胚胎干细胞途径获得基因工程小鼠的原理与方法

胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell简称ES细胞)是从早期胚胎的内细胞团(Inner Cell Mass,MIS)分离出来的多潜能细胞系。它具有与胚胎细胞相似的形态特征及分化潜能。在饲养层上或含有白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)或分化抑因子(Differentiation inhibitory activity DIA)的培养基中培养时保持未分化状态,但在适当条件下被诱导分化。在这种细胞注入受体胚胎时,能参与各种组织器官发育,形成嵌合体。正是由于这些特征,ES细胞在培养的细胞与个体发育之间架起了桥梁,在体细胞与生殖细胞之间架起了桥梁,随着基因工程的发展,现在人工构建基因不成问题,可以用同源重组的方法加一定的选择系统对ES细胞进行基因打靶,把外源基因定点掺入或内源基因定点敲除。     

小鼠胚胎干细胞体外非定向分化培养系统的建立及其形态学观察

目的 建立胚胎干细胞(embryonic stem cells，ES cells)体外非定向分化培养系统，为其向各种成熟细胞的定向诱导分化提供方法学和形态学基础。方法 选用BALB／c小鼠ES细胞，分别进行未分化培养和非定向分化培养，对培养系统中ES细胞的发育和分化情况进行观察。结果 ①ES细胞在含小鼠白血病抑制因子的培养液中保持未分化状态，呈克隆性生长；②ES细胞在分化第2～10天和11～13天分别发育为拟胚体(embryonic bodys，EBs)和囊胚；③分化第14天，囊胚贴壁形成以贴壁点为中心的细胞群落并分化多种类型细胞，包括类上皮细胞、心肌细胞和神经细胞等；④分化第17～30天，三维组织结构形成；⑤分化第36天，细胞出现衰退裂解。结论 ES细胞在该培养系统中自然分化为包括三个胚层的多种类型细胞，为下一步定向分化提供技术支持。     

由囊胚内细胞团分离人胚胎干细胞

胚胎干（Embryonic stem，ES）细胞是由着床前胚胎内细胞团（Inner cell mass，ICM）或原始生殖细胞（Primordial germ cells，PGC）经体外分离培养而建立的克隆细胞系。ES细胞的特点是只生长、不分化，并保持早期胚胎发育的多能性。本文比较了人囊胚在G２．２培养液和含DMEM培     

昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定

目的 提高昆明小鼠胚胎干细胞（ES细胞）建株的成功率。方法 收集小鼠3．5d的囊胚培养,用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,形成的ES细胞样集落,经两次亚克隆分离培养ES细胞;进行相差显微镜观察、碱性磷酸酶染色和体内外分化能力鉴定。结果 获得两个稳定ES细胞集落,传至第11代。ES细胞呈集落样生长,碱性磷酸酶染色强阳性,体外分化的细胞沿拟胚体外向性生长,形态多样,在体分化可形成来源于3个胚层的组织。结论 两次亚克地获得的细胞具有ES细胞主要的生物学性状,有助于提高昆明小鼠ES细胞建株的能力。     

胚胎干细胞的体外培养及分化的研究现状和前景

胚胎干细胞（Embryonic stem sell，ES细胞）是从早期胚胎内细胞团（Inner cell mass，ICM）或原始生殖细胞（Primordial germ cell．PGCs）经体外分化抑制培养分离克隆的，ES细胞在组织工程、基因治疗和发育生物学等的应用研究中起着重要作用。本文介绍了ES细胞的生物学特点及国内外研究进展和动态，阐明了建立ES细胞系的技术要点以及它的应用前景。     

胚胎干细胞的体外培养及分化的研究现状和前景

胚胎干细胞(Embryonicstemsell,ES细胞)是从早期胚胎内细胞团(Innercellmass,ICM)或原始生殖细胞(Primordialgermcell,PGCs)经体外分化抑制培养分离克隆的,ES细胞在组织工程、基因治疗和发育生物学等的应用研究中起着重要作用。本文介绍了ES细胞的生物学特点及国内外研究进展和动态,阐明了建立ES细胞系的技术要点以及它的应用前景。     

人胚胎干细胞分化研究进展

胚胎干细胞（Embryonic Stem Cell,ES细胞）是由着床前囊胚期内细胞团（Inner Cell Mass,ICM）或早期胚胎原始生殖嵴的胚胎生殖细胞（Primordial Germ Cells,PGCs）建立的、可在体外未分化状态下长期增殖传代的、具有稳定的二倍体核型和多能干细胞表面特异抗原标记的、可分化为3个胚层来源的各种组织和细胞类型（包括生殖腺和生殖细胞）的永久细胞系。基于其特性,目前普遍认为,ES细胞对体外研究动物和人胚胎的发生发育,新基因的发现,药物的筛选和致畸实验及作为细胞组织移植治疗,克隆治疗和基因治疗的细胞源及产生克隆和转基因动物等领域将产生重要的影响。本文综述了人胚胎干细胞诱导分化研究进展。     

干细胞的研究进展

干细胞是在生物个体的生长和发育中起源头作用的原始细胞，具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体。也就是说，干细胞可以通过细胞分裂维持自身细胞群的大小，同时又可以进一步分化成为各种不同的组织细胞，从而构成机体各种复杂的组织器官。根据其发展阶段和来源不同，干细胞可分为胚胎于细胞（Embryonic stem cells，ES cells）和成体干细胞（Adult stem cells，ASCs）。胚胎干细胞可以分化、发育成完整的动物个体，属于全能干细胞。     

胚胎干细胞的研究新进展

随着干细胞生物学研究热潮的掀起，胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）的研究也取得了巨大进步。ES细胞是指胚泡期的内细胞团中分离出的尚未分化的、能在体外培养、具有发育全能性的早期胚胎细胞。ES细胞具有胚胎细胞和体细胞的某些特性，既可进行体外培养、扩增、转化和制作基因突变模型等遗传操作，又保留了分化成包括生殖细胞在内的各种组织细胞的能力。因此，具有无限增殖、自我更新和多向分化的潜能。ES细胞在临床移植医学、细胞治疗、组织工程、药理学及发育生物学基础等研究领域具有重要的科学意义和巨大的应用前景，对于有效地治疗人类多种疾病，维护和促进人类健康具有巨大的潜在价值。     

成体干细胞研究进展

近年来 ,人们在对成体干细胞 (Adult stem cell,AS细胞 )的分化潜能进行深入研究过程中 ,发现 AS细胞置于一个新的微环境时 ,可以分化为有别本身的另一系统的体细胞。这种跨系统分化的现象被称为 AS细胞的可塑性(plasticity)。AS细胞可塑性的发现是干细胞研究中的一个里程碑。为 AS细胞的应用开辟了更广阔的前景。人们甚至认为 ,具有可塑性的 AS细胞可取代甚至超过胚胎干细胞 (Embryonic stem cell,ES细胞 )的临床应用价值。由于 AS细胞的可塑性与传统观念相去甚远 ,部分科学家对之颇为怀疑。最近的有关实验使 AS细胞的可塑性遇到了巨大挑战。有必要对 AS细胞的可塑性进行更严格的实验检验     

大鼠胚胎干细胞的研究进展

胚胎干细胞是来源于早期胚胎内细胞团或着床后胚原始生殖细胞的一类未分化的全能性(多能性)干细胞,具有无限增殖和全向分化的能力。ES细胞能够自我更新和多向分化的生物学特性具有重要的医学价值,在基因治疗、组织工程学、药学研究等许多领域都具有广泛的应用前景。至今为止人类已建立了数百个小鼠的ES细胞系。但相对大鼠而言,由于其ES细胞在体外培养时较易发生分化,故建系较难。Iannaccone等从大鼠PVG近交系大鼠的囊胚分离克隆了大鼠ES细胞系-RESC-01。本文主要综述了目前分离、培养大鼠胚胎干细胞的技术进展,我实验小组在预实验中得到的结果及面临的问题,讨论其在临床工作中的应用前景。     

胚胎干细胞的研究进展和面临的挑战

胚胎干细胞(embryonicstemcells,EScells)是存在于胚胎发育早期阶段,具有自我更新和多分化潜能性的干细胞,是组成机体各种组织器官的起源细胞。一定条件下,其在体外可以保持未分化状态,长期存活无限繁殖。有关ES细胞在动物疾病模型中治疗作用的研究,尤其是在小鼠中的研究,已趋于成熟。在此基础上,人们开始尝试人类ES细胞用于临床治疗各种疾病,探讨其可行性和安全性等问题。本文主要综述了ES细胞的发展历史,特性和鉴定的方法及目前ES细胞在治疗糖尿病、帕金森及心血管损伤等各种疾病中的应用,讨论了培养体系中的一些问题和ES细胞研究中所面临的难点与挑战。     

胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞 (embryonicstemcell,ES细胞 )是从哺乳动物的囊胚内细胞群 (innercellmass,ICM)和原始生殖细胞 (Pri mordialgermcells,PGCs)经体外分化、抑制培养并分离克隆出来的一种原始、高度未分化细胞[1 ] 。ES细胞是一种具有自我复制、更新和发育全能性并能产生后代能力的早期胚胎细胞。在特定条件下可分化为人体 2 0 0多种细胞类型 ,并可构建成心、肝、肾等各种组织和器官 ,最后能发展成一个完整的个体。自 1 998年Thomson[2 ] 等分离并克隆了人的ES细胞后 ,国内外掀起了ES细胞研究的高潮 ,打开了体外生产可供移植治疗的所有类型…     

非人灵长类胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞是来源于胚胎发育早期的具有多分化潜能的未分化细胞。非人灵长类作为与人类亲缘关系最密切的动物，其ES细胞与人类十分接近。非人灵长类ES细胞的建系成功为开展干细胞的基础和应用研究提供了重要的工具。本文阐述非人灵长类ES细胞的建系、分化的研究进展。     

科学审慎地对待成体组织干细胞的"可塑性"或"横向分化"

近5年来干细胞之所以再次成为人们关注的焦点和热点,其一是因为人胚胎性干细胞系(embryonic stem and germ cells,ESCs和EGCs)终于在1998年分别从人胚胎细胞及生殖嵴细胞中被分离、克隆培养成功,证明它们在体外仍保持未分化状态、具有无限的增殖能力及可分化为三胚层各种细胞类型的广泛潜能。其二是因为1995年有学者首次报道源自成体骨髓的黏附细胞亦可分化成为在发育上无关的其他胚层的细胞类型,即成体组织干细胞(adult stem cells,ASCs)具有“可塑性”(plasticity)抑或“横向分化”(transdifferentiation)潜能。     

以间充质干细胞为饲养层分离培养昆明小鼠胚胎干细胞

目的:探讨以间充质干细胞作为饲养层细胞分离培养昆明小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ES细胞)的方法.方法:以鼠间充质干细胞作为饲养层,收集受孕3.5～4 d昆明小鼠的囊胚和桑椹胚进行培养,筛选纯化细胞集落,使其稳定传代后,采用光镜,碱性磷酸酶染色及Oct-4染色对其形态学和生物学性状进行初步鉴定.结果:以间充质干细胞作为饲养层细胞分离培养的昆明小鼠ES有其典型的形态学特征:集落呈鸟巢状,边缘清楚,表面平滑,结构致密,隆起生长,细胞之间界限不清楚;单个细胞体积小、核大;对ES细胞碱性磷酸酶进行检测,末分化的Es细胞显微镜下为黄褐色,分化的不着色;Oct-4染色阳性.结论:以间充质下细胞作为饲养层细胞分离培养昆明小鼠胚胎干细胞可行,得到的胚胎干细胞能保持特殊的形态和未分化状态.     

干细胞研究的机遇与挑战

胚胎干细胞(embryonicstemcell,简称ES细胞)是胚胎或原始生殖细胞(PGC)经体外分化抑制培养而筛选出的具有发育多能性的细胞。它在发育阶段上类似于早期胚胎的内细胞团细胞(ICM细胞),具有与早期胚胎相似的分化潜能和正常二倍体核;兼有胚胎细胞和体细胞的类似特性,既可以进行体外培养、扩增、转化和筛选,又可分化为包括生殖细胞在内的各种组织,还可与受体胚胎嵌合,生产包括生殖系在内的各种组织的嵌合体。特别是人类胚胎干细胞的研究取得了突破后,近年来干细胞研究一直是人们关注的热点。本文依据自然辩证法的基本观点,论述干细胞研究领域…     

胚胎干细胞生物学特性

来源于早期胚胎或原始生殖细胞的胚胎干细胞(ES细胞)可在体外抑制分化培养条件下无限扩增,并保持未分化状态和多能性.ES细胞研究是国际生物科学的热点课题之一.多年来,众多学者对ES细胞形态结构、核型、分化潜能、碱性磷酸酶、胚胎阶段特异性细胞表面抗原的表达以及一些分子标记等生物学特性作了大量研究报道,为ES细胞分离鉴定提供了理论基础.     

小鼠胚胎干细胞体外定向分化为心肌细胞的实验研究

1981年，英国Evans等首先报道了由小鼠囊胚内细胞群经体外培养而成功获得胚胎性干细胞(embryonic stem cells，ES)。同年，美国Martine。建立了小鼠ES细胞系，由于ES细胞具有分化的全能性，在体外培养过程中加入合适的诱导分化剂可以诱导出所需要的特殊类型细胞和组织，从而引起了人们的极大关注。ES细胞向心肌细胞定向分化的研究将为临床心肌损害的治疗提供一条新的思路。     

干细胞与组织工程学在眼科中的应用前景

一、干细胞与组织工程学的基本概念 干细胞是指具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的一类未分化细胞,主要分为两大类:一类是胚胎组织来源,可以分化为3个胚层的各种细胞,如胚胎于细胞(embryonic