转录因子Oct4、Sox2在结肠癌中的表达及意义

目的：研究转录因子Sox2、Oct4在结肠癌中的表达及相互关系,探索两者参与结肠癌发生发展中的临床意义。方法：用免疫组织化学SP法检测Oct4、Sox2在50例结肠癌及其匹配的癌旁组织中的表达。West-erRblot检测其在结肠癌细胞株SW480、SW620、Lovo及永生化结肠上皮细胞株HIEC中的表达。结果：免疫组织化学结果显示Oct4、Sox2在结肠癌组织中阳性表达率分别为80％（40／50）,74％（37／50）,显著高于匹配的癌旁组织,后者表达率分别为48％（24／50）,20％（10／50）（P〈0．05）,并且两者阳性表达率呈正相关关系（r=0．465,P〈0．05）。Oct4表达与病理级别呈负相关,而与年龄、性别无相关性。Sox2表达与患者的年龄、性别、病理级别无明显相关性。Westernblot显示结肠癌细胞株与永生化结肠上皮细胞HIEC均表达Oct4,Sox2;0et4、Sox2在结肠癌高转移细胞系SW620较亲本细胞SW480表达增高。结论：转录因子Oct4、Sox2在结肠癌组织中表达高于癌旁组织,并且两者的表达存在正相关性。提示Oct4和Sox2在结肠癌的发生中起着重要的作用。     

PIAS3在结肠癌组织和细胞中的表达及意义

摘 要：［目的］ 观察PIAS3在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨PIAS3在结肠癌发生发展中的作用。［方法］ 采用免疫组织化学染色法检测60例结肠癌及同源癌旁组织中PIAS3蛋白的表达,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western blot检测人结肠癌SW480、SW620及COLO205细胞株中PIAS3 mRNA及蛋白表达水平。［结果］ 结肠癌组织中PIAS3蛋白表达显著高于癌旁正常组织（χ2=8.543,P=0.006）;且表达强度随肿瘤病理分化程度的降低、Dukes分期的增高及肿瘤体积的增大而逐渐增高,差异有统计学意义（P均<0.05）;PIAS3在结肠癌SW480、SW620及COLO205细胞株中均有表达,其中COLO205细胞株中PIAS3蛋白及mRNA表达高于SW480和SW620细胞株（P<0.05）。［结论］ PIAS3的表达水平以及活性与结肠癌的发生发展有关,可能为结肠癌的早期诊断及靶向治疗提供新的分子靶点。     

miR－647在结肠癌细胞中的表达及临床意义

目的：分析miR－647在结肠癌组织及细胞系中的表达情况,探讨其对结肠癌细胞增殖、迁移能力的影响及其可能的作用机理。方法：利用Real－time quantitative Polymerase Chain Reaction（qPCR）技术检测17例结肠癌患者癌及癌旁组织中miR－647的表达;利用qPCR技术检测正常人肠上皮细胞HIEC及结肠癌细胞HT－29中miR－647的表达;将miR－647 antagomir及对照分别转染至结肠癌细胞中,应用MTT实验检测细胞增殖,体外划痕实验检测细胞迁移能力,评价转染miR－647抑制剂对结肠癌细胞增殖能力和迁移能力的影响。结果：qPCR结果显示,与癌旁组织相比,miR－647在结肠癌肿瘤组织中表达明显升高;与正常人肠上皮细胞相比,人结肠癌细胞系HT－29中miR－647表达明显升高;MTT结果显示miR－647抑制剂可以显著抑制SW480和SW620细胞的增殖能力和细胞迁移能力。结论：miR－647通过促进结肠癌细胞的增殖和迁移能力,参与结肠癌的发生发展进程。     

microRNA143表达对结肠癌组织中细胞增殖的影响及其作用机制

目的 探讨microRNA143(miR-143)表达对结肠肿瘤组织中细胞增殖和K-ras基因表达的影响.方法 采用Northern blot方法检测21例结肠癌组织和癌旁组织中miR-143的表达;构建miR-143的表达载体,将其转入人结肠癌细胞系SW480,用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)方法检测miR-143转染对细胞增殖的影响;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测K-rasmRNA和蛋白的表达变化.结果 在21例结肠癌组织标本中,有17例(81.0%)癌组织的miR-143表达水平低于癌旁组织.基因转染的SW480细胞中,miR-143表达水平显著升高,细胞增殖被抑制,K-ras蛋白的表达水平下降约40.3%,而K-ras mRNA水平未受影响.结论 miR-143在结肠癌组织中的表达明显低于癌旁组织,转染细胞中高表达的miR-143能够抑制细胞增殖,下调K-ras蛋白的表达.     

miR-7调控结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的机制研究

目的 研究microRNA-7(miR-7)和5氟尿嘧啶(5-FU)联合对5-FU耐药结直肠癌(SW620/5-FU)细胞增殖、凋亡的影响,探讨miR-7表达对结直肠癌细胞5-FU敏感性的调控机制。方法 收集2019年5月—2021年7月手术切除的结直肠癌组织和癌旁组织;培养结直肠癌细胞系(HCT116、SW1116、DLD1、SW620)和正常结肠上皮细胞(NCM460),培养SW620细胞并构建5-FU耐药结直肠癌细胞(SW620/5-FU)。用RT-qPCR检测细胞和组织中miR-7的表达量。对SW620细胞和SW620/5-FU细胞均瞬时转染miR-7 mimic、miR-7 inhibitor和vector,分为miR-7 vector组(空载体组)、miR-7 mimic组(过表达组)和miR-7 inhibitor组(抑制组),以及与5-FU联合处理的miR-7 mimic+5-FU组和control组(空细胞组)。采用CCK-8法检测细胞增殖和5-FU半数抑制浓度(IC₅₀),流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测各组的cle...     

lncRNA BLACAT1靶向LEMD1促进结直肠癌细胞的增殖和转移

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)BLACAT1在结直肠癌细胞发生发展过程的作用机制。方法 starBase分析TCGA数据库中lncRNA BLACAT1分别在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达水平,采用qPCR分别检测10例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中lncRNA BLACAT1的表达水平;检测结直肠癌细胞系SW620、SW480、HT-29、LoVo、HCT116和正常结直肠上皮细胞FHC中lncRNA BLACAT1的mRNA表达水平,筛选lncRNA BLACAT1高表达细胞系;敲低lncRNA BLACAT1验证对高表达细胞系增殖、迁移和侵袭的影响;starBase在线预测与lncRNA BLACAT1靶向作用的基因,qPCR和Western blot实验验证结果;starBase分析lncRNA BLACAT1与作用基因相关性,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA BLACAT1的靶基因;检测lncRNA BLACAT1作用靶基因对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果 TCGA数据库分析和结直肠癌患者检测结果均表明癌组织中lncRNA BLACAT1表达明显高于癌旁组织(P＜0.001);结直肠癌细胞系SW620中lncRNA BLACAT1的mRNA表达水平最高(P＜0.001);敲低lncRNA BLACAT1能够抑制SW620细胞的增殖(P＜0.001)、迁移(P＜0.001)和侵袭能力(P＜0.001);qPCR和Western blot实验及数据库分析结果表明lncRNA BLACAT1与LEMD1的表达存在正相关关系(r=0.778,P＜0.001),双荧光素酶报告基因实验证明LEMD1是lncRNA BLACAT1的靶基因;lncRNA BLACAT1上调LEMD1的表达,促进SW620细胞的增殖(P＜0.001)、迁移(P＜0.001)和侵袭(P＜0.001)。结论 lncRNA BLACAT1靶向LEMD1促进结直肠癌细胞SW620的增殖和转移。     

结直肠癌与其淋巴结转移癌及结直肠癌细胞上皮-间质转化的对比研究

背景与目的:对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的研究虽有大量文献报道,但研究数据仍有争议.本研究旨在探讨淋巴结转移的结直肠癌与结直肠癌细胞系SW480、SW620的EMT特征差异.方法:Real-time RT-PCR检测结直肠癌细胞系SW480和SW620 E-cadherin和vimentin的mRNA表达:免疫组织化学法检测30例配对结直肠癌及其转移淋巴结的石蜡组织标本中E-cadherin和vimentin的表达,HE染色观察30例配对结直肠癌及其淋巴结转移癌组织形态以及SW480和SW620的细胞形态.结果:SW480与SW620中E-cadherin和vimentin的mRNA表达差异有统计学意义(P=0.037),均以后者为高;E-cadherin和vimentin在结直肠癌与其淋巴结转移癌组织中的表达差异无统计学意义(P=0.108;P=0.660).部分淋巴结转移癌中E-cadherin的表达高于结直肠癌(4/30),且vimentin表达比结直肠癌弱,甚至表达缺失(6/30);结直肠癌与其淋巴结转移癌组织具有相似的形态学特征;SW480和SW620两者形态类似.结论:结直肠癌对比其淋巴结转移癌、SW480对比SW620发现EMT特征无显著差异,推测是由于淋巴结转移癌和SW620发生TEMT.     

SPRED1在结肠癌中的表达及意义

摘 要：［目的］ 探讨SPRED1在结肠癌中的表达，及其与结肠癌患者预后的相关性，以及对结肠癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。［方法］ 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测SPRED1 mRNA在结肠癌细胞和组织标本中的表达，免疫组织化学技术检测SPRED1蛋白在结肠癌组织中的表达。使用小干扰RNA（siRNA）干扰结肠癌细胞内SPRED1表达后，CCK-8试剂盒检测结肠癌细胞增殖能力变化，Transwell小室检测结肠癌细胞迁移能力变化，Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测细胞凋亡水平。［结果］ SPRED1 mRNA在结肠癌细胞株和结肠癌组织中表达水平均显著上调（P均<0.001），高表达SPRED1患者的总生存期短于低表达SPRED1患者（HR=2.326，95%CI：1.340～4.062，P<0.05）。干扰SPRED1后，干扰组结肠癌SW480和SW620细胞在36h和48h后增殖能力显著下降（P<0.05），侵袭能力显著下降（SW480：t=42.05，P<0.0001；SW620：t=12.91，P=0.0002），且凋亡水平显著上升（SW480：t=18.46，P<0.05；SW620：t=18.52，P<0.0001）。［结论］SPRED1在结肠癌中表达上调，促进结肠癌的增殖和侵袭。     

RBM8A在人结肠癌细胞株中的表达及其意义

目的 检测RBM8A在不同结肠癌细胞株中的表达,为进一步体外实验筛选靶细胞。方法 采用实时定量反转录聚合酶连锁反应（qRT-PCR）法以及蛋白免疫印迹（Western-blot）法检测RBM8A在结肠癌细胞株SW480、SW620、HT29、LOVO、COLO320DM、T84及人正常结肠上皮细胞株NCM460中的表达。结果 RBM8A在7株细胞株中均有表达,其中在结肠癌细胞株SW620和COLO320DM中的表达高于正常细胞株,差异有统计学意义（P＜0.05）,而其余细胞株中RBM8A的表达与正常细胞株差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 RBM8A在结肠癌细胞株SW620和COLO320DM中高表达,SW620和COLO320DM细胞株或可作为靶细胞。     

芦荟大黄素对结肠癌细胞株SW620 FasL基因表达和侵袭能力的影响

目的：在体外通过细胞培养，初步研究芦荟大黄素对人结肠癌SW620细胞FasLmRNA表达及对其侵袭能力的影响，为中药抗肿瘤提供实验依据。方法：根据MTT法得到芦荟大黄素对SW620细胞的半数有效抑制浓度（IC50），确定药物作用浓度．SW620细胞分别经芦荟大黄素不同浓度（0．5IC50、IC50）作用后，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测芦荟大黄素作用前后人结肠癌SW620细胞FasL mRNA的变化；应用Transwell细胞侵袭试验检测芦荟大黄素对SW620细胞侵袭能力的影响。结果：芦荟大黄素处理后较处理前SW620细胞FasLmRNA表达水平均明显高于对照组；而且FasLmRNA表达水平随芦荟大黄素作用浓度增加显著上调，芦荟大黄素不同浓度组比较均有显著性差异；随芦荟大黄素作用浓度升高，SW620细胞侵袭能力明显增强，不同浓度组比较均有显著性差异。结论：芦荟大黄素在一定时间内均可上调人结肠癌SW620细胞FasL mRNA的表达，而且这种上调作用在一定范围内呈剂量依赖性，可使结肠癌细胞的侵袭能力增强。     

Lin28 对肝癌HepG2 细胞5-Fu 敏感性的影响及其分子机制

目的：探讨RNA结合蛋白Lin28 对肝癌HepG2细胞5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的影响及其机制。方法：应用pcDNA3.1-Lin28 或si-Lin28 转染HepG2 细胞，采用qPCR及WB法检测转染后HepG2 细胞Lin28 的表达水平，CCK-8 法检测5-Fu 作用后转染细胞增殖活性变化并计算5-Fu 对细胞作用的IC50，流式细胞术检测5-Fu 处理后细胞凋亡情况、WB法检测凋亡相关蛋白的表达变化，qPCR法检测转染后耐药相关miRNA（let-7a 和let-7b）及肿瘤干细胞标记物（Oct4、Nanog和Sox2）的mRNA表达水平。结果：与空载对照组（HepG2/Vector）相比，HepG2/Lin28 组细胞中Lin28 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（P<0.05 或P<0.01），过表达Lin28 可显著抑制HepG2 细胞对5-Fu 作用的敏感性（IC50明显升高，P<0.05）和增强细胞增殖活性、使细胞凋亡率和凋亡相关蛋白caspase-3 表达明显降低（均P<0.01）。与阴性对照组（si-control）相比，si-Lin28 细胞中Lin28 表达水平显著下降（P<0.01）；敲减Lin28 可使细胞增殖活性及5-Fu 的IC50显著降低（均P<0.01），凋亡率及凋亡蛋白表达明显增加（P<0.01）。与HepG2/Vector 组比较，HepG2/Lin28 细胞中let-7a、let-7b 及肿瘤干细胞标记物（Oct4、Nanog 和Sox2）的表达水平明显上调（均P<0.01），而si-Lin28 细胞中let-7a、let-7b 及Oct4、Nanog、Sox2 的表达水平较si-control 组明显下调（均P<0.01）。结论：Lin28 可通过调节miRNAs的表达及肿瘤干细胞的形成从而调节肝癌HepG2细胞对化疗的敏感性，靶向调节Lin28 表达有望成为提高肝癌化疗疗效的手段。     

Oct4与EGFR在右半结肠癌组织中表达的相关性及临床价值

目的:探讨Oct4与EGFR在右半结肠癌组织中表达的相关性及临床价值.方法:应用免疫组织化学法检测120例右半结肠癌组织中Oct4与EGFR的表达,并与病理参数进行相关性分析;结合GEPIA数据库结果确认两者相关性.结果:免疫组化染色结果显示,Oct4表达与组织学分级、淋巴结转移以及TNM分期呈正相关(P＜0.05),...     

OCT4 spliced variants are highly expressed in brain cancer tissues and inhibition of OCT4B1 causes G2/M arrest in brain cancer cells

The new claim about the origin of cancer known as Cancer Stem Cell theory states that a somatic differentiated cell can dedifferentiated or reprogrammed for regaining the cancer cell features. It has been recently shown that expression of stemness factors such as Oct4, Sox2, Nanog and Klf4, in a variety of somatic cancers can leads to development of tumorogenesis. Here, the expression of Oct4 variants were evaluated in brain tumor tissues by quantitative RT-PCR and immunohistochemical (IHC) analysis. In next phase of our study, the expression of Oct4B1 was knock-down in brain cancer cell lines and its effect on cell cycle was assessed. Finally, in order to get insights into sequence-structure-function relationships of Oct4 isofroms, their sequences were analysed using bioinformatic tools. Our data revealed that all three variants of Oct4 are expressed in different types of brain cancer. The expression level of Oct4B1, in contast to Oct4B, was much higher in high-grade brain tumors compared with low-grade ones. In line with qPCR, the expression of Oct4A and B isofroms was confirmed with IHC in different types of brain tumors. Moreover, as a result of the suppression of Oct4B1 expression, the brain cancer cells were arrested in G2/M phase of cell cycle. Bioinfromatics data indicated that the predicted Oct4B1 protein have DNA binding properties. All together, our findings suggest that Oct4B1 has a potential role in tumorigenesis of brain cancer and can be considered as a new tumor marker with potential value in diagnosis and treatment of brain cancer.     

Modulation of POPDC1 Expression by Phenothiazine and Trifluoperazine Suppress Colon Cancer Growth and Migration

Objective: The aim of this study was to investigate the effects of CaM antagonist, PTZ, and TFP on cell proliferation and migration of colon cancer cells and its impact on POPDC protein expression. Methods: The 50% inhibitory concentration (IC50) of PTZ and TFP in SW1116, SW480, HCT-15, and COLO205 colon cancer cell lines are measured using MTT. Western blot and immunocytochemistry were used to determine the expression of PCNA, cyclin D1 (CD1), and POPDC proteins. Cell migration was observed using a scratch wound-healing assay. Results: Treatment with PTZ and TFP inhibited colon cancer cells growth in a dose-dependent manner. PTZ and TFP significantly inhibited the activation of proliferation markers, PCNA and CD1, and the migration of colon cancer cells. Furthermore, POPDC protein was significantly suppressed in all cell types of colon cancer, particularly in SW480. Finally, the CaM antagonist upregulates the POPDC1 expression in colon cancer cells. Conclusion: These findings suggest that CaM antagonists suppress colon cancer cells proliferation via downregulation of CD1 and PCNA. In addition, POPDC protein could be used as a biomarker in colon cancer, and CaM antagonist could be used to regulate POPDC1 expression. This study suggests that targeting POPDC1 with CaM inhibition could be a potential therapeutic strategy for colon cancer treatment.     

FUNDC1调控肺癌A549细胞及其干细胞的生长、自噬、凋亡和细胞干性的研究

目的:本实验旨在阐明线粒体自噬受体蛋白FUNDC1(FUN 14 domain containing 1)在肺癌病理进程中对肿瘤细胞生长死亡以及细胞干性的调控作用。方法:使用RT-qPCR分析FUNDC1在肺癌组织和细胞中的表达情况。siRNAs和过表达载体转染A549细胞以及诱导形成的A549干细胞团(A549/CSC)。采用CCK-8增殖试剂盒及集落形成实验分析不同处理对肺癌细胞增殖的影响。Western blotting检测FUNDC1、细胞自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase3)和细胞干性相关蛋白(CD133、Sox2、Oct4)的表达。细胞凋亡试剂盒(Elisa)用于测定细胞凋亡水平。流式细胞术分析CD133细胞阳性率。结果:FUNDC1在肺癌组织及细胞中表达上调,干扰FUNDC1抑制A549细胞增殖和保护性自噬,同时诱导细胞凋亡。此外,FUNDC1与CD133表达显著正相关,干扰FUNDC1可显著抑制细胞干性相关基因CD133、Sox2、Oct4的表达。A549/CSC细胞的FUNDC1表达高于正常A549细胞。干扰FUNDC1同样会抑制A549/CSC细胞增殖和保护性自噬,促进细胞凋亡。结论:FUNDC1调控肺癌细胞及CSC细胞的生长、自噬、凋亡及细胞干性。     

Survivin基因的shRNA 干扰对结肠癌SW480 细胞增殖和凋亡的影响*

目的:以携带shRNA 片段的腺病毒为载体,对结肠癌细胞SW480 中Survivin基因的表达进行干扰,研究其对肿瘤细胞中Survivin基因沉默效果及对细胞周期、凋亡和增殖的影响。方法:将构建好的携带Survivin-shRNA 片段腺病毒,体外转染结肠癌细胞株SW480。以EGFP为报告基因,采用流式细胞计数测定不同感染复数（MOI）下的转染效率,选取适当病毒浓度进行下一步实验。通过RT-PCR 和Western blot检测基因沉默后结肠癌细胞内Survivin mRNA和蛋白的表达水平;在Annexin V-FITC 和PI染色后通过流式细胞术检测并分析Survivin基因沉默后细胞周期和凋亡的变化;同时采用噻唑蓝（MTT）法、克隆增殖实验对细胞不同时期增殖活性进行观察,明确对细胞增殖的抑制时效性。结果:腺病毒转染后MOI 值在0～50时,剂量与转染效率成正比,确定最佳MOI 值为50并进行后续实验;shRNA 干扰后细胞内Survivin mRNA和蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义（P<0.01）。 流式细胞仪检测结果显示基因沉默后细胞凋亡率升高,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）。 同时基因沉默后,细胞周期也有明显变化,表现为G1/S 期细胞增多和G2/M期细胞减少,与对照细胞组相比差异有统计学意义（P<0.05）。 MTT 和单克隆平板实验均显示Survivin基因的沉默,对细胞的增殖和生长均具有明显抑制作用（P<0.05）。 结论:采用腺病毒对结肠癌进行靶向Survivin基因的shRNA 干扰,能有效降低目的基因的表达。其介导的Survivin基因的沉默,可以有效的诱导结肠癌细胞凋亡,同时Survivin基因可以通过抑制细胞G1/S 期转化来阻止细胞分裂,抑制细胞生长。