柚皮苷对破骨细胞分化的影响

目的: 探讨骨碎补单体成分柚皮苷对小鼠单核细胞RAW264.7诱导分化为破骨细胞的影响. 方法: 通过100 μg·L^-1核因子κB受体活化因子配基(RANKL)诱导RAW264.7细胞株分化为成熟破骨细胞,经TRAP特异性染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定.采用MTT法筛选抑制破骨细胞最强的浓度.在诱导过程中,采用筛选后含柚皮苷的培养基,诱导5 d后,通过TRAP阳性细胞计数和骨吸收面积分析来观察柚皮苷对破骨细胞的形成和骨吸收功能情况;流式细胞术检测柚皮苷对破骨细胞增殖的影响,RT-PCR检测柚皮苷对破骨细胞分化过程中核因子κB 受体活化因子(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)、活化T细胞核因子1(NFATc1)与C-fos mRNA表达的影响. 结果: 采用100 μg·L^-1的RANKL可成功诱导成熟的、有功能的破骨细胞.柚皮苷可以抑制破骨细胞的分化和骨吸收功能;抑制破骨细胞的增殖活性;柚皮苷可明显下调破骨细胞分化过程中的RANK,TRAP,MMP-9,NFATc1 mRNA的表达,上调C-fos mRNA表达. 结论: 柚皮苷可抑制破骨细胞分化、增殖和骨吸收功能,其机制可能是通过抑制破骨细胞分化过程中特异性基因表达实现的.     

低渗联合冻干技术制备脱细胞神经支架及其力学性能分析

目的研究低渗联合冻干技术改良制备的脱细胞神经支架材料的组织学和生物力学特性。方法采用低渗联合冻干技术对传统脱细胞神经支架材料进行改良,脱细胞完成后通过HE染色和扫描电镜观察各组神经组织的组织学结构;利用Mimics软件测定脱细胞神经支架的孔隙率及空隙直径;并采用Endura TEC ELF3200力学仪器测试各组神经的生物力学特性。结果改良组所获得的脱细胞神经的脱细胞效果与传统脱细胞方法组相似,但组织结构更为疏松;传统和改良脱细胞组平均孔隙率分别为34.5%、49.3%,空隙直径分别为11.96、17.61μm;生物力学测试结果表明各组神经的生物力学特性(极限载荷、极限应力、极限应变、断裂功耗等)经检验无统计学差异(P>0.05)。结论低渗联合冻干技术制备的脱细胞神经可作为一种更有利于细胞复合的神经支架材料。     

柚皮苷联合运动对去势大鼠骨量和骨强度的影响

目的观察柚皮苷（NG）联合中强度跑台运动对去势大鼠骨质疏松模型的治疗效果。方法2月龄雌性SD大鼠80只,用随机数字法分为假手术组（SHAM）、去势组（OVX）、去势＋不同浓度（40、100、200 mg/kg）柚皮苷组（OVX＋NG）、去势＋跑台＋柚皮苷组（OVX＋EX＋NG）、去势＋跑台组（OVX＋EX）、雌激素组（OVX＋E2）,每组10只。大鼠切除卵巢2个月后开始给药,给药60 d后观察各组大鼠股骨骨密度（BMD）,Micro-CT参数,血清生化指标及及股骨力学性能与组织学改变。结果柚皮苷与跑台运动干预60 d后,OVX＋EX＋NG组大鼠股骨颈力学强度、股骨BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th等均高于单纯去势组（P〈0.05）,OVX＋EX＋NG组治疗效果与柚皮苷浓度呈正相关,以200 mg/kg柚皮苷效果最佳;200 mg/kg柚皮苷联合中强度跑台运动可进一步提高治疗效果。OVX＋NG组大鼠血清骨钙素升高,Ⅰ型胶原C端肽（CTX-1）降低;OVX＋EX组大鼠骨钙素与CTX-1均降低;OVX＋EX＋NG组大鼠骨钙素水平与柚皮苷组（200 mg/kg）无差异,但高于OVX＋EX。OVX＋EX＋NG组CTX-1水平低于单纯柚皮苷组和单纯跑台组（P〈0.05）。结论柚皮苷联合中强度跑台运动可提高去势大鼠股骨BMD,增加骨小梁数目,改善骨代谢指标,提高股骨力学性能。     

体外培养成骨细胞对自体骨髓间充质干细胞定向成骨分化的影响

目的观察体外培养成骨细胞对自体骨髓间充质干细胞（BMSC）增殖和定向成骨分化的影响．探讨此诱导方法作为骨组织工程种子细胞来源方法的可行性。方法应用密度梯度离心联合贴壁筛选法从兔股骨骨髓中分离、纯化BMSC．取第3代BMSC常规培养设为空白对照组,利用含有钙化诱导剂的DMEM培养基诱导培养第3代BMSC．设为钙化对照组。取第3代成骨细胞,1：1的比例和第3代BMSC共同培养．设为实验组。碱性磷酸酶（ALP）染色及钙结节染色鉴定诱导结果．ALP定量测定观察共同培养中成骨细胞对BMSC诱导影响。总蛋白定量测定观测诱导成骨细胞的分化活性．结果成骨细胞与BMSC共同培养24h后．在倒置光学显微镜下可见两种细胞形态混杂生长．共同培养5d后．细胞形态趋于一致,多呈长梭形。诱导培养5d后．实验组与钙化对照组ALP染色均为阳性。诱导培养21d．两组钙结节茜素红染色均呈阳性．而BMSC空白对照组并未见钙结节形成。ALP定量测定,实验组于3、5、7、9d均低于钙化对照组,且差异均具有统计学意义。实验组与空白对照组ALP定量测定,在4个时间段差异也均具有统计学意义。总蛋白定量测定显示实验组于第3天．A值高于钙化对照组,差异具有显著统计学意义（P〈0．01）,而第5天、第7天、第9天时却低于钙化对照组．差异具有显著统计学意义（P〈0．01）。实验组于各时间段均高于空白对照组．差异亦具有统计学意义。结论成骨细胞与BMSC共同培养应用于BMSC的成骨诱导．从诱导效率和诱导后成骨细胞的分化活性方面．都能证实该共同培养方法的有效性。但与钙化诱导方法相比．共同培养的诱导效果差于钙化诱导方法。     

循环牵张应力对人退变纤维环细胞增殖的影响

目的 探讨不同水平循环牵张应力对人退变椎间盘细胞增殖的影响.方法 取1例29岁手术切除的腰椎间盘突出患者的椎间盘,通过病理学方法评价其退变程度,酶消化法分离椎间盘纤维环细胞.选取P3代细胞,利用ElectroForce 3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应舱系统,以3h为固定时间点对其进行不同水平的频率...     

埃索美拉唑镁三水合物生产新工艺

目的 探讨合成埃索美拉唑镁三水合物的新工艺.方法 以2-巯基-5-甲氧基苯并咪唑与2-氯甲基-3,5-二甲基-4-甲氧基吡啶盐酸盐为起始物料,经缩合、sharpless不对称氧化、成盐、离子交换及转晶制得埃索美拉唑镁三水合物.结果 采用该工艺得到46.2 kg符合药用晶型的埃索美拉唑镁三水合物白色固体,摩尔总收率64.7％,色谱纯度为99.9％,ee值为100％.结论 本工艺操作简便,收率较高,产品质量符合药用要求,能满足原料药工业化大生产需要.     

先天性髌骨外脱位1例

正患者,男,19岁,因右膝关节无痛性跛行15年于2014年2月18日来我院就诊。15年前患者无明显诱因出现快速行走后跛行,跑动时易跌跤,不能跑步,就诊于当地医院,考虑为先天性髌骨外脱位(图1a),于当地医院在关节镜下行外侧关节囊松解、内侧关节囊紧缩术治疗,术后症状有所缓解。为求进一步治疗,1年后在当地医院第2次手术行半腱肌转位成形术,术后6个月膝关节伸直位髌骨位置恢复     

骨性关节炎软骨下骨成骨细胞的分离培养与增殖活性的观察

目的 探讨骨性关节炎软骨下骨成骨细胞的分离、培养、鉴定方法及生长特性.方法 复制改良Hulth兔膝关节不稳模型;采用Ⅰ型胶原酶消化联合组织块贴附法获得软骨下骨成骨细胞;应用倒置显微镜、Ⅰ型胶原免疫化学染色以及瑞氏-姬姆萨染色来进行形态学观察和生物学鉴定;利用软骨细胞与滑膜细胞分别于软骨下骨成骨细胞共培养,应用四甲基偶氮唑蓝检测软骨下骨成骨细胞的增殖活性;检测细胞的Ⅰ型胶原在基因水平的表达.结果 Ⅰ型胶原酶消化后在组织块贴附第11天有细胞开始从组织块周围爬出;Ⅰ型胶原酶免疫化学染色后可见胞浆内出现黄褐色颗粒,为阳性反应.瑞氏-姬姆萨染色显示细胞染成蓝紫色,胞核饱满,核仁清晰;四甲基偶氮唑蓝检测显示在3d时,滑膜细胞和软骨细胞对于软骨下骨成骨细胞的增殖有着明显的促进作用,在第6、10、14天时这种促进作用变得不明显,而软骨下骨成骨细胞的增殖活性超过2个共培养组.Ⅰ型胶原表达水平检测显示在第10天时,软骨细胞对于软骨下骨成骨细胞分泌Ⅰ型胶原的促进作用最强,而滑膜细胞对其的促进作用不明显.结论 酶消化联合组织块贴附法可获得理想的软骨下骨成骨细胞;利用Ⅰ型胶原酶免疫化学染色鉴别软骨下骨成骨细胞方法简便易行;利用软骨下骨成骨细胞与软骨细胞和滑膜细胞共培养的体系适用于骨性关节炎(0A)微环境的研究,且该体系可以模拟类OA软骨下骨成骨细胞、滑膜细胞和软骨细胞相互影响作用的进程.     

旋后外旋Ⅳ度踝关节骨折保守治疗的疗效分析

目的:探讨保守治疗旋后外旋Ⅳ度踝关节骨折的疗效.方法:对40例旋后外旋Ⅳ度踝关节骨折的患者进行了保守治疗.其中男性19例,女性21例;年龄16～78岁,平均54岁;左踝15例,右踝25例,均为单侧.所有患者均闭合复位治疗,复位后内翻位石膏夹板外固定7～9周,平均8周,而后更换中立位夹板固定3周,定期复查,随访内容包括功能评分及影像学评估.结果:37例患者治疗后获得随访,平均随访时间12.7个月(10～15个月).按照Olerud-Molander踝关节骨折评分标准评分,平均71分(40～100),其中优17例,良9例,可6例,差3例,优良率为70.3％,2例保守治疗失败行切开复位内固定.影像学测量结果,踝关节内侧宽度平均(4.7±1.)mm,下胫腓联合间隙宽度(5.6±1.3)mm,下胫腓联合重叠宽度(3.0±2.8)mm,正位片胫距关节间隙宽度(3.7±0.6) mm,侧位片胫距关节间隙宽度(3.7±0.7)mm.结论:经保守治疗后,大部分旋后外旋Ⅳ度踝关节骨折愈合后功能满意;影像学测量结果提示距骨存在一定程度的外侧移位,长期疗效需进一步观察.     

中重度过敏性鼻炎345例临床疗效分析

目的:比较两组过敏性鼻炎治疗方法的差异和临床症状改善。方法:通过临床症状和皮肤点刺试验(Skin Prick Test,SPT)筛选过敏性鼻炎确诊患者345名,分别采用抗组胺药物和鼻喷激素+抗组胺药物治疗2周复诊,比较临床症状改善程度。结果::鼻喷激素+抗组胺药组患者鼻堵的症状改善更为明显,与单纯使用抗组胺组相比,差异具有统计学意义(P=0.032);而喷嚏、流涕和鼻痒症状两组间差异无统计学意义。结论:对于中重度过敏性鼻炎患者的治疗策略以鼻喷激素+抗组胺药为主,疗效优于单纯使用抗组胺药物。