体外缺氧／复氧对星形胶质细胞AQP4表达的影响及葛根素干预的实验研究

目的观察缺氧,复氧条件下星形胶质细胞形态和AQP4mRNA的表达变化以及葛根素对其表达变化的影响,探讨脑缺血再灌注损伤与AQP4的关系以及葛根索的干预作用。方法原代培养星形胶质细胞,用5％CO2＋95％N2混合气体造成缺氧．以LDH漏出率及M1Tr降解率作为细胞受损指标,应用RT-PCR技术检验星形胶质细胞缺氧／复氧各个时间点AQP4mRNA的表达变化及葛根素的干预效果。结果体外培养的星形胶质细胞在缺氧环境下损伤不明显,随着复氧时间的延长细胞损害加重。AQP4mRNA在缺氧时表达与正常对照组无明显差异。复氧后表达升高并随时间延长呈增高趋势（P〈0．05）。葛根素干预组AQP4mRNA表达丰度与缺氧,复氧组无明显差异（P〉0．05）。结论星形胶质细胞AQP4mRNA表达变化与细胞损伤有明显的相关性,葛根素对星形胶质细胞损伤的保护作用不是通过改变AQP4的表达来实现的。     

缺氧预适应的心肌保护作用及其对心肌细胞摄取^201Tl的影响

目的观察缺氧预适应(PC)对体外培养的心肌细胞的保护作用以及不同时相的PC对心肌细胞摄取201T1的影响。材料和方法在原代培养的乳鼠心肌细胞基础上,建立早期缺氧预适应(EP)和晚期缺氧预适应(DP)模型,观察EP和DP条件下心肌细胞存活和摄取210T1情况。结果与缺氧／复氧组相比较,EP组细胞存活率提高20％,DP组提高12％,均有显著差异(P<0．01)。EP组心肌细胞在复氧1小时后对210T1的摄取接近正常组(P>0．05),DP组心肌细胞在复氧1小时后210T1的摄取量低于正常组(P<0．05),与缺氧／复氧组相比无显著性差异(P>0．05)。结论EP和DP能够保护体外培养乳鼠心肌细胞,两时相摄取210T1表现不同,可能与其不同的保护机制有关。     

缺氧复氧后肾小管上皮细胞ICAM-1的表达及NAC对其干预研究

 目的 研究缺氧复氧后肾小管上皮细胞ICAM-1的表达及N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其影响.方法 选用人肾小管上皮细胞(HK2)建立缺氧复氧损伤模型,设正常对照组、单纯缺氧复氧组、不同浓度(1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L)NAC干预组.流式细胞术检测细胞内氧化应激水平,流式细胞术检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达、RT-PCR法测定细胞ICAM-1 mRNA表达.结果 缺氧复氧后HK2细胞内氧化应激水平提高,细胞ICAM-1蛋白和mRNA表达上调,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高,ICAM-1蛋白和mRNA表达逐渐增强;NAC呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平,同时呈剂量关系抑制ICAM-1蛋白和mRNA表达的上调.结论 缺氧复氧诱导细胞内氧化应激的产生,诱导ICAM-1表达上调;NAC可以通过抑制细胞内氧化应激抑制ICAM-1的上调.     

紫芪方对缺氧复氧所致大鼠小肠上皮细胞损伤的保护作用

目的观察缺氧复氧对大鼠小肠上皮细胞（intestinal epithelial cell，IEC）-6培养液中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量及细胞内Ca^2＋浓度和线粒体膜电位的影响，探讨复方中药-紫芪方对IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制。方法复制IEC-6细胞缺氧复氧损伤模型，采用紫外分光法测定缺氧复氧后及紫芪方血清治疗后细胞培养液中SOD活性及MDA含量；采用激光共聚焦显微镜测定细胞Ca^2＋浓度和线粒体膜电位变化。结果细胞缺氧复氧损伤后，可导致细胞培养液中SOD活性显著降低、MDA含量显著升高、线粒体膜电位明显降低及细胞内Ca^2＋浓度明显升高（P〈0．01）。紫芪方药物血清治疗后，可提高细胞培养液中SOD活性并降低其MDA含量，同时稳定了线粒体膜电位并降低细胞内Ca^2＋浓度（P〈0．05）。结论缺氧复氧可导致IEC-6肠上皮细胞损伤；紫芪方血清对IEC-6小肠上皮细胞缺氧复氧损伤具有显著的保护作用。     

红景天苷对心肌细胞缺氧/复氧的保护作用

目的观察红景天苷抗心肌缺氧/复氧损伤的保护作用,探讨红景天苷抗心肌缺氧可能的信号通路。方法原代培养的心肌细胞加入不同浓度的红景天苷缺氧24h,噻唑蓝法测定细胞增殖;原代培养的心肌细胞分为5组：正常对照组;缺氧/复氧组;缺氧/复氧加红景天苷100μg/ml组;缺氧/复氧加红景天苷100μg/ml再加细胞外调节激酶抑制剂20μg组;缺氧/复氧加细胞外调节激酶抑制剂20μg组。加药后先孵育60min,再缺氧培养4h,随后常氧培养2h。全自动生化分析仪测定心肌酶（乳酸脱氢酶、肌酸肌酶、谷草转氨酶）含量,Westernblot法检测细胞外信号调节激酶蛋白表达。结果红景天苷增加了缺氧/复氧损伤心肌细胞的活力,降低了心肌细胞乳酸脱氢酶和肌酸激酶的渗漏,使磷酸化细胞外信号调节激酶蛋白表达水平明显降低。结论红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞损伤有保护作用,此作用可能通过细胞外信号调节激酶信号通路发挥作用。     

rrBMP-7基因对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用

目的 探讨骨形态发生蛋白-7(BMP-7)基因对缺氧复氧损伤后心肌细胞的保护作用.方法 将体外培养的乳大鼠心肌细胞分为3组:对照组(C组);缺氧复氧组(HR组):将培养的心肌细胞缺氧120min,复氧240min;转染组(BT组):将重组鼠BMP-7质粒转染心肌细胞后,再缺氧120min/复氧240min.每组重复8次.心肌细胞损伤程度以心肌细胞搏动功能评定、台盼蓝摄取率和乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CPK)活性来表示,同时检测心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.通过荧光成像技术检测各组心肌细胞内钙含量的变化.结果 与C组比较,HR组心肌细胞LDH、CPK含量显著增高,台盼蓝摄取率增加,SOD活性和细胞搏动频率显著下降,MDA和钙离子含量显著增高.与HR组比较,BT组心肌细胞台盼蓝摄取率降低,LDH活性减低,SOD活性增高,MDA含量下降,细胞内钙离子含量降低.结论 BMP-7转染可对抗缺氧复氧对心肌细胞的损伤,其机制与提高心肌细胞抗氧化损伤能力,对抗缺氧复氧引起的细胞内钙超载有关.     

纳洛酮对缺氧心室肌细胞早期凋亡的影响

心肌缺血 再灌注与心肌细胞调亡关系密切 ,且细胞调亡是缺血 再灌注损伤的病理特征之一。临床和实验表明 ,纳洛酮在心肌缺血 再灌注损伤中对心肌有保护作用。本研究应用纳洛酮干预体外培养家兔心肌细胞缺氧 复氧过程 ,观察其对心肌细胞早期调亡的影响。作者取重量在 3 5 g～ 5 0g当天生乳兔 1 5只 ,取乳兔心尖心肌 ,培养传一代后分成 2组 :正常组、单纯缺氧 复氧组 (缺氧组 )、缺氧 复氧加纳洛酮干预组 (用药组 )。AnnexinV联合PI法 :复氧 4h完毕 ,以 0 .2 5 %胰蛋白酶消化悬浮细胞 ,收集至少 1 0 6个组胞 ,3 0 0 0r min离心 5min弃上…     

人参皂苷Rg1和丹参酮ⅡA配伍对缺氧-复氧损伤心肌细胞的保护作用

目的探讨复方丹参方中两种主要有效成分人参皂苷Rg1和丹参酮ⅡA不同剂量配伍组合对缺氧-复氧损伤心肌细胞的保护作用。方法利用原代培养心肌细胞,采用缺氧-复氧模型造成细胞损伤,通过检测细胞活性、乳酸脱氢酶（LDH）渗漏评价保护作用;检测超氧化物歧化酶（SOD）活性评价细胞内抗氧化状态。结果人参皂苷Rg1（120μmol/L）和丹参酮ⅡA（4μmol/L）单体,人参皂苷Rg1与丹参酮ⅡA两种单体配伍均可以明显增加缺氧-复氧损伤心肌细胞活性,组合效果优于单体单独用药。以人参皂苷Rg160μmol/L＋丹参酮ⅡA2μmol/L组合效果最佳。单体组合还可以减轻缺氧-复氧诱导心肌损伤的LDH渗漏,升高SOD活性。结论人参皂苷Rg1与丹参酮ⅡA两种单体配伍对缺氧-复氧损伤心肌细胞具有明显的保护作用,其抗氧化损伤机制可能部分是通过升高SOD酶活性实现的。     

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和Jun基因表达的影响

取培养 1 2天的神经元 ,置于缺氧环境中培养 4小时后取出 ,再置含 0 .1 0Ｌ ＬＣＯ2 和空气培养箱内复氧培养 2 4小时和 72小时 ,于不同时间取出 ,观察其存活数、Ｊｕｎ表达阳性和阴性的神经元数。结果发现缺氧前对照组和低氧预处理组神经元存活数未见明显变化 ;缺氧前两组海马细胞中Ｊｕｎ表达阳性细胞百分率分别为 1 0 .5 7%± 3 .45 %和1 0 .1 7%± 2 .84%。缺氧 4小时复氧 2 4小时～ 72小时后 ,神经元中Ｊｕｎ表达阳性百分率较缺氧前显著增多。经缺氧预处理的神经元缺氧———复氧后Ｊｕｎ表达阳性百分率明显低于对照组 ,神经元存活数明…     

Apocynin对缺氧复氧后肾小管上皮细胞凋亡的干预研究

 目的 研究缺氧复氧后肾小管上皮细胞凋亡的表达及Apocynin对其影响.方法 选用人肾小管上皮细胞(HK2)建立缺氧复氧损伤模型,设正常对照组、单纯缺氧复氧组、不同浓度(0.05、0.25、0.5 mM)Apocynin干预组.流式细胞术检测细胞内氧化应激水平,检测细胞凋亡.结果 缺氧复氧后HK2细胞内氧化应激水平提高,HK2细胞凋亡和死亡细胞数量增多,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高,凋亡细胞和死亡细胞数量逐渐增多;Apocynin呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平,同时呈剂量关系减少凋亡细胞和坏死细胞的数量.结论 缺氧复氧诱导细胞内氧化应激的产生,诱导HK2细胞凋亡和死亡;Apocynin可以通过抑制细胞内氧化应激,减少细胞和坏死细胞的数量.     

小剂量重组人生长激素对心力衰竭患者心功能与生活质量的影响

为探讨小剂量重组人生长激素对充血性心力竭患者心脏功能和结构的疗效。对２１例扩张型心肌病与缺血型心肌病心力衰竭患者随机分为传统治疗组和ｒｈＧＨ治疗组１１例。所有病例均以洋地黄、利尿剂和硝酸酯治疗,ＧＨ组加用ｒｈＧＨ４．５Ｕ,第１个月隔日１次,第２个月每周２次,第３个月每周１次。     

酸枣仁总皂甙对小鼠缺氧的保护作用和体外对家兔血小板聚集及产生血栓素B_2的影响

酸枣仁总皂甙(ZS 100mg/kg IP)对小鼠常压缺氧和异丙肾上腺素加重的缺氧及亚硝酸钠所致的携氧障碍均能显著延长存活时间。用比浊法和放射免疫测定法研究ZS对家兔凝血酶诱导的血小板聚集和产生血栓素B_2(TXB_2)的影响。ZS(25-660mg/L)显著抑制血小板聚集和TXB_2的产生。上述结果提示:ZS对缺氧的保护作用与抗血小板聚集和减少TXB_2生成有关。     

Hypoxia-Induced increase in FDG uptake in MCF7 cells.

Recent clinical data indicate that tumor hypoxia negatively affects the treatment outcome of both radiotherapy and surgery in various cancers, emphasizing the need for noninvasive detection of tumor hypoxia. Several studies have shown an increased uptake of FDG in hypoxic regions of xenografts, suggesting the use of PET with FDG as a potential technique. In this study, we examine the mechanism underlying the hypoxia-induced increase of FDG uptake in the human breast carcinoma cell line MCF7. METHODS: The uptake of 3H-FDG into MCF7 cells was determined after incubation under hypoxic (0% oxygen) or normoxic conditions, with or without redox agents, for varying time periods. In addition, the effects of the redox agents on the glucose transporter activity and the hexokinase activity were determined independently, and the effects of hypoxia on glucose transporter protein and hexokinase levels were assessed. RESULTS: A more than twofold increase (2.53 +/- 0.79; P < 0.005) in 3H-FDG uptake was observed under hypoxic conditions, but no changes in the cellular levels of glucose transporter proteins or hexokinase were observed. A reducing agent, dithiothreitol (DTT), also caused an increase in 3H-FDG uptake but failed to affect uptake under hypoxic conditions. This indicates that the mechanisms by which hypoxia and DTT affect 3H-FDG uptake might be the same. The oxidizing agent p-chloromercuribenzenesulfonic acid (pCMBS) had no effect on 3H-FDG uptake under normoxic conditions but counteracted the effect of hypoxia. DTT caused an increase in glucose transporter activity, whereas it had no effect on hexokinase activity. pCMBS had no effect on either glucose transporter activity or hexokinase activity. CONCLUSION: The hypoxia-induced increase in 3H-FDG uptake in MCF7 cells is the result, in part, of an increase in glucose transporter activity resulting from the modification (reduction) of thiol group(s) in the glucose transport protein(s). Modulation of hexokinase activity is probably not involved in the hypoxia-induced increase in 3H-FDG uptake in these cells.     

蒺藜总皂苷对缺氧复氧损伤心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2与bax表达的影响

目的观察蒺藜总皂苷（GSTT）对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响。方法利用原代培养的SD乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注（M1／R）模型，分正常培养组、模型组和蒺藜总皂苷大、小剂量组。流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率，免疫组化检测心肌细胞凋亡基因bcl-2、bax的表达。结果GSTT大、小剂量组均可显著降低细胞凋亡率（P〈0．05）。GSTT大剂量组可显著上调bcl2表达（P〈0．01）、下调bax表达（P〈0．05），而GSTT小剂量组可上调bcl—2表达（P〈0．05），但对bax表达无明显影响。结论GSTT可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡，其作用可能是通过上调bcl-2、下调bax表达实现的。     

The effect of hypoxia on thallium kinetics in cultured chick myocardial cells

To assess the effect of hypoxia on cellular thallium-201 (201Tl) uptake and washout independent of coronary flow, we studied thallium kinetics during normoxia and hypoxia in cultured chick ventricular cells. Monolayers of contracting ventricular cells grown on coverslips were placed in a chamber and perfused to asymptote with media containing 201Tl. Perfusates were equilibrated with 5% CO2-95% air or 5% CO2-95% nitrogen for normoxia and hypoxia, respectively. Washout thallium kinetics were then observed during perfusion with unlabeled media. Twenty paired experiments were performed, randomly alternating the sequence of normoxia and hypoxia. Pharmacokinetics for thallium were determined by computer using standard formulae. Thallium uptake and washout were best described by assuming that intracellular thallium was contained within a single compartment. Cellular thallium uptake, as well as transfer rate constants for thallium uptake and for thallium washout during normoxia and hypoxia, were compared using paired t-tests. During normoxia and hypoxia, respectively, thallium uptake was 22 +/- 7% and 19 +/- 7% of asymptote (p less than 0.01); the compartmental rate constant for uptake by the cell was 0.16 +/- 0.07 min-1 and 0.15 +/- 0.06 min-1 (N.S.); and the transfer rate constant for washout from the cell was 0.26 +/- 0.06 min-1 and 0.23 +/- 0.05 min-1 (p less than 0.01). We conclude that there was a small (14%) decrease in thallium uptake during hypoxia. The rate of thallium uptake and washout was slightly less during hypoxia, although only the rate of washout was significantly less. These data show that cellular accumulation of thallium and the rate of washout of thallium were minimally decreased by hypoxia independent of blood flow.     

脑活素对大鼠及小鼠缺氧的保护作用

目的：观察脑活素对小鼠及大鼠胚脑组织细胞缺氧时的保护作用。方法：用ＴＢＡ微量法测量小鼠脑组织中过氧化脂质的含量;按邹氏法检测及观察培养大鼠胚鼠脑细胞存活状况,计算存活率。结果：脑活素组中小鼠脑组织匀浆过氧化脂质含量及胚鼠脑细胞存活率均较对照组有显著性差异（前者Ｐ＜ ０．０１;后者Ｐ＜ ０．０５） 。结论：脑活素具有明显的抑制自由基产生,提高脑组织细胞抗缺氧能力,从而具有保护脑细胞的作用。     

细胞膜损伤结构特征的研究

我们对热及冲击波损伤的细胞膜结构特征进行了系统研究。结果发现细胞膜损伤具有如下一些特征:①膜内微粒分布明显紊乱,出现直径超过20um的巨大微粒;②膜内微粒数量有显著变化,增加或降低与器官及细胞类型有关;③饮液泡的数量在脱水状态时是降低的,水肿时是增高的;④细胞紧密连接结构的完整性丧失;⑤肾小球毛细血管内皮细胞窗孔呈扩张趋势。     

缺氧复氧对大鼠离体中性粒细胞与心肌细胞粘附的影响

目的　研究粘附分子在中性粒细胞介导的缺氧复氧大鼠心肌细胞损伤中的作用。方法　体外培养的大鼠心肌细胞缺氧６ 小时后复氧２ 小时。采用粘附试验和抗细胞间粘附分子－１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎ ｍ ｏｌｅｃｕｌｅ－１,ＩＣＡＭ－１）单克隆抗体阻断试验观察中性粒细胞与心肌细胞间的粘附作用和心肌细胞乳酸脱氢酶的释放。结果　缺氧６小时后复氧２小时可使心肌细胞与中性粒细胞粘附数显著增加（Ｐ＜ ０．０１）,为正常培养组的１．７８ 倍;同时心肌细胞释放ＬＤＨ也明显增高（Ｐ＜ ０．０１）。５ μｇ／ｍ ｌ抗Ｉ－ＣＡＭ－１和抗淋巴细胞功能相关抗原－１（ＬＦＡ－１）单克隆抗体均可显著阻断中性粒细胞与心肌细胞间的粘附,阻断率为３６．７２％ 和３１．４１％ ,且心肌细胞释放ＬＤＨ明显下降（Ｐ＜ ０．０１）。结论　缺氧复氧后心肌细胞与中性粒细胞粘附增加,这种粘附作用伴随着中性粒细胞的激活和其细胞毒作用;抗ＩＣＡＭ－１ 和抗ＬＦＡ－１ 单抗能部分阻断这一粘附过程,提示粘附分子ＩＣＡＭ－１和ＬＦＡ－１ 参与介导中性粒细胞对缺氧复氧心肌细胞的损伤机制。抗ＩＣＡＭ－１ 和抗ＬＦＡ－１ 单抗可减轻中性粒细胞对缺氧复氧心肌细胞的损害     

腺苷A1受体拮抗剂DPCPX对脑神经元低氧复氧损伤的影响

目的观察腺苷A1受体拮抗剂DPCPX对脑神经元低氧复氧(H/R)损伤的影响及其机制。方法通过建立体外培养大鼠大脑皮质神经元H/R损伤模型,观察终浓度分别为0(对照组)、25、50、100nmol/L的DPCPX对常氧(低氧0h)和低氧暴露8、12、24h后复氧24h的H/R神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放量的影响,并检测了100nmol/LDPCPX对低氧暴露12h的H/R神经元丙二醛(MDA)含量及黄嘌呤氧化酶(XO)、Ca2 -ATP酶活性的影响。结果与对照组比较,100nmol/LDPCPX显著增加低氧暴露12h的H/R神经元LDH释放量(P<0·05),明显升高其MDA含量(P<0·01)和XO活性(P<0·05),明显降低其Ca2 -ATP酶活性(P<0·05)。结论DPCPX可加重培养神经元H/R损伤,其机制可能包括降低神经元抗氧化能力及Ca2 -ATP酶活性。