成年家兔前包氏复合体机能解剖定位

通过细胞外记录探测成年家兔前包氏复合体(pre-(B(o)t.c))分布.实验在50只氨基甲酸乙酯麻醉的成年健康家兔上进行.结果如下:①细胞外记录表明腹侧呼吸组(VRG)嘴侧含有3类不同的呼吸神经元群,嘴尾方向依次是E-aug神经元群(B(o)t.c)、混合神经元群(pre-(B(o)t.c))、I-aug神经元群.根据神经元放电模式及与膈神经放电的时相关系将pre-的呼吸神经元分为7类:早吸气神经元、吸气递增神经元、晚吸气神经元、后吸气神经元、呼气递增神经元、前吸气神经元及吸气-呼气跨时相神经元.前吸气神经元分为两型,以Ⅱ型为主.②pre-(B(o)t.c)呼吸神经元不能被电刺激颈髓C3节段及颈迷走神经所逆行兴奋,表明pre-(B(o)t.c)呼吸神经元为延髓固有神经元.结果显示,成年家兔pre-位于VRG嘴侧呼气递增神经元群(B(o)t.c)与吸气递增神经元群之间的过渡区域,含有与呼吸节律发起有关的各类延髓固有呼吸神经元.     

神经元Glu合成、分解和分泌与癫痫发病的研究

目的:研究神经元谷氨酸(Glu)合成、分解和分泌与癫痫发病的关系。方法:用致病剂马桑内酯(CL)处理培养大鼠海马神经元,用高效液相色谱仪、液体闪烁仪分别检测培养神经元内外Glu含量和神经元内谷氨酸脱羧酶(GAD)活性。结果:与对照组比较,CL致痫神经元内Glu浓度没有显著差异,神经元外Glu浓度显著升高(P<0.05),神经元内GAD活性显著增高(P<0.05)。结论:癫病发病中,痫性神经元Glu合成、分解、分泌增强。     

神经生长因子对糖皮质激素诱导大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨神经生长因子对糖皮质激素诱导的大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法体外分离原代培养18只新生Wister大鼠海马神经元,噻唑蓝法测定地塞米松诱导海马神经元凋亡的最低敏感剂量,观察不同质量浓度神经生长因子对地塞米松(0.10×10~(-6)mol/L)诱导海马神经元凋亡的保护作用。结果与阴性对照组相比,地塞米松Ⅰ组(10×10~(-6)mol/L)、Ⅱ组(1×10~(-6)mol/L)和Ⅲ组(0.10×10~(-6)mol/L)大鼠海马神经元活性均降低(P=0.000,0.000,0.000)。予不同质量浓度神经生长因子后,神经生长因子0.18 ng/ml组大鼠海马神经元活性低于阴性对照组(P=0.000)和阳性对照组(P=0.010),神经生长因子18 ng/ml组大鼠海马神经元活性高于阳性对照组(P=0.000)和神经生长因子0.18 ng/ml组(P=0.000)。结论糖皮质激素可以诱导体外培养的大鼠海马神经元凋亡,地塞米松0.10×10~(-6)mol/L是诱导海马神经元凋亡的最低敏感剂量,神经生长因子可以拮抗地塞米松诱导的大鼠海马神经元凋亡。     

CRH对培养下丘脑神经元胞浆cAMP作用的探讨

目的:研究促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)对下丘脑神经元细胞内cAMP浓度的调节作用。方法:取孕17天胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元,采用PTI(Photon Technology International,PTI)测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度([Ca~(2+)]i)变化的影响,放射免疫方法测定神经元内cAMP含量,治疗组用CRHl受体特异性拮抗剂CP-154526处理下丘脑神经元后。结果:正常对照组的下丘脑神经元[[Ca~(2+)]i和cAMP含量较低,外源性CRH刺激后,[Ca~(2+)]i立即升高,神经元细胞内cAMP生成明显增加,预先应用CP—154526处理再用CRH刺激下丘脑神经元,各刺激组与对照组相比,差异显著。CP—154526可明显抑制CRH(10~(-6)mol/L)刺激的下丘脑神经元细胞内[Ca~(2+)]i和cAMP的生成增加。结论:CRH可通过与其1受体结合直接作用于下丘脑神经元,使神经元[Ca~(2+)]i和cAMP含量明显增加,在调节下丘脑神经元激活过程中CRH可能起了一定的重要作用。     

胆碱能M2受体激动剂及拮抗剂对大鼠脚桥核神经元电活动的影响

目的　在体水平上观察选择性胆碱能M2 受体激动剂oxotremorine和拮抗剂methoctramine对大鼠PPN神经元自发放电频率的影响。方法　 采用玻璃微电极细胞外记录和脚桥核 (pedunculopontinenucleus ,PPN)内微量注射法。 结果　11个神经元在PPN内微量注射高浓度 (每 2 0 0nl含 4 μg)oxotremorine后 ,10个神经元被兴奋 ,放电频率较注射前升高 (2 82± 5 9) % ,1个神经元放电频率无明显变化 ;低浓度 (每 2 0 0nl含 0 .2 μg)oxotremorine注射后 ,11个神经元中 ,有 6个神经元被抑制 ,放电频率较注射前降低 (98± 2 ) % ,5个神经元被兴奋 ,放电频率较前对照升高(6 80± 32 4 ) %。 12个神经元在PPN内微量注射高浓度 (每 2 0 0nl含 4 μg)methoctramine后 ,4个神经元被兴奋 ,放电频率较前对照升高 (4 0 9± 133) % ,6个神经元被抑制 ,放电频率较注射前降低 (86± 8) % ,2个放电频率无显著变化 ;低浓度 (每 2 0 0nl含 0 .4 μg)methoctramine注射后 ,12个神经元中 ,有 5个神经元被兴奋 ,放电频率较前对照升高 (117± 15 ) % ,6个神经元被抑制 ,放电频率较注射前降低 (79± 11) % ,1个放电频率未受明显影响。 结论　 胆碱能M2 受体通过直接和间接作用对PPN神经元的电活动进行调节     

Preso调控nNOS在神经元机械性损伤中的作用

目的通过建立神经元机械性损伤模型,研究突触后致密物质(PSD)支架蛋白中的树突棘突触后致密物质-95(PSD-95)相互作用调节蛋白(Preso)在创伤性脑损伤中的作用及调控机制。方法建立神经元机械性损伤模型,通过细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)检测神经元损伤程度,并通过Western blot检测明确Preso在损伤后的表达变化;利用Preso慢病毒过表达载体上调Preso在神经元中的表达,通过细胞活力和LDH检测明确上调Preso在神经元损伤中的作用;利用神经元特异性一氧化氮合酶(nNOS)特异性抑制剂ARL 17477,通过细胞活力和LDH检测明确抑制nNOS对上调Preso调控神经元损伤的影响。结果神经元机械性损伤后,Preso表达无明显改变,而上调Preso表达可加重神经元损伤;利用nNOS特异性抑制剂ARL 17477可显著改善神经元损伤,并抑制上调Preso表达对神经元损伤的影响。结论神经元机械性损伤后,Preso可促进神经元损伤的形成,而nNOS是其重要的下游效应分子。     

刺五加皂甙对谷氨酸毒性神经元凋亡的保护作用

目的观察神经元在谷氨酸毒性损伤时一氧化氮(NO)的动态变化及其与凋亡的关系,探讨刺五加皂甙(ASS)的有效保护浓度。方法采用谷氨酸(Glu)诱导的皮质神经元凋亡模型。随机分成Glu组、正常对照组及ASS3组;用流式细胞仪检测神经元凋亡率,用硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO的含量,用MTT法测定神经元存活率并在电镜下观察细胞形态学变化。结果(1)Glu呈剂量和时间依赖性增加神经元培养液中NO含量,ASS能不同程度地减少NO含量;(2)与Glu共培养的神经元,其存活率呈剂量和时间依赖性下降,ASS能增加神经元存活率;(3)经Glu处理的神经元发生凋亡,细胞超微结构呈现凋亡样改变,其凋亡率与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01)。ASS能减少Glu毒性神经元凋亡。结论NO介导了Glu毒性神经元凋亡,ASS可能通过抑制NO的释放及其神经毒性作用,拮抗Glu引起的神经元凋亡。     

Exendin-4对大鼠皮质神经元缺血再灌注损伤后内质网相关性细胞凋亡的影响

目的探讨Exendin-4(Ex-4)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法体外培养Spra-gue Dawley(SD)乳鼠皮质神经元并随机分为对照组(正常培养)、模型组(体外模拟缺血再灌注)、治疗组(建模前2h、建模中均给予Ex-4)。免疫荧光染色鉴定神经元纯度,RT-PCR检测GLP-1受体基因表达,ELISA检测神经元细胞浆内cAMP水平,MTT法测定神经元存活率,流式细胞术检测神经元凋亡率,Western-blot免疫印迹法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达。结果大鼠皮质神经元可体外纯化培养。RT-PCR及ELISA检测结果显示皮质神经元存在活性GLP-1受体。体外模拟缺血再灌注后神经元凋亡率明显增加,早期凋亡率及总凋亡率分别为(22.43±1.67)%、(41.87±3.2)%,Ex-4(0.4μg/ml)干预后神经元凋亡率明显下降,早期凋亡率及总凋亡率分别降至(7.53±0.6)%、(13.67±1.77)%,两组比较差异均有统计学意义(t早期凋亡率=14.511、t总凋亡率=13.352,P0.01)。体外模拟缺血再灌注损伤可诱导神经元GRP78、CHOP表达上调,Ex-4干预后神经元GRP78表达进一步增加、CHOP表达反而减少,两组GRP78、CHOP含量比较差异均有统计学意义(tGRP78(%control)=7.103、tCHOP(%control)=7.816,P0.01)。结论 Ex-4对大鼠皮质神经元体外模拟缺血再灌注损伤具有保护作用,其可能机制为抑制损伤后内质网相关性细胞凋亡。     

帕金森病患者僵直迟缓症状神经元电活动特点研究

目的探讨帕金森病(PD)患者僵直迟缓症状的神经元电活动特点。方法 25例僵直迟缓为主征的PD患者接受立体定向丘脑底核(STN)脑深部电极植入术(DBS)。术中通过微电极记录技术采集神经元电活动。应用单细胞分析方法,峰间隔分析方法分析神经元放电的频率和形式,应用功率谱分析方法分析神经元放电周期节律。结果分析了180个信号稳定的神经元,平均放电频率为(40.6±22.3)Hz;有35.6%(n=64)神经元有周期节律性放电,放电周期节律在β节律内。结论β节律的神经元周期节律性电活动可能和PD僵直迟缓症状的病理生理改变有关。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-14与阿尔茨海默病发病机制关系的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)的发病机制尚不完全清楚,其病理改变为老年斑(senile plaque,SP)、神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)的形成以及神经元的丢失,而神经元丢失主要表现为细胞凋亡[1].     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-14与阿尔茨海默病发病机制关系的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)的发病机制尚不完全清楚,其病理改变为老年斑(senile plaque,SP)、神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)的形成以及神经元的丢失,而神经元丢失主要表现为细胞凋亡[1].     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-14与阿尔茨海默病发病机制关系的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)的发病机制尚不完全清楚,其病理改变为老年斑(senile plaque,SP)、神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)的形成以及神经元的丢失,而神经元丢失主要表现为细胞凋亡[1].     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-14与阿尔茨海默病发病机制关系的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)的发病机制尚不完全清楚,其病理改变为老年斑(senile plaque,SP)、神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)的形成以及神经元的丢失,而神经元丢失主要表现为细胞凋亡[1].     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-14与阿尔茨海默病发病机制关系的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)的发病机制尚不完全清楚,其病理改变为老年斑(senile plaque,SP)、神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)的形成以及神经元的丢失,而神经元丢失主要表现为细胞凋亡[1].     

刺五加多糖对H_2O_2损伤的海马神经元表达c-fos和p53基因的影响

目的研究刺五加多糖(ASPS)对氧化应激损伤的海马神经元表达c-fos和p53基因的影响,进一步探讨ASPS对氧化应激损伤海马神经元的保护机制。方法从新生大鼠分离出海马,其神经元经培养后分为阴性对照组、损伤模型组(1 mmol/LH_2O_2诱导)和ASPS干预组(该组按ASPS 10、5、2.5μg/ml的终浓度又分为三个亚组)。采用H_2O_2建立海马神经元氧化应激损伤模型。用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测各组海马神经元活性,免疫组化法检测其c-fos和p53的表达。结果 ASPS干预组神经元活性显著高于损伤模型组(P0.05)。c-fos和p53在ASPS干预组神经元中的表达水平较损伤模型组明显降低(P0.05)。结论 ASPS能够减少受损海马神经元c-fos和p53基因的表达,增强其活性,对海马神经元有明显的保护作用。     

沉默调节蛋白1促进体外神经元的轴突生长

目的探讨沉默调节蛋白1(Sirt1)对神经元轴突生长的影响。方法体外原代分离培养胚胎海马神经元,观察Sirt1在72 h神经元的分布表达;通过RNAi技术下调Sirt1基因,观察其对72 h神经元轴突长度的影响;通过质粒转染过表达Sirt1基因或药物白藜芦醇(RES)激活Sirt1蛋白,检测其对72 h神经元轴突长度的影响。结果免疫荧光染色结果显示Sirt1位于海马神经元的生长圆锥以及胞体和突起,尤其是轴突末端;与正常对照组(Sirt1正常表达组)相比,Sirt1表达下调可显著缩短72 h海马神经元轴突的长度[由(178.3±3.2)μm缩短到(110.2±18.30)μm,P0.01];与正常对照组(Sirt1正常表达组)相比,基因过表达Sirt1可显著增加72 h海马神经元轴突的长度[由(178.3±3.2)μm增长到(310.6±39.5)μm,P0.01]。与药物对照组(DMSO处理组)相比,药物RES激活Sirt1蛋白亦可显著增加72 h海马神经元轴突的长度[由(292.8±11.2)μm增长到(525.1±49.7)μm,P0.01]。结论Sirt1在神经元的轴突生长中起着重要的作用,可作为轴突再生一个潜在的治疗靶点。     

ATP在Aβ_(1-42)导致的突触可塑性损害中的作用

目的探讨ATP在调节神经元突触可塑性中的作用。方法培养大鼠原代神经元细胞,应用Aβ_(1-42)孵育原代培养的神经元细胞48 h,或者在Aβ_(1-42)孵育原代培养的神经元细胞前30 min预先给予ATP处理细胞。应用Alexa Fluor 488-phalloidin dye染色观察不同处理后神经元树突棘的变化。同时,应用Western blot检测Aβ_(1-42)及ATP处理后对PDS-95蛋白表达的影响。结果 ATP能减少Aβ_(1-42)所导致的神经元树突棘丢失,Aβ_(1-42)孵育原代培养的神经元细胞48 h后,PSD-95蛋白水平降低;而经过ATP预处理30 min后,神经元PSD-95蛋白表达无显著变化。结论 ATP能够调节神经元突触可塑性,从而发挥脑保护作用。     

突触后密度蛋白93基因敲除抑制血小板活化因子性神经元损害

目的　探讨血小板活化因子 (PAF)所致的神经元毒性损伤是否受突触后密度蛋白 93(PSD93 )基因调控。方法　用PAF处理培养的野生型和PSD93 基因敲除型的小鼠皮质神经元 ;经碘化物 (PI) /钙黄绿素(Calcein)染色 ,荧光显微镜观察并计算细胞死亡率 (% ) ;细胞生存能力检测 (MTT)神经元生存能力 ;免疫印迹法测定PSD93 和PSD95蛋白的表达。结果　野生型神经元表达PSD93 和PSD95蛋白 ,PSD93 基因敲除型只表达PSD95,不表达PSD93 ;基因敲除型的小鼠皮质神经元凋亡明显低于野生型 (P <0 0 5 ) ,生存能力高于野生型(P <0 0 1)。结论　PSD93 基因敲除抑制PAF所致的神经元损害     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-14与阿尔茨海默病发病机制关系的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)的发病机制尚不完全清楚,其病理改变为老年斑(senile plaque,SP)、神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)的形成以及神经元的丢失,而神经元丢失主要表现为细胞凋亡[1].     

尼莫地平诱导小脑颗粒神经元凋亡及机制研究

目的探讨尼莫地平能否诱导小脑颗粒神经元凋亡及可能机制。方法取Sprague-Dawley(SD)大鼠小脑颗粒神经元,体外培养7d,用含10μM尼莫地平培养基处理神经元24h,对照组为含1‰二甲亚砜(DMSO)培养基处理细胞。Hoechst33258染胞核检测凋亡率。Westernblot检测c-Fos和c-Jun蛋白的表达水平;腺病毒作载体过表达c-Fos和负显性c-Jun突变体阻断c-Jun功能,检测能否抑制尼莫地平诱导的神经元凋亡,免疫细胞化学方法检测腺病毒感染率。结果对照组神经元的凋亡率为(10±4)%,尼莫地平处理6、12、24h后神经元的凋亡率分别为(13±4)%、(28±5)%、(45±3)%。尼莫地平处理使c-Fos表达下调,但c-Jun表达水平上调。腺病毒Ad-c-Fos和Ad-c-JunDN(负显性c-Jun突变体)对神经元感染率为85%以上,过表达c-Fos或负显性c-Jun突变体使尼莫地平诱导的神经元凋亡率从(42±6)%减少到(28±6)%或(20±3)%。结论尼莫地平通过下调c-Fos和上调c-Jun表达诱导小脑颗粒神经元凋亡。