大株红景天对心肌细胞缺糖缺氧损伤的作用及机制研究

目的:研究大株红景天对心肌细胞缺糖缺氧(OGD/R)损伤的保护作用及机制,探讨其与Akt/Nrf2信号通路的关系。方法:以大株红景天对氧化损伤心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响为评价指标,研究大株红景天对OGD/R心肌细胞的保护作用,利用PI3K抑制剂联合药物处理细胞,Western blot法检测细胞中p-Akt、Akt、Nrf-2、HO-1蛋白的表达。结果:与模型组相比,大株红景天100μg/ml组能明显降低OGD/R损伤心肌细胞LDH漏出、MDA含量、NO含量,显著升高SOD活性和细胞存活率,同时上调缺糖缺氧诱导的p-Akt、Nrf-2、HO-1蛋白表达的升高,并能够被PI3K信号通路抑制剂抑制。结论:大株红景天对OGD/R损伤的H9C2细胞损伤具有显著的抑制作用,其作用机制可能与激活Akt/Nrf2信号通路有关。     

CXC型趋化因子和外周血单核细胞Toll样受体/髓样分化因子88/核转录因子κB信号通路的影响

目的 观察清心解瘀方治疗冠心病心绞痛的临床疗效及对患者心功能、CXC型趋化因子和外周血单核细胞(PBMC) Toll样受体(TLRs)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法 将126例冠心病心绞痛患者按照随机数字表法分为2组。对照组63例予常规西医治疗,治疗组63例在对照组治疗基础上加服清心解瘀方治疗。疗程均为8周。比较2组治疗前后心功能指标[心输出量(CO)、每搏输出量(SV)、心脏指数(CI)、左室射血分数(LVEF)]、CXC型趋化因子[CXC趋化因子配体10(CXCL10)、CXCL12、CXCL16]、TLRs/MyD88/NF-κB信号通路相关指标[Toll样受体2 (TLR2)、TLR4、NF-κB、MyD88]水平。结果 治疗组疗效优于对照组(P 0. 05)。治疗后2组CO、SV、CI、LVEF水平均较本组治疗前升高(P 0. 05),且治疗后治疗组均高于对照组(P 0. 05)。治疗后2组CXCL10、CXCL12、CXCL16水平均较本组治疗前降低(P 0. 05),且治疗后治疗组均低于对照组(P 0. 05)。治疗后2组TLR2、TLR4、NF-κB阳性表达率、MyD88平均荧光强度均较本组治疗前降低(P 0. 05),且治疗后治疗组均低于对照组(P 0. 05)。结论 采用清心解瘀方治疗冠心病心绞痛患者,有利于心功能的恢复,改善CXC型趋化因子水平,抑制CD14+PBMC TLRs/MyD88/NF-κB信号通路激活,治疗效果佳,值得临床应用。     

苦碟子注射液对氧糖剥夺/复氧损伤大鼠C6胶质细胞IκBα/NF-κB蛋白的调节作用

目的研究苦碟子注射液对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤大鼠C6胶质细胞的保护作用及对IκBα/NF-κB蛋白活化的影响。方法将C6胶质细胞分为空白对照组、OGD/R模型组、苦碟子注射液组,采用OGD/R方法建立C6胶质细胞损伤模型。MTT法确定氧糖剥夺/复氧时间和苦碟子注射液的最佳有效浓度;LDH漏出率检测细胞死亡率;Western Blot法检测p-IκBα/IκBα、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达。结果 C6胶质细胞OGD/R时间为OGD24h/R6h,苦碟子注射液最佳浓度为1.25%。OGD/R损伤后,细胞IκBα和NF-κB的表达上调及磷酸化蛋白增加;苦碟子注射液能够显著降低细胞死亡率,降低细胞p-IκBα和p-NF-κB蛋白高表达。结论 OGD/R损伤C6胶质细胞,促进了IκBα/NF-κB磷酸化,苦碟子注射液可抑制C6胶质细胞中IκBα/NF-κB磷酸化活化,降低细胞死亡率,对胶质细胞起到保护作用。     

注射用丹参多酚酸通过调节Akt/mTOR通路介导的自噬对氧糖剥夺/再灌注Neuro-2a细胞凋亡的影响

目的 研究注射用丹参多酚酸（SalvianolateLyophilizedInjection,SLI）对氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）损伤小鼠脑神经瘤细胞株Neuro-2a的保护作用及机制。方法 体外培养Neuro-2a细胞,建立OGD/R损伤模型,给予SLI(10、25、50μg/mL)以及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）干预,检测SLI对OGD/R损伤Neuro-2a细胞存活率、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）漏出量及细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的释放;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用Western blotting法检测凋亡及自噬相关蛋白的表达情况。结果 与OGD/R组比较,SLI显著提高OGD 4 h/R 24 h Neuro-2a细胞存活率（P<0.05、0.01）,降低LDH漏出量（P<0.05、0.01）,抑制细胞凋亡和细胞内Cyt-C释放（P<0.05、0.01）,调节活化的半胱氨酸天...     

血塞通注射液对体外OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应的影响

该研究通过对小鼠神经小胶质细胞(BV2)体外模拟脑缺血再灌注(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤探讨血塞通注射液(XST)抗炎症反应的作用及可能的作用机制。BV2细胞OGD损伤4 h后,通过测定细胞存活率(MTS法)确定复氧时间及血塞通给药浓度,采用ELISA法检测细胞上清中炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6及IL-10的分泌水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测细胞中p-ERK,p-JNK,p-p38蛋白表达水平的变化,免疫荧光法检测NF-κB p65的核转位水平。结果显示XST 25 mg·L-1可显著提高OGD 4 h/R 6 h引起的细胞活力的下降,并抑制TNF-α,IL-1β,IL-6及IL-10的分泌水平的增高,同时XST能下调OGD/R诱导的p-JNK,p-p38蛋白表达的升高,并逆转NF-κB p65的核转位。以上研究结果表明XST对OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应具有显著的抑制作用,其作用机制可能与抑制前炎症因子的分泌,调节MAPK信号通路及核转录因子NF-κB p65有关。     

毛蕊异黄酮苷调控SIRT1 信号通路缓解海马神经元细胞损伤的研究

目的探讨毛蕊异黄酮苷（CG）通过调控沉默信息调节因子1（SIRT1）信号通路对氧糖剥夺再灌注（OGD/R） 海马神经元细胞损伤的保护作用。方法将海马神经元细胞在无糖培养基中缺氧8 h 后,在完全培养基中复氧 6 h 建立OGD/R 模型。将细胞分为4 组：正常对照组、氧糖剥夺再灌注组（OGD/R 组,模型组）、SIRT1 特异性 抑制剂组（EX527 组）、EX527+毛蕊异黄酮苷组（EX527+CG 组）。细胞处理结束后,采用CCK-8 法测定细胞存 活率;分光光度法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量;荧光 法检测细胞中活性氧（ROS）含量、细胞凋亡率;Western Blot 及ELISA 法检测SIRT1 信号通路中相关蛋白的表 达水平。结果与OGD/R 组比较,EX527 组的细胞活力、SOD 含量及SIRT1、叉头转录因子1（FOXO1）、B 淋 巴细胞瘤-2（Bcl-2）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ 共激活因子-1α（PGC-1α）蛋白表达水平均明显降低（P＜ 0.05）,LDH 及MDA 含量、细胞凋亡率、Bax 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与EX527 组比较,EX527+CG 组的细胞活力及FOXO1、Bcl-2 和PGC-1α 蛋白表达水平均有升高,SOD 含量及SIRT1 蛋白表达水平明显升高 （P＜0.05）;MDA 含量有降低,LDH 含量、细胞凋亡率及Bax 蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。结论毛蕊 异黄酮苷缓解海马神经元OGD/R 损伤的机制与调控SIRT1 信号通路有关。     

瓜子金皂苷己神经保护作用的体外研究

目的观察瓜子金皂苷己(PGSF)对大鼠原代皮层神经细胞和PC12细胞的保护作用及其机制。方法建立体外氧糖剥夺/复灌(OGD/R)、氧化应激及去血清模型,以MTT法检测细胞存活率,光镜下观察细胞形态,Western blotting法检测蛋白表达。结果 PGSF(10,1,0.1μmol.L-)1可明显增加OGD/R、氧化应激和去血清处理细胞的存活率(P<0.01,P<0.05);在OGD/R模型中,PGSF(10、1、0.1μmol.L-1)还可改善神经元形态,减少Caspase-3活性片段的表达(P<0.01,P<0.05),并与MAPK通路抑制剂协同降低神经元死亡率(P<0.01,P<0.05);PGSF(10,1μmol.L-1)可增加神经元Bcl-2/Bax表达比值(P<0.01,P<0.05),并减少p53的表达(P<0.05)。结论 PGSF对OGD/R、氧化应激及去血清导致的神经元或PC12细胞损伤具有保护作用,在OGD/R模型中,该作用机制与其调节凋亡相关蛋白的表达相关,并可能与其抗氧化应激功能有关。     

玄参环烯醚萜苷对氧糖剥夺再灌注诱导的原代皮层神经元细胞内质网应激的作用研究

目的探讨玄参环烯醚萜苷通过内质网应激介导的细胞凋亡通路对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)诱导的原代皮层神经元细胞的作用及机制。方法分离SD大鼠原代皮层神经元,用玄参环烯醚萜苷(50、100、200μg/mL)对原代皮层神经元进行预处理24 h,采用OGD/R诱导制备脑缺血再灌注细胞模型,倒置显微镜下鉴定细胞纯度,观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞内乳酸脱氢酶(LDH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测C/EBP同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)和Caspase-12蛋白表达。结果培养的原代皮层神经元胞体饱满,状态良好,纯度较高。与对照组比较,经OGD/R处理后原代皮层神经元整体回缩变圆,胞体表面变粗糙;细胞存活率、SOD活性显著降低;LDH水平、细胞凋亡率显著升高;CHOP、Caspase-12和GRP78蛋白表达水平显著升高。与模型组比较,玄参环烯醚萜苷预处理能改善细胞损伤情况;提高细胞存活率、SOD活性;降低LDH水平和细胞凋亡率;降低CHOP、Caspase-12和GRP78蛋白表达水平。结论玄参环烯醚萜苷能拮抗OGD/R诱导的原代皮层神经元神经损伤,其作用机制与抑制内质网应激介导的细胞凋亡有关。     

三七皂苷R_1通过雌激素受体调节ATF6/Akt信号通路减轻OGD/R所导致的神经元损伤

三七皂苷R_1(notoginsenoside R_1,NGR_1)是传统中药三七的重要活性成分,也是雌激素受体激动剂。因其蕴含抗炎、抗氧化、抗凋亡等多种功能,故在疾病治疗中被普遍运用。为阐明NGR_1在缺血缺氧性脑病(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的潜在神经保护作用机制,该研究采用原代皮层神经元建立氧糖剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型,并且给予NGR_1及雌激素受体阻断剂ICI-182780处理,然后分别采用MTT,LDH和Hochest 33342染色检测神经元存活率、细胞膜完整性和凋亡,Western blot检测抗凋亡通路ATF6α,p-Akt,Akt蛋白及凋亡相关蛋白Bax,Cleaved Caspase-3的表达。结果显示:神经元在OGD/R损伤后,其细胞存活率明显下降(P0.05)、细胞膜相对完整性显著降低(P0.05)、细胞凋亡加重(P0.05),ATF6α,p-Akt表达下调且促凋亡蛋白Bax,Cleaved Caspase-3表达增加(P0.05)。NGR_1处理后能够减轻OGD/R造成的神经元细胞损伤,上调ATF6α表达、促进Akt磷酸化并且减少Bax,Cleaved Caspase-3蛋白的表达(P0.05),但是,NGR_1的这些神经保护性作用能够被雌激素受体阻断剂ICI-182780阻断。研究结果证实:NGR_1在缺血缺氧情况下对神经元具有保护性作用,该保护作用可能是NGR_1通过雌激素受体调控ATF6/Akt信号通路实现的。     

异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的研究异甘草素对氧糖剥夺/复糖复氧损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法细胞SH-SY5Y建立OGD/R损伤细胞模型。NC Nrf2-siRNA、siRNA-Nrf2质粒转染SH-SY5Y细胞,并培养48 h,20μmol/L异甘草素预处理2 h后构建OGD/R损伤,24 h后继续加入20μmol/L异甘草素再培养24 h。OGD/R损伤48 h后,测定细胞活力,LDH水平,caspase-3、caspase活性,ROS、MDA、SOD、GSH水平;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、NQO1、HO-1 mRNA表达;Western blot检测HO-1蛋白表达。结果 OGD/R诱导SH-SY5Y细胞活力降低,caspase-3、caspase活性升高,ROS、MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低,Bcl-2、NQO1、HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达降低,Bax mRNA表达增高(P0.01);经异甘草素干预后,OGD/R SY5Y细胞活力升高,caspase-3、caspase活性降低,ROS、MDA水平降低,SOD、GSH水平及Bcl-2、NQO1、HO-1 mRNA和HO-1蛋白表达升高,Bax mRNA表达降低(P0.01)。而敲除Nrf2基因逆转异甘草素对OGD/R细胞的作用。结论异甘草素能减轻OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞损伤,可能与激活Nrf2/ARE信号通路,增强SH-SY5Y细胞的抗氧化能力有关。     

管花肉苁蓉醇提取物对缺氧/缺糖再灌注所致神经细胞损伤的保护作用及机制研究

探究管花肉苁蓉醇提取物(CTEE)对缺氧/缺糖再灌注(OGD/R)所致的PC12细胞损伤的抑制作用及潜在机制。实验以OGD/R诱导PC12细胞作为损伤模型,通过MTT法检测细胞存活率、通过AO/EB与Hoechst 33258染色法考察细胞凋亡、通过JC-1染色法考察线粒体膜电位变化、通过MitoSOX染色法考察线粒体氧化应激反应,通过Western blot法考察凋亡相关蛋白(PARP,cleaved PARP,caspase-3,cleavd caspase-3,Bax,Bcl-2)的表达,研究了CTEE(12. 5,25,50 mg·L-1)对神经细胞的保护作用。结果显示,CTEE可以有效保护OGD/R诱导的PC12细胞损伤,并提高PC12细胞存活率,AO/EB与Hoechst 33258染色法显示CTEE可以有效抑制细胞凋亡。此外,JC-1与MitoSOX染色法显示CTEE可显著降低细胞中线粒体的氧化应激及线粒体膜电位的失调,且呈剂量依赖性。同时,CTEE可明显抑制线粒体凋亡信号通路中关键蛋白caspase-3和PARP的激活,且明显抑制Bax的升高和Bcl-2的下调。以上结果表明,管花肉苁蓉醇提取物对OGD/R所致的PC12细胞损伤具有较好的保护作用,其潜在机制可能是通过抑制线粒体氧化应激及相关凋亡信号通路实现的。     

mTOR/Akt/FoxO3信号通路在人参皂苷Rg1抗PC-12细胞OGD损伤的作用

目的:研究人参皂苷Rg1对PC-12细胞缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用,并初步探讨与mTOR/Akt调控FoxO3核浆穿梭相关的可能的分子机制.方法:建立OGD损伤PC-12细胞模型,MTT 法检测OGD对PC-12细胞存活率.人参皂苷Rg110,20,40 μmol·L-1预处理PC-12细胞24h,加OGD损伤,MTT 检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.Western blot法检测mTOR,p-Aktser473,p-Aktthr308,Akt,p-FoxO3,细胞核、细胞质FoxO3和总FoxO3蛋白表达.结果:OGD作用4～24h显著抑制PC-12细胞增殖,呈时间依赖性.Rg1(20,40 μmol·L-1)预处理24h可显著增加细胞存活率,减少LDH释放,增加SOD活力和降低MDA含量.Rg1可抑制由OGD引起的rmTOR,p-Aktser473表达降低.OGD 6 h可减少FoxO3磷酸化,并促进细胞质FoxO3进入细胞核;预处理Rg1增加FoxO3磷酸化,促进FoxO3进入细胞质.提示Rg1可经由调控mTOR/Akt/FoxO3信号通路抑制PC-12细胞损伤.结论:人参皂苷Rg1可抑制OGD引起PC-12细胞损伤,作用机制可能与激活mTOR/Akt信号通路调控FoxO3核质穿梭密切相关.     

通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs的保护作用

目的:探讨通窍活血汤含药脑脊液对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的保护作用及潜在机制。方法:通过酶消化法提取原代BMECs,并将细胞随机分为6组,分别为正常组,OGD/R组,通窍活血汤(TQHXT)组(20%),尼莫地平(NMDP)组(10μmol·L~(-1)),卡博替尼(BMS)组(1μmol·L~(-1))和合用药组。除正常组外,其余各组细胞在氧糖剥夺2 h后迅速复糖复氧24 h进行OGD/R造模并分组给药。采用细胞免疫荧光染色法鉴定BMECs,观察OGD/R损伤大鼠BMECs的形态学和超微结构改变并检测细胞跨膜电阻(TEER)值变化。用试剂盒检测细胞内一氧化氮(NO)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧(ROS)荧光强度和组织型纤溶酶原激活因子(tPA)含量。采用流式细胞术检测细胞内钙离子浓度及细胞凋亡,观察血管新生标记因子CD34的表达,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中紧密连接蛋白(ZO-1),血管内皮生长因子(VEGF),黏着斑激酶(FAK)和桩蛋白(Paxillin)蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,OGD/R组细胞皱缩、变圆,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著降低,细胞中NO,LDH及ROS水平显著升高,tPA含量显著降低,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著增加,细胞中CD34有所表达,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P0. 01);与OGD/R组比较,TQHXT组细胞损伤明显改善,细胞TEER值和细胞中ZO-1蛋白表达显著升高,细胞中NO,LDH及ROS含量显著降低,tPA含量显著升高,细胞中钙离子浓度和细胞凋亡显著减少,细胞中CD34表达增加,VEGF,FAK和Paxillin蛋白表达显著升高(P0. 05,P0. 01)。结论:通窍活血汤含药脑脊液对OGD/R损伤大鼠BMECs具有保护作用,该保护作用可能是通过VEGF/VEGF受体2(R2)/FAK/Paxillin信号通路促进血管生成来发挥作用。     

PC12细胞氧糖剥夺模型细胞自噬与损伤的关系及黄芪甲苷的保护作用研究

目的:研究PC12细胞OGD/R后自噬与损伤的经时性变化以及黄芪甲苷的干预效应。方法:探讨PC12细胞OGD/R后不同时间自噬的变化及与细胞损伤的关系,初步确定细胞发生自噬性损伤的时间点,再制作PC12细胞OGD/R自噬性损伤模型,研究黄芪甲苷抗自噬性损伤的作用。结果:复糖复氧6~36 h后,细胞存活率降低、LDH漏出率增加;用3-MA预处理后,可使复糖复氧6~12 h细胞存活率降低、LDH漏出率增加,复糖复氧后24~36 h相反。激光共聚焦和western-blot检测显示,复糖复氧后6 h LC3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,至24 h达高峰;p62蛋白表达随再复糖复氧时间的延长逐渐降低。黄芪甲苷对OGD 2 h复糖复氧24 h的PC12细胞自噬具有显著抑制作用,且呈剂量依赖性。结论:PC12在在OGD复糖复氧6~12 h,自噬减轻神经细胞的损伤,而在24~36 h后加重细胞损伤;黄芪甲苷可通过抑制细胞过度自噬诱导的细胞损伤,从而发挥对受损细胞的神经保护作用。     

黄芩苷对缺氧复氧损伤的人脑微血管内皮细胞炎性反应及TLR4/NF-κB信号通路的影响

该研究以人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell,HBMEC)氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型,模拟脑缺血神经细胞损伤,观察炎性反应,并从抑制炎性反应的角度探讨治疗脑缺血/再灌注、改善记忆障碍的可能机制,对相关中药治疗脑缺血疾病具有借鉴意义。选择HBMEC在OGD损伤同时给予药物,4 h后复氧2 h,收集细胞上清,测定细胞上清炎性因子含量;免疫荧光法检测HBMEC细胞形态,及细胞内磷酸化核因子-κB(p-nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B,p-NF-κB)表达量,免疫印迹法检测细胞Toll样受体4(Toll like receptor 4, TLR4)、骨髓分化主要反应蛋白(myeloid differentiation primary response 88,MYD88)、p-NF-κB表达变化。实验结果发现,HBMEC缺氧后白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、IL-1α、IL-1β与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量显著升高,黄芩苷可保护HBMEC,抑制p-NF-κB的核内转录,并能明显降低OGD损伤引起的HBMEC炎性因子的释放,抑制TLR4,MYD88,p-NF-κB的表达。研究提示,黄芩苷对OGD损伤的HBMEC具有明显的保护作用,抑制炎性反应,其保护作用机制可能与抑制TLR4相关信号通路有关。该研究从抑制炎性反应的角度探讨治疗脑缺血/再灌注、改善记忆障碍的可能机制,对相关中药治疗脑缺血疾病具有借鉴意义。     

龙血通络胶囊对血管内皮细胞氧糖剥夺/复氧损伤后细胞凋亡的改善作用

局灶性脑缺血及再灌注损伤是缺血性脑中风的重要发病过程,而缺血再灌注(I/R)损伤诱导的脑血管内皮细胞凋亡是局灶性脑缺血后脑组织损伤的重要诱因。龙血通络胶囊在临床上用于缺血性脑中风恢复期血瘀证的治疗,具有很好的治疗效果,然而其对大脑局灶性缺血后脑组织损伤的保护作用机制目前尚不清晰。该文采用体外氧糖剥夺/复氧(OGD/R)细胞模型模拟血管内皮细胞HUVEC缺血再灌注损伤,通过MTT实验、LDH实验、流式细胞术、AO/EB细胞染色以及Western blot等技术方法观察龙血通络胶囊对OGD/R诱导HUVEC细胞损伤的保护作用,并对其作用机制进行研究。MTT和LDH实验结果显示,龙血通络胶囊能剂量依赖性的提升HUVEC细胞OGD/R损伤后的细胞存活率并降低乳酸脱氢酶(LDH)的释放;流式细胞术与AO/EB细胞染色结果显示,龙血通络胶囊能浓度依赖性的抑制HUVEC细胞OGD/R损伤后的细胞凋亡;Western blot实验结果表明,龙血通络胶囊通过抑制HUVEC细胞caspase 3/9凋亡通路的激活进而抑制OGD/R损伤的细胞凋亡。总之,该研究表明龙血通络胶囊对OGD/R诱导的HUVEC细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制是通过抑制OGD/R诱导线粒体相关caspase 3/9通路的激活而实现的。     

芍药苷配伍小檗碱对 TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞NF-κB/YY1 信号通路的影响

目的基于NF-κB/YY1信号通路探讨芍药苷配伍小檗碱对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响。方法体外培养HUVECs,分别设空白对照组、模型组(TNF-α20 ng/m L)、芍药苷组(PF 160μmol/L)、小檗碱组(BBR 20μmol/L)、配伍组(160μmol/L芍药苷+20μmol/L小檗碱组)。采用CCK8法检测各组细胞活力;LDH毒性实验检测细胞上清液中LDH释放量;ELISA法检测细胞上清液中IL-6和IL-8含量;RT-PCR检测NF-κB、YY1基因表达;Western Blot法检测NF-κB、YY1蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组细胞活力减弱,LDH漏出率增加,IL-6和IL-8含量增加,NF-κB和YY1基因及蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,芍药苷组、小檗碱组及配伍组干预后细胞活力增强,LDH漏出率减少,IL6和IL-8含量降低,NF-κB和YY1基因及蛋白表达下调,且芍药苷和小檗碱配伍组较单体组干预后效果更明显(P<0.05,P<0.01)。结论TNF-α可激活HUVECs NF-κB/YY1信号通路,诱导炎症反应,加重内皮损伤。芍药苷配伍小檗碱较单药使用可更有效地抑制NF-κB/YY1信号通路,减轻炎症反应进而起到血管内皮保护作用。     

姜黄素抑制库普夫细胞活化作用的机制研究

目的:通过分析姜黄素对库普夫细胞(kupffer cells,KCs)促炎因子和趋化因子分泌功能的抑制情况,阐述姜黄素对急性肝损伤的治疗作用。方法:通过原位灌注和梯度离心的方法提取小鼠肝脏中原代KCs细胞,予以不同浓度的姜黄素预处理后,加入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后培养24 h。实时定量PCR法检测KCs中促炎细胞因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)mRNA的表达及趋化因子CXC家族趋化因子配体1(C-X-C Motif Chemokine Ligand 1,CXCL1)、趋化因子CXC家族趋化因子配体2(C-X-C Motif Chemokine Ligand 2,CXCL2)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、单核细胞趋化蛋白2(monocyte chemotactic protein 2,MCP-2)和MCP-1的mRNA表达;利用WB检测ERK1/2、P38和JNK细胞通路的变化。结果:予以LPS刺激后,KCs表达的促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL1、CXCL2和MCP-1表达明显升高,予以不同浓度的姜黄素预处理后,TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL1、CXCL2和MCP-1表达均明显降低,且呈剂量依赖性,不同组别之间差异有统计学意义(P0.05)。WB结果显示姜黄素可以缓解LPS诱导的ERK1/2、P38和JNK蛋白磷酸化水平(P0.05)。结论:姜黄素可能是通过抑制KCs活化来减少促炎因子和趋化因子分泌,进而缓解急性肝损伤。     

通窍活血汤含药脑脊液调控ASK1/MKK4/JNK信号通路对OGD/R损伤HT22细胞的保护作用北大核心CSCD

该文探讨通窍活血汤含药脑脊液(TQHXD-CSF)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤小鼠海马神经元(HT22)细胞的保护作用及其作用机制是否与调控ASK1/MKK4/JNK信号通路有关.将HT22细胞随机分为5组,分别为空白脑脊液组(control组)、OGD/R组、TQHXD-CSF组、凋亡抑制剂组(Z-VAD-FMK,20μmol·L^(-1))、TQHXD-CSF+凋亡抑制剂组.除control组外,其余各组细胞在氧糖剥夺6 h后迅速复糖复氧12 h进行OGD/R造模并分组给药.CCK8法检测HT22细胞活力,LDH试剂盒检测乳酸脱氢酶释放量,倒置显微镜观察HT22细胞形态.Western blot检测Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA水平.再将HT22细胞随机分为6组,分别为control组、OGD/R组、si-NC组、si-ASK1组、TQHXD-CSF组、TQHXD-CSF+si-ASK1组.CCK8法检测细胞活力,细胞动态分析仪动态监测细胞增殖,Hoechst染色和流式细胞术检测HT22细胞凋亡情况,Western blot检测MKK4、p-MKK4、JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、Cyt C、Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达情况.结果显示,与OGD/R组相比,TQHXD-CSF可以显著提高细胞存活率,改善细胞形态,降低Bax/Bcl-2、caspase-3蛋白和mRNA的表达量.当沉默ASK1后,与OGD/R组相比,TQHXD-CSF组细胞存活率显著提升,降低细胞荧光强度,降低细胞凋亡率,p-MKK4、p-JNK、p-c-Jun、Cyt C、Bax/Bcl-2和caspase-3的蛋白表达量减少,但其效果不及TQHXD-CSF+si-ASK1组.综上,TQHXD-CSF可抑制OGD/R损伤的HT22细胞ASK1/MKK4/JNK通路介导的细胞凋亡,对缺血再灌注神经元细胞损伤具有保护作用.     

下瘀血汤调控中性粒细胞浸润抑制脂多糖诱导肝损伤机制

目的以脂多糖(LPS)诱导的急性肝损伤为载体,探讨下瘀血汤对急性肝损伤的干预作用。方法将24只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、下瘀血汤组,每组8只;下瘀血汤组按照0.467 8 g/kg剂量一次性灌胃下瘀血汤药液(相当于75 kg成人体质量的10倍量),正常组和模型组给予等量的双蒸水,4 h后下瘀血汤组和模型组小鼠腹腔注射LPS(10 mg/kg),18 h后取材检测肝功能、病理学,免疫组化检测中性粒细胞标记物髓过氧化物酶(MPO)及CXC趋化因子配体15(CXCL15)表达,实时定量PCR检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、CXC趋化因子配体2(CXCL2)、CC趋化因子配体3(CCL3)、CXC趋化因子受体1(CXCR1)、白介素6(IL-6)基因表达。结果与正常组比较,模型组肝功能ALT和AST水平显著升高(P0.001),下瘀血汤对LPS诱导的肝功能损伤有显著改善作用(P0.05);组织病理学显示模型组肝组织炎细胞浸润明显,免疫组化染色显示LPS处理后MPO及CXCL15阳性表达显著升高(P0.001),主要分布在小叶间和肝窦,下瘀血汤显著抑制中性细胞浸润。实时定量PCR结果显示,模型组TNF-α、IL-6炎症因子及趋化因子MCP-1、CXCL2、CCL3、CXCR1的mRNA表达显著升高(P0.001);下瘀血汤对LPS引起的炎症/趋化因子水平升高有显著抑制作用(P0.01)。结论 LPS诱导肝脏中性粒细胞浸润,上调炎症及趋化因子表达;下瘀血汤对LPS诱导的肝损伤有显著的抑制作用。