红芪多糖HPS-3体外诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡研究

目的:研究红芪多糖均一组分HPS-3体外对人胃腺癌MGC-803细胞增殖及凋亡的作用。方法:应用MTT法、显微荧光术和流式细胞术测定HPS-3对MGC-803细胞的增殖、细胞周期和诱导凋亡的影响,应用流式细胞术测定对Bc1-2和Bax蛋白表达的影响。结果:HPS-3对MGC-803细胞具有抑制增殖、G2/M期阻滞和诱导凋亡作用;HPS-3降低bcl-2蛋白表达,对Bax蛋白表达无明显作用。结论:HPS-3可通过抑制人胃腺癌MGC-803细胞的生长增殖、G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,降低bcl-2蛋白等作用机制发挥肿瘤作用。     

N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素对胃癌MGC-803细胞周期的影响

目的:研究N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素(MVC)对胃癌MGC-803细胞周期的作用机制。方法:采用MTT法检测MVC对肿瘤细胞的生长抑制作用;采用流式细胞术检测MVC对MGC-803细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测MVC对MGC-803细胞周期相关基因蛋白p21WAF1/CIP1,Cdc 2和Cyclin B1表达的影响。结果:20μmol.L-1 MVC可明显抑制MGC-803细胞生长,可明显诱导MGC-803细胞S,G/M期阻滞。20μmol.L-1MCV作用MGC-803细胞24 h,p21WAF1/CIP1蛋白表达增高,Cdc 2蛋白表达减少。结论:MVC可通过增加细胞周期相关基因p21WAF1/CIP1蛋白的表达和下调Cdc 2蛋白表达,使MGC-803细胞的周期阻断在S,G2/M期,从而抑制MGC-803细胞的生长。     

黄连解毒汤对人胃癌SGC-803细胞株作用的实验研究

目的:观察黄连解毒汤对人胃癌细胞株SGC-803的作用及其机制。方法:体外培养胃癌细胞株SGC-803,应用黄连解毒汤干预胃癌SGC-803细胞。运用CCK-8实验检测SGC-803细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡水平; qRT-PCR法检测细胞相关基因mRNA的表达水平。结果:CCK-8实验结果表明,黄连解毒汤可有效抑制胃癌MGC-803细胞株的增殖,且呈现出药物浓度依赖性及时间依赖性。划痕实验结果表明,黄连解毒汤干预的实验组细胞迁移率的增长明显慢于对照组,具有统计学差异(P 0. 05)。流式细胞术检测细胞凋亡结果显示,黄连解毒汤可以有效促进胃癌细胞的凋亡,实验组MGC-803细胞的细胞凋亡率与对照组相比均有显著性差异(P 0. 05)。qRT-PCR结果显示,经黄连解毒汤干预,Bax、Caspase3基因mRNA表达上调,Bcl-2基因mRNA表达下调。结论:黄连解毒汤能够通过诱导SGC-803抑制胃癌细胞MGC-803增殖,抑制胃癌细胞迁移能力,推测其机制可能是通过影响凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,发挥抗肿瘤作用。     

树舌多糖抑制胃癌MGC-803细胞增殖及对EGFR表达的影响

目的 研究树舌多糖(Ganoderma applanatum polysaccharides,GAPS)粗提物对人胃粘液性腺癌MGC-803细胞增殖、细胞周期及其对受体蛋白酪氨酸激酶EGFR表达的影响,探讨树舌多糖抗肿瘤作用机制.方法 MTT法检测不同时间不同浓度树舌多糖对胃癌细胞MGC-803增殖抑制作用;流式细胞仪检测2.0 g/L树舌多糖作用72 h后MGC-803细胞的周期分布,流式细胞仪检测和免疫荧光显微镜观察树舌多糖对MGC-803细胞EGFR表达的影响.结果 树舌多糖对胃癌细胞MGC-803具有增殖抑制作用,并呈时间及浓度依赖性.2.0 g/L树舌多糖作用72 h后,MGC-803细胞被阻滞于G_0/G_1期,S期和G_2/M期细胞减少,与细胞对照组比较有差异,具有统计学意义(P<0.05).荧光显微镜下观察树舌多糖组MGC-803细胞EGFR荧光强度较对照组明显减弱;流式细胞仪检测树舌多糖能下调MGC-803细胞EGFR表达,与细胞对照组比较有差异,具有统计学意义(P<0.05).结论 树舌多糖可以抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,这与树舌多糖能够阻止肿瘤细胞由G_1期进入S期、延缓细胞周期进程,降低受体型酪氨酸蛋白激酶EGFR的表达、阻断细胞增殖信号转导途径的信息传递有关.     

EGCG通过Hedgehog信号抑制人胃癌MGC-803细胞增殖的机制研究

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)通过Hedgehog信号抑制人胃癌MGC-803细胞增殖的机制。方法:采用不同浓度的EGCG干预人胃癌MGC-803细胞。MTT比色法观察EGCG对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;分光光度法检测细胞caspase-3活性;电泳法检测Smo、Gli-1蛋白表达;RT-PCR测定bcl-2,bax mRNA表达水平。结果:EGCG(10,20 mol/L)以剂量依赖性地抑制MGC-803细胞增殖,诱导其凋亡,增加caspase-3活性,抑制Smo、Gli-1蛋白表达,上调bax mRNA表达水平的同时下调bcl-2 mRNA表达水平。结论:EGCG通过Hedgehog信号抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导其凋亡。     

紫花苜蓿黄酮对人胃癌MGC-803细胞周期和凋亡的影响

目的探究紫花苜蓿黄酮在体外抑制肿瘤细胞活性的研究。方法采用四氮甲基唑蓝(MTT)法测定紫花苜蓿黄酮在体外的抗肿瘤活性;流式细胞术检测紫花苜蓿黄酮对人胃癌细胞MGC-803周期和凋亡的影响;Western blotting方法检测相关细胞蛋白的表达情况。结果 MGC-803细胞经紫花苜蓿黄酮预处理后,细胞存活率显著降低(P0.05)。流式细胞术检测发现紫花苜蓿黄酮能够诱导细胞凋亡;引起细胞周期紊乱,使细胞阻滞在G0/G1期。Western blotting实验结果表明它能够活化促凋蛋白Caspase-9,Caspase-3,RARP,抑制抑凋蛋白Bcl-2的表达;引起相关细胞周期蛋白Cyclin D1,CDK4,CDK6的表达量下调。结论紫花苜蓿黄酮能够通过诱导MGC-803细胞凋亡途径和调节正常周期活动来抑制MGC-803细胞增殖,并且这种抑制作用还存在着时间和剂量依赖效应。     

复方中药紫龙金对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用

目的 探讨复方中药紫龙金(简称紫龙金)对雄激素依赖型人前列腺癌细胞系LNcaP的体外作用机制。方法 应用MTT法、流式细胞术和显微荧光术测定紫龙金对LNCaP的增殖、细胞周期分布和诱导凋亡的影响,应用RT-PCR方法检测前列腺特异性抗原基因(PSA)和雄激素受体(AR),凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响;应用western blot方法测定对bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果紫龙金对LNCaP细胞具有时间和剂量依赖性增殖抑制、G1/G1期阻滞和诱导凋亡作用,作用72h时IC50为0．79mg／ml;紫龙金可以下调前列腺特异性标志基因PSA、AR和凋亡相关基因bcl-2的表达,降低bcl～2蛋白表达,对bax蛋白表达无明显作用。结论紫龙金可以通过抑制LNCaP细胞增殖、G0／G1期阻滞、诱导凋亡、下调PSA、AR和bcl-2基因表达,降低bcl-2蛋白表达等作用机制发挥抗肿瘤作用。     

益气健脾解毒方对胃癌细胞的抑制作用及其机制研究

目的:探讨益气健脾解毒方对胃癌细胞的抑制作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT法观察不同浓度的益气健脾解毒方溶液体外作用于胃癌细胞株不同时间后对其增殖的抑制作用;运用流式碘化丙啶(Annexin-V/PI)双染色法研究不同浓度益气健脾解毒方对人胃癌细胞株凋亡的诱导作用;利用流式细胞仪检测益气健脾解毒方对人胃癌细胞株的周期阻滞效应;采用免疫印迹(Western blot)法观察B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cysteinyl aspartate-specific proproteases-3,Caspase-3)蛋白的变化情况。结果:益气化瘀解毒方对人胃癌细胞株MGC-803细胞有较好的抑制增殖作用(P0.05),并呈一定的浓度依赖性;益气健脾解毒方在作用于人胃癌细胞24小时后,细胞早期凋亡率随着给药浓度的增加呈上升趋势,呈浓度依赖关系;表明益气健脾解毒方可阻滞MGC-803细胞于S期,并呈浓度依赖性;Bcl-2、Caspase-3在4、2、1 mg/mL组的蛋白表达下调;而Bax、Cleaved-caspase-3在4、2、1 mg/mL组表达上调。结论:益气健脾解毒方能抑制人胃癌细胞株的增殖并诱导其凋亡,杀伤肿瘤细胞,可能是通过启动caspase的级联反应及下调Bcl-2,上调Bax来实现。     

白藜芦醇抑制胆囊癌细胞生长与诱导细胞凋亡的实验研究

目的:探讨白藜芦醇(Res)对胆囊癌细胞(GBC)和正常成纤维细胞(3T3)体外增殖的影响,进而观察Res对GBC和3T3细胞凋亡的影响.方法:MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞术分析细胞周期,检测细胞凋亡;SABC法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:Res呈浓度依赖性抑制GBC细胞的生长与增殖(P＜0.01),抑制率最高可达54%.Res能明显诱导GBC细胞凋亡,凋亡率最高为30.52%;处理组较对照组G1期细胞由34.88%上升至55.47±3.95%,S期细胞减少8.41%～17.54%,呈明显的G0/G1期阻滞现象.GBC细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.结论:Res能通过诱导GBC细胞凋亡而抑制其生长与增殖,但对3T3细胞无此作用.     

藤黄酸诱导人胃腺癌SGC-7901细胞的凋亡作用

目的：探讨藤黄酸(gambogic acid，GA)诱导体外培养人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用。方法：通过MTT比色法分析藤黄酸对人胃癌SGC-7901细胞在24，48，72 h增殖的影响，并通过光镜、电镜观察细胞形态学的改变及流式细胞术检测藤黄酸对SGC-7901肿瘤细胞周期动力学和凋亡诱导率的影响，用免疫组化方法检测凋亡相关基因bax和bcl-2的蛋白表达变化。结果：藤黄酸可明显抑制SGC-7901细胞的增殖，48h半数生长抑制剂量(IC50)为1．47，1．6 μmol／L的藤黄酸可导致7901细胞形态学的改变，流式细胞术显示细胞周期亦发生变化，G2／M期细胞增加，凋亡率呈时间-剂量相关性。同剂量的藤黄酸还可增加抑癌基因bax和减少诱癌基因bcl-2的蛋白表达量。结论：藤黄酸可明显抑制SGC-7901肿瘤细胞的生长，诱导细胞凋亡，其分子机制可能与其减少Bcl-2／Bax的比值相关。     

大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度大蒜素(12.5、25、50μg/mL)和顺铂(40μg/mL)分别干预对数生长期Ishikawa细胞,采用MTT法检测Ishikawa细胞增值抑制;通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用Western blotting法检测Ishikawa细胞中caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测Ishikawa细胞中Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值。结果:大蒜素能够显著提高子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖抑制率,阻滞Ishikawa细胞周期于G2/M期,提高细胞凋亡率,上调caspase-3蛋白和Bax mRNA表达,下调bcl-2 mRNA表达,提高Bax/bcl-2表达比值,且上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:大蒜素对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖具有抑制作用以及促其凋亡的作用,机制可能与大蒜素能够改变Ishikawa细胞周期以及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。     

香加皮水提取物诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制

目的研究香加皮水提取物(CPE)诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制。方法采用G iem sa染色观察细胞凋亡形态学变化;电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测BGC-823细胞凋亡率、细胞周期和细胞凋亡的DNA水平变化;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和surv iv in mRNA表达水平变化;免疫细胞化学方法检测bcl-2、bax和surv iv in蛋白表达的变化。结果经CPE作用后,人胃癌细胞BGC-823出现明显的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变,细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现梯形图。经250μg/mL CPE处理48 h后,多数BGC-823细胞被阻滞在G2/M期,而且细胞发生明显的凋亡变化,BGC-823细胞凋亡率可达18.9%。CPE可抑制BGC-823细胞bcl和surv iv in mRNA及蛋白的表达,促进baxmRNA及蛋白的表达。CPE可明显延长S180荷瘤小鼠生存期,且具有剂量依赖性。结论CPE通过阻滞BGC-823细胞于G2/M期及诱导BGC-823细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制与抑制细胞的bcl-2和surv iv in基因mRNA及蛋白表达、促进bax基因和蛋白的表达有关。     

补肾活血丹对脑梗塞大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：研究脑梗塞模型大鼠海马、皮质凋亡相关基因bcl-2、hax及Bax、Bel-2蛋白表达，探讨补肾活血丹对上述基因及蛋白表达的影响。方法：应用流式细胞仪测定模型小鼠细胞群中细胞凋亡基因bcl-2、bax的比例和Bax、Bel-2蛋白含量。结果：补肾活血丹高、中、低3个剂量组和尼莫地平组均可见海马区及皮层区bel-2免疫表达增强明显，而bax的免疫表达则与用药剂量及区域有关，其高剂量组可显著降低海马区和皮层区bax的表达，中剂量组和尼莫地平组仅降低皮层区bax的表达。模型组小鼠海马、皮质Bax、Bcl-2蛋白含量较正常对照组明显升高；Bcl-2蛋白水平在补肾活血丹高、中、低3个剂量组和尼莫地平组均有显著下调；Bax蛋白水平除补肾活血丹低剂量组外，其余组都有显著下调。结论：脑梗塞与神经细胞凋亡有关，补肾活血丹可能有一定的治疗作用。     

熊果酸诱导HL-60细胞凋亡机制的探讨

目的：本实验拟用熊果酸干预处理人急性早幼粒白血病HL-60细胞,体外培养实验,证实其对HL-60细胞的增殖抑制和促进诱导凋亡作用,并通过免疫细胞化学方法检测bcl-2,survivin在熊果酸与该细胞株作用后表达,探讨熊果酸诱导HL-60细胞调亡可能的分子机制。方法：荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期相分布及细胞凋亡率：琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA;免疫细胞化学方法检测Bcl-2、Survivin蛋白。结果：荧光显微镜下观察,80gmol／LUA作用24h的HL一60细胞可看到典型的细胞凋亡形态学变化;40umol／L、80umol／LuA可使G0／G1期细胞增多,出现G0／G1期阻滞,S期和G2／M期细胞数减少,凋亡细胞峰（sub-G1）及凋亡率逐渐增高,Bcl-2、Survivin蛋白表达降低,当UA浓度为40gmol／L时,P〈0．01,有显著性差异。结论：UA呈浓度和时间依赖性抑制HL．60细胞增殖,诱导其凋亡机制可能与下调Bcl-2、Survivin蛋白表达有关。     

低剂量雄黄诱导NB4细胞凋亡的研究

目的：探讨复方黄黛片中主要成分雄黄治疗急性早幼粒细胞白血病的作用机理。方法：应用台盘蓝排染法、流式细胞仪、DNA电泳、免疫印迹等多项方法,体外研究雄黄对NB4细胞的促凋亡作用。结果：雄黄时NB4细胞的生长有抑制作用,并有促凋亡效应,对细胞周期的影响表现为G2/M期的阻滞,药物处理的早期细胞凋亡,未见伴有bcl-2的下调。结论：雄黄作用的早期主要以细胞凋亡为主,并且可能通过其他途径诱导细胞凋亡。     

土荆皮酸诱导宫颈癌细胞系HeLa凋亡的实验研究

目的研究土荆皮酸(PAB)对体外培养的HeLa细胞的生物学效应和作用机制。方法用MTT法、流式细胞术、透射电镜检测体外培养的HeLa细胞在PAB作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测p53/bcl-2/bax的表达水平。结果(1)PAB对HeLa细胞的增殖抑制作用随浓度升高而明显增强,其IC_(50)约10μmol/L。(2)流式细胞术证实10μmol/L PAB呈时间依赖性改变细胞周期分布,一方面降低G_0/G_1期的细胞比例,另一方面增高G_2/M期细胞的比例。(3)RT-PCR法显示HeLa细胞在10μmol/L PAB作用12、24、48 h均显示bax上调和bcl-2的下调,p53则未检测到表达。结论在体外PAB能抑制HeLa细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与bax的上调和bcl-2的下调相关。     

Apoptosis of human cholangiocarcinoma cell lines induced by β-escin through mitochondrial caspase-dependent pathway

The study aimed to evaluate the effects of β-escin on human cholangiocarcinoma cell lines (QBC939, Sk-ChA-1 and MZ-ChA-1) and to explore its mechanisms. Cell growth, cell cycle and apoptosis were investigated, respectively, by MTT assay, single PI and FITC/PI double-staining flow cytometry, and fluorescence microscopy. The protein expression was determined by western blotting. The study revealed that β-escin inhibited cholangiocarcinoma cell growth in a dose- and time-dependent manner, and the cell cycle of QBC939 and Sk-ChA-1 cells was arrested in the G2/M phase, and MZ-ChA-1 cells in G1 phase. Apoptosis of the three cholangiocarcinoma cell lines induced by β-escin was associated with the collapse of the mitochondrial membrane potential and the activation of caspase-3. The apoptotic effect of β-escin was suppressed by pancaspase inhibitor z-VAD-fmk. Molecular dissection revealed that the antiapoptotic protein bcl-2 was down-regulated after cholangiocarcinoma cell lines were treated with β-escin, while the protein levels of bax and p53 were unchanged. Apoptosis was accompanied by an increase in reactive oxygen species (ROS). These results suggest that β-escin induces apoptosis of cholangiocarcinoma cells through an intrinsic mitochondrial caspase-dependent pathway, and the increase in the bax/bcl-2 ratio and ROS may play important roles in β-escin-induced apoptosis of cholangiocarcinoma cells.     

5-FU联合人参黄芪复方对人胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响

目的探讨中药人参黄芪复方联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）,在体外对人胃癌MGC-803细胞的增殖、克隆、凋亡、迁移等生物学行为的影响。方法采用MTT方法检测细胞的增殖抑制率;并计算其中效浓度;流式细胞仪检测观察细胞的周期及凋亡;Giemsa染色检测细胞的克隆形成;细胞划痕实验检测药物对细胞迁移的抑制作用。结果人参黄芪复方和5-Fu均能抑制人胃癌MGC-803细胞生长,并随着药物浓度的增加而增强,5-Fu联合人参黄芪复方对细胞生长的抑制率明显高于单用人参黄芪复方或5-Fu组（P〈0．05）,并随着浓度的增加而增强;人参黄芪复方和5-Fu均能诱导胃癌细胞凋亡、抑制细胞克隆形成、阻滞细胞于G0／G1期、并抑制细胞迁移,而两药联用时细胞凋亡率、G0／G1期细胞均明显高于两药单用（P〈0．05）,并阻滞细胞于G0／G1期;人参黄芪复方与5-FU联合应用时细胞克隆形成、细胞迁移面积均明显低于两药单用（P〈0．05）,且联合用药的中效浓度小于两药单用时的中效浓度之和。结论人参黄芪复方和5-Fu联合应用与两药单用比较,能更好的抑制人胃癌MGC-803细胞增殖、抑制细胞克隆形成、促进细胞凋亡、阻滞细胞期于G0／G1期,并抑制细胞迁移。