻滞后,细胞表达CK的时间较对照晚2 d。结论：EGF-R和IGF-1-R的表达与培养的BMSCs向上皮细胞分化密切相关;体外培养的P4-BMSCs～P5-BMSCs为加入外源性EGF、IGF-1诱导其向上皮细胞分化的最佳时间点。     

细胞因子IGF-1及IGF-1R在不同程度肝纤维化的表达

目的：对不同程度慢性乙型肝炎病人肝脏组织中IGF-1及IGF—1R表达进行免疫组织化学法，探讨IGF—1及IGF—1R在肝纤维化不同程度的表达及分布。探讨细胞因子IGF-1及IGF-1R在肝纤维化形成中的作用，明确肝纤维化成因。方法：选择52例不同程度肝纤维化组织标本。采用免疫组化方法检测各个标本IGF-1及IGF-1R的表达及分布进行定位度半定量研究。结果：IGF-1阳性细胞主要定位于肝星状细胞及枯否细胞胞浆，阳性产物呈棕黄色，未见细胞核着色。IGF—1R的分布与IGF-1类似。IGF-1随着病理损伤的加重而逐渐增加，S3期和S4期IGF-1水平明显高于S3期，与肝脏病理炎症程度呈正相关。IGF—1R的表达与IGF—1呈类似趋势。结论：在慢性肝炎肝组织中有IGF-1及IGF—1R的阳性表达。IGF-1及IGF-1R在肝组织内的表达强度与肝纤维化程度呈正相关。     

血清一氧化氮变化对豚鼠庆大霉素耳毒性作用影响的实验研究

目的:探讨豚鼠血清一氧化氮变化在药物性耳聋过程中的作用机制. 方法:24只健康豚鼠随机均分为正常组、庆大霉素组、庆大霉素加L.精氨酸(全程)组和庆大霉素加L一精氨酸(半程)组.观察各种豚鼠血清中一氧化氮、听觉脑干反应、内耳外毛细胞的形态学变化. 结果:庆大霉素组血清中一氧化氮与正常组差异无统计学意义(P＞0.05);L-精氨酸全程组和半程组治疗后血清中一氧化氮高于正常组和庆大霉素组(P＜0.05～P＜0.01).L一精氨酸组ABR反应阈较庆大霉素组降低(P＜0.05).L-精氨酸组内耳外毛细胞仅有散在损失. 结论:一氧化氮一定量升高对内耳毛细胞有细胞毒性作用,进一步升高则对外毛细胞有保护作用.L-精氨酸治疗能降低ABR阈值,减少外毛细胞损害,对耳蜗有保护作用.     

胚胎期豚鼠前庭终器细胞凋亡的检测

目的 研究豚鼠胚胎正常期前庭终器形态变化及细胞凋亡，探讨细胞凋亡在前庭终器发育中的作用。方法 选用胚胎40和50d正常豚鼠，光镜观察基前庭终器发育形态变化，末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）测定毛细胞和支持细胞凋亡，并以电镜观察凋亡细胞胞核变化。结果 胚胎40d，豚鼠前庭壶腹、椭圆囊斑及球囊斑已分化，前庭上皮出现一层毛细胞及多层支持细胞；胚胎50d，支持细胞层数减少，毛细胞数目增加，伴有神经纤维出现。TUNEL检测提示大量毛细胞和支持细胞发生凋亡。电镜下前庭上皮细胞发生分化，凋亡的毛细胞和支持细胞胞核染色质浓缩边集。凋亡细胞与新生细胞相邻。结论 细胞凋亡是豚鼠内耳前庭终发育的必然现象，凋亡的发生对保证内耳正常结构和功能密切相关。     

60Co照射后豚鼠内耳前庭终器毛细胞损伤及凋亡的实验研究

目的:探讨60 Co照射后豚鼠内耳前庭终器损伤与caspase-3、bax及bcl-2表达的关系及照射后前庭功能的损伤情况。方法:将白化豚鼠40只随机分为正常对照组和照射组(1,4,14,30d组),每组8只。照射组豚鼠右耳颞部做一次性60 Coγ射线照射40Gy。分别于照射前、照射后1,4,14d及30d行冰水试验后处死,取出听泡,行前庭终器切片、HE染色、免疫组化染色,并分离囊斑及壶腹嵴,行超薄切片透射电镜检查。结果:冰水试验照射组眼震时间较对照组缩短,差异有统计学意义(P<0.05),照射后30d组眼震时间较其他照射组长,差异有统计学意义(P<0.05)。照射组豚鼠的囊斑较对照组感觉上皮层厚度变薄,毛细胞数量减少,纤毛变短、减少,照射组壶腹嵴耳石层消失,纤毛消失。透射电镜显示,照射后各组的囊斑及壶腹嵴均可见受损的毛细胞,受损毛细胞线粒体肿胀,以30d为明显,线粒体嵴变短减少并且发生断裂。照射后各组囊斑caspase-3、bax、bcl-2表达较对照组增强,差异有统计学意义(P<0.05)。照射后30d组囊斑、壶腹嵴caspase-3表达强度较其他对照组减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。照射后4d组囊斑、壶腹嵴bax表达上调程度较bcl-2表达上调程度强,差异有统计学意义(P<0.05),bax/bcl-2上升。照射后30d组囊斑、壶腹嵴bcl-2的上调程度较bax表达上调程度强,差异有统计学意义(P<0.05),bax/bcl-2下降。结论:凋亡相关蛋白caspase-3的表达上调及bax、bcl-2的不均衡表达上调可能在60 Coγ射线造成的前庭损伤中起重要作用。     

IGF-1及IGF-1R在SD大鼠前列腺组织中的表达

目的 研究不同饮食和丙酸睾酮对SD大鼠前列腺组织的改变及胰岛素生长因子( IGF)-1、IGF-1R 的表达强度. 方法 采用高脂高糖饲料饮食及去势后皮下注射丙酸睾酮建造前列腺增生模型,40 d后处死大鼠;取出前列腺组织,称重并HE染色观察前列腺增生情况;用免疫组化法检测前列腺组织中IGF-1、IGF-1R的表达强度. 结果 高脂高糖饮食组前列腺组织增生,IGF-1、IGF-1R的表达强度均高于普通饮食组(P<0. 05);去势+低剂量丙酸睾酮皮下注射组前列腺组织明显增生,IGF-1、IGF-1R的表达强度明显增加(P<0. 05). 结论 高脂高糖饮食及低剂量丙酸睾酮均可促进大鼠前列腺组织的增生,IGF-1、IGF-1R与前列腺增生的发展呈正相关性.     

哮喘豚鼠气道内NK-1R mRNA表达及其含量的研究

目的:研究哮喘豚鼠气道内神经激肽1受体(NK-1R)mRNA的分布及相对含量.方法:用卵蛋白超声雾化法制作哮喘豚鼠模型;原位杂交技术检测NK-1R mRNA,光镜观察其在气道内表达的部位.图像分析测定NK-1R mRNA的相对含量.结果:哮喘组NK-1R mRNA表达程度明显高于正常组;NK-1RmRNA分布于气管上皮细胞上层细胞表面、黏膜下层、血管周围上皮细胞、炎性细胞的表面和平滑肌细胞、腺体细胞表面.结论:NK-1R参与了卵蛋白诱导的哮喘豚鼠发病机制.     

鼓阶开窗微孔技术注入胰岛素样生长因子-1对庆大霉素致聋豚鼠的治疗作用

目的 探讨通过鼓阶开窗,微孔技术注胰岛素样生长因子-1(IGF-1)入内耳鼓阶,研究IGF-1对感音神经性聋动物模型(庆大霉索致耳聋豚鼠)的治疗作用.方法 豚鼠20只,施用庆大霉素致耳聋后均分为IGF-1组和对照组,行鼓阶开窗术,微孔技术注入试剂(IGF-1组注入鼠重组IGF-1,对照组注入人工生理外淋巴液)10μl,分别在术前和术后7、14 d行ABR测试;测试完后每组3只断头取听泡,在扫描电镜下观察耳蜗毛细胞改变.结果 IGF-1组ABR反应阈(RT)术后7、14 d均比术前有显著降低;IGF-1组比对照组RT在术后14 d有显著降低.扫描电镜发现对照组较IGF-1组毛细胞受损严重;同时,IGF-1组受损毛细胞表面有指状微绒毛生长.结论 微孔技术注入IGF-1可以改善豚鼠受损听力,减轻庆大霉素耳毒性的继续损伤,其机制可能为减轻耳蜗毛细胞的损伤并修复部分毛细胞,同时保护传人神经.     

哮喘豚鼠气道上皮细胞Fas、NOS-2的表达

目的 :检测哮喘豚鼠气道上皮细胞Fas、NOS 2的表达 ,评价两者在哮喘发病机制中的作用。方法 :2 4只豚鼠随机分为 3组 :①哮喘组。用 10 %卵白蛋白 1ml腹腔注射致敏 ,2周后 ,用 1%卵蛋白超声雾化吸入 ,连续激发10次 ,复制豚鼠哮喘模型。②地塞米松 (Dxm)处理哮喘组。诱喘同哮喘组 ,在每次激发前 5min腹腔注射Dxm 0 .5mg/kg。③正常对照组。用生理盐水代替诱喘剂。应用免疫组化方法 (SP法 )检测气道上皮细胞Fas、NOS 2的表达。结果 :哮喘组豚鼠气道上皮细胞Fas的表达上调 [0 .2 2 37± 0 .0 32 4 ,与正常组 (0 .16 6 6± 0 .0 2 86 ) ,P <0 .0 0 1];Dxm促进Fas的表达 (0 .2 4 19± 0 .0 36 2 ,与正常组相比 ,P <0 .0 0 1;但与哮喘组相比 ,差别无显著性 ) ;正常对照组有较少的阳性表达。哮喘组豚鼠气道上皮细胞NOS 2的表达明显上调 (0 .2 5 6 7± 0 .0 345 ) ,Dxm组阳性信号稍弱 (0 .2 318± 0 .0 2 2 9) ,正常对照组有较少的阳性表达 (0 .182 9± 0 .0 2 5 9)。但哮喘组与Dxm组之间差别无显著性 (P >0 .0 5 )。哮喘豚鼠气道上皮细胞NOS 2、Fas的改变呈总体正相关 (r =0 .789,P <0 .0 1)。结论 :NOS 2为上皮损伤性因素 ,Fas可能为修复性因素。两者表达的同时上调说明气道上皮的损伤与修复同时进行     

IGF-1R对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞合成HA的影响及其作用机制

目的 探讨胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）对甲状腺相关眼病（TAO）眼眶成纤维细胞合成透明质酸（HA）的影响及其作用的信号通路。方法 体外培养19例（23只眼）TAO患者（TAO组）及5例（5只眼）正常对照（对照组）眼眶成纤维细胞,并采用免疫荧光染色进行鉴定;细胞培养液中分别加入不同浓度重组人IGF1,ELISA检测细胞培养上清液中HA质量浓度;细胞培养液中分别加入IGF1受体阻断剂1H7、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）阻断剂LY294002或蛋白激酶B(PKB)抑制剂（即Akt抑制剂）Ⅳ对细胞进行预处理,再加入重组人IGF1,ELISA检测培养上清液中HA质量浓度,Western blot检测PI3K、Akt及pAkt蛋白表达情况。结果 TAO组HA质量浓度在重组人IGF1 0~5 nmol/L处理时逐渐增加,在IGF1 10 nmol/L时达到最大值,随后在IGF1 20~50 nmol/L时出现波动。与正常对照组相比,0~50 nmol/L重组人IGF1处理的TAO组HA质量浓度均增高,差异有统计学意义（ P<0.01）。IGF1受体阻断剂1H7和Akt抑制剂Ⅳ对细胞预处理后,再加入重组人IGF1,其细胞培养上清液中的HA质量浓度较对照组降低,差异有统计学意义（ P<0.01）,PI3K阻断剂LY294002预处理后,细胞培养上清液中HA质量浓度约有降低,但差异无统计学意义（ P=0.390）。与空白对照组相比,IGF1处理组细胞pAkt蛋白表达水平升高,而对PI3K和总Akt蛋白表达无明显影响;1H7和LY294002可降低PI3K及pAkt蛋白的表达水平,对总Akt蛋白表达的抑制作用不明显;Akt抑制剂Ⅳ处理组,PI3K、Akt及pAkt蛋白表达水平均较对照组明显降低。结论 TAO患者眼眶成纤维细胞合成HA增加,IGF1能促进HA合成,且这种促进作用部分通过PI3K/Akt信号通路实现。     

庆大霉素对豚鼠耳蜗琥珀酸脱氢酶的影响

目的观察庆大霉素（ＧＥ）对耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）的影响。方法用组织化学染色方法,观察ＧＥ引起的豚鼠耳蜗毛细胞ＳＤＨ的变化。结果正常豚鼠耳蜗内毛细胞的ＳＤＨ呈深蓝色染色,显示毛细胞排列形式;ＧＥ耳中毒豚鼠耳蜗毛细胞内的ＳＤＨ显示变淡,甚至消失,毛细胞破坏显著。结论实验结果表明,ＧＥ引起的耳蜗毛细胞的损坏与线粒体呼吸酶活性变化有关,可能由于呼吸酶活性降低,导致细胞供能障碍,最终引起毛细胞的坏死