心肌梗死大鼠毛细血管周细胞变化及益气活血中药对其的影响

目的观察心肌梗死大鼠毛细血管周细胞变化及益气活血中药的作用,探讨益气活血中药改善心肌血流灌注的作用机制。方法采用SD大鼠冠状动脉结扎法制备急性心肌梗死(AMI)模型,在心电图评价的基础上将造模成功的动物随机分为模型组、益气活血组(给予益气活血药治疗)、培哚普利组(给予培哚普利治疗)和通心络组(给予通心络治疗),以假手术组为对照,共5组,模型组和假手术组给予生理盐水进行干预。选择治疗后第7、28日2个时间点,观察各组大鼠心肌毛细血管密度(MCD)和毛细血管周细胞数量的变化。结果模型组大鼠心肌梗死边缘区MCD较假手术组明显下降、周细胞计数明显增加(P＜0.01),益气活血组、培哚普利组和通心络组大鼠 MCD 较模型组明显升高,周细胞数量明显下降(P＜0.01)。结论益气活血中药通过降低毛细血管周细胞计数、促进血管新生而达到改善局部心肌血供的目的。     

通心络对心肌梗死模型大鼠心肌损伤保护作用及机制的研究

目的探索通心络对心肌梗死模型大鼠心肌损伤的保护作用及机制。方法采用结扎前降支方法制作30只心肌梗死大鼠模型,随机分为模型组、通心络组、培哚普利组,每组10只;假手术组9只仅穿线不结扎。药物组大鼠分别以通心络、培哚普利灌胃,模型组和假手术组给予等量羧甲基纤维素钠溶液灌胃。2周后测量TUNEL凋亡指数,以及血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)水平。结果药物组大鼠的一般情况均有所改善。通心络组、培哚普利组的凋亡指数和MDA、ET-1水平较模型组均明显降低,SOD、NO水平较模型组均明显升高(P0.05)。结论通心络可抑制心肌细胞凋亡,并通过升高SOD、NO水平,降低MDA、ET-1水平,改善氧化应激状态和内皮功能,保护心肌组织。     

基于TGF-β1/Smads通路的鹿红方对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的观察鹿红方对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响,从TGF-β1/Smads通路探讨其作用机制。方法采用左冠状动脉结扎法制备心肌梗死后心力衰竭大鼠模型。60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、培哚普利组和鹿红方低、中、高剂量组,鹿红方低、中、高剂量组分别予鹿红方0.625、1.25、2.5 g/kg灌胃,培哚普利组予培哚普利2 mg/kg灌胃,模型组及假手术组予等体积生理盐水,每日1次。灌胃8周后,超声心动图检测大鼠左室射血分数(LVEF)和缩短分数(FS);HE和Masson染色检测心脏组织病理变化,计算心肌胶原容积分数(CVF);PCR和Western blot分别检测心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7m RNA和蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、FS明显降低(P0.01),心肌组织局部出现细胞消失,结缔组织内部有大量淋巴细胞浸润,细胞发生肿胀,呈纤维化改变,CVF明显升高(P0.01),心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达升高,Smad7 mRNA和蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,鹿红方低、中、高剂量组及培哚普利组大鼠LVEF、FS明显升高(P0.01),结缔组织增生、淋巴细胞浸润减少,心肌纤维化改善,CVF明显降低(P0.05,P0.01),鹿红方中、高剂量组及培哚普利组大鼠心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达明显降低,Smad7 mRNA和蛋白表达明显升高(P0.01)。结论鹿红方对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化有良好的抑制作用,其机制可能与调节TGF-β1/Smads通路有关。     

益气活血方对心肌梗死大鼠心肌纤维化影响的研究

目的检测大鼠心肌梗死后心肌纤维化相关指标的变化,从而探讨益气活血方对其的改善和治疗作用。方法 (1)结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死动物模型,依据梗死后24小时心电图坏死性Q波的数量随机分为三组:模型组、益气活血组、培哚普利组,另设假手术组(只开胸穿线但不结扎),并以7天和28天为两个观察时间点。(2)术后24小时各组大鼠予灌胃治疗。取材前一天行大鼠心脏彩色多普勒超声检测心脏功能学变化:左室射血分数(left ventricular ejection fractions,LVEF)、左室短轴率(left ventricular fraction shortening,LVFS)、左室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVIDd)、左室收缩末期内径((left ventricular internal dimension systole,LVIDs)。(3)于造模后第7天、第28天行心脏取材。HE染色法观察药物对心肌组织病理形态变化的影响,Western Blot检测Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)、转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1),结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白的表达水平。结果 (1)7天时:与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS均降低(P0.05),LVIDs、LVIDd均升高(P0.05),collagenⅠ、collagenⅢ、TGF-β1、CTGF均升高(P0.05);与模型组比较,培哚普利组和益气活血组LVEF、LVFS均升高,LVIDs降低(P0.05),collagenⅢ、TGF-β1、CTGF表达下降(P0.05)。(2)28天时:各组LVEF、LVFS与7天时相似,给药组TGF-β1、CTGF蛋白表达较模型组有所减少(P0.05),模型组大鼠与益气活血组的collagenⅠ、collagenⅢ表达差异不显著(P0.05)。结论益气活血方能够明显提高心肌梗死大鼠心功能,减轻心肌纤维化程度,对心脏具有保护作用,其保护机制可能与下调TGF-β1和CTGF的表达,进而减少胶原蛋白的分泌有关。     

基质金属蛋白酶2在高血压大鼠肾脏的表达及螺内酯和培哚普利的肾脏保护作用

目的:观察基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase,MMP-2)在高血压大鼠肾脏的及螺内酯和培哚普利干预后的高血压大鼠的肾脏的表达情况,探讨上述两种药物对高血压大鼠肾脏的保护作用。方法:在48只雄性Wistar大鼠中,随机选出36只,以腹主动脉缩窄法制备高血压模型,再随机分为3个亚组:高血压模型组(模型组,自来水灌胃+饮用1%盐水),高血压培哚普利组[培哚普利组,培哚普利2mg/(kg·d)灌胃+饮用1%盐水],高血压螺内酯组[螺内酯组,螺内酯20mg/(kg·d)灌胃+饮用1%盐水];其余12只进入假手术对照组(假手术组,只分离腹主动脉但不结扎,自来水灌胃+饮用自来水)。12周时分别检测肾功能相关的生化指标:血肌酐(Scr),尿肌酐(Ucr),计算肌酐清除率(Ccr),尿白蛋白排泄率(UAER)。12周后颈动脉插管法测量血压。12周后处死动物后,取各组动物肾脏,免疫组织化学方法检测各组大鼠肾脏中MMP-2表达的情况。结果:培哚普利和螺内酯均能降低高血压大鼠收缩压及舒张压(P0.01)。第8周开始高血压组尿UAER开始增加,到12周时上述变化更明显,而且Ccr也有明显上升。培哚普利组和螺内酯组上述指标与模型组相比明显好转(P0.01)。MMP-2在肾脏表达的面积,培哚普利组和模型组相比,明显多于模型组(P0.01),螺内酯组和模型组相比,明显多于模型组(P0.01),上述两组于假手术组相比,少于假手术组,有统计学意义(P0.05)。结论:肾脏局部MMP-2参与了肾脏纤维化,培哚普利和螺内酯可能通过增加局部MMP-2的表达减轻肾纤维化。     

温阳活血方对慢性心力衰竭大鼠心室重构的影响

目的:探讨温阳活血方对慢性心力衰竭(Chronic heart failure,CHF)大鼠心室重构的影响。方法:用肾上腹主动脉缩窄法制备CHF模型。雄性Wistar大鼠30只随机分为假手术组、模型组、温阳活血方组,每组10只。观察各组大鼠左心室重量指数(Left ventricular mass index,LVMI)、胶原容积分数(Collagen volume fraction,CVF),免疫组化法测定各组大鼠左心室心肌结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)、转化生长因子(Transforming growth factor-β_1,TGF-β_1) mRNA表达水平。结果:与假手术组比较,模型组LVMI、CVF明显升高(P 0.05),左心室心肌CTGF、TGF-β_1 mRNA表达明显升高(P 0.01);与模型组比较,温阳活血方组LVMI、CVF明显下降(P 0.05),左心室心肌CTGF、TGF-β_1 mRNA表达明显下降(P 0.01)。结论:温阳活血方通过影响信号通路中CTGF、TGF-β_1 mRNA的表达来改善心衰大鼠心肌纤维化(Myocardial fibrosis,MF)程度。     

针刺对自发性高血压大鼠肾脏形态结构及转化生长因子-β1mRNA表达的影响

目的:探讨针刺干预高血压大鼠肾间质纤维化的机制.方法:将24周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR) 24只随机分为模型组、培哚普利组、针刺组,每组8只.针刺组:捆绑大鼠后电针刺激大鼠双侧“曲池”“足三里”穴,强度以针柄微颤为度,刺激20 min,1次/d;培哚普利组:培哚普利(0.4 mg/kg)悬液每天灌胃1次;模型组每日捆绑束缚20 min,不予治疗;同龄同种系正常血压的京都大鼠(WKY)8只为空白对照组.空白对照组自由饮食,不予处理.实验疗程为6周.测量大鼠尾动脉收缩压;HE染色观察肾脏组织形态结构;免疫组织化学染色法观察肾Ⅰ、Ⅲ型胶原在肾脏沉积光密度;RT-PCR法检测转化生长因子-β1mRNA (TGF-β1 mRNA)在各组大鼠肾脏表达情况.结果:与模型组比较,针刺组血压显著下降(P＜0.01);肾脏形态结构损害程度较轻;肾I、Ⅲ型胶原蛋白沉积阳性面积明显减少(均P＜0.05);肾TGF-β1mRNA的半定量分析表达下降(P＜0.05),其作用和西药培哚普利相似.结论:针刺“曲池”“足三里”穴可能通过减少肾脏Ⅰ、Ⅲ型胶原合成和抑制TGF-β1在肾脏表达而干预肾脏纤维化的进程.     

通心络对心梗后心室重构大鼠心肌钙调控蛋白基因转录及蛋白表达的影响

目的:探讨心肌梗死后心室重构过程中心肌钙调控蛋白基因转录及蛋白表达的变化及中药通心络对心室重构的干预作用。方法:制备大鼠心梗后心室重构模型,随机分成心室重构组、通心络治疗组、丹参组、培多普利组和假手术组,6w后分别观察各组心肌细胞钙调控蛋白的mRNA转录和蛋白质的表达。结果:(1)与假手术组比较,模型组SR Ca2 -ATPase mRNA转录明显减少,通心络组SR Ca2 -ATPase mRNA转录明显增加,培多普利组SR Ca2 -ATPase mRNA有所转录增加,未及通心络组明显。丹参组SR Ca2 -ATPase mRNA转录有轻度增加;(2)与假手术组比较,模型组SRCa2 -ATPase蛋白表达量明显降低,培多普利组、通心络组、丹参组均能提高SR Ca2 -ATPase蛋白表达量,与模型组比较,3组药物能提高SR Ca2 -ATPase蛋白表达量,3组药物之间比较,通心络疗效更为明显。结论:通心络可在一定程度上抑制心梗后大鼠的心室重构。     

健脾益肾丸对肾脏纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号通路相关基因表达的研究

目的:研究健脾益肾丸对5/6肾切除大鼠模型肾损伤的改善作用,并分析探讨其可能存在的机制。方法:40只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、健脾益肾丸低剂量组(2.06 g/kg·d~(-1))、健脾益肾丸高剂量组(10.89 g/kg·d~(-1))、培哚普利组(4 mg/kg·d~(-1)),每组10只。造模4个月后开始给药,连续给药6周。6周后处死大鼠,留取血清,采用酶联免疫吸附试验法检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);采用实时荧光定量PCR法检测肾组织TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA基因表达。结果:健脾益肾丸不同剂量均可明显降低大鼠血清Scr、BUN水平(P0.01/P0.05),下调TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA基因表达(P0.01);培哚普利作为西药阳性对照,可明显降低大鼠血清Scr、BUN水平(P0.01/P0.05),下调TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA基因表达(P0.01)。结论:健脾益肾丸能有效改善5/6肾切除慢性肾衰大鼠模型肾功能;其机制可能与下调TGF-β1、Smad2、Smad3水平,从而抑制过度激活的TGF-β1/Smads信号通路有关。     

养肝益水颗粒对自发性高血压大鼠血浆AngⅡ、TGF-β1、CTGF含量和肾皮质AngⅡ、TGF-β1、CTGF mRNA表达的影响

目的观察养肝益水颗粒对12周龄自发性高血压大鼠(SHR)血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)含量和肾皮质AngⅡ、TGF-β1、CTGF mRNA表达的影响,以进一步探讨养肝益水颗粒发挥肾脏保护的可能作用机制。方法将40只12周龄雄性SHR大鼠随机分为模型组、贝拉普利组[1.8mg/(kg·d)]、养肝益水颗粒低剂量组[5.4g/(kg·d),简称低剂量组]、养肝益水颗粒高剂量组[27g/(kg·d),简称高剂量组],每组10只;并设Wistar-Kyoto大鼠(WKY)10只作为正常对照组;模型组和正常对照组给予等量生理盐水灌胃,每天1次,共6周。检测各组大鼠血浆AngⅡ、TGF-β1、CTGF浓度和肾皮质AngⅡ、TGF-β1、CTGF mRNA的表达。结果模型组,低、高剂量组血浆AngⅡ、TGF-β1、CTGF含量显著高于正常对照组(P<0.01),贝拉普利组与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);贝拉普利组与高剂量组血浆AngⅡ、TGF-β1、CTGF含量显著低于模型组(P<0.01,P<0.05),低剂量组与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);贝拉普利组及高、低剂量组肾皮质AngⅡ、TGF-β1、CTGFmRNA的表达显著低于模型组(P<0.01,P<0.05);高剂量组优于贝拉普利组和低剂量组(P<0.01,P<0.05)。结论养肝益水颗粒主要通过降低肾脏局部AngⅡ、TGF-β1及CTGF的表达而发挥肾脏保护作用。     

芪丹利心丸对心肌梗死大鼠左心室心肌组织miR-133a/TGF-β1/CTGF信号通路的影响

目的探讨芪丹利心丸防治心肌梗死后心肌纤维化的可能作用机制。方法采用左冠状动脉结扎术建立心肌梗死大鼠模型,随机分为模型组、卡托普利组和芪丹利心丸组,另设假手术组只穿线不结扎,每组10只。术后第2天,芪丹利心丸组给予芪丹利心丸2.43 g/(kg·d)灌胃,卡托普利组给予卡托普利片2.25 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予去离子水10 ml/(kg·d)灌胃。4周后检测各组心脏血流动力学指标[包括心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dt max)、左心室内压最大下降速率(-dp/dt max)],称取左心室重量(LVM)并计算左心室质量指数(LVMI),HE染色进行病理学观察,Masson染色计算胶原容积分数(CVF),检测左心室心肌组织miR-133a、转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA及TGF-β1、CTGF蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组LVSP、+dp/dt max,-dp/dt max下降,LVEDP升高,LVMI、CVF增大,miR-133a下调,TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达增多(P0.01)。与模型组比较,芪丹利心丸组LVSP、+dp/dt max,-dp/dt max上升,LVEDP降低,LVMI、CVF减小,miR-133a上调,TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA表达减少(P0.05或P0.01)。HE染色显示,模型组见梗死边缘区残存的心肌纤维混乱、部分断裂,肌间隙增宽明显,而卡托普利组和芪丹利心丸组心肌梗死边缘区心肌纤维走形相对规整,多数胞膜基本完整。结论芪丹利心丸可防治心肌梗死大鼠心肌纤维化,其机制可能与miR-133a/TGF-β1/CTGF信号通路有关。     

肾疏宁对肾小管间质损害大鼠TGF-β1及其下游因子CTGF mRNA表达的影响

目的观察肾疏宁对肾小管间质损害大鼠TGF-β1、CTGF蛋白及CTGFmRNA表达的影响。方法在系膜增生性肾炎(MsPGN)模型基础上,延长造模时间至12～16周,使其自然发展成肾小管间质损害模型,观察肾疏宁对肾小管间质TGF-β1、CTGF蛋白及CTGFmRNA表达的影响,并设苯那普利为阳性对照组。结果第12～16周末,造模各组肾小管间质TGF-β1、CTGF蛋白及CTGFmRNA表达量均明显高于正常组(P<0.01),肾疏宁组、苯那普利组均显著低于模型组(P<0.01);第12周末,肾疏宁组与苯那普利组比较无显著性差异(P>0.05),而第16周末,肾疏宁组明显低于苯那普利组(P<0.01)。结论肾疏宁可对抗CTGF基因的表达,直接或间接抑制TGF-β1,从而保护肾小管间质损害。     

通心络对肥大细胞介导的大鼠心肌I/R损伤中β-氨基己糖苷酶、类糜蛋白酶及蛋白激酶C表达的影响

目的探讨通心络对肥大细胞介导的大鼠心肌缺血再灌注损伤中β-氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase,β-Hex)、类糜蛋白酶及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)表达的影响,进而探寻通心络对受损心肌的保护作用及相关机制。方法将36只健康成年雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、通心络组,每组12只。通过可逆性左冠状动脉前降支结扎法建立心肌缺血再灌注模型,大鼠心肌缺血1小时,再灌注2小时;假手术组仅穿线不结扎。通心络组大鼠予通心络灌胃,假手术组和模型组给予等量的生理盐水灌胃。1周后,采用RT-PCR法检测左心室心肌组织PKCε和PKCδmRNA的表达;Western blot法检测PKCα的表达水平。Elisa法分别检测心肌组织β-氨基己糖苷酶和类糜蛋白酶的水平。结果通心络组大鼠β-氨基己糖苷酶、类糜蛋白酶及PKC表达水平较模型组均明显降低(P0.01或P0.05)。结论通心络可以降低β-氨基己糖苷酶、类糜蛋白酶及PKC表达水平,抑制肥大细胞脱颗粒,减轻受损心肌的炎症反应,进而保护心肌组织。     

培哚普利对心肌缺血再灌注损伤早期Toll样受体4表达的影响

目的观察培哚普利对缺血再灌注早期Toll样受体4蛋白（TLR4）的影响,初步探讨其对心肌缺血再灌注损伤的保护机制。方法30只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组及培哚普利组。培哚普利组灌服培哚普利4mg／kg,每日1次,共7d。结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）,建立大鼠缺血再灌注模型,光镜观察心肌形态学改变,TUNEI,法检测细胞凋亡数及免疫组化检测心肌组织中TLR4表达情况。结果与缺血再灌注组相比,培哚普利组炎症损伤减轻;培哚普利组心肌细胞凋亡数明显低于缺血再灌注组,但高于假手术组（P〈0．05）;培哚普利组心肌组织TLR4表达低于缺血再灌注组,但高于假手术组（P〈0．05）。结论培哚普利可减轻心肌缺血再灌注早期的细胞凋亡,其机制之一可能是通过抑制TLR4所介导的炎症反应实现的。     

芪参健脾方对SHR大鼠心肌组织中MMP-1,MMP-2,MMP-9和Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的:观察芪参健脾方对自发性高血压大鼠(SHR)心肌组织内基质金属蛋白酶1,2,9(MMP-1,MMP-2,MMP-9)和Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅰ,collagenⅢ)表达的影响,探讨其改善高血压心肌纤维化的可能机制.方法:采用随机对照法将60只24周龄的SHR分为模型组、培哚普利组、培哚普利联合芪参健脾方组、芪参健脾方高、中、低剂量组,以同龄同种系的京都种大鼠(WKY) 10只作为正常组.正常组和模型组给予蒸馏水;培哚普利组用药量为0.4 mg·kg-1,中药治疗组采用标准水煎工艺,浓缩生药量4 g·mL-1,高、中、低剂量组ig给药剂量分别为40,20,10 g·kg-1;培哚普利联合中药组用药为培哚普利0.4 mg·kg-1+芪参健脾方20 g·kg-1.每日ig 1次,连续治疗6周后处死大鼠.免疫组化法检测各组大鼠心肌组织中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的表达;采用逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组大鼠心肌组织中MMP-1,MMP-2,MMP-9的mRNA表达,采用Western免疫印迹(Western blot)法测定各组大鼠心肌组织中MMP-1,MMP-2和MMP-9的蛋白表达.结果:与正常组比较,SHR组心肌呈典型心肌纤维化改变;与SHR模型组比较,培哚普利联合中药组、培哚普利组和芪参健脾方高剂量组中collagen Ⅰ和collagenⅢ的表达显著下降(P＜0.01,P＜0.05),中剂量组中collagenⅢ的表达也明显减少(P＜0.05);与模型组比较,培哚普利组、培哚普利联合中药组和芪参健脾方高剂量组中MMP-1,MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白的表达量都显著增加(P ＜0.01,P＜0.05),芪参健脾方中剂量组MMP-1蛋白的表达量也明显增加(P＜0.05).结论:芪参健脾方可通过调节MMP-1,MMP-2,MMP-9和collagen Ⅰ,collagenⅢ的水平,从而改善SHR大鼠心肌功能,这可能是其抑制SHR大鼠的心肌纤维化的机制之一.     

积雪草苷对大鼠心肌梗塞后左室功能及胶原修复影响的实验研究

目的:研究积雪草苷对心梗大鼠左室功能及胶原修复的影响。方法:结扎雄性SD大鼠左冠状动脉前降支建立心肌梗塞模型,随机分为假手术组、心梗模型组和积雪草苷治疗组。积雪草苷治疗组自造模当天灌胃给予积雪草苷连续2周,其他两组给予等体积生理盐水,2周后测定各组大鼠左心室重量与体重之比、梗塞面积;动脉导管测定左室功能;氯氨T法测量左室非梗塞区心肌羟脯氨酸水平;免疫组织化学检测左室非梗死区心肌转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果:与心梗模型组比,积雪草苷治疗组左室梗死面积无显著差异(P0.05),左心室重量/体重低于心梗模型组,差异显著(P0.05);左室功能显著改善(P0.05);左室非梗塞区心肌羟脯氨酸含量显著降低(P0.05);免疫组织化学染色结果显示,左室非梗死区心肌TGF-β的表达显著降低(P0.05)。结论:积雪草苷可降低心梗大鼠左室非梗死区心肌TGF-β1的表达及心肌羟脯氨酸含量,改善左室功能,减轻大鼠心梗后心肌纤维化。     

益气活血方对肾间质纤维化大鼠肾脏TGF-β/smad信号通路及结缔组织生长因子的影响

目的:观察益气活血方对肾间质纤维化大鼠肾脏TGF-β/smad信号通路及结缔组织生长因子(connectivetissue growth factor,CTGF)的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠30只诱导建立单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)致肾小管间质纤维化模型,模型成功后随机分为模型组,益气活血方大、中、小剂量组和西药组,另取健康雄性Wistar大鼠6只设为假手术组。3周后处死大鼠,称取体质量;取血清检测肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(bloodurea nitrogen,BUN)水平;取肾脏组织采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法和免疫印迹法检测各组转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)、smad2、smad7、CTGF mRNA和蛋白表达水平;苏木精-伊红染色和Masson染色检测各组肾间质纤维化指数。结果:模型组大鼠血清Cr和BUN值较假手术组偏高;与模型组比较,大剂量益气活血方可以降低Cr和BUN值,但差异无统计学意义。苏木精-伊红染色和Masson染色显示模型组肾小管上皮细胞萎缩,大部分肾小管管腔扩张,间质纤维组织增生,大量炎性细胞浸润,肾小球数目明显减少,胶原成分显著增加。益气活血方大剂量组、中剂量组和西药福辛普利钠组大鼠肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生、肾小管扩张情况较模型组明显减轻,胶原成分明显减少。与假手术组比较,模型组大鼠肾脏组织中TGF-β、smad2和CTGFmRNA以及蛋白表达水平明显升高(P0.05),smad7的表达水平则明显降低(P0.05)。与模型组比较,益气活血方大剂量组和中剂量组大鼠TGF-β、smad2、CTGF mRNA和蛋白表达明显下降(P0.01,P0.05),smad7表达明显升高(P0.01,P0.05)。结论:UUO大鼠肾组织中CTGF mRNA的表达可能通过TGF-β/smad信号通道进行调节;益气活血方可以通过下调TGF-β、smad2和上调smad7的表达来抑制CTGF表达,进而遏制肾纤维化的进展。     

通心络对压力超负荷大鼠心肌HO-1mRNA表达及心功能的影响

目的观察通心络对压力超负荷大鼠心肌组织中血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA基因表达的影响,并探讨其对心功能的保护作用。方法选择40只SD大鼠,随机抽取8只作为假手术组,其余32只大鼠采用腹主动脉缩窄术制备压力超负荷模型,将术后存活的24只大鼠再随机分成模型组、通心络组及通心络+HO-1抑制剂组各8只。通心络组给予通心络超微粉水溶液1 g/(kg·d)灌胃,假手术组、模型组均给予等容积的生理盐水灌胃,通心络+HO-1抑制剂组给予通心络超微粉水溶液1 g/(kg·d)灌胃同时给予Zn PP注射剂1 mg/(kg·d)腹腔注射。各组每日9:00干预1次,连续干预4周后行心脏超声检测室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、左室舒张末内径(LVEDD)、左室收缩末内径(LVESD)和左室质量指数(LVMI)。8周后检测心肌组织HO-1mRNA表达水平,并在同时间段做心肌组织病理学HE染色。结果模型组、通心络组及通心络+HO-1抑制剂组IVST、LVPWT、LVEDD、LVESD及LVMI均显著高于假手术组(P均0.05),通心络组上述各指标均明显低于模型组和通心络+HO-1抑制剂组(P均0.05)。通心络组HO-1mRNA表达水平明显高于其他3组(P均0.05);HE染色显示,通心络组和通心络+HO-1抑制剂组心肌组织形态学均较模型组有不同程度的改善,其中通心络组改善更为显著。结论通心络可以抑制心肌纤维化,减缓心室重构,保护心肌组织,此作用可能与通心络诱导HO-1过表达有关。     

通心络对自发性糖尿病大鼠心肌组织胶原网络重构的影响

目的:观察通心络对自发性糖尿病(GK)大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原阳性表达及含量、细胞转化生长因子(TGF-β1)含量的影响。方法:4月龄GK大鼠30只,随机分为GK对照组、通心络大、小剂量组,另取4月龄Wistar大鼠10只作正常对照,分别灌胃12周。灌胃结束后,制备心肌切片,免疫组化染色,计算胶原I、胶原Ⅲ阳性面密度比值以代表表达程度;取心肌匀浆,酶联免疫方法测定心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1含量。结果:与同月龄正常大鼠相比较,GK大鼠血糖明显增高(P0.01),通心络药物组有降低趋势,但无差异(P0.05)。与正常大鼠比较,GK大鼠心肌胶原Ⅰ阳性面密度比值明显增高(P0.01),胶原Ⅲ阳性面密度比值明显降低(P0.01),心肌匀浆胶原Ⅰ含量明显增高(P0.01),胶原Ⅲ含量降低(P0.05),心肌胶原Ⅰ/Ⅲ比值明显增高(P0.01),TGF-β1含量降低(P0.01);与7月龄GK大鼠比较,通心络组胶原Ⅰ阳性面密度明显降低(P0.01),高、低剂量组之间有差异(P0.05),胶原Ⅲ阳性面密度明显升高(P0.01);胶原Ⅰ含量明显降低(P0.01),胶原Ⅲ含量明显提高(P0.01),胶原Ⅰ/Ⅲ比值降低(P0.01),TGF-β1含量明显提高(P0.01),高、低剂量组之间无差异(P0.05)。结论:通心络可降低GK大鼠心肌胶原Ⅰ阳性表达,Ⅰ型胶原含量,升高胶原Ⅲ阳性表达,Ⅲ型胶原含量,降低胶原Ⅰ/Ⅲ比值,升高TGF-β1含量,具有改善心肌间质网络重构作用。     

葱白提取物干预慢性心衰心肌纤维化的机制研究

目的探讨辛温通阳中药——葱白提取物治疗慢性心力衰竭及干预心肌重构的作用机制。方法将造模成功的26只CHF大鼠随机分为:模型对照组8只、依拉普利组9只、葱白提取物组9只。另设10只大鼠为假手术组。模型组和假手术组大鼠给予生理盐水灌胃,依拉普利组给予0.19g/kg灌胃,葱白提取物组给予0.25g/kg灌胃,每天1次。实验4周后,处死全部大鼠并迅速取实验大鼠心肌组织,观察心肌细胞的变化情况,并比较各组大鼠心肌组织AngⅡ、AT1R、TGF-β1、CTGF mRNA的表达水平。结果 (1)模型组大鼠可见心肌细胞片状坏死,心肌纤维排列紊乱;依那普利组大鼠心肌细胞排裂尚整齐,可见部分坏死溶解;葱白提取物组大鼠心肌细胞排裂尚整齐,可见横纹。(2)模型组各项指标表达水平均显著高于假手术组和葱白提取物组(P0.05或P0.01);且葱白提取物组AngⅡ及CTGF的表达水平均明显低于依那普利组(P0.05)。结论 CTGF可能是心肌纤维化发生发展的重要环节,葱白提取物可通过抑制AngⅡ介导的TGF-β1/Smad信号通路,调控CTGF mRNA的表达及活性,从而控制心肌纤维化的发生和发展,改善CHF患者的心功能。