芪丹通脉片对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化易损斑块TLR4/NF-κB信号转导通路的影响

目的观察芪丹通脉片对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化易损斑块TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法采用右侧颈总动脉外置管术(PCCP)加高脂喂养制备易损斑块模型小鼠。将手术成功的60只小鼠随机分为模型组(B组)、黄芪甲苷组[C组,黄芪甲苷40 mg/(kg·d)]、丹参酮ⅡA组[D组,丹参酮ⅡA 90 mg/(kg·d)]、益气活血组[E组,黄芪甲苷40 mg/(kg·d)+丹参酮ⅡA 90 mg/(kg·d)]、芪丹通脉片组[F组,芪丹通脉片浸膏干粉700 mg/(kg·d)],每组12只;同时设12只ApoE~(-/-)小鼠为对照组(A组)。于手术后当天开始,各药物干预组按上述剂量分别溶于同等体积生理盐水灌胃,A、B组给予同等体积生理盐水灌胃,每日1次。A组给予普通饲料,其余五组给予高脂饲料。共计12周。常规HE染色检测各组小鼠动脉内斑块情况,常规生化法检测TC、TG、HDL、LDL;ELISA法检测TNF-α、IL-6、C-反应蛋白(CRP)表达水平;RT-PCR检测Toll样受体4(TLR4)、核转录因子(NF-κB)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA的表达量及Western-Blot法检测斑块中TLR4、NF-κB蛋白相对表达水平。结果 HE结果显示:A组小鼠动脉管腔内壁光滑,无斑块附着;B组小鼠可见大量斑块沉积于动脉内壁,斑块内可见到较大的脂质池,斑块结构较不稳定;与B组比较,C组及D组小鼠动脉内斑块减小,斑块内脂质池缩小,斑块结构趋向稳定,其中C、D两组比较,D组小鼠动脉斑块结构较C组稳定;E、F组小鼠动脉内壁基本光滑,少量斑块附着,结构较B、C、D组稳定。与A组比较,B组TC、TG、LDL、TNF-α、IL-6、CRP水平升高,TLR4、NF-κB、MMP-9 mRNA及TLR4、NF-κB蛋白表达水平亦升高(P0.01),HDL水平降低(P0.01)。与B组比较,C组TC降低,D、E、F组TC、TG、LDL水平及NF-κB、MMP-9 mRNA表达量均降低,E、F组HDL水平升高(P0.05,P0.01);C、D、E、F组TNF-α、IL-6、CRP水平降低,TLR4 mRNA及TLR4、NF-κB蛋白表达亦降低(P0.05,P0.01)。与C组比较,D组TC降低,E、F组TC、LDL水平降低,F组TG水平降低,HDL水平升高(P0.05,P0.01);D、E、F组TNF-α、IL-6、CRP水平降低,NF-κB、MMP-9 mRNA表达量及TLR4、NF-κB蛋白表达水平亦降低(P0.05,P0.01),E、F组TLR4 mRNA表达量降低(P0.01);与D组比较,E、F组TNF-α、IL-6、CRP水平、MMP-9 mRNA表达量及TLR4、NF-κB蛋白表达水平降低(P0.05,P0.01),E组TG、LDL水平及NF-κB mRNA表达量降低(P0.05),F组TLR4 mRNA表达量降低(P0.05)。结论芪丹通脉片可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低TNF-α、IL-6、CRP水平及MMP-9 mRNA的表达量而发挥抗易损斑块的作用。其中丹参酮ⅡA抑制易损斑块的作用可能优于黄芪甲苷,益气活血药单体配伍使用具有明显的协同作用。     

温阳活血解毒方对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块及斑块内血管新生的影响

目的探讨温阳活血解毒方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)易损斑块及斑块内血管新生的作用。方法以高脂饲料喂养雄性ApoE-/-小鼠13周,复制AS小鼠模型。将模型小鼠随机分成模型组,辛伐他汀组,温阳活血解毒方低、中、高剂量组,分别给予蒸馏水、辛伐他汀和温阳活血解毒方干预13周。测定小鼠动脉斑块内成分(细胞外脂质成分、泡沫细胞、平滑肌细胞、胶原纤维),计算易损指数,并测定斑块内新生血管的密度。结果与模型组比较,辛伐他汀组及温阳活血解毒方中、高剂量组易损指数、斑块内新生血管密度均有明显降低(P0.05)。温阳活血解毒方中、高剂量组对斑块易损指数、新生血管密度的作用优于低剂量组(P0.05),而高剂量组对新生血管密度的作用优于中剂量组(P0.05)。结论温阳活血解毒方可通过减少AS斑块内泡沫细胞、增加斑块内平滑肌和胶原成分,降低斑块内新生血管的表达以稳定AS斑块,并呈一定的剂量依赖性。     

铁皮石斛对ApoE-/-小鼠血脂及TNF-α,IL-6的影响

目的:考察铁皮石斛对ApoE-/-小鼠血脂、炎症相关蛋白的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:将ApoE-/-小鼠以高脂饲喂养4w构建AS小鼠模型,分别用辛伐他汀(3 mg·kg-1)、铁皮石斛(1.5,3 g·kg-1)对小鼠灌胃给药,8w后处死,酶法检测血清血脂;ELISA检测血清中TNF-α,IL-6表达;苏丹Ⅳ染色观察主动脉瓣处斑块形成情况;HE和油红0染色观察小鼠主动脉管腔内粥样斑块;免疫组化法检测TNF-α和IL-6在主动脉壁的表达.结果:铁皮石斛可显著降低小鼠血清中TG,TCHOL,LDL-C水平,下调血清中TNF-α,IL-6表达;可明显减少ApoE-/-小鼠主动瓣处粥样斑块的面积和ApoE-/-小鼠主动脉管腔内粥样斑块的面积,可明显降低TNF-α,IL-6在主动脉内表达.结论:铁皮石斛能有效降低ApoE-/-小鼠血清中有关脂质含量,降低血清和主动脉内TNF-α,iL-6的表达,降低炎症反应的发生,缓解动脉粥样硬化损伤.     

麝香通心滴丸稳定家兔动脉粥样硬化斑块研究

目的:探讨麝香通心滴丸对家兔动脉粥样硬化斑块的稳定作用。方法:日本大耳白家兔91只,雄性,体重1.8~2.2 kg。分为正常对照组及高脂饮食伴主动脉球囊拉伤术致动脉粥样硬化易损斑块模型组,模型加麝香通心滴丸高剂量组(2 mg/kg)、中剂量组(1 mg/kg)、低剂量组(0.5 mg/kg)和阳性对照组(辛伐他汀2 mg/kg)。连续灌胃给药12周,并分别于处死前24 h和48 h,注射蛇毒(0.15 mg/kg腹膜下注射)和组胺(耳缘静脉注射组胺0.02 mg/kg),对斑块进行药物触发后取材。计算斑块破裂率。利用HE、MASSON、油红O、免疫组化染色观察斑块情况、斑块内胶原、脂质、巨噬细胞、平滑肌细胞含量,并计算易损指数。结果:麝香通心滴丸可以降低药物触发所致的动脉粥样硬化家兔主动脉斑块破裂率(P0.05);增加斑块中的胶原、平滑肌成分,降低巨噬细胞成分(P0.05或P0.01);降低其斑块易损性(0.01P0.05)。结论:麝香通心滴丸具有稳定动脉粥样硬化家兔易损斑块的作用。     

经方小柴胡汤对小鼠肝纤维化的改善作用及其机制的研究

目的:探究经方小柴胡汤对肝纤维化改善作用的机制。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,即正常对照组、模型组和实验组。模型组和实验组小鼠腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN),每周3次,实验组注射DMN的同时每天灌胃小柴胡汤。4周后麻醉处死各组小鼠,取小鼠血浆和肝脏,对肝脏进行HE和masson染色;利用ELISA检测试剂盒测定血清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和C反应蛋白(CRP)以及肝脏4-羟脯氨酸(4-Hyp)含量;采用realtime PCR和western blot检测肝脏IL-1β、IL-6、TNF-α、I型胶原蛋白(Collagen I)和α-平滑肌动蛋白α(α-SMA)表达量、核因子κB抑制蛋白(IκB)的磷酸化水平及核因子κB(NF-κB)核积累量。结果:结果表明,实验组肝纤维化病理变化相比于模型组得到显著改善(P<0.05);实验组血清IL-1β、IL-6、TNF-α、CRP及肝脏4-Hyp与模型组相比其含量均明显下降,且差异显著(P<0.05);实验组肝脏IL-1β、IL-6、TNF-α、Collagen Ⅰ和α-SMA的表达水平、IκB的磷酸化水平及NF-κB的核积累量相比于模型组显著下降(P<0.05)。结论:小柴胡汤能显著改善小鼠肝纤维化,其作用机制与抑制肝脏内的炎症反应有关。     

益气活血法干预冠状动脉粥样硬化易损斑块研究进展

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一个复杂的病理生理过程,导致心血管事件的主要原因是动脉粥样硬化斑块的不稳定性,即易损性。近来的研究表明,益气活血法具有抑制血小板聚集、调节脂质代谢、抗氧化作用、保护血管内皮功能、抑制炎性反应、抑制血管平滑肌细胞增殖等作用,从而在一定程度上干预AS易损斑块的形成与发展。     

三七总皂苷抗动脉粥样硬化作用的实验研究

目的:探讨三七总皂苷抗动脉粥样硬化的效应。方法:在体动物实验:以Apo E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠为研究对象,喂饲高脂饲料模拟动脉粥样硬化发病过程,将9周龄ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组、PNS低剂量组(50 mg/kg)、PNS中剂量组(100 mg/kg)、PNS高剂量组(200 mg/kg)。接受溶剂治疗的C57BL/6J小鼠及ApoE~(-/-)小鼠分别作为正常对照及模型对照组,腹腔注射进行干预8周。通过HE染色、Masson’s trichrome染色和油红O染色分别观察主动脉病理形态学改变、血管纤维化及脂质沉积。体外细胞学实验:用LPS诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞产生炎症反应和氧化应激,用不同浓度的PNS进行干预(50、100、200、400 mg/L),采用Real Time-PCR测定RAW264.7细胞炎症相关因子(IL1-β、IL-6、TNF-α和ICAM1)和氧化应激相关基因(Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2)的表达水平。结果:主动脉HE染色、油红O染色和Masson’s trichrome染色结果显示,与模型组比较,PNS低、中、高剂量均能不同程度减小斑块面积、减少斑块上的脂质沉积和减小斑块纤维化面积(P0.05)。Real timePCR结果显示:与空白组对比,模型组的炎症相关基因IL-1β、IL-6、TNF-α和ICAM1的表达显著上调(P0.01),氧化应激相关基因Nrf2、HO-1和SOD1的表达无差异,仅SOD2的表达有反应性上调(P0.01);与模型组对比,PNS各浓度均能显著下调IL-1β、IL-6、TNF-α和ICAM1的表达(P0.01),不同程度上调Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2的表达(P0.05或P0.01)。结论:三七总皂苷具有体内抗动脉粥样硬化斑块形成作用和显著的体外抗炎、抗氧化作用。     

定心方通过上调CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞表达对PM2.5所致动脉粥样硬化的影响

目的:观察定心方(DXR)在小鼠吸入PM2.5所致动脉粥样硬化(AS)过程中对CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs)表达调控的影响。方法:50只载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠喂食高脂饲料并吸入严重污染的自然空气,随机分为5组,DXR低、中、高剂量组分别灌胃DXR 9.29,18.59,37.18 g·kg~(-1)·d~(-1);辛伐他汀组灌胃辛伐他汀5 mg·kg~(-1)·d~(-1);模型组灌胃等剂量生理盐水;10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料吸入过滤空气设为正常组。16周后检测小鼠血清脂质、酶联免疫吸附测定测定(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素~(-1)0(IL~(-1)0)及转化生长因子-β(TGF-β)水平;流式细胞法检测脾脏CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量;苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉AS斑块形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉AS斑块Foxp3蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠主动脉AS斑块形成,血清脂质,IL-6及TNF-α水平明显升高,IL~(-1)0及TGF-β水平明显降低,CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量明显减少,Foxp3蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,辛伐他汀组,DXR中、高剂量组小鼠AS斑块面积明显减小,血清脂质,IL-6及TNF-α水平明显降低,IL~(-1)0及TGF-β水平明显升高,CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs数量明显增加,Foxp3蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:DXR可通过上调CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs表达发挥抗PM2.5所致AS功效。     

染料木素对APAP诱导小鼠肝纤维化的影响

目的:研究染料木素对对乙酰氨基酚(APAP)诱导小鼠肝纤维化的保护作用。方法:将40只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、染料木素低(50 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg),每组10只。采用灌胃APAP建立小鼠肝损伤肝纤维化模型,观察染料木素药物干预后的影响。应用HE染色和Masson染色检测肝脏组织病理学变化;TUNEL法检测肝细胞凋亡情况;免疫组织化学染色检测结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素6(IL-6)的表达。结果:HE和Masson染色结果显示,染料木素可明显减轻模型小鼠肝脏炎性损伤及坏死,减少胶原纤维沉积;TUNEL染色结果显示,染料木素组小鼠肝细胞凋亡数量显著低于模型组(P0.01);免疫组织化学染色结果显示,染料木素组小鼠肝脏中CTGF、TNF-α、IL-6表达显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论:染料木素具有改善APAP诱导小鼠肝损伤和肝纤维化的作用。     

何首乌总苷对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块部位核转录因子-κB蛋白表达的影响

目的通过复制载脂蛋白E基因缺陷小鼠模型,研究何首乌总苷对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化斑块部位核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法将24只8周龄ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为模型组、何首乌总苷高、低剂量组和普罗布考组各6只。4组均给予0.15%胆固醇高脂饲料喂养建立动脉粥样硬化动物模型。同时,模型组给予0.9%氯化钠注射液0.3mL/d,何首乌总苷高、低剂量组分别给予何首乌总苷150、25mg/(kg.d)(0.3mL/d),普罗布考组给予普罗布考0.3mL/d(与高脂饲料的质量比为1∶100)。饲养16周后进行指标检测。观察比较各组小鼠主动脉斑块部位蛋白表达的免疫组织化学染色,分析核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果与模型组比较,何首乌总苷高、低剂量组和普罗布考组均可明显下调ApoE-/-小鼠主动脉斑块NF-κB蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论何首乌总苷通过影响NF-κB等炎性因子的表达,抑制动脉粥样硬化斑块的胶原纤维降解,从而稳定斑块,预防斑块的破裂,避免临床不良事件的发生。     

定心方降低脂质运载蛋白-2表达抑制ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的研究

目的探讨定心方对动脉粥样硬化(AS)小鼠的防治作用及其机制。方法 50只载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠喂食高脂饲料并随机分为5组:定心方低、中、高剂量组分别给予定心方(DXR)9.375,18.75,37.5 g/(kg·d)灌胃;辛伐他汀组予辛伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃;模型组予等剂量生理盐水。另设10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料为对照组。14周后测小鼠血清脂质运载蛋白-2(LCN-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色观察主动脉组织病理形态学改变;Western blot检测主动脉LCN-2蛋白表达。结果DXR中、高剂量组及辛伐他汀组小鼠血清LCN-2、TNF-α、MCP-1及IL-6水平、主动脉LCN-2蛋白表达及主动脉AS斑块面积均显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论 DXR可能通过降低LCN-2表达,抑制炎症反应,显著减轻ApoE~(-/-)小鼠AS病变。     

黄连素降低ApoE-/-小鼠内脏脂肪素表达

目的:观察黄连素(Ber)对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠主动脉粥样硬化(AS)病变、内脏脂肪素(visfatin)及炎症因子表达的影响。方法:50只SPF级8周龄雄性Apo E-/-小鼠予高脂饲料喂养随机分为5组:Ber低、中、高剂量组分别ip给予Ber 2.5,5,7.5 mg·kg-1·d-1;辛伐他汀组ig辛伐他汀5 mg·kg-1·d-1;模型组ig等量生理盐水。另设10只相同基因背景和周龄的雄性C57BL/6J小鼠为对照组予普通饲料喂养。16周后测小鼠体重、血清脂质及visfatin,血浆白介素(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色观察小鼠主动脉组织AS斑块面积;免疫组化法测AS斑块内visfatin的表达;Western blotting测小鼠主动脉visfatin蛋白的表达。结果:小鼠体重增加值,血清visfatin,总胆固醇(TG),三酰甘油(TC),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,血浆IL-6及TNF-α含量,主动脉visfatin蛋白表达方面,模型组均显著高于对照组(P0.05),各给药组均显著低于模型组(P0.05);辛伐他汀组,Ber中、高剂量组小鼠主动脉AS斑块面积比显著低于模型组(P0.05)。结论:Ber可通过降血脂、减小AS斑块面积、降低IL-6及TNF-α含量等发挥抗AS效应,其机制可能与降低visfatin表达有关。     

景虎通脉方抗ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用机制研究

目的探讨景虎通脉方对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块及炎性因子的作用及机制。方法 SPF级ApoE~(-/-)小鼠高脂饲养8周后建立AS模型,随机分为模型组、阳性药物组及景虎通脉方高、中、低剂量组(18.20、9.10、4.55 g/kg),C57BL/6/J小鼠为正常组。给药8周后HE和Masson染色观察主动脉斑块情况;ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6及检测血脂4项;免疫组化和Western blot检测主动脉Toll样受体4(TLR4)和核受体77(Nur77)表达;基因芯片杂交技术筛选差异基因进行KEGG通路富集分析。结果与模型组比较,景虎通脉方各剂量组能不同程度减低血清TC、TG、LDL-C水平,增加HDL-C水平(P0.05,P0.01);HE和Masson染色观察景虎通脉方各剂量组显著减少斑块面积,增加斑块内胶原纤维表达(P0.01);ELISA检测景虎通脉方各剂量组可减低IL-1β、TNF-α、IL-6水平(P0.01);免疫组化和Western blot显示景虎通脉方各剂量组降低TLR4表达,增加Nur77表达;miRNA芯片结果显示49个miRNA差异显著,经KEGG分析显示其作用与包括Axon guidance及TLR4下游在内的多条通路相关。结论景虎通脉方可明显减少AS小鼠主动脉斑块面积,其机制可能与其调节血脂、减低炎症因子、干预Nur77和TLR4蛋白及包括Axon guidance在内的多条通路相关。     

降浊升清法对抗动脉粥样硬化炎症反应及干预NF-κB的动物实验研究

目的:探讨降浊升清汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样斑块炎症反应及NF-κB的影响.方法:ApoE基因敲除小鼠给予高脂饲料喂养,利用HE染色法确定造模成功后,小鼠随机分为3组中药组、西药组及空白组,分别给药后用HE染色观察小鼠斑块的形成,用原位杂交法检测NF-κB mRNA的表达,研究降浊升清法抗动脉粥样硬化及对炎症信号的抑制作用.结果:给药后,中药组与空白组对照NF-κB的阳性率的表达有统计学意义,中药组与西药组对照对动脉组织中NF-κB的阳性率的表达无统计学意义.结论:降浊升清汤与辛伐他汀均可抑制动脉组织中NG-κB的表达,通过改善斑块内部成分来稳定易损斑块,具有程度不同的调脂作用,其机制可能与调节脂质代谢和抑制炎症反应有关.说明降浊升清汤该方药对动脉硬化炎症反应有一定的改善和调节作用.     

艾灸对动脉粥样硬化小鼠炎性反应因子及MMP-9的实验研究

目的:观察艾灸对Apo E~(-/-)小鼠主动脉内肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响,并从抑制炎性反应,稳定动脉粥样硬化斑块等角度探讨艾灸在防治动脉粥样硬化中的机制。方法:将48只采用高脂饮食喂养的载脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E~(-/-)小鼠)作为动脉粥样硬化模型,并随机分为3组:艾灸组,模型组,药物对照组。并将16只同龄相同遗传背景的C57BL/6小鼠作为空白对照组。空白组、模型组小鼠每天常规抓取、固定,并放置假艾灸装置。艾灸组小鼠每天抓取固定,并艾灸膻中穴。药物组小鼠每天采用辛伐他汀0.28 mg/100 g灌胃,所有干预20 min/d,6 d/周,干预14周后牺牲,取材检测。Elisa法测定主动脉内TNF-α、IL-10、MMP-9的含量。油红"O"染色观察胸主动脉病理改变。结果:1)与模型组相比,艾灸组,药物组小鼠主动脉内TNF-α、MMP-9含量明显降低(P0.05),艾灸组,药物组之间无明显差异;与模型组相比,药物组IL-10水平明显升高有统计学意义(P0.05),艾灸组小鼠主动脉内IL-10呈升高趋势,但无统计学意义。2)胸主动脉病理改变:与空白组相比,模型组胸主动脉可见明显的AS斑块,内膜破坏,中膜增厚,平滑肌细胞破坏变性,管腔变狭窄。相比于模型组,艾灸组及药物组主动脉病变明显减轻。结论:1)艾灸可以有效缓解动脉粥样硬化病变,抑制动脉粥样硬化斑块生长;2)艾灸可以抑制体内炎性反应,并具有稳定斑块的作用     

丹参酮ⅡA对动脉粥样硬化小鼠脂质运载蛋白-2表达的干预研究

目的:探讨丹参酮ⅡA对动脉粥样硬化(AS)小鼠脂质运载蛋白-2(LCN-2)表达的干预作用。方法:将50只载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠喂食高脂饲料并随机分为5组:丹参酮ⅡA低、中、高剂量组分别给予丹参酮ⅡA灌胃(7.5,15,30 mg·kg~(-1)·d~(-1));辛伐他汀组予辛伐他汀5 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃;模型组予等剂量生理盐水。另设10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料为对照组。14周后测小鼠血清LCN-2、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色观察主动脉组织病理形态学改变;Western blot检测主动脉LCN-2蛋白表达。结果:各给药组小鼠血清LCN-2、IL-6、MCP-1及TNF-α水平、主动脉LCN-2蛋白表达均显著低于模型组(P<0.05),辛伐他汀组、丹参酮ⅡA中、高剂量组小鼠主动脉AS斑块面积显著低于模型组(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可通过降低LCN-2表达,抑制炎症反应,显著减轻ApoE~(-/-)小鼠AS病变。     

葛根素降低ApoE-/-小鼠visfatin表达抑制动脉粥样硬化形成的研究

目的观察葛根素对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠主动脉粥样硬化(AS)病变、血脂水平、内脏脂肪素(visfatin)及炎症因子IL-6及TNF-α表达的影响。方法 50只SPF级8周龄雄性Apo E-/-小鼠予高脂饲料喂养随机分为5组:葛根素低、中、高剂量组分别给予葛根素300,600,1200 mg·kg-1·d-1灌胃;辛伐他汀组灌服辛伐他汀5 mg·kg-1·d-1;模型组灌服等剂量生理盐水。另设10只相同基因背景和周龄的雄性C57BL/6J小鼠为对照组予普通饲料喂养。16周后测小鼠体质量、血清脂质及visfatin、血浆IL-6及TNF-α含量;HE染色观察小鼠主动脉组织AS斑块面积;western blotting测小鼠主动脉visfatin蛋白的表达。结果各给药组小鼠体质量增加值、血清visfatin、TG、TC、LDL-C水平、血浆IL-6及TNF-α含量、主动脉visfatin蛋白表达均显著低于模型组(P0.05),血清HDL-C高于模型组(P0.05);辛伐他汀组、葛根素中、高剂量组小鼠主动脉AS斑块面积百分比显著低于模型组(P0.05)。结论葛根素可通过降血脂、减小AS斑块面积、降低IL-6及TNF-α含量等发挥抗AS效应,其机制可能与降低visfatin表达有关。     

生姜醇提取物对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后细胞凋亡和炎症反应的影响

目的观察生姜醇提取物对肝脏缺血再灌注大鼠炎症反应和肝细胞凋亡的影响。方法将84只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,生姜醇提取物100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg预处理组和金纳多4 mg/kg预处理组,每组14只。自术前2周开始,各给药组均灌胃给予相应药物,假手术组和模型组灌胃生理盐水,均每天1次。末次灌胃后第2天,除假手术组外,其余组均通过夹闭肝门静脉和肝动脉的方法制备肝脏缺血再灌注模型,再灌注2 h后,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平及炎症因子C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10水平,HE染色观察肝脏组织病理性形态,TUNEL染色观察肝细胞凋亡情况并计算凋亡指数,检测肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测肝组织中NF-κB蛋白表达并进行半定量分析。结果与模型组比较,生姜醇提取物200 mg/kg、400 mg/kg预处理组大鼠血清ALT、AST、ALP及CRP、TNF-α、IL-6水平均明显降低(P均0.05),其中400 mg/kg预处理组IL-1β水平显著降低而IL-10水平显著升高(P均0.05)。生姜醇提取物各预处理组大鼠肝脏组织病变和肝细胞凋亡状况呈不同程度改善,其中以400 mg/kg预处理组效果最为显著;肝脏组织中SOD、CAT活性显著升高而MDA含量显著降低(P均0.05),肝细胞凋亡指数和NF-κB蛋白表达量均显著降低(P均0.05)。结论生姜醇提取物对大鼠肝脏缺血再灌注后细胞凋亡和炎症反应具有抑制作用;作用机制可能与生姜醇提取物能够有效改善抗氧化酶活性、降低氧化应激损伤、下调NF-κB蛋白表达有关。     

活血、益气、化痰中药对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块炎症反应的影响

目的探讨活血、益气、化痰中药对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化（AS）斑块成分和炎症反应的影响及其稳定AS斑块作用可能机制。方法70只6～8周龄小鼠ApoE基因敲除小鼠予高脂饮食喂养13周后,待其形成成熟的AS斑块后,随机分为活血组（予丹参酮）、益气组（予西洋参茎叶总皂苷）、化痰组（予瓜蒌提取物）、模型组、阳性对照组（予辛伐他汀）、正常组,相应处理13周后,处死取主动脉根部染色、测量并计算脂质核心占斑块总面积的百分比以及斑块内脂质成分与胶原成分的比值,免疫组织化学染色法观察小鼠主动脉根部粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测主动脉内核转录因子κB（NF-κB）mRNA的表达。结果在斑块内脂质核心面积、斑块内脂质成分与胶原成分比值方面,益气、化痰组较模型组均有不同程度的降低;活血组斑块内脂质成分与胶原成分比值明显降低,而斑块内脂核面积与模型组相近。与模型组相比,益气、活血、化痰组小鼠主动脉根部斑块内GM-CSF表达明显减少,对小鼠主动脉斑块内TNF-α表达无明显影响。活血组小鼠主动脉斑块内NF-κBmRNA的表达较模型组降低。结论活血、益气、化痰中药可通过改善斑块内部成分以稳定易损斑块,其机制可能与抑制炎症反应有关。     

出血性络风内动证小鼠模型的构建

目的建立符合临床、具有易行性与广泛适用性的出血性络风内动证动物模型。方法 Apo E(-/-)基因敲除小鼠高脂饲料喂养并于12周龄行右侧颈总动脉套管术,术后随机分为对照组、应激组、Compound组、应激+Compound组。术后4周后对所有小鼠腹腔注射脂多糖1mg/kg,每周2次,共8周;术后8周应激组、应激+Compound组给予限制性精神刺激,每天4h,共4周;术后10周Compound组、应激+Compound组小鼠腹腔注射Compound 48/80 0.5 mg/kg,隔日1次,共4次。术后12周进行血脂检测和斑块病理形态学检测,计算斑块面积、血管管腔狭窄率,比较斑块内脂质、胶原含量、平滑肌细胞和单核/巨噬细胞含量并计算斑块易损指数。结果各组小鼠血脂水平差异均无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,Coumpound组斑块内出血情况明显升高,应激+Compound组总斑块病理形态情况差异有统计学意义(P0.05)。各组斑块面积、血管管腔狭窄率及斑块中脂质、平滑肌细胞含量比较差异均无统计学意义(P0.05),而应激+Compound组和Coumpound组的单核/巨噬细胞含量则较对照组明显升高(P0.05)。应激+Compound组斑块内胶原含量较其余各组减少,而易损指数较其余各组升高(P0.05)。结论采用脂多糖+应激+Compound 48/80三种因素联合刺激进行出血性络风内动证小鼠模型构建具有较高的斑块易损性和斑块内出血率,可作为出血性络风内动证动物模型的最佳造模方法。