双表法对流感病毒感染小鼠肺组织MyD88及NF-κB P65mRNA表达的影响

目的探讨双表法对流感病毒感染小鼠肺组织MyD88及NF-κB P65mRNA表达的影响,探讨双表法的作用机制。方法将120只昆明种小鼠随机分为12组:模型组10只;正常组10只;利巴韦林对照组10只;解表药(银翘散)高、中、低剂量组各10只;固表药(玉屏风散)高、中、低剂量组各10只;双表法(银翘散+玉屏风散)高、中、低剂量组各10只。动物造模后正常组和模型组均以等体积的生理盐水灌胃,各中药治疗组分别予固表法(玉屏风散提取物)、解表法(银翘散提取物)、双表法(玉屏风散+银翘散)、利巴韦林灌胃给药。采用RT-PCR法检测MyD88及NF-κB P65mRNA表达情况。结果正常组和模型组肺组织中均可检测到MyD88mRNA及NF-κB P65mRNA的表达,但模型组明显高于正常组(P0.05)。双表法高剂量组MyD88mRNA及NF-κB P65mRNA表达最低,与双表法中低剂量组、解表法各剂量组、固表法各剂量组、利巴韦林组比较均有显著性差异(P均0.05)。结论流感病毒感染小鼠时激活了MyD88/NF-κB P65信号通路,双表法能较好地抑制MyD88mRNA及NF-κB P65mRNA的表达。     

汉黄芩素对流感病毒感染肺泡巨噬细胞NF-κB核转位及表达的影响及机制

目的:探讨汉黄芩素对流感病毒感染大鼠肺泡巨噬细胞( NR8383)中核转录因子-κB(NF-κB)核转位、表达的影响及与Toll样受体7(TLR7)介导的髓样分化因子88( MyD88)依赖性信号通路的关系.方法:流感病毒感染NR8383细胞1h后,加入含汉黄芩素的培养基(终质量浓度0.016 g · L-1),药物作用后6,12,24 h,RT-PCR检测TLR7,MyD88,NF-kB p65mRNA水平;4,6,24 h时,免疫组化法检测NF-κB p65核转位情况,并做半定量分析;24 h时,Western blot检测NF-κB p65表达水平.结果:汉黄芩素降低了流感病毒感染NR8383细胞后TLR7,MyD88,NF-κB p65 mRNA水平(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05),抑制了流感病毒感染后NF-κB p65的核转位及表达(P＜0.01).结论:汉黄芩素通过抑制TLR7介导的MyD88依赖性信号通路,抑制了NF-κB p65的核转位及表达,从而减轻流感感染中的炎症反应.     

热毒宁注射液对LPS诱导ALI/ARDS小鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响

目的 探讨热毒宁注射液对LPS诱导急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)小鼠肺损伤的保护作用及对TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法 将小鼠随机分为对照组、模型组、热毒宁注射液组、地塞米松(阳性药)组，每组6只，气管注射LPS溶液制备ALI/ARDS模型，造模后3 h给予各组相应药物，连续干预7 d后，检测小鼠肺湿/干重比、肺组织MPO活性及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)水平，HE染色观察肺组织病理改变，Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、IKKα、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 与对照组比较，模型组小鼠肺湿/干重比、肺组织MPO活性、血清炎性因子水平和肺组织TLR4、MyD88、IKKα、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),肺泡腔增大，肺泡壁增厚，肺部有大量的炎性细胞浸润；与模型组比较，热毒宁注射液组和地塞米松组小鼠肺湿/干重比、肺组织MPO活性、血清炎性因子水平和肺组织TLR4、MyD88、I...     

流感病毒性肺炎湿热证小鼠TLR-7介导信号通路的变化

目的通过人工气候模拟,观察流感病毒性肺炎湿热证小鼠Toll样受体7(TLR-7)介导信号通路的变化,探讨病毒性疾病湿热证的物质基础。方法将50只BALB/c小鼠随机分为正常对照组10只、单纯湿热组10只、湿热模型组15只、单纯病毒组15只。单纯湿热组:全程高脂饲料喂养,连续10天置于气候箱;湿热模型组:全程高脂饲料喂养,连续10天置于气候箱,第11天接种病毒,接种病毒后不再置入气候箱;单纯病毒组:全程普通饲料喂养14天,不置入气候箱,第11天接种病毒1次,继续喂养3天,第15天处死采集标本,每组随机选取8个样本检测,比较各组TLR-7、核因子-κB(NF-κB)、髓样分化因子88(MyD88)mRNA表达水平。结果湿热模型组TLR-7、MyD88、NF-κB三者mRNA表达水平较其他3组增高,但TLR-7、MyD884组间差异无统计学意义(P>0.05),NF-κB水平湿热模型组高于其他3组(P<0.05或P<0.01)。结论湿热因素干预能上调TLR-7介导信号因子,尤其是下游信号因子NF-κB,从而激发Tol1-NF-κB信号通路,导致湿热模型组小鼠肺脏病变程度较单纯病毒组重。     

清肺排毒汤对LPS诱导急性肺损伤小鼠炎症的作用

目的 探讨清肺排毒汤对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的抗炎作用及其机制。方法 小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组及清肺排毒汤低、高剂量组,除对照组外,其余各组采用气管穿刺注射LPS建立ALI模型,造模成功后给予相应药物干预7 d。记录小鼠存活率、肺湿干重比,HE染色观察肺损伤程度,吉姆萨染色法及血液分析仪分类计数肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞,RT-qPCR法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达,ELISA法检测小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达。结果 与模型组比较,清肺排毒汤高剂量组小鼠肺水肿和损伤程度,血清、BALF中炎性细胞因子和炎性细胞数量,肺组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达和肺组织TLR4、MyD88、p-NF-κB p65,p-IκBα蛋白表达均有不同程度降低(P<0.05,P<0.01)。结论 清肺排毒汤可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制炎症因子和介质释放,减轻LPS诱...     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路及相关分子的影响,探讨二陈汤加味对COPD抗炎作用的分子机制。方法:将40只SD大鼠随机平均分为正常组、模型组、二陈汤加味组和EVP4593(NF-κB抑制剂)组。以香烟烟雾联合气管滴注脂多糖(LPS)方法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味组以10 g·kg~(-1)灌胃(ig),EVP4593组皮下注射1 mg·kg~(-1),正常组、模型组ig等量生理盐水,连续干预14 d。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1),趋化因子(CXCL)-2,CXCL-3和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肺匀浆中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平,免疫组化(IHC)检测TLR4,MyD88,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)在大鼠肺组织中的定位表达。结果:与正常组比较,模型组肺匀浆中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA及蛋白表达均显著增加(P0.01),HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,二陈汤加味组TLR4,MyD88,NF-κB p65mRNA及其蛋白表达均显著减弱(P0.05,P0.01),HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1含量显著降低(P0.05,P0.01)。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路相关信号分子基因的表达,以及减少HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1的释放有关。     

基于“脾为之卫”探讨历节胶囊对CIA小鼠炎症信号通路的影响

目的 观察历节胶囊对CIA小鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响，探讨其治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制。方法 将60只DBA/1小鼠随机分成3组：正常组，模型组，历节胶囊组，每组各20只。每组给药连灌21天后处死。Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达量；PCR检测TLR4、MyD88、NF-κB p65的mRNA表达水平；ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果 与正常组比较，模型组MyD88、NF-κB p65及TLR4的mRNA及蛋白表达量均上升，模型组的血清TNF-α水平升高，差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较，历节胶囊组MyD88、NF-κB p65及TLR4 mRNA及蛋白表达量均下降，血清TNF-α水平下降，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 历节胶囊可以通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65炎症信号通路以取得疗效。     

银翘散提取物对流感病毒性肺炎小鼠组织TLR4及NF-κB p65的影响

目的观察银翘散提取物对流感病毒性肺炎小鼠组织TLR4及NF-κB p65表达的影响。方法昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、银翘散组和利巴韦林组,每组10只,采用鼻腔接种甲型流感病毒FM1株诱导幼龄小鼠肺炎,于感染前1天,银翘散组灌服中药提取物,利巴韦林组腹腔注射利巴韦林注射液,正常组和模型组以等体积的生理盐水灌胃。观察各组小鼠的一般状态、肺组织形态学,各组小鼠感染5天后处死,采用免疫组化染色法检测各组小鼠肺组织NFB p65和TLR4的表达。结果与正常组相比,模型组小鼠肺组织中NF-κB p65、TLR4的表达显著增高(P0.05),银翘散组NF-κB p65、TLR4的表达较模型组明显降低(P0.05)。结论 NF-κB p65、TLR4表达降低,很可能是银翘散提取物治疗流感病毒性肺炎小鼠的机理。     

银花平感颗粒和三拗汤体内抗甲型流感病毒的免疫机制研究

为探讨银花平感颗粒和三拗汤体内对流感病毒肺炎小鼠免疫调节机制的影响及不同方剂配伍对流感病毒的药效异同。采用滴鼻感染建立小鼠甲型流感病毒(H1N1)肺炎模型,随机分为正常对照组、病毒模型组、达菲组、银花平感颗粒组、三拗汤组,灌胃给予相应药物5 d后,处死动物。酶联免疫吸附法(ELISA)检测流感病毒感染小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量,荧光定量PCR法检测肺组织中Toll样受体3/7(TLR3/7)、髓样分化因子88(MyD88)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、转录因子-κB(NF-κB p65)基因的表达,免疫组化法检测JNK,p38MAPK,NF-κB p65蛋白的表达。结果显示,银花平感颗粒和三拗汤均显著降低肺组织血清中TNF-α和IL-6水平及升高IFN-γ水平,显著下调流感病毒感染小鼠肺组织中TLR3/7,MyD88,JNK,p38MAPK,NF-κB p65基因的表达水平,显著降低肺组织中JNK,p38MAPK,NF-κB p65蛋白的表达水平,且银花平感颗粒对其调控效果优于三拗汤。结果表明,银花平感颗粒和三拗汤对流感病毒肺炎小鼠有一定的治疗作用,其抗流感病毒的作用机制可能是通过调节流感病毒感染小鼠的免疫功能和调控TLR3/7信号通路多个环节的基因和蛋白表达相互作用的结果,兼有清热解毒与宣肺解表疏邪之法的辛温与辛凉合用药银花平感颗粒比辛温单用药三拗汤配伍更全面,疗效更好。     

疏风宣肺方、解表清里方药对流感病毒小鼠TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察疏风宣肺和解表清里方药对流感病毒亚甲型肺适应株（FM1）感染小鼠肺组织细胞Toll样受体7（Toll-like receptor 7, TLR7）、髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88, MyD88）、激活核因子Kappa B（nuclear factor-kappaB,NF-κB） mRNA及蛋白表达的影响。方法 选择108只小鼠,随机分为9组：正常组,模型组,磷酸奥司他韦胶囊组［西药组,2.5 g/（mL?d）］,疏风宣肺方（中药1）高、中、低剂量组［3.762、1.881、0.941 g/（kg?d）］,解表清里方（中药2）高、中、低剂量组［4.368、2.184、1.092 g/（kg?d）］,每组12只。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉,正常组以0.05 mL生理盐水滴鼻,其余各组以0.05 mL 4LD50流感病毒FM1稀释液滴鼻感染小鼠。造模成功率100%。感染后2 h灌胃给药。正常组、模型组灌胃蒸馏水, 0.2 mL/次,1次/d,连续干预4天。采用RT-PCR反应测定肺组织TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达,采用Western blot法测定肺组织TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达升高（P<0.01）;与模型组比较,西药组,中药1高、中、低剂量组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,中药2高、中剂量组TLR7、NF-κB mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,中药2高、中剂量组MyD88 mRNA表达降低（P<0.05）,中药2中剂量组MyD88蛋白表达降低（P<0.05）,中药2低剂量组TLR7、NF-κB蛋白表达降低（P<0.05）。与西药组比较,中药1低剂量组MyD88蛋白表达降低（P<0.05）,中药1中、低剂量组NF-κB蛋白表达降低（P<0.01）;中药2高、中、低剂量组TLR7 mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,MyD88蛋白表达降低（P<0.01）,中药2低剂量组NF-κB mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。结论 疏风宣肺方各剂量和解表清里中剂量能通过调节MyD88依赖的TLR信号传导通路下调NF-κB活性,发挥抗流感病毒的作用。疏风宣肺方效果优于解表清里方。     

萆薢总皂苷对尿酸钠诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响

目的:研究萆薢总皂苷(TSD)对尿酸钠(MSU)诱导THP-1细胞Toll样受体/核转录因子-κB(TLR/NF-κB)信号通路的影响,探讨其抗痛风性关节炎的可能作用机制。方法:佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,分为正常组,模型组,TSD低、中、高质量浓度组(1,3,10 mg·L~(-1))和秋水仙碱组(0.2 mg·L~(-1)),除正常组外,其余各组均用400 mg·L~(-1)MSU刺激6 h,诱导体外炎症反应。噻唑蓝(MTT)比色法检测TSD对细胞活力影响;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液炎性因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的分泌水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR4,髓样分化因子88(MyD88)及NF-κB蛋白表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4,NF-κB及IL-1β前体(Pro-IL-1β)mRNA表达水平;免疫荧光法检测NF-κB p65的核位移情况。结果:0～32 mg·L~(-1)TSD对细胞活力基本无影响;与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α及IL-1β的分泌水平显著升高(P0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL-1β)的表达显著升高(P0.01);与模型组比较,1～30 mg·L~(-1)TSD可显著下调炎性因子TNF-α及IL-1β的分泌(P0.01),通路关键蛋白(TLR4,MyD88及NF-κB)和基因(TLR4,NF-κB及Pro-IL-1β)的表达明显降低(P0.05,P0.01),细胞核内NF-κB p65叠加减少,部分转位至胞浆,抑制NF-κB p65核转位。结论:TSD可能通过下调TLR4,NF-κB及Pro-IL-1βmRNA的表达,减少炎性因子TNF-α及IL-1β分泌而发挥抗炎作用。     

平喘方对哮喘小鼠NF-κB信号通路的调控及对TLR4 mRNA和蛋白表达的影响

目的研究平喘方通过调节核因子-K B(NF-K B)信号通路对哮喘小鼠的作用及其对Toll样受体4(TLR4)mRNA和蛋白表达的影响。方法将60只SPF级雄性Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组、平喘方组,每组15只。除空白组外,其余组均采用先卵清蛋白(OVA)+氢氧化铝凝胶[AI(OH)3]腹腔注射致敏,采用OVA雾化激发的方法来建立哮喘模型。地塞米松组、平喘方组分别予0.075 mg/mL地塞米松溶液、5.33 g/mL平喘方灌胃治疗1周,空白组、模型组给予等量生理盐水灌胃。末次给药24 h后,采用HE、Masson染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,Western Blot观察肺组织中NF-κB亚单位(p65)、NF-κB的抑制蛋白(IκBα)、TLR4、髓样分化因子(MyD88)蛋白表达,RT-PCR法观察p65、IκBα、TLR4、MyD88 mRNA水平。结果HE及Masson染色可见模型组小鼠肺组织明显炎症细胞浸润,上皮基底膜增厚,胶原纤维增多,平喘方组小鼠肺部炎性细胞浸润明显减轻,胶原纤维面积减小;与空白组比较,模型组小鼠BALF中IL-6、TNF-α浓度,肺组织中p65、MyD88蛋白表达及mRNA水平,气管中TLR4mRNA及蛋白表达水平均升高(均P<0.01),IκBα蛋白表达及mRNA水平降低(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组和平喘方组BALF中IL-6、TNF-α浓度均降低,MyD88、p65、TLR4蛋白表达及mRNA水平下调(P<0.01,P<0.05),地塞米松组IκBα蛋白表达及mRNA水平升高(均P<0.01),平喘方组IκBαmRNA水平升高(P<0.01),IκBα蛋白表达上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。与地塞米松组比较,平喘方组BALF中IL-6、TNF-α因子水平、p65 mRNA水平、TLR4 mRNA水平、MyD88蛋白表达及mRNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),p65及TLR4蛋白表达升高(P<0.05)。结论平喘方对OVA诱导哮喘小鼠的气道炎症有较好的改善作用,其机制可能与降低TLR4及MyD88活性,调控NF-κB信号通路有关。     

补肺健脾益肾方对COPD模型大鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路相关因子的影响

目的:研究补肺健脾益肾方对大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)通路的影响。方法:采用随机数字表法将40只大鼠随机分为模型组、常规组、实验组、正常组,每组10只。取其干预12周后肺组织和支气管肺泡灌洗液,比较各组大鼠干预期间一般情况,比较各组大鼠TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA水平及肺组织形态学评分。结果:正常组大鼠在干预期间皮毛、活动度、饮水进食、体重增长趋势均优于其余三组,常规组及实验组上述表现均优于模型组。与正常组比较,模型组大鼠TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、NF-κB mRNA水平均升高; 与模型组比较,常规组、实验组以上指标均低,且实验组低于常规组,差异有统计学意义(均P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠肺组织上皮细胞变性坏死糜烂脱落、气道管壁黏膜充血水肿、气道管壁中性粒细胞浸润评分均升高,与模型组比较,常规组、实验组以上指标均降低,且实验组低于常规组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:补肺健脾益肾方可通过抑制大鼠TLR4/MyD88/NF-κB通路相关因子表达改善COPD的气道炎症反应,提高治疗效果。     

苜蓿素对哮喘小鼠肺泡巨噬细胞TLR4/MyD88/NF-κB通路的抑制作用

目的观察苜蓿素对低剂量脂多糖(LPS)诱导的哮喘小鼠气道炎症的抑制作用。方法采用低剂量LPS+卵白蛋白(OVA)建立BALB/c小鼠哮喘气道炎症反应模型,随机分为哮喘模型组、苜蓿素组、地塞米松(阳性药)组,另设空白对照组。ELISA法对小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症介质NO、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平进行检测;HE染色观察小鼠肺组织病理情况;RT-PCR法和Western blot法对小鼠肺泡巨噬细胞的Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子κB p65(NF-κB p65)mRNA及蛋白表达进行检测。结果苜蓿素可显著降低哮喘小鼠BALF液中NO、TNF-α、IL-1β水平,有效改善哮喘小鼠肺部炎症,显著下调肺泡巨噬细胞的TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达量。结论苜蓿素对哮喘小鼠气道炎症有抑制作用,其机制可能与干预TLR4/My D88/NF-κB通路有关。     

黄芪桂枝五物汤对糖尿病周围神经病变大鼠模型AGEs/RAGE/NF-κB信号通路的影响

目的:研究黄芪桂枝五物汤对糖尿病周围神经病变大鼠模型晚期糖基化终产物(AGEs)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨黄芪桂枝五物汤减轻糖尿病周围神经病变的作用机制。方法:以高脂饮食加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导法,制作糖尿病周围神经病变大鼠模型。造模成功后,按照随机数字表法分成模型组、黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组、甲钴胺组,共5组,另设正常组,自第5周开始黄芪桂枝五物汤干预,采用黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组(19. 40,4. 85,2. 43 g·kg-1·d-1)连续灌胃12周;甲钴胺组采用甲钴胺0. 25 mg·kg-1·d-1灌胃。实验结束后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测糖尿病周围神经病变大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测坐骨神经组织中RAGE,NF-κB p65 mRNA含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测坐骨神经组织中RAGE,NF-κB,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β,TNF-α含量,坐骨神经组织RAGE,NF-κB p65 mRNA含量,RAGE,NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达显著增加(P0. 01),p-NF-κB p65/NF-κB p65升高,p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P0. 01)。经黄芪桂枝五物汤干预后,与模型组比较,各给药组血清IL-1β,TNF-α含量,RAGE,NF-κB p65 mRNA含量,RAGE,NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达量均显著降低(P0. 01),黄芪桂枝五物汤高剂量组p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(P0. 01),且呈剂量相关性,随黄芪桂枝五物剂量增加而效果明显。结论:黄芪桂枝五物汤可减轻糖尿病周围神经病变,其机制可能与阻断AGEs/RAGE/NF-κB信号通路中组织细胞表面RAGE的表达、抑制NF-κB激活及其引发TNF-α触发的氧化应激和过度炎症反应,从而避免细胞受损和功能紊乱有关。     

狼疮定对系统性红斑狼疮活动期肝肾阴虚证患者外周血单个核细胞中pDC含量及TLR7/TLR9/MyD88通路的影响

目的探讨狼疮定治疗系统性红斑狼疮(SLE)活动期肝肾阴虚证的可能作用机制。方法收取SLE活动期肝肾阴虚证患者及正常人全血分离外周血单个核细胞(PBMC),并将SLE活动期肝肾阴虚证患者PBMC分为模型组、狼疮定组(狼疮定冻干粉2μg/μl)、狼疮定+地塞米松组(狼疮定冻干粉2μg/μl+地塞米松注射液10μg/ml)、地塞米松组(地塞米松注射液10μg/ml)。用药24h后收集细胞,采用流式细胞术检测正常人与活动期SLE患者及各组PBMC中浆细胞样树突状细胞(pDC)含量。采用Realtime-PCR法检测各组PBMC细胞Toll样受体7(TLR7)、Toll样受体9(TLR9)、髓样分化因子88(MyD88) mRNA表达水平,Western blotting检测TLR7、TLR9、MyD88、核因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白表达,ELISA法检测其上清中干扰素α(IFN-α)含量。结果与正常人比较,SLE活动期患者外周血PBMC中pDC含量减少(P0.01)。与模型组比较,狼疮定组pDC含量、NF-κB p65蛋白表达增多,MyD88 mRNA及TLR7、TLR9蛋白表达、培养上清中IFN-α含量减少(P0.05或P0.01);狼疮定+地塞米松组TLR9、MyD88 mRNA及TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白表达,培养上清中IFN-α含量减少(P0.05或P0.01)。与地塞米松组比较,狼疮定组pDC含量增多,TLR7、MyD88 mRNA表达降低,培养上清中IFN-α含量降低;狼疮定+地塞米松组TLR7、TLR9、MyD88 mRNA表达及MyD88、NF-κB p65蛋白表达,培养上清中IFN-α含量均降低(P0.01)。与狼疮定组比较,狼疮定+地塞米松组NF-κB p65蛋白表达减少(P0.01)。结论狼疮定及狼疮定联合地塞米松可能通过增多活动期SLE患者PBMC中pDC含量,抑制其PBMC的TLR7/TLR9/MyD88信号通路,进而抑制SLE病情进展,且狼疮定联合地塞米松效果更好。     

双表法对流感病毒感染小鼠肺组织TLR4/NF-κB信号通路的调控作用

目的:研究扶正祛邪双表法对流感病毒感染小鼠肺组织TLR4/NF-κB信号通路的调控作用。方法:将昆明种小鼠随机分为模型组、正常组、解表法代表方剂银翘散(YQS)组、固表法代表方剂玉屏风散(YPF)组、双表法代表方剂(YPS)组以及利巴韦林组。采用流感病毒滴鼻方法建立病毒感染模型,根据给药量制备相应浓度药物并灌胃给药,正常组和模型组给予同体积生理盐水。采用RT-PCR、免疫组化法检测给药后1、3、5、7天各时间点各组小鼠Toll样受体4(toll like receptors 4,TLR4)和核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白及其m RNA动态表达情况。结果:YQS、YPF及YPS在不同时点均能不同程度阻断流感小鼠肺组织中TLR4、NF-κB蛋白及其m RNA的高表达,并且YPS组表达最低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:双表法对流感病毒感染小鼠的防治作用与抑制流感病毒感染小鼠肺组织TLR4/NF-κB信号通路过度活化有关。     

复方佛耳草合剂对慢性阻塞性肺疾病大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨复方佛耳草合剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响。方法 大鼠随机分为空白组(10只)和造模组(50只),造模组连续12周采用香烟烟雾联合气管注射LPS建立COPD大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)和复方佛耳草合剂低、中、高剂量组(6.8、13.6、27.2 g/kg),每组10只。给药干预24周后,采用动物肺功能仪检测大鼠肺功能,HE染色法观察肺组织病理变化,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平及SOD活性,RT-qPCR法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB及caspase-3 mRNA表达,Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB及TNF-α蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠存在肺通气功能障碍,肺组织和支气管受损明显,SOD活性降低(P<0.01),血清TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平升高(P<0.01),肺组织TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA表达和TLR4、MyD8...     

泽漆醇提物对LPS诱导小鼠急性肺损伤及其炎症信号通路MAPK/NF-κB的影响

目的:研究泽漆醇提物对脂多糖(LPS)所致急性肺损伤小鼠的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法:50只雄性BALB/c小鼠按体质量随机分为正常组,模型组,地塞米松组(1.5 mg·kg-1)及泽漆醇提物高、低剂量组(7.5,3.75 g·kg-1)。除正常组外,其余各组采用鼻腔内滴入LPS建立小鼠急性肺损伤模型。利用全自动血液分析仪以及瑞氏-姬姆萨复合染色法检测并观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞种类及数量;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织损伤情况;流式细胞仪检测BALF中炎性因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定核转录因子-κB(NF-κB)通路中NF-κB p65,NF-κB抑制蛋白α(IκBα),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路中c-Jun氨基末端激酶(JNK),p38,细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)及其磷酸化蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺组织出现明显损伤,其中大量炎性细胞浸润,且肺泡完整性被破坏。BALF中炎性因子TNF-α,IL-6及肺组织NF-κB p65,JNK,p38,ERK1/2磷酸化蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组比较,泽漆醇提物高剂量组及地塞米松阳性药组小鼠肺组织病理损伤明显缓解,BALF中TNF-α,IL-6含量及肺组织NF-κB p65,JNK,p38,ERK1/2磷酸化蛋白表达水平显著下调(P0.01)。结论:泽漆醇提取物对LPS诱导小鼠急性肺损伤具有保护作用,其机制可能与调控MAPK/NF-κB信号通路有关。