壮药扶正方对TAMs与肿瘤细胞共培养体系A549细胞生物学行为的影响

目的:探讨壮药扶正方含药血清对肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）与肺癌A549细胞共培养体系肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为影响及可能的作用机制。方法:采用氟波酯（PMA）联合白细胞介素-4、白细胞介素-13诱导人急性白血病单核细胞株（THP-1）建立TAMs体外模型,实时定量PCR及酶联免疫吸附试验法分析含药血清（低、中、高剂量组)及药物处理后24、48、72 h对TAMs表型调节;采用共培养体系,以肺癌A549细胞为研究对象,分别采用MTT法、实时细胞分析技术（RTCA）、Transwell法检测不同条件下A549细胞增殖、迁移及侵袭情况。结果:壮药扶正方含药血清能显著上调TMAs中M1型标志物白细胞介素-12、诱导型一氧化氮合酶表达水平,下调M2型标志物白细胞介素-10、CD206表达水平;与空白对照组比较,共培养组A549细胞增殖明显增加,细胞迁移及侵袭能力均明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与共培养组比较,壮药扶正方含药血清低、中、高剂量组A549细胞增殖、迁移和侵袭作用受抑制,且呈剂量依赖性（P<0.05）。结论:壮药扶正方含药血清在共培养体系中能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移及侵袭作用,机制可能与其调节肿瘤微环境TAMs表型有关。     

芪连扶正胶囊含药血清对肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的:观察芪连扶正胶囊含药血清对肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:体外培养肺癌A549细胞,按实验分组干预,采用MTT法检测细胞增殖、划痕试验观察细胞迁移,Transwell实验观察细胞侵袭情况。结果:芪连扶正胶囊含药血清对肺癌A549细胞的增殖抑制且呈时间、浓度依赖性,且与化疗联合有协同作用;各药组细胞迁移值均小于对照组,与之比较除芪连扶正胶囊低剂量组外均有显著性差异(P0.05);与顺铂组相比,芪连扶正胶囊各组迁移值均大于顺铂组(P0.01),而联合组迁移值小于顺铂组(P0.01);芪连扶正胶囊低、中、高剂量组、顺铂组及联合组的侵袭抑制率分别为8.87%、19.11%、24.57%、37.88%、47.10%。结论:芪连扶正胶囊含药血清可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭,具有抗肿瘤转移作用。     

补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞中整合素β1蛋白表达的影响

目的:利用补中益气汤含药血清干预TGF-β介导的肺腺癌A549细胞,观察A549细胞中整合素β1的表达变化,探讨补中益气汤在肺癌侵袭和转移过程中的作用。方法:采用血清药理学方法制备含药血清,按照随机对照方法将40只SD大鼠随机分为4组,分别为补中益气汤高剂量含药血清组(11.34 g·kg-1)、补中益气汤中剂量含药血清组(5.67 g·kg-1)、补中益气汤低剂量含药血清组(2.84 g·kg-1)和空白血清组(10 m L·kg-1),每日给药一次,连续灌胃三天后提取大鼠血清,用于后续实验。将A549细胞分为空白血清组(10%大鼠空白血清)、TGF-β+空白血清组(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠空白血清)、TGF-β+补中益气汤高剂量含药血清(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠高剂量含药血清)、TGF-β+补中益气汤中剂量含药血清(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠中剂量含药血清)、TGF-β+补中益气汤低剂量含药血清组(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠低剂量含药血清)。MTT法检测补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞的抑制率。细胞划痕实验检测补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞迁移能力的影响。细胞免疫荧光技术、western blot方法检测整合素β1在蛋白水平上的表达。结果:与A549细胞空白血清组、TGF-β+空白血清组分别比较,补中益气汤高剂量、中剂量和低剂量含药血清可提高对TGF-β介导的A549细胞的抑制率(IR)(P0.01),分别具有抑制TGF-β介导的A549细胞的迁移作用(P0.01),且能减少整合素β1在蛋白水平上的表达(P0.01)。结论:补中益气汤含药血清能抑制TGF-β介导的A549细胞的生长及迁移,以及能降低整合素β1在蛋白水平上的表达。     

二冬膏抗NF-κB抑制介导的人肺癌细胞效应探讨

目的:探讨二冬膏的抗肿瘤效应,并研究核转录因子κB(NF-κB)在二冬膏抗肿瘤效应中的作用。方法:用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测二冬膏对A549细胞的增殖抑制效应(量效和时效关系);逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测二冬膏对A549细胞p65 mRNA表达的影响;采用免疫印迹法(Western blot)检测二冬膏对A549细胞p65蛋白表达的影响。结果:不同剂量组二冬膏含药血清均具有对肺腺癌A549细胞的明显增殖抑制作用(P0.05),且各自表现出一定时间和剂量相关性,给药干预24 h后细胞增殖均出现抑制,其中以二冬膏中剂量组(3.2 g·kg-1,bid)干预48 h后对细胞增殖的抑制作用最明显。二冬膏中剂量组(3.2 g·kg-1,bid)干预A549细胞24 h后明显抑制p65 mRNA的表达;中剂量组(3.2 g·kg-1,bid)干预A549细胞后48 h对p65蛋白有显著抑制效应。结论:二冬膏可显著抑制人肺腺癌细胞系A549的增殖,通过对NF-κB的抑制介导其抗肿瘤活性。     

二冬汤含药血清对肺癌细胞A549的作用研究

目的：研究二冬汤含药血清对肺癌细胞A549的抑制作用、最佳给药方案及诱导细胞凋亡。方法：采用MTT法,观察不同给药天数、不同剂量、不同采血时间、不同培养时间的二冬汤血清对肺癌细胞A549的抑制效应,及应用FITC／PI流式细胞术检测最佳给药方案含药血清对A549细胞的凋亡率。结果：二冬汤含药血清对人肺癌细胞A549具有抑制作用,中剂量组[7．99g／（kg·d）]给药5天、10天,末次给药2h的含药血清与细胞培养48h后的抑制作用最明显,抑制率分别为42．27％和39．67％,与空白血清组比较,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）;但从给药天数以及与肺癌细胞培养时间上来看,与空白血清组比较,差异无显著性意义（P〉0．05）;FITC／PI双染法显示二冬汤含药血清对A549的凋亡总计为（28．45±0．68）％,与空白血清组（6．75±0．46）％比较,差异有非常显著性意义护〈0．01）。结论：二冬汤最佳给药方案为给药5天,末次给药2h后取血,此时制备的含药血清能诱导细胞发生凋亡。     

金福安汤对人肺腺癌A549细胞生物学行为的影响

目的 观察金福安汤对人肺腺癌A549细胞增殖、p120ctn磷酸化、细胞黏附及迁移的影响并探讨其治疗肺癌的作用机制.方法 培养A549细胞,分为空白对照组,金福安汤低、中、高剂量组,环磷酰胺组,分别给予含空白血清和含药血清培养液干预.检测各组A549细胞OD值并计算抑瘤率;刺激A549细胞p120ctn磷酸化后,检测各组A549细胞p120ctn灰度值;并观察各组p120ctn磷酸化的A549细胞黏附和迁移.结果 金福安汤高、中、低剂量组A549细胞OD值与空白对照组比较差异有统计学意义,且呈剂量相关性(P＜0.05或P＜0.01);金福安汤中剂量组A549细胞p120ctn磷酸化程度较空白对照组显著降低(P＜0.05);金福安汤中、高剂量组A549细胞的黏附能力较空白对照组高(P＜0.05),金福安汤各剂量组A549细胞的迁移能力较空白对照组下降(P＜0.05).结论 金福安汤具有抑制A549细胞增殖及其p120ctn磷酸化、促进细胞黏附和抑制迁移的作用.     

二参加芪口服液含药血清对人肺癌A549细胞的抑制作用及机制研究

目的:研究二参加芪口服液含药血清对人肺癌A549细胞的抑制作用及机制。方法:采用血清药理学方法制得二参加芪口服液三个剂量的含药血清,培养A549细胞,同时加入顺铂和含药血清,用MTT法测定吸光度值并计算各组肿瘤细胞生长抑制率,并用ELISA法测定加入含药血清后A549细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的含量。结果:各给药物组能显著抑制肿瘤细胞的增殖,与空白对照组比较,差异极显著(P0.01),尤其以加入二参加芪口服液含药血清中、高剂量组联合顺铂对A549细胞的抑制作用更明显,含药血清亦能显著提高A549细胞上清液中TNF-α和IFN-γ的含量,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:二参加芪口服液含药血清对人肺癌A549细胞具有抑制作用,提高肿瘤细胞上清液中IFN-γ和TNF-α含量可能是其作用机制。     

尖叶假龙胆醇提物含药血清对A549细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:探讨尖叶假龙胆醇提物(EEGA,ethanol extract from Gentianella acuta)含药血清对人肺癌A549细胞株诱导凋亡和影响细胞周期的作用。方法:采用四甲基偶氮盐(MTT)比色法检测EEGA含药血清对A549细胞作用24 h、48 h、72 h的增殖抑制率,使用流式细胞仪观察EEGA含药血清处理A549细胞48 h后,细胞凋亡率和细胞周期阻滞率变化的检测。结果:MTT显示EEGA低、中、高剂量含药血清都能抑制A549细胞增殖(P0.05),其抑制率与作用时间相关。低、中、高剂量含药血清处理A549细胞48 h后凋亡率显著高于空白组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理A549细胞48 h后,G0/G1期细胞明显较空白组增加(P0.01),提示EEGA含药血清可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期。结论:尖叶假龙胆对人肺癌A549细胞有抑制作用,机制可能与抑制细胞生长、阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响

目的研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备补中益气汤高剂量（补中益气汤1.134 g/mL,2 mL）、中剂量（补中益气汤0.576 g/mL,2 mL）、低剂量（补中益气汤0.284 g/mL,2 mL）含药血清,采用MTT法检测不同剂量和浓度的补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞的增殖抑制效应,计算耐药逆转倍数;采用免疫细胞化学法、Western blot技术、免疫荧光三种方法检测Survivin在两细胞株中的表达。结果补中益气汤含药血清对A549和A549/DDP细胞有明显抑制作用,10%各剂量组抑制率均高于5%相应剂量组,且随着剂量浓度的升高,抑制率也逐渐升高;与10%空白组比较,10%中、低剂量组抑制率升高（P〈0.05）;10%中剂量含药血清作用后,A549和A549/DDP IC50均降低（P〈0.05）,逆转倍数均升高,对A549/DDP细胞的逆转倍数达到2.46,使A549/DDP对顺铂的耐药性下降;与本组A549比较,免疫细胞化学法、Western blot法、免疫荧光法均检测到A549/DDP细胞中Survivin的表达量均降低（P〈0.05）,与10%空白组比较,10%中剂量组A549/DDP均降低（P〈0.05）。结论 10%中剂量补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞都有抑制作用,并可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,其逆转机制可能与减少细胞内Survivin的表达,增强A549/DDP对化疗药物的敏感性有关。     

芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路影响的研究

目的:观察芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路的影响。方法:分别运用MTT法检测含药血清对A549细胞增殖的影响;Annexin V-PE/7-AAD双染法检测含药血清对A549细胞凋亡的影响;Western-blot法检测含药血清对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响;RT-PCR法检测含药血清对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为24.26%,16.44%和10.89%,含药血清浓度越大,对细胞的抑制作用越显著。与空白组相比,芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组细胞凋亡率显著升高,且含药血清浓度越大,对细胞凋亡的作用越显著。芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因相对表达量与空白组相比,表达量降低,且含药血清浓度越大,对A549细胞凋亡相关蛋白和基因表达的影响越显著。结论:芪杉胶囊通过影响A549细胞凋亡相关Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因表达,从而抑制细胞增值、促进细胞凋亡。     

寿胎丸含药血清对人早孕滋养层细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

  目的：探讨寿胎丸含药血清对人早孕滋养层细胞增殖、侵袭、迁移能力的调节作用。  方法：体外分离培养人早孕滋养层细胞,采用高、中、低剂量寿胎丸含药血清进行干预,以空白血清、地屈孕酮含药血清为对照。采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术(FCM)及Transwell 侵袭移动实验测定滋养层细胞的增殖活性、周期分布及侵袭迁移能力。  结果：与空白组比较,滋养层细胞经寿胎丸含药血清干预后,细胞的增殖活性、侵袭迁移能力明显增强,S期细胞比例增高,G2/M期细胞比例降低(P<0.05)。与寿胎丸低剂量组比较,寿胎丸中、高剂量组滋养层细胞的增殖活性、侵袭迁移能力明显增强,细胞周期分布变化更加明显(P<0.05)。  结论：寿胎丸含药血清可促进人早孕滋养层细胞的增殖活性及侵袭迁移能力,减少细胞凋亡。     

固肺消积饮调控上皮—间质转化相关miRNA对肺癌A549细胞转移的抑制作用

目的 探讨固肺消积饮对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用及其通过调节上皮-间质转化(EMT)相关miRNA对肺癌A549细胞增殖、迁移能力的影响。方法 (1)将40只Balb/c裸鼠随机分为对照组、顺铂组和固肺消积饮低、中、高剂量组，每组8只。各组均采用皮下接种法建立肺癌移植瘤模型，顺铂组于造模后第1,3,5天给予顺铂溶液1 mL腹腔注射，固肺消积饮低、中、高剂量组分别于造模后给予固肺消积饮13 g/kg、26 g/kg、52 g/kg灌胃14 d,观察各组皮下成瘤情况，计算移植瘤体积、瘤重和抑瘤率。(2)将40只SD大鼠随机分为4组各10只，空白组给予生理盐水灌胃7 d制备空白血清，固肺消积饮低、中、高剂量组分别给予固肺消积饮9 g/kg、18 g/kg、36 g/kg灌胃7 d制备固肺消积饮低、中、高剂量含药血清。取肺癌A549细胞，实验分为空白组、固肺消积饮低含药血清、固肺消积饮中含药血清、固肺消积饮高含药血清组，采用CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性。取肺癌A549细胞，实验分为空白组和固肺消积饮高含药血清组，流式细胞仪检测A549细胞周期，Transwell小室实验检...     

六味地黄丸对肿瘤细胞抑制作用的研究

目的 探讨六味地黄丸对不同肿瘤细胞的抑制作用.方法 采用中药血清药理学方法,选择不同剂量的六味地黄丸水溶液以灌胃方式给药,以空白血清组为对照组,应用MTT法检测考察不同给药天数、不同采血时间点大鼠含药血清对人肝癌细胞BEL-7402、肺癌细胞A549共同孵育不同时间段的抑制作用.结果 六味地黄丸低剂量组(4.8 g·kg-1)给药5d与10d,在末次给药1h眼眶取血制作的含药血清与肝癌细胞孵育48 h的抑制作用最明显,抑制率分别为43.2％和42.8％.与空白对照血清组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),但是从给药天数上比较差异无统计学意义(P＞0.05).低剂量组(4.8 g·kg-1)给药5d末次给药4h取血制作的含药血清培养基,与人肺癌细胞孵育72 h的抑制作用为49.2％;给药10 d末次给药2h眼眶取血制作的含药血清培养基,与人肺癌细胞孵育48 h的抑制作用为47.2％,与空白对照血清组比较差异都有统计学意义(P＜0.01),但是从给药天数上比较差异无统计学意(P＞0.05).结论 对人肝癌细胞BEL-7402进行干预时,六味地黄丸含药血清的制备方法以低剂量(4.8 g·kg-1),给药5d,给药后1h取血,与肝癌肿瘤细胞培养48 h的抑制作用最为理想.对人肺癌细胞A549进行干预时,六味地黄丸含药血清的制备方法以低剂量(4.8 g·kg-1),给药5d,给药后4h取血,与肺癌肿瘤细胞培养72 h的抑制作用最为理想.     

人参水提液对TAMs与肿瘤细胞共培养体系肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的探讨人参水提液(water extract of ginseng,WEG)对肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)与肺癌A549细胞共培养体系肺癌A549细胞增殖、迁移及骨架蛋白F-actin表达等生物学行为影响。方法采用佛波酯(PMA)联合IL-4及IL-13诱导人急性白血病单核细胞株(THP-1)成为TAMs。以TAMs细胞上清与肺癌A549细胞共培养,模拟肿瘤微环境构建共培养模型。将细胞分为空白组(A549)、共培养组(TAMs+A549)、WEG高、中、低剂量组(TAMs+A549+WEG)。分别采用MTT法、实时细胞分析技术及高内涵细胞成像系统检测分析不同条件下A549细胞增殖、迁移和骨架蛋白F-actin表达情况。结果与空白组比较,共培养组A549细胞增殖明显增加,细胞迁移能力和细胞骨架面积均明显升高,差异有统计学意义(P0.05);与共培养组比较,WEG高、中、低剂量组A549细胞增殖和迁移能力受抑制,细胞骨架面积和微丝条数减少,且呈剂量依赖性(P0.05)。结论人参水提液在共培养体系中能有效抑制A549细胞增殖迁移能力,可能通过调节TAMs免疫活性而影响肿瘤细胞的生物学行为。     

黄芪建中汤含药血清联合顺铂对A549细胞的抑制作用及Smad3、Smad7表达的影响

目的:观察黄芪建中汤含药血清联合顺铂对肺癌A549细胞中Smad3、Smad7蛋白表达的影响。方法:应用MTT法分别计算5%高、中、低剂量和10%高、中、低剂量黄芪建中汤含药血清作用于人肺腺癌A549细胞株24、48、72 h的半数抑制浓度(IC_(50))、黄芪建中汤最佳含药血清(10%中剂量,48h)联合最佳顺铂(5μmol/mL,48 h)作用于人肺腺癌A549细胞株的增殖抑制率。免疫组织化学显色技术检测肺癌A549细胞内Smad3、Smad7蛋白的表达情况;Western Blot技术检测Smad3、Smad7蛋白表达。结果:①黄芪建中汤含药血清作用于A549细胞株48h的(IC_(50))为10%中剂量。黄芪建中汤含药血清联合顺铂作用于A549细胞的增殖抑制率高于两单药组和空白组(P<0.05)。②免疫组化方法检测Smad3、Smad7在A549细胞中的表达,与其它组相比在中西药联合组(HuangQi+Cisplatin)中Smad3蛋白表达棕黄色颗粒最少,Smad7蛋白表达棕黄色颗粒最多。差异具有统计学意义(P<0.05)。③Western Blot技术检测Smad3与Smad7的表达。与其它组相比,中西药联合组Smad3表达下调,Smad7表达上调(P<0.05)。结论:黄芪建中汤含药血清联合顺铂对肺癌A549细胞具有抑制增殖作用,其作用机制可能与上调smad7蛋白表达,下调Smad3蛋白表达有关。     

益肺方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的:探究益肺方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法选取15只大耳兔分别给予高剂量益肺方、低剂量益肺方和生理盐水连续灌胃14天处理,采心脏血液并取其血清,并在体外培养的肺癌A549细胞株中加入上述益肺方含药血清。使用MTT法检测肺腺癌A549细胞增殖能力,使用Annexin V/PI法检测细胞凋亡、使用Westen Bolt和RT-PCR定性、半定量检测Bcl-2、Bax、P-mTOR、P-AMPK、caspase-3、caspase-9的表达量。结果MTT比色结果显示,相比空白对照组,低剂量组和高剂量组细胞抑制率显著升高(P0.01),相比低剂量组,高剂量组的抑制率显著提高(P0.01);相比空白组,低剂量组和高剂量组含药血清caspase-3、caspase-9表达量显著增加,相比低剂量组,高剂量组caspase-3、caspase-9表达量显著增加(P0.01);相比空白组,低剂量组和高剂量组Bcl-2、P-mTOR表达量显著降低,Bax、P-AMPK表达量显著增加且两者有显著性差异(P0.01),相比低剂量组,高剂量组Bcl-2、P-mTOR表达量显著降低,Bax、P-AMPK表达量显著增加且两者有显著性差异(P0.01)。结论:益肺方含药血清可以抑制肺腺癌A549细胞增殖,同时可以通过调控AMPK/mTRO信号通路促进结直肠癌细胞的凋亡。     

补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响

目的:探讨补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为补肾疏肝方低、高剂量组(15,30 g·kg-1),顺铂组(8 g·kg-1),低剂量联合顺铂组(联合低剂量组),高剂量联合顺铂组(联合高剂量组),正常组,顺铂组ip给予相应药物,补肾疏肝方ig给予相应药物,正常组给予等体积的生理盐水,制备大鼠含药血清;分别配制10%含补肾疏肝方低、高剂量、顺铂、低剂量联合顺铂、高剂量联合顺铂,分别与肺癌A549细胞共同培养,CCK8法检测补肾疏肝方含药血清对A549增殖的影响;流式细胞术检测含药血清对A549细胞周期的影响;Annexin V/PI双染流式细胞术观察含药血清对A549细胞凋亡的影响;荧光定量PCR检测含药血清对相关m RNA表达的影响;流式细胞术检测含药血清对CD133蛋白表达的影响。结果:补肾疏肝方以时间、剂量依赖方式抑制A549细胞增殖,与顺铂联合有协同增效作用,24,48,72 h高剂量联合顺铂组的抑制率分别为45.39%,54.76%及59.94%;与正常组比较,补肾疏肝方、联合、顺铂含药血清可促进A549细胞凋亡,随着浓度增加,G2/M期细胞的百分比明显增加,明显下调CD133,SOX-2,OCT-4 m RNA的表达,明显降低CD133蛋白表达量,均具有明显统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:补肾疏肝方可抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,与顺铂联合可下调CD133,SOX-2,OCT-4等干性因子的表达。     

益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究

目的:观察益气除痰方是否能通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)。方法:通过暴露于TGF-β_1环境中,诱导肺腺癌细胞株A549发生EMT,并以益气除痰方含药血清进行干预,相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测各组细胞EMT相关蛋白及TGF-β信号通路蛋白Smad2/3的表达。结果:镜下可见经TGF-β_1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清作用24 h后细胞A549细胞出现凋亡且间质化程度较低;划痕实验结果显示:与空白血清组比较,TGF-β_1+空白血清组A549细胞迁移及侵袭能力显著升高,益气除痰方可降低TGF-β_1所升高的细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测显示TGF-β_1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,而益气除痰方含药血清可抑制该过程。结论:益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移。     

补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果最佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降最多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.     

下瘀血汤对肝癌细胞生物活性及Nanog信号通路表达的影响

目的:研究下瘀血汤对肝癌细胞的作用以及对Nanog信号通路的影响。方法:将HepG2细胞分为空白血清组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组;高剂量含药血清组,通过MTT、流式细胞仪、Transwell测肝癌细胞增殖、凋亡及侵袭情况,实时PCR、蛋白质印迹法测Nanog mRNA、Bcl-2、胱天蛋白酶-3水平。结果:空白血清组肝癌细胞的OD值及侵袭数量高于中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),肝癌细胞凋亡率低于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),高剂量含药血清组肝癌细胞OD值及侵袭数量最少、凋亡最高;空白血清组肝癌细胞中Nanog mRNA及Bcl-2蛋白表达高于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),胱天蛋白酶-3的蛋白表达水平低于低剂量、中剂量、高剂量含药血清组(P<0.05),与低剂量、中剂量剂量含药血清组比较,高剂量含药血清组肝癌细胞中Nanog mRNA及Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),胱天蛋白酶-3蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:下瘀血汤通可抑制肝癌细胞的活性及其侵袭力、促进癌细胞的凋亡,其作用机制可能调控与Nanog信号通路,从而促进胱天蛋白酶-3的表达、抑制Bcl-2水平有关。