水飞蓟素对人骨肉瘤Saos-2细胞的抑制作用及相关机制

目的研究水飞蓟素对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法设置对照组及不同浓度水飞蓟素组,作用人骨肉瘤Saos-2细胞。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;CCK-8法测定细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2及cleaved caspase-3蛋白表达。结果水飞蓟素抑制Saos-2细胞增殖,呈时间及浓度依赖性;水飞蓟素诱导Saos-2细胞凋亡,呈浓度依赖性;水飞蓟素降低Saos-2细胞p-ERK1/2蛋白表达,增加Saos-2细胞cleaved caspase-3蛋白表达,呈浓度依赖性,而ERK1/2蛋白表达无明显变化。结论水飞蓟素能够抑制人骨肉瘤Saos-2细胞增殖及诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制ERK信号通路及上调caspase-3蛋白表达有关。     

柚皮素对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的影响

本研究探究柚皮素对肺炎链球菌(SP)诱导的肺泡上皮细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的影响。培养肺泡上皮细胞HPAEpiC,使用CCK-8检测柚皮素对HPAEpiC细胞的毒性。再次培养HPAEpiC细胞,分为对照组、模型组、阳性对照组、柚皮素组和抑制剂组,ELISA法检测炎症因子的表达水平;TUNEL检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡及MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果显示,柚皮素浓度≤60μmol/L时,对HPAEpiC细胞无毒性(P>0.05)。SP诱导可上调细胞上清液中炎症因子(TNF-α和IL-1β)的释放量、细胞凋亡率和细胞中凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-8、Cleaved caspase-9和Cleaved caspase-3)与MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白(p-JNK、p-p38、p-ERK、p-p65和p-IκBα)的表达水平。柚皮素干预后可改善SP对肺泡上皮细胞的影响,且添加MAPK/NF-κB信号通路抑制剂干预与柚皮素干预对SP诱导的肺泡上皮细胞的作用效果具有相似性。以上结果提示柚皮素可能通过抑制MA...     

大麻素受体2激动剂AM1241对TGF-β1诱导的HSC-T6增殖、活化及凋亡的影响

目的 探究大麻素受体2激动剂AM1241对转化生长因子（TGF）-β1诱导的大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增 殖、活化与凋亡的影响及其作用机制。方法 体外培养HSC-T6,采用CCK-8法检测AM1241对空白对照组（空白培 养基）、阴性对照组（未加药品）、TGF-β1 组（5 μg/L TGF-β1）及 20、40、80、160 μmol/L AM1241 组（5 μg/L TGF-β1+ 20、40、80、160 μmol/L AM1241）HSC-T6增殖的影响,计算半数抑制浓度（IC50）。采用流式细胞术检测阴性对照组、 TGF-β1组、30 μmol/L AM1241组、60 μmol/L AM1241组HSC-T6凋亡情况;采用Western blot检测阴性对照组、TGF- β1 组、27 μmol/L AM1241 组 α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、凋亡相关蛋白 Bax、 cleaved caspase-3、JNK及磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）蛋白表达水平。结果 与TGF-β1组比较,AM1241可 抑制HSC-T6增殖能力,且呈剂量依赖性（P＜0.05）。AM1241的IC50为27 μmol/L。30、60 μmol/L AM1241组HSC-T6 凋亡率较TGF-β1组明显上升,且60 μmol/L AM1241组高于30 μmol/L AM1241组（P＜0.05）。27 μmol/L AM1241组 α-SMA 和 bFGF 蛋白表达水平较 TGF-β1 组降低,Bax、cleaved caspase-3、p-JNK 蛋白表达水平较 TGF-β1 组升高 （P＜0.05）。结论 大麻素受体2激动剂AM1241能抑制TGF-β1诱导的HSC-T6的增殖与活化,并促进其凋亡,其作 用机制可能与JNK通路有关。     

ERK1/2 信号转导通路参与冠心病致心肌炎症的机制

摘要： 目的 探讨细胞外信号调节激酶 （ERK） 1/2 信号转导通路参与冠状动脉粥样硬化性心脏病 （冠心病） 致心肌炎症的机制。方法 45 例尸检病例分为 3 组： 冠心病死亡组、 冠心病组、 对照组 （每组 15 例）。 HE 染色和免疫组织化学染色白细胞共同抗原 （CD45） 并观察心肌组织炎症细胞浸润情况; 免疫组织化学染色和 Western blot 检测心肌组织的总 ERK 1/2 （t-ERK1/2） 和磷酸化 ERK 1/2 （p-ERK1/2） 的蛋白表达及分布; 荧光定量 RT-PCR 分析肿瘤坏死因子 （TNF） -α表达水平; 应用电泳迁移率转变分析 （EMSA） 评价核因子 （NF） -κB 的活性。结果 与冠心病组、 对照组比较, 冠心病死亡组心肌炎症细胞数、 心肌组织 p-ERK1/2 蛋白表达、 TNF-α mRNA 表达及 NF-κB 活性明显增高 （均 P＜0.05）。Western blot 检测冠心病死亡组 p-ERK1/2 和 TNF-α mRNA、 心肌炎细胞计数均呈正相关 （r 分别为 0.675、 0.893, 均 P＜0.01）。结论 ERK1/2 信号转导通路激活是冠心病致心肌炎症反应的重要机制, 抑制 ERK1/2 信号转导通路可能成为冠心病防治的潜在新靶点。     

NF-κB和MAPK信号通路参与金雀异黄酮诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究

目的探讨金雀异黄酮(genistein)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的可能机制。方法采用MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;集落形成法观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞集落形成能力的影响;金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3及NF-κB、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白的表达。结果 MTT结果显示,金雀异黄酮呈时间、浓度依赖性抑制乳腺癌MDAMB-231细胞增殖;集落形成实验结果显示,金雀异黄酮能明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的集落形成(P<0.05);Western blot结果显示,金雀异黄酮干预乳腺癌MDA-MB-231细胞36 h后,与对照组相比,Bcl-2、NF-κB、p-ERK蛋白表达水平明显下调(P<0.05),Bax、caspase-3、p-JNK蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论金雀异黄酮能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,且能诱导其凋亡,其机制可能与抑制NF-κB、ERK,激活JNK信号转导通路有关。     

5-氟尿嘧啶诱导Jurkat细胞凋亡及Fas、FasL的表达

目的探讨5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导Jurkat细胞株的凋亡和Fas、FasL的表达。方法不同浓度的5-FU分别处理Jurkat细胞12h和24h后,流式细胞仪检测细胞表达CD95、CD95L的百分率。结果与对照组相比,5-FU在10、20、40μg.mL-1浓度下明显促进Jurkat细胞表达Fas、FasL;且5-FU在24h比处理12h有更强的诱导效果。结论 5-FU可显著提高Jurkat细胞凋亡率,并增强Fas、FasL的表达率。     

五味子甲素对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的初步研究不同浓度的五味子甲素(Schisandra A,Sch A)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP^+)引起的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,1 mmol/L MPP^+染毒同时分别给予1、3和5μmol/L Sch A处理48 h,Muse^(TM)细胞分析仪检测凋亡细胞数的变化;hoechst33342染色后激光共聚焦显微镜进一步观察各组细胞形态的改变;Western-blot检测各组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,1 mmol/L MPP^+染毒48 h可引起SH-SY5Y细胞凋亡细胞数明显增多;1、3和5μmol/L Sch A干预可明显抑制1mmol/L MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,且随着Sch A浓度的升高,凋亡细胞数明显减少。Western-blot实验结果显示,MPP^+组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,而Sch A干预组cleaved caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 1 mmol/L MPP^+可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,而一定浓度的Sch A能有效抑制MPP^+引起的SH-SY5Y细胞凋亡,且该作用可能是通过抑制caspase-3蛋白活化实现的。     

五味子甲素对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的初步研究不同浓度的五味子甲素(Schisandra A,Sch A)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP~+)引起的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,1 mmol/L MPP~+染毒同时分别给予1、3和5μmol/L Sch A处理48 h,Muse~(TM)细胞分析仪检测凋亡细胞数的变化;hoechst33342染色后激光共聚焦显微镜进一步观察各组细胞形态的改变;Western-blot检测各组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,1 mmol/L MPP~+染毒48 h可引起SH-SY5Y细胞凋亡细胞数明显增多;1、3和5μmol/L Sch A干预可明显抑制1mmol/L MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,且随着Sch A浓度的升高,凋亡细胞数明显减少。Western-blot实验结果显示,MPP~+组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,而Sch A干预组cleaved caspase-3蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 1 mmol/L MPP~+可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,而一定浓度的Sch A能有效抑制MPP~+引起的SH-SY5Y细胞凋亡,且该作用可能是通过抑制caspase-3蛋白活化实现的。     

氢溴酸樟柳碱对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞凋亡及ERK1/2磷酸化水平的影响

目的:研究氢溴酸樟柳碱对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞凋亡及细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化(p-ERK1/2)水平的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(尼莫地平1.0 mg/kg)和氢溴酸樟柳碱高、中、低、极低剂量组(1.2、0.6、0.3、0.15 mg/kg),每组8只,采用线栓法建立大鼠急性脑缺血再灌注损伤模型。分别于脑缺血2 h和再灌注6 h时对各组大鼠尾iv给药1次,再灌注22 h后检测各组大鼠脑组织三磷酸腺苷(ATP)酶活性、Ca~(2+)含量、细胞凋亡情况、脑组织中p-ERK1/2蛋白表达和p-ERK1/2/总ERK1/2(t-ERK1/2)比例。结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑组织ATP酶活性明显降低、Ca~(2+)含量明显增加、凋亡细胞密度明显增加,以上差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠脑组织凋亡细胞密度均明显减小,阳性对照组和氢溴酸樟柳碱高、低剂量组大鼠脑组织Ca~(2+)含量均明显降低,氢溴酸樟柳碱高、低、极低剂量组大鼠脑组织中p-ERK1/2/t-ERK1/2比例均明显增加,以上差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);其余差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:氢溴酸樟柳碱能抑制急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织细胞凋亡,其作用机制可能与激活ERK1/2信号通路和调节ATP酶活性,进而降低脑组织Ca~(2+)含量有关。     

肉灵芝提取物调控长链非编码 RNA BRCA1相邻基因 2/双特异性磷酸酶 4/细胞外信号调节激酶通路对肝癌细胞 Hep3B增殖及凋亡的影响

目的探讨肉灵芝提取物是否可通过长链非编码 RNA BRCA1相邻基因 2(LncRNA NBR2)/双特异性磷酸酶 4/细胞外信号调节激酶( DUSP4/ERK)通路而影响肝癌 HepB细胞增殖及凋亡。方法体外培养肝癌 HepB细胞,分为 1 mg/L肉灵芝提取物组、 2 mg/L肉灵芝提取物组、 4 mg/L肉灵芝提取物组、 si-NC组、 si-LncRNA NBR2组、 pcDNA-NC组、 pcDNA-LncRNA NBR2组、肉灵芝提取物 +si-NC组、肉灵芝提取物 +si-LncRNA NBR2组;采用 MTT检测肝癌 HepB细胞增殖;流式细胞术检测肝癌 HepB细胞凋亡; RT-qPCR检测 LncRNA NBR2的表达量;蛋白质印迹法( Western blotting)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(Cleaved-caspase-3)、 DUSP4、p-ERK蛋白表达量。结果肉灵芝提取物可明显降低肝癌 HepB细胞增殖率与 PCNA、DUSP4、p-ERK蛋白水平( P<0.05),提高肝癌 HepB细胞凋亡率、 Cleaved-caspase-3蛋白水平及 Ln. cRNA NBR2的表达水平( P<0.05);转染 si-LncRNA NBR2后可明显提高肝癌 HepB细胞增殖率及 PCNA、DUSP4、p-ERK蛋白水平( P<0.05)降低凋亡率及 Cleaved-caspase-3蛋白水平( P<0.05)而转染 pcDNA-NBR2可明显减弱转染 si-LncRNA NBR2对肝癌 HepB细胞增,殖及凋亡的作用;与肉灵芝提取物 +si-NC组比较,,肉灵芝提取物 +si-LncRNA NBR2组肝癌 HepB细胞增殖率及 PCNA、DUSP4、p-ERK蛋白水平升高( P<0.05),凋亡率及 Cleaved-caspase-3蛋白水平降低( P<0.05)。结论肉灵芝提取物可通过上调 LncRNA NBR2的表达而抑制 DUSP4/ERK信号通路的活化从而抑制肝癌 HepB细胞增殖及诱导细胞凋亡。     

双黄连冻干粉通过抑制MEK-ERK信号通路诱导急性淋巴细胞白血病Nalm6细胞凋亡

目的 探讨双黄连（SHL）冻干粉诱导急性B 淋巴细胞白血病细胞（Nalm6）凋亡的机制。方法 采用0、 0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 g/L的SHL处理急性白血病细胞株（Nalm6、Jurkat、Molt4、KG1a）,CCK-8法检测细胞增殖 抑制率,并计算半数抑制浓度（IC50）。Nalm6细胞分为空白对照组（含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养基）和SHL 0.1、0.2、0.4 g/L组。流式细胞术检测各组细胞周期分布及凋亡情况,Hoechst 33342染色细胞后观察细胞凋亡形态学 改变。蛋白免疫印迹法检测各组 Nalm6 细胞 MEK-ERK-c-Myc 信号通路蛋白以及凋亡相关蛋白的表达情况。结 果 SHL对Nalm6的IC50最低,为（0.11±0.01）g/L。细胞周期分析显示,0.1~0.4 g/L SHL处理后,Nalm6的细胞周期分 布无明显变化,但随着处理浓度的升高,Nalm6 凋亡细胞数增多,总凋亡率升高,tBid、cleaved Caspase-9、cleaved Caspase-3、cleaved PARP 表达升高,MEK/ERK 通路相关蛋白 p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、c-Myc 表达下降（均 P＜ 0.05）。经凋亡抑制剂 Z-VAD-FMK 预处理后,SHL 对 Nalm6 细胞的促凋亡作用被抑制。结论 SHL 可通过抑制 MEK-ERK信号通路来诱导Nalm6细胞凋亡。     

The α-lipoic acid improves high-fat diet-induced cerebral damage through inhibition of oxidative stress and inflammatory reaction

This study is to clarify the protective role of α-lipoic acid in high-fat diet-induced cerebral damage mice. The mice were divided into 5 groups: normal control group, high-fat diet (HFD) group, low-dose α-lipoic acid group for prevention, high-dose α-lipoic acid group for prevention, and high-dose α-lipoic acid group for treatment. The groups’ weights and blood glucose changes were monitored. We used HE staining to observe morphological changes in the cerebral cortex. The expression levels of the oxidative stress proteins SOD2, catalase, and the inflammatory pathway proteins p-JNK, p-ERK were measured by western blot and immunochemistry. Compared with the control group, the quantity of cortical neurons in the HFD group was decreased, and the samples exhibited retrogression. However, the lipoic acid significantly protected and promoted the cortical neurons survival. Moreover, compared with the HFD group, the expression levels of SOD2 and catalase in the three α-lipoic acid obtained groups were significantly increased. However, the expression levels of the inflammatory pathway proteins p-JNK and p-ERK were significantly decreased. These results indicate that theα-lipoic acid greatly protects the cortical neurons, and inhibited the oxidative stress and inflammatory reactions in the high-fat diet mice.     

ERK和JNK通路在沙土鼠脑缺血预处理中的表达及作用

目的探讨ERK和JNK在沙土鼠脑缺血预处理中的表达及作用。方法采用沙土鼠前脑缺血再灌注损伤模型。随机分为假手术组(SH)、预处理对照组(IC)、预处理缺血组(IP)及脑缺血再灌注组(IR);各组根据再灌注15 m in、2 h、4h、6 h、1 d、3 d、5 d及7 d又分8个亚组。在预定时间点行开阔法行为学检查、TUNEL法海马CA1/3区凋亡细胞检测、免疫组织化学SP法测定p-ERK、p-JNK在海马区的变化。结果IP可减少沙土鼠探索活动及海马CA1区凋亡锥体细胞数量(vsIR,P<0.01)各组CA1区p-ERK无表达,IR组海马CA1区p-JNK表达较强,再灌后1d最为明显,IP可明显减弱CA1区p-JNK的表达(vsIR,P<0.01),明显增强CA3区p-ERK的表达(P<0.05,P<0.01)。结论脑缺血可导致ERK及JNK在海马各亚区的差异性表达。缺血预处理可能通过抑制CA1区JNK磷酸化、增强CA3区ERK活性而保护海马细胞。     

CD137-CD137L信号通路通过活化TNF受体相关因子6促进小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生#br#

目的　探讨CD137-CD137L信号通路是否通过活化TNF受体相关因子6（TRAF6）促进粥样硬化斑块内血管新生。方法　将小鼠内皮细胞（bEnd.3）和小鼠主动脉环分别分为对照组（培养基中加入10 μg/L TNF-α）、IgG同型对照组（培养基中加入10 μg/L TNF-α+5 mg/L IgG2b）和CD137刺激组（培养基中加入10 μg/L TNF-α+5 mg/L CD137抗体）。利用转染小干扰RNA（siRNA）技术抑制内皮细胞和主动脉环TRAF6基因表达,将内皮细胞和主动脉环分别分为对照siRNA组（转染对照siRNA）和TRAF6 siRNA组（转染TRAF6 siRNA）。分别采用Western blot和实时荧光定量PCR（qPCR）检测内皮细胞和主动脉环TRAF6、血管内皮生长因子（VEGF）、Smad1/5蛋白和mRNA的表达;采用Transwell迁移实验检测内皮细胞的迁移能力;内皮细胞管腔形成实验检测内皮细胞的管腔形成能力;主动脉环血管新生实验检测主动脉环新生微血管形成能力。结果　CD137刺激组内皮细胞和主动脉环TRAF6、VEGF蛋白和mRNA表达水平均高于对照组和IgG同型对照组（均P＜0.05）。与对照siRNA组比较,TRAF6 siRNA组内皮细胞和主动脉环TRAF6、Smad1/5蛋白和mRNA表达水平明显降低,内皮细胞迁移数量减少,内皮细胞小管长度和分支数量降低,主动脉环新生微血管数量减少（均P＜0.05）。结论　CD137-CD137L信号通路可能通过TRAF6促进小鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生。     

柚皮苷对破骨细胞分化和极化影响的初步探究

目的　探究柚皮苷对破骨细胞分化和极化功能的影响。方法　体外培养RAW264.7细胞,设置对照组（培养基不含柚皮苷）和实验组（培养基中柚皮苷剂量分别为2、20、200 μg/L）连续培养7 d,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色对比组间诱导分化结果,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）对比组间组织蛋白酶K（CK）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、整合素β3（integrin β3）和非受体酪氨酸激酶（c-src）mRNA表达水平,通过蛋白免疫印迹法对比组间CK、MMP-9、integrin β3、磷酸化产物p-src蛋白表达水平。结果　与对照组相比,各实验组TRAP染色阳性细胞数显著降低（P＜0.05）;与对照组相比,20 μg/L与200 μg/L组CK、MMP-9、integrin β3及c-src mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）;与对照组相比,20 μg/L与200 μg/L组CK、MMP-9、integrin β3及p-src蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论　柚皮苷对破骨细胞的分化和极化有一定的抑制作用,其作用机制可能与下调integrin β3、c-src及p-src表达有关。     

维生素B2在胃癌中的作用及机制研究

摘要：目的　探讨维生素B2（Vit B2）在胃癌中的表达及其生物学意义。方法　选择39例胃癌患者（胃癌组）和40例健康体检者（对照组）,检测2组血清Vit B2水平,分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。培养人胃癌MGC-803细胞,并取对数生长期细胞分别给予0、10、25、50、100 μmol/L Vit B2处理,检测细胞氧化磷酸化（葡萄糖、乳酸和琥珀酸脱氢酶）水平。实时荧光定量PCR（qPCR）检测己糖激酶Ⅱ（HKⅡ）、丙酮酸激酶M2（PKM2）和葡萄糖转运体1（GLUT1）mRNA水平。CCK-8法检测胃癌MGC-803细胞的增殖活性。流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡情况。结果　胃癌患者血清Vit B2水平低于对照组［（207.85±39.71）μg/L vs. （246.07±45.43）μg/L］,且血清Vit B2水平与胃癌患者的TNM分期和分化程度有关;与0 μmol/L Vit B2组相比,25、50、100 μmol/L Vit B2组细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成量均降低,琥珀酸脱氢酶含量均升高,HKⅡ、PKM2和GLUT1 mRNA水平均降低（均P＜0.05）;且50 μmol/L Vit B2组变化最明显。对照组、Vit B2组、阿帕替尼组和联合用药组胃癌细胞增殖活性依次降低,细胞凋亡率依次升高,组间多重比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论　胃癌患者血清Vit B2水平降低,Vit B2和阿帕替尼联合用药可提高其对胃癌的抗肿瘤效果。     

尿石素C对胶质母细胞瘤生物学行为的调控作用及机制

目的　探讨尿石素C（UC）对胶质母细胞瘤（GBM）U251和U87 MG细胞生物学行为的影响及调控机制。方法　将U251和U87 MG细胞分为0、20、40、80、120和160 μmol/L UC处理组,通过CCK-8法分别检测各组细胞24、48和72 h时增殖率。将细胞分为0、40、80和120 μmol/L UC处理组,通过细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,划痕愈合实验检测24 h和48 h时细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测24 h时细胞侵袭能力,流式细胞术检测24 h时细胞凋亡率及细胞周期,Western blot检测AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）和丝裂原活化蛋白激酶p38（p38 MAPK）蛋白表达水平和磷酸化水平。结果　与0 μmol/L组比较,U251细胞中不同浓度UC组于48 h开始增殖率均降低,而U87 MG细胞中40 μmol/L及以上浓度组于48 h时增殖率开始降低（P＜0.05）。与0 μmol/L组比较,40、80和120 μmol/L组U251和U87 MG细胞的克隆形成率、24 h和48 h时的细胞迁移能力和24 h时的细胞侵袭能力降低,且均呈浓度依赖性（P＜0.05）。与0 μmol/L组比较,120 μmol/L组U251和U87 MG细胞凋亡率均增加,40、80和120 μmol/L组U251和U87 MG细胞周期均阻滞在S期（P＜0.05）。与0 μmol/L组比较,40、80和120 μmol/L组U251和U87 MG细胞中p-AMPK和p-p38 MAPK水平均升高,80和120 μmol/L组U251细胞中p-ERK水平升高,但仅120 μmol/L组U87 MG细胞p-ERK水平升高（P＜0.05）。结论　一定浓度的UC可抑制GBM细胞增殖、迁移和侵袭,诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞,其机制可能与调控AMPK/ERK/p38 MAPK信号通路有关。     

EGF-ERK1/2-IL-8通路在胆道闭锁患儿Kasai术后胆管炎中的作用机制研究

摘要：目的　明确白细胞介素8（IL-8）在胆道闭锁（BA）患儿中的表达水平及其与肝门空肠吻合术（Kasai术）后胆管炎间的关系,探索调控IL-8的上游信号通路。方法　（1）纳入33例BA患儿（BA组,其中胆管炎组18例,无胆管炎组15例）,6例胆道扩张患儿（胆道扩张组）以及36例体检健康婴幼儿（正常对照组）。获取全部BA患儿和健康婴幼儿血清样本,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清IL-8和表皮生长因子（EGF）表达水平。取6例BA和6例胆道扩张患儿肝组织标本,免疫组化染色检测磷酸化胞外信号调节激酶1/2（p-ERK1/2）活化情况。（2）体外培养人正常肝细胞L-02,给予磷酸盐缓冲液（PBS）和25、50、100 μg/L EGF干预24 h,定量聚合酶链反应（qPCR）检测IL-8水平。细胞系HIBEpic、L-02、LX-2分别给予PBS和100 μg/L EGF干预24 h,qPCR检测IL-8水平。L-02细胞经100 μg/L EGF和（或）5 mmol/L的ERK通路抑制剂KO-947干预后,检测ERK1/2活化情况和IL-8表达水平。结果　（1）BA组血清IL-8水平高于正常对照组,胆管炎组术前血清IL-8水平高于无胆管炎组（P＜0.01）。BA组血清EGF与IL-8水平呈正相关（rs=0.422,P＜0.01）。免疫组化染色显示,BA组肝组织中大量表达p-ERK1/2。（2）PBS和25、50、100 μg/L EGF干预后,L-02细胞IL-8表达呈浓度依赖性增高。3种细胞经100 μg/L EGF处理后,HIBEpic、LX-2细胞IL-8表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,L-02细胞IL-8表达升高（P＜0.01）。100 μg/L的EGF还可诱导L-02细胞p-ERK1/2大量表达,添加KO-947干预可逆转上述改变。结论　BA患儿术前血清IL-8表达显著升高,与Kasai术后胆管炎关系密切,EGF可通过ERK1/2信号通路促进肝细胞IL-8表达升高。     

氯沙坦对自发性高血压大鼠细胞外信号调节激酶活性和B型利钠肽表达的影响

目的　探讨氯沙坦治疗高血压心肌肥厚的作用机制。方法　选择同周龄WistarKyoto(WKY)大鼠作正常对照,将2 1只14周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)随机分成3组:模型组、肼屈嗪组(10mg·kg- 1·d- 1)和氯沙坦组(10mg·kg- 1·d- 1)。用West ern印迹方法检测大鼠心肌总细胞外信号调节激酶(t ERK)、磷酸化ERK(p ERK)及有丝分裂素激活蛋白激酶磷酸酶 1(MKP 1)水平;用RT PCR法半定量测定大鼠心肌中B型利钠肽(BNP)mRNA的含量;酶联免疫吸附法检测大鼠血浆BNP水平。结果喂药10周后,氯沙坦组和肼屈嗪组血压相似,均显著低于模型组(n =7,P <0 .0 1)。氯沙坦组心肌肥厚指数显著低于肼屈嗪组和模型组(n =7,P <0 .0 1) ,与WKY组无差异(n =7,P >0 .0 5 ) ;肼屈嗪组和模型组心肌肥厚指数无差异(n =7,P >0 .0 5 )。4组大鼠t ERK水平无显著性差异(n =7,P >0 .0 5 ) ;氯沙坦组心肌p ERK ,p ERK/t ERK及MKP 1水平均显著低于SHR肼屈嗪组和SHR模型组(n =7,P <0 .0 5 ) ,与WKY组无差异(n =7,P >0 .0 5 )。肼屈嗪组和模型组心肌p ERK ,p ERK/t ERK及MKP 1水平无差异(n =7,P >0 .0 5 )。氯沙坦组大鼠心肌BNPmRNA和血浆BNP水平显著低于SHR肼屈嗪组和模型组(n =7,P <0 .0 5 ) ,与WKY组无差异(n =7,P >0 .0 5 ) ;肼屈嗪组和SHR模型组大鼠