基于指纹图谱和网络药理学的南柴胡质量标志物预测分析

目的基于指纹图谱和网络药理学分析南柴胡Bupleurumscorzonerifolium中潜在的质量标志物(qualitymarker,Q-Marker)并测定其含量。方法运用高效液相色谱法建立南柴胡药材指纹图谱,确认共有峰并进行指认,再运用网络药理学方法构建"活性成分-靶点-通路"网络,预测Q-Marker,并测定其含量。结果建立了12批南柴胡药材指纹图谱,确认了13个共有峰,通过柴胡皂苷对照品指认5个色谱峰,分别为柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷f;经网络药理学确认以上5种成分为活性成分,可作用于14个核心靶点、20条关键通路发挥抗炎、抗抑郁、抗肿瘤作用,初步预测柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷f为南柴胡潜在的Q-Marker,南柴胡药材中其总质量分数不低于0.10%。结论南柴胡Q-Marker预测分析为药材质量评价提供参考,为阐明其药效物质基础的作用机制奠定基础。     

柱前衍生化法评价不同品种和产地柴胡药材和饮片的质量

目的:通过对大量柴胡药材和柴胡饮片样品中柴胡总皂苷和柴胡皂苷a,d的含量进行测定评价不同产地、不同品种柴胡样品的质量优劣。方法:分光光度法测定柴胡总皂苷的含量;柱前衍生化HPLC-UV测定柴胡皂苷a,d的含量。结果:红柴胡、黑柴胡的皂苷类成分较北柴胡低,竹叶柴胡几乎检不出柴胡皂苷;北柴胡的柴胡皂苷a的质量分数主要在0.100%~0.330%,柴胡皂苷d 0.200%~0.400%,柴胡总皂苷1.00%~2.00%;粗根无分支柴胡皂苷成分明显低于细根或粗根多分支柴胡药材。结论:建议北柴胡的柴胡皂苷a的含量不得低于0.100%,柴胡皂苷d不得低于0.200%,柴胡总皂苷不得低于1.00%;北柴胡的适宜产区为山西中部的太谷,山西南部的芮城,平陆,万荣,山西东南部的长治,甘肃的陇西,礼县等地;选育北柴胡品种时优先选取根粗且多分支的品种。     

北柴胡及醋北柴胡标准汤剂质量差异性分析

目的 建立北柴胡Bupleurum chinense及醋北柴胡标准汤剂质量评价方法,比较二者质量的差异性。方法 制备北柴胡及醋北柴胡标准汤剂各20批,对醋制前后标准汤剂的pH值及出膏率进行考察;建立北柴胡醋制前后标准汤剂HPLC指纹图谱方法和多指标成分含量测定方法,并结合化学计量学和统计学方法对二者差异进行分析。结果 北柴胡醋制后标准汤剂pH值降低,出膏率降低;建立了北柴胡及其醋制品标准汤剂指纹图谱,分别确定了16个共有峰,指认了其中5个共有峰;北柴胡标准汤剂相似度为0.976～0.995,醋北柴胡标准汤剂相似度为0.946～0.996。主成分分析将北柴胡及其醋制品标准汤剂归为2类,正交偏最小二乘法-判别分析找出二者共7个差异色谱峰,分别为峰1、4(柴胡皂苷c)、6、7(柴胡皂苷a)、9(柴胡皂苷b₂)、10(柴胡皂苷b₁)及13(柴胡皂苷d),为北柴胡及醋北柴胡标准汤剂差异化合物。多指标成分含量测定结果表明北柴胡醋制前后指标成分含量具有显著差异(P<0.05),北柴胡醋制后标准汤剂中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c及柴胡皂苷d含量较低,柴胡皂苷...     

北柴胡麸煨工艺的正交试验法优选

目的优选北柴胡的最佳麸煨工艺。方法以柴胡皂苷a、d含量为考察指标,通过正交试验考察麦麸用量、麸煨锅温、麸煨时间3个因素,采用高效液相色谱法进行含量测定。结果麸煨锅温和麸煨时间对柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量均有显著性影响,而麦麸用量对柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量影响不明显。最佳麸煨工艺为1倍麦麸用量,麸煨锅温150℃,麸煨时间60 min。结论优选的北柴胡最佳麸煨工艺合理可靠,重现性好,为规范麸煨北柴胡的饮片加工提供参考。     

北柴胡标准汤剂的制备与质量评价研究

目的 根据标准汤剂的制备方法制备15批北柴胡标准汤剂,并对其进行质量评价研究。方法 收集产自不同地区的15批北柴胡饮片,依据标准化工艺制备成15批北柴胡标准汤剂。以出膏率、柴胡皂苷a含量及其转移率、特征图谱为主要表征参数,对北柴胡标准汤剂进行质量评价。结果 北柴胡标准汤剂的出膏率在13.71%～17.21%之间;柴胡皂苷a转移率在21.24%～37.17%之间,其中特征图谱指认了柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷b₁和柴胡皂苷b₂共4个共有峰。结论 本研究制备的北柴胡标准汤剂符合《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》中的相关规定,建立的含量与特征图谱测定方法精密度、稳定性及重复性良好,可为北柴胡标准汤剂及其配方颗粒的质量控制提供参考。     

柴胡属药材皂苷高效薄层色谱指纹图谱的研究

目的以柴胡正品北柴胡为基础建立柴胡皂苷高效薄层荧光色谱指纹图谱，并对同属品种南柴胡、锥叶柴胡、多枝柴胡、三岛柴胡、西藏柴胡等的指纹图谱进行比较分析。方法硅胶60高效预制薄层板，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（30：40：15：3）为展开剂展开，2％对二甲氨基苯甲醛／10％硫酸乙醇液显色后获得薄层荧光色谱指纹图谱，经指纹图谱系统解决方案软件（Chromafinger^TM）生成共有模式，并进行了相似度和主成分分析。结果北柴胡指纹图谱由19个特征荧光条斑组成。荧光色谱图像与轮廓扫描图谱结合分析比较，可分为北柴胡指纹图谱模式、锥叶柴胡模式及大叶柴胡模式。北柴胡、南柴胡、多枝柴胡、三岛柴胡虽然总皂苷含量相互有别，但指纹图谱彼此相似，如西藏柴胡指纹图谱接近北柴胡，虽然整体皂苷含量高于其他品种，但均可归属于“北柴胡指纹图谱模式群”。锥叶柴胡及有毒性的大叶柴胡指纹图谱可明确与北柴胡区别。结论经指纹图谱考察，当前市场商品以‘北柴胡指纹图谱模式’为主流。大叶柴胡为有毒品种，性状及指纹图谱与正品柴胡不同，易于区别。     

基于聚类分析和典型相关分析的北柴胡保肝作用谱效关系研究

目的 探讨北柴胡正丁醇萃取部位的保肝作用及与其HPLC指纹图谱间的谱效关系,以阐明其药效物质基础。方法 采用HPLC-ELSD法获取北柴胡正丁醇萃取部位的指纹图谱;检测CCl₄所致急性肝损伤小鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平、肝组织中丙二醛（MDA）的量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性;利用聚类分析与典型相关分析法对色谱-药效数据进行相关分析。结果 从HPLC指纹图谱中共提取出12个能够标示药材特征的皂苷类成分的共有峰。不同产地北柴胡药材的保肝作用存在显著差异（P＜0.05）。聚类分析和典型相关分析明确了给予北柴胡正丁醇萃取部位的小鼠血清中ALT水平和肝组织中SOD活性与皂苷类化合物柴胡皂苷a和柴胡皂苷d之间存在线性关系。结论 北柴胡保肝作用的部分药效物质基础为柴胡皂苷a和柴胡皂苷d。     

HPLC-ELSD指纹图谱分析提取与炮制对柴胡中化学成分的影响

目的:建立柴胡HPLC-ELSD指纹图谱,分析柴胡主要成分在提取和炮制过程中的变化规律。方法:色谱条件为Phenomenex KinetexC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~60 min,25%~58%A),柱温30℃,流速1.0 m L·min-1,进样量10μL,检测器为蒸发光检测器,氮气流速3.0 m L·min-1;以此色谱条件分别对4种样品(柴胡水提液、柴胡醇提液、醋柴胡水提液、醋柴胡醇提液)进行指纹图谱研究,并测定柴胡皂苷a,d,b1,b2的含量。结果:得到4种柴胡样品指纹图谱,共指认23个色谱峰,各样品的指纹图谱共有模式图不尽相同,成分色谱峰存在较大差异。柴胡经水提加热回流或醋炙后会使原生皂苷向次生皂苷转化,其中醋柴胡水提液中的原生皂苷含量最少,次生皂苷含量最多,柴胡醇提液中次生皂苷含量最少。结论:所建立的HPLC-ELSD指纹图谱可作为柴胡化学成分分析测定的方法;柴胡经水提或醋炙后化学成分变化较大,含柴胡制剂的临床使用及质量评价应充分考虑到柴胡皂苷类成分的转变情况。     

不同炮制方法对北柴胡中柴胡皂苷含量的影响

目的测定北柴胡不同炮制品(蜜炙北柴胡和麸炒北柴胡)中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量。方法采用高效液相色谱法;Ultimate XB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,0.45μm);流动相:乙腈-水;流速:1.0ml/min;检测波长:210nm;柱温:30℃;采用梯度洗脱法测定北柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a和皂苷d的含量。结果生柴胡和麸炒北柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量均高于蜜制北柴胡中的柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量。结论不同炮制方法对北柴胡中柴胡皂苷a、d含量影响不同。     

栽培与野生北柴胡质量比较分析

目的以河北承德地区栽培的北柴胡和北京昌平地区野生的北柴胡为样本,探讨北柴胡栽培品与野生品的质量差异以及北柴胡最适宜的采收期。方法主要以柴胡皂苷a、d的含量以及北柴胡醇溶性浸出物为指标,采用高效液相色谱法为分析方法。结果所有样品醇溶性浸出物及柴胡皂苷a、d总含量均符合2015年版《中国药典》的要求。醇溶性浸出物在春季野生北柴胡中含量最高,与栽培品差异不大。柴胡皂苷a及柴胡皂苷d在春季栽培北柴胡中均含量最高。栽培品与野生品中柴胡皂苷a、d的含量,春季采收品均高于秋季采收品。结论野生北柴胡与栽培北柴胡柴胡皂苷a、d含量差异较大,栽培品含量显著高于野生品以及药典要求,可替代野生北柴胡使用。建议在春季对北柴胡进行采收。     

HPLC法测定柴胡中柴胡皂苷的含量及皂苷类成分指纹图谱初步研究

目的 测定柴胡中柴胡皂苷的含量。方法采用HPLC法。结果柴胡皂苷a及柴胡皂苷d的平均回收率为101．6％和98．05％，RSD分别为1.51％和1．60％。结论方法准确、快速、可靠；用本文的指纹图谱难以控制商品柴胡药材的质量。     

柴胡口服液HPLC指纹图谱及柴胡皂苷b2的含量测定

目的:建立柴胡口服液HPLC指纹图谱,并测定柴胡皂苷b2的含量,为科学评价和有效控制其质量提供可靠的方法.方法:用HPLC方法测定了10批柴胡口服液,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统,建立柴胡口服液的标准指纹图谱,并计算了每批制剂的相似度及柴胡皂苷b2的含量.结果:10批柴胡口服液的HPLC指纹图谱主要有11个共有峰,其中1个共有峰得到确认,相似度均＞0.985.柴胡皂苷b2在0.0397～0.793 3μg呈良好的线性关系(r=0.999 1),平均加样回收率98.27％,RSD 1.79％.结论:柴胡口服液制剂可通过与标准指纹图谱比较评价质量,方法稳定易行、重复性好,可用于柴胡口服液的质量评价.     

野生北柴胡根与根茎中化学成分比较研究

目的对比野生北柴胡根与根茎中各化学成分含量差异,为进一步明确柴胡药用部位提供科学依据。方法实地考察北京百花山与灵山的北柴胡野生资源,采挖地下部分,区分根与根茎;采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮及总皂苷含量,高效液相色谱法测定柴胡皂苷a、c、d的含量,利用SAS 8.2软件对根与根茎中各化学成分进行配对t检验与主成分分析,并以主成分得分进行综合性评价。结果野生北柴胡根与根茎中总黄酮含量无显著性差异;根中总皂苷与柴胡皂苷a、c、d含量显著高于根茎含量,其中根茎中柴胡皂苷a+d含量未达到药典规定标准;主成分分析提取三个特征值:综合型(Z_1)、黄酮型(Z_2)、皂苷型(Z_3),累计方差贡献率达到97.90%,特征向量构建主成分线性关系为:Y=0.6638Z_1+0.1851Z_2+0.1301Z_3,根与根茎主成分得分之间存在显著性差异(P=0.0022),且根中平均值高于根茎。结论野生北柴胡根茎中皂苷类成分远低于根,根茎不能药用,只有根才可药用。     

市售柴胡药材的质量评价

目的:鉴别市售柴胡药材基原,分析评价药材质量,为柴胡药材质量调控奠定基础。方法:从河北安国、安徽亳州、广西玉林3个中药材专业市场收集柴胡药材或饮片共24份,参考《中华人民共和国药典》及相关文献,采用性状鉴定法鉴别样品基原,HPLC法测定柴胡皂苷a和d的含量,综合外观性状和皂苷含量测定结果,评价样品质量。结果:市售柴胡来源混杂,正品以北柴胡多见,其余以马尔泰柴胡、锥叶柴胡为多,同时存在不同程度的掺伪现象;市售柴胡中柴胡皂苷a、d含量参差不齐,其中马尔泰柴胡皂苷a+d含量最高,部分掺伪品柴胡皂苷含量不符合药典标准。结论:现今市场流通的柴胡复杂的来源造成了柴胡药材质量的不稳定。人工种植柴胡作为市售柴胡药材的主要来源,其种植来源问题亟需解决,种植药材质量也需要进一步提升,才能确保柴胡的临床用药安全和疗效。     

不同采收期北柴胡指标性成分的动态积累研究

目的:以河南嵩县地区北柴胡为样本,研究柴胡皂苷a、d,挥发油及醇溶性浸出物的动态变化规律,探讨北柴胡的最适采收期。方法:以柴胡皂苷a、d的含量,柴胡挥发油的吸光度以及柴胡醇溶性浸出物为指标,采用高效液相-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)及紫外分光光度法为分析方法。结果:不同采收期北柴胡中的柴胡皂苷a、d,挥发油及醇溶性浸出物均存在明显的差异。其中柴胡挥发油的含量10月份最高;柴胡皂苷a的含量9月份最高;柴胡皂苷d的含量12月份最高;而醇溶性浸出物10月份最高。结论:确定了河南地区北柴胡的最适采收期,为柴胡药材的采收及生产提供了一定的科学依据。     

柴胡疏肝汤高效液相指纹图谱的建立及含量测定

目的建立柴胡疏肝汤高效液相指纹图谱方法,并同时测定柴胡皂苷a、汉黄芩苷、芍药苷的含量,为该方质量控制提供参考。方法采用RP-HPLP-DAD法,利用ZORBAX SB-C8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),在检测波长210nm、柱温25℃下,以乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱。对10批柴胡疏肝汤进行指纹图谱及柴胡皂苷a、汉黄芩苷、芍药苷含量测定研究,采用"中药色谱指纹谱图相似度评估软件"(2004A)进行分析。结果建立了柴胡疏肝汤指纹图谱共有模式,标定22个共有峰,10批柴胡疏肝汤相似度较好(均大于0.96);通过与标准品的保留时间和紫外光谱图对比,确定了7个成分;柴胡皂苷a、汉黄芩苷、芍药苷重复性、稳定性良好,含量测定结果可靠。结论指纹图谱的建立和多成分含量测定,可以为该方提供较全面的质量控制依据。     

指纹图谱轮廓分析结合化学计量对柴胡配方颗粒质量差异特征性分析

目的采用色谱轮廓及化学计量学结合的方法对不同生产企业生产的柴胡配方颗粒进行差异性研究,以促进柴胡配方颗粒的质量一致性。方法研究建立了柴胡配方颗粒高效液相210和254 nm指纹图谱,并且通过相似度分析、聚类分析、主成分分析以及偏最小二乘判别分析分别对双波长指纹图谱进行了质量差异特征性分析。结果建立了12批柴胡配方颗粒的指纹图谱。结果表明,所建立的双波长指纹图谱可以对不同生产企业生产的柴胡配方颗粒进行区分,也进一步明确了不同生产企业生产的柴胡配方颗粒指纹图谱特征色谱峰的位置。结论柴胡配方颗粒的210 nm指纹图谱的特征差异最大,建议双波长指纹图谱结合一起进行分析及应用;柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2和柴胡皂苷b1为质量差异的关键组分,应在对柴胡配方颗粒进行质量评价与控制时重点关注。     

不同产地北柴胡中柴胡皂苷含量与土壤因子的关系

目的土壤是影响中药材活性成分形成和积累的重要生态因子,以11个省市自治区29个样地野生和栽培北柴胡Bupleurum chinense为研究材料,采用数学统计分析方法探讨柴胡皂苷积累与土壤因子的关系,为实施土壤生态调控提高北柴胡品质提供依据。方法采用高效液相色谱法(HPLC)分析不同产地北柴胡柴胡皂苷a、c、d、e、f的含量;采用常规方法测定土壤样品的pH、有机质、电导率、全氮、碱解氮、速效磷、速效钾、有效镁、有效铁、有效铜、有效锰;通过聚类分析研究不同产地北柴胡皂苷差异;通过主成分分析解释不同产地土壤因子差异;通过Pearson相关性分析研究土壤因子与北柴胡柴胡皂苷含量的关系。结果北柴胡的柴胡皂苷测定结果显示河南禹州的柴胡皂苷含量最高,其中柴胡皂苷a和d的含量分别为0.71%、0.80%。对不同产地进行聚类分析,根据柴胡皂苷差异29个样地分为3类。对柴胡皂苷含量与土壤因子进行Pearson相关性分析表明,土壤的有机质、有效铁与各柴胡皂苷之间呈极显著正相关(P0.01),有效铜、有效镁与各柴胡皂苷之间呈显著负相关(P0.05)。不同产地土壤主成分分析表明,得分较高的是样地9、10、11、14、19、28,这与不同产地北柴胡柴胡皂苷含量聚类分析的结果基本一致;通过对不同产地北柴胡主要土壤指标分析发现,在一定范围内土壤中有效铁含量与柴胡皂苷含量显著正相关,这与Pearson相关性分析结果基本一致。结论研究结果提示在北柴胡生产实践中可以通过提高土壤有机质含量,增施铁肥等农艺措施调控北柴胡柴胡皂苷含量。     

多成分指标定量结合指纹图谱分析评价不同产地柴胡的质量

目的高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)同时测定柴胡药材中柴胡皂苷a、柴胡皂苷b2、柴胡皂苷c和柴胡皂苷d的含量,结合柴胡药材的HPLC-DAD指纹图谱研究,对不同产地柴胡药材的质量进行初步比较和评价。方法采用Agilent Zorbax SB-C18(4. 6mm×250mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1. 0mL·min-1,柱温30℃。利用化学计量法对色谱数据进行相似度比较和聚类分析。结果测定了15批不同产地的柴胡药材,发现15批药材中4种柴胡皂苷类成分的含量差异较大。指纹图谱相似度比较显示S1,S7,S8,S10样品间相似度大于0. 95,S1,S7,S8,S9,S10,S12,S13,S14,S15与对照指纹图谱之间相似度大于0. 90,其余样品与对照指纹图谱之间相似度均不大于0. 86; 15批样品可聚为4类,与相似度计算结果基本一致。结论市场上柴胡药材产地来源多,质量参差不齐。该方法重现性好,可以为不同产地柴胡药材的质量控制和评价提供依据。     

五个产地北柴胡中皂苷含量的比较

目的:建立柴胡药材中柴胡皂苷的含量测定方法,并比较不同产地北柴胡总皂苷及皂苷a,d的含量。方法:紫外分光光度法测定柴胡总皂苷的含量,检测波长546 nm。高效液相色谱法测定柴胡皂苷a,d的含量,色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B)梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温为35℃,检测波长210 nm。结果:柴胡总皂苷在0.0462⁰.462 mg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为97.12%,RSD为2.29%;柴胡皂苷a,d分别在0.06900.462 mg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为97.12%,RSD为2.29%;柴胡皂苷a,d分别在0.0690⁰.690、0.07360.690、0.0736⁰.736 mg·mL-1范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为97.85%、101.07%,RSD分别为1.68%、1.88%。不同产地北柴胡药材中柴胡皂苷含量差异较大,其中陕西,河北的北柴胡药材中柴胡皂苷含量相对高于其它产地。结论:本方法简单准确,重复性好,适用于柴胡总皂苷及皂苷a,d的含量测定,柴胡皂苷在各产地北柴胡间差异较大。