三色流式细胞术对儿童急性白血病免疫表型的分析

目的 探讨三色荧光标记流式细胞术CD45辅助设门检测儿童急性白血病免疫表型的临床应用及意义.方法 采用流式细胞仪和几组三色荧光标记抗体检测34例FAB分型为ALL与AML的儿童骨髓或外周血免疫表型.结果 25例ALL儿童中,B型淋巴细胞白血病14例,T型淋巴细胞白血病6例,双标记5例,在T-ALL中,淋系抗原阳性率表达顺序为CD7＞CD3＞CD5,在B-ALL中,淋系抗原阳性率表达顺序为CD19＞CD10＞CD22＞CD20,在T-ALL、B-ALL及双标记中还可同时表达髓系抗原（CD13、CD14、CD15、CD33）.9例AML儿童中,同时或分别表达髓系标志抗原CD15、CD33、CD13、CD14,其阳性表达率为89%、89%、79%、11%,9例中有3例还不同程度表达淋系抗原CD3、CD7、CD19.结论 三色流式细胞术,可准确将白血病分为淋系与髓系白血病,并能将淋系白血病分为B型和T型及双标记,同时能反映髓系抗原阳性的ALL（My＋ALL）与淋系抗原阳性的AML（AL＋AML）,对指导临床治疗有重要价值.     

急性淋巴细胞白血病免疫表型的特点及抗体表达水平分析

目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)免疫表型特征、各种抗体的表达水平与诊断价值,为微小残留病(MRD)检测提供依据。方法采用CD45设门三色流式细胞术检测白血病患者骨髓标本,根据抗体积分系统进行分型。结果三染色标记法检测24例B细胞系列急性淋巴细胞白血病(B-ALL)高水平表达(>50%SSC/CD45原始细胞门细胞)抗原依次为CD19、CD10、cyCD79a、CD34、HLA-DR、CD13、CD33;7例T细胞系列急性淋巴细胞白血病(T-ALL)高水平表达抗原分别为CD7和cyCD3;CD10、CD34、HLA-DR等非系列相关性早期分化抗原在B-ALL均有较高的表达频率,呈高水平表达;在T-ALL表达频率很低,2例CD10阳性,呈高水平表达,CD34无阳性表达;31例ALL中,除均表达淋系抗原外,同时有58.06%(18/31例)伴髓系抗原(CD13,CD33)的表达,B-ALL为72.50%,T-ALL跨系表达为42.86%。结论T-ALL、B-ALL具有不同的免疫表型特征;各种抗体的表达水平为微小残留病检测提供了依据。     

儿童急性淋巴细胞白血病128例免疫分型

目的:分析儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)免疫表型特点,探讨不同表型ALL缓解率及预后的差别.方法:采用流式细胞仪CD45/侧散射(SSC)双参数散点图设门方法对128例形态学分型为ALL的患儿幼稚细胞表面分化抗原进行分析,并与细胞组织化学(FAB分型)进行比较.对所有ALL患儿进行化疗,比较完全缓解率的差异.结果:128例患儿形态学与免疫学检查符合率为81.25%,有16例形态学误诊被免疫分型纠正.128例ALL患儿中104例表达淋系抗原,纯B系抗原表达52例,纯T系抗原表达22例.淋系中可合并髓系抗原表达,30例伴有髓系抗原表达,主要表达CD33、CD13,4例ALL-L2为纯髓系表达,8例诊断为急性髓细胞白血病伴淋系表达,8例为未分化型,4例急性混合型白血病同时表达2种以上淋系和髓系抗原标志,其中在B-ALL中CD19敏感性最高,在T-ALL中CD7敏感性最高,HLA-DR、CD34等非系列相关抗原在儿童ALL中均有较高表达.伴髓系表达的ALL完全缓解率低于无髓系表达者(X2=17.26,P=0.028).结论:免疫分型能助诊一些特殊类型的白血病,是对白血病细胞形态学诊断的重要补充.儿童ALL采用形态学结合免疫学分型可获得T、B细胞来源、肿瘤细胞分化阶段和异常抗原表达等参数,有助于临床预后的判断.     

流式细胞术在急性白血病细胞免疫表型分析中的价值

目的研究应用流式细胞技术对急性白血病进行免疫表型分析,为临床治疗和预后提供有价值的信息。方法运用双色免疫荧光抗体标记患者骨髓或外周血单个核细胞,用流式细胞仪分析白血病细胞膜免疫表型。结果分析75例急性白血病患者中,急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)患者12例,占16.0%;急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者24例,占32.0%;急性髓细胞白血病(AML)患者37例,占49.3%。混合型急性HALL/B有2例,占2.6%。ALL患者除均表达淋系抗原外,同时伴有髓系统抗原的表达;AML患者除均表达髓系抗原外,少部分同时伴有淋系抗原的表达。AML细胞表面抗原表达百分率成人明显高于儿童(73%/27%)。结论流式细胞技术能准确地分析并鉴别出急性白血病各型别,是白血病诊断分型的重要手段之一。     

儿童急性淋巴细胞白血病的免疫表型分析

目的 分析儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的免疫表型特点.方法用一组相关单克隆抗体和流式细胞技术间接免疫荧光法对85例儿童ALL进行免疫分型.结果 T系ALL占28.2%,B系ALL占61 2%,T/B急性混合细胞白血病(AMLL)8.2%,其中髓系抗原表达率21.2%.各组L1、L2比率、染色体异常及治疗完全缓解(CR)率均无显著性差异(P＞0.05);T-ALL中CD3平均阳性率较CD2、CD7低(P＜0.01,P＜0.05),B-ALL中CD22阳性率明显低于CD10、CD19(P＜0.01).结论 ALL免疫分型与FAB分型、染色体核型变化无相关性系列特异性单抗CD3、CD22在诊断T-ALL、B-ALL中起决定作用;ALL髓系抗原阳性与治疗CR率无关.     

急性淋巴细胞性白血病跨系表达方式研究

目的 利用三色流式细胞术对急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫表型跨系表达进行研究。方法 采用CD45／SSC双参数散点图设门方法对135例ALL（111例B-ALL，24例T-ALL）患者幼稚细胞表面及胞质内分化抗原进行分析。结果 在ALL中，髓系抗原（M）表达64％，T和B亚型中髓系抗原表达差异无显著性意义（P〉0．05），其中CD13表达最为常见（40％），其次是CD33（37％）、CD11b（20％）和CD15（16％），CD13和CD33在CD34^＋病例中的表达均高于CD34^-病例。B-ALL中，T系抗原CD4、CD2和CD7分别在19例、2例和2例中表达，CD4^＋和CD7^＋病例通常共表达CD13和（或）CD33；T-ALL中2例CD19表达者均伴CD13／CD33表达。结论 ALL伴髓系表达的频率较高（B^＋M^＋，T^＋M^＋），偶尔出现B系，T系和髓系共表达的表型（B^＋T^＋M^＋），B系T系共表达但不伴髓系表达的表型（B^＋T^＋M^-）极少，跨系表达多存在各未成熟的阶段，髓系抗原表达与干细胞表面标志CD34有一定的联系。     

成人急性白血病细胞三色流式细胞术的免疫分型

目的:探讨成人急性白血病(AL)细胞三色流式细胞术免疫分型的特点.方法:采用CD45/SSC双参数散点图设门方法、三色流式细胞术对197例急性白血病细胞进行免疫表型分析.结果:急性淋系白血病细胞均表达淋系抗原,46.7%和11.1%的成人ALL细胞表达CD13和CD33;急性髓系白血病细胞均表达髓系抗原,M3中只有1例表达CD34,HLA-DR均无表达;同时AML中有12例表达淋系抗原CD7,21例表达CD10;197例急性白血病中有11例(占5.6%)为杂舍型急性白血病(HAL),其中有6例B/M型.结论:CD45/SSC设门方法能排除骨髓中正常细胞的干扰,免疫表型的检测和研究对急性白血病的分型和明确诊断有帮助.     

广西地区儿童急性白血病流式细胞术免疫分型研究

目的:研究流式细胞术(FCM)在广西地区儿童急性白血病(AL)的免疫分型诊断价值,了解儿童白血病免疫亚型的分布情况.方法:采用CD45侧散射(SSC)双参数设门方法进行FCM白血病细胞表面分化抗原分析. 结果:120例广西地区儿童急性白血病分型可分为3型:急性淋巴细胞白血病(ALL)占65.83%;急性髓细胞白血病(AML)占27.5%;混合型白血病占6.67%.79例ALL中,B淋巴细胞白血病(B-ALL)占91.14%,T淋巴细胞性白血病(T-ALL)占7.59%.伴髓系抗原表达的ALL占 25.32 %,主要表达CD13(22.78%).髓过氧化物酶(MPO)在AML特异性表达.结论:应用FCM能对广西地区儿童急性白血病进行正确分型诊断.     

急性淋巴细胞白血病髓系分化抗原的异常表达

目的:探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)髓系分化抗原(MyAg)的表达情况.方法:选择480例ALL患者,其中T细胞-ALL(T-ALL)92例,B细胞-ALL(B-ALL)388例,经血常规和骨髓细胞学检查确诊.抽取肝素抗凝骨髓,加入荧光标记的单克隆抗体,采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术免疫表型分析.结果:在480例ALL患者中,39.17%伴有MyAg的表达,最常见为CD13(25.42%),其在B-ALL各亚型中表达依次为B-前体ALL(40.00%)、前B-ALL(29.93%)、普通B-ALL(22.22%)、B-ALL(20.98%);CD13在T-ALL的阳性表达率为20.65%.CD33(16.04%)在B-ALL阳性表达率(17.27%)与T-ALL(10.87%)比较,差异无统计学意义.CD117也表达于ALL(4.17%),尤其是T-ALL(14.13%),而B-ALL阳性表达率为1.80%(P<0.01).结论:ALL最常表达的MyAg为CD13和CD33,CD117表达于T-ALL.     

急性白血病细胞膜和细胞质抗原的流式细胞术检测

目的应用流式细胞仪检测急性白血病（AL）患者细胞膜及细胞质抗原,探讨其在白血病免疫分型中的作用.方法采用三色直接免疫荧光法检测290例AL患者16种膜抗原及3种细胞质抗原表达.结果134例急性髓细胞白血病（AML）中以CD13（89.6%）、CD33（77.6%）表达为主,髓过氧化物酶（MPO）表达也较高,占99.25%;125例B系列急性淋巴细胞白血病（B-ALL）主要表达CyCD79a（97.6%）、CD19（84%）、CD22（84%）、CD10（68.8%）;31例T系列急性淋巴细胞白血病（T-ALL）以CyCD3（96.8%）、CD2（71%）、CD3（80.6%）、CD5（87.1%）、CD7（83.9%）为主.CD34在AML组表达47%,急性淋巴细胞白血病（ALL）组62.8%;ALL组髓系抗原表达以CD13、CD33多见;AML组淋系抗原表达以CD7多见.结论利用流式细胞仪进行细胞膜、细胞质抗原检测对AL的诊断分型有重要价值.     

92例B系急性淋巴细胞白血病多参数流式细胞术免疫表型分析

目的 探讨B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者的免疫表型特点及其临床意义.方法 采用高分辨多参数流式细胞术CD45/SSC散点图设门方法,对92例初发性B-ALL患者的骨髓幼稚细胞表面及胞内分化抗原进行分析.结果 B-ALL患者的免疫表型具有明显特征:HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、cCD79a、TdT最为常见;髓系抗原CD11b、CD13、CD15和CD33亦可见明显表达,表达率分别为16.7%、42.4%、17.4%和37.4%.不同亚型比较,前前B-ALL中HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、cCD79a的表达率均在90%以上,而不成熟B-ALL不表达CD10,CD11b、CD13、CD33主要在前前B-ALL上表达,CD15则在前B-ALL中多见.儿童B-ALL的免疫表型与成人B-ALL之间没有显著性差异.结论 B-ALL的异常骨髓细胞具有明显的本系列特征、原始细胞标记和跨系表达.且不同免疫亚型的B-ALL具有一定的表型差异.     

不同抗体和透膜剂组合对胞浆抗原检测的影响

目的探讨不同抗体和透膜剂组合对流式细胞术中胞浆抗原检测的影响.方法通过单色直接标记法和流式细胞术,用不同抗体和透膜剂组合进行胞浆内抗原的检测.结果急性B淋巴细胞性白血病(B-ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)标本使用抗CD3抗体(Becton Dickinson公司)进行胞浆内抗原检测时,出现假阳性的结果;B-ALL、急性T细胞性白血病(T-ALL)标本使用抗髓过氧化酶(MPO)抗体(Immunotech公司)和8E透膜剂组合可出现MPO假阳性的现象,而使用其他3种透膜剂时,MPO检测都为阴性;B-ALL和正常人标本使用抗CD22抗体(Immunotech公司)和FACS Permeabilization solution搭配进行胞浆抗原检测时,CD22抗原检测为假阴性;AML和T-ALL标本使用抗CD22抗体(Immunotech公司)和8E组合检测时,胞浆抗原CD22可出现假阳性.结论流式细胞术不同抗体和透膜剂组合可产生不同的结果,应当谨慎选择,以便正确进行白血病的免疫分型和微小残留病的检测.     

急性B淋巴细胞白血病CD304表达的临床意义

目的：探讨急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)CD304表达的临床意义及其应用价值。方法：采用流式细胞术(FCM)检测初诊的32例B-ALL细胞CD304和相关白血病抗原表达、5例急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)和10例良性血液病对照者细胞CD304的表达;21份初诊时融合基因和CD304共阳性的治疗后B-ALL样本,FCM和PCR检测微小残留病(MRD)水平,比较两者符合率。结果：BCR-ABL1阳性病人CD304表达阳性率高于E2A-PBX1和融合基因阴性病人(P<0.05)。5例T-ALL细胞和10例对照者B细胞上CD304均阴性表达,初诊43.75%(14/32)B-ALL病人CD304阳性表达：10例BCR-ABL阳性(12例)、1例TEL-AML1阳性和3例融合基因阴性(14例)病人CD304阳性表达,而3例E2A-PBX1阳性和2例MLL/AF4阳性病人CD304阴性表达。CD304阳性病人B-ALL细胞CD66c表达频率升高(P<0.01)。21例MRD中,PCR阳性11份,FCM阳性10份,共阳性10份,与PCR结果比较,FCM阳性符合率为91%,总符合率...     

102例儿童急性淋巴细胞性白血病免疫分型、细胞遗传学改变及临床特征分析

目的对102例儿童急性淋巴细胞性白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）的免疫表型,细胞遗传学改变及其临床特征进行总结和分析。方法对102例初治急性淋巴细胞性白血病患儿进行FBA分型并采用流式细胞术检测白血病细胞的免疫表型,G显带技术对68例患儿进行染色体核型分析。结果 102例患儿中15.7%表达T淋巴细胞表型（T-ALL）,84.3%表达B淋巴细胞表型（B-ALL）。35.3%患儿存在髓系抗原阳性（My＋-ALL）,其中以CD13阳性率最高,达27.8%。88接受核型检查的患儿发现核型异常41例（51.3%）。T-ALL组患儿与B-ALL组患儿相比显示出更高的白细胞总数（〉50×109/L）和髓外浸润表现。结论免疫分型是对细胞形态学诊断的有力补充,能够更加全面了解白血病细胞的起源和分化阶段,帮助对患儿进行临床危险的评估,选择适宜的治疗方案并有效评估预后提供依据。     

Flow cytometric detection of minimal residual disease in B-lineage acute lymphoblastic leukemia by using “MRD lite” panel

BackgroundNormal B lymphoid precursors that express CD19, CD10, and/or CD34 are highly sensitive to corticosteroids and after two weeks of remission-induction therapy, they form less than 0.01% of the bone marrow population. More than 0.01% of such cells indicate minimal residual disease (MRD). MRD “lite” panel uses only three antibodies, namely CD19, CD10, and CD34 for MRD detection in cases of B-lineage acute lymphoblastic leukemia (B-ALL) expressing CD19, CD10, and/or CD34 by flow cytometry.MethodsFifteen cases of B-ALL were studied for MRD at Day 19 of remission-induction therapy by employing a simplified MRD detection protocol using a 3-color fluorochrome conjugated antibody panel (CD19, CD10, and CD34) on bone marrow aspirate samples.ResultsAll cases at diagnosis expressed CD19, CD10, and CD34. Of fifteen patients, five (33.33%) were MRD negative with less than 0.01% of mononuclear cells and remaining ten cases (66.66%) were MRD positive, with the level of 0.01% to less than 0.1% cells.ConclusionThe MRD assay used in this study is a simplified method for detecting MRD at Day 19 of remission-induction therapy for B-lineage ALL. This MRD assay is an effective and useful methodology in cases of B-ALL expressing CD19, CD10, and/or CD34 by flow cytometry.     

急性淋巴细胞白血病免疫表型的研究及其临床意义

目的 研究急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)免疫表型的特点及其临床意义.方法 应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测33例初诊ALL患者的免疫表型.结果 ①33例ALL分为B-ALL(75.76％),T-ALL(12.12％)和T/B-ALL(12.12％).②B-ALL中CD19表达率最高,占100％;T-ALL中CD7与cCD3表达率均为100％;CD20在成人及儿童组B-ALL表达率分别为23.53％、62.5％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);CD22在成人及儿童组B-ALL表达率分别为29.41％、62.5％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).③33例ALL中髓系抗原表达阳性率为60.61％,髓系抗原阳性与阴性患者完全缓解率之间的比较无统计学差异(P＞0.05).④33例ALL中CD34阳性表达率为66.67％,CD34阳性与阴性患者CR率之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CD19、cCD79a分别是B-ALL中高敏感性抗原和高特异性抗原,CD7、cCD3分别是T-ALL中高敏感性抗原和高特异性抗原;儿童组CD20和CD22表达率明显高于成人组;髓系抗原和CD34的表达与CR率无相关性.     

47例急性淋巴细胞白血病免疫表型分析

目的探讨免疫分型在急性淋巴细胞白血病（ALL）诊断及预后判断中的价值。方法采用流式细胞术对47例急性淋巴细胞白血病患者进行免疫表型检测和分析。结果 （1）47例ALL中,B-ALL36例（76.6%）,T-ALL9例（19.1%）,T/B-ALL2例（4.3%）。B-ALL中cCD79a和CD19表达率均为100.0%,明显高于CD20（83.3%）和CD10（77.8%）（P〈0.01）;9例T-ALL cCD3和CD7的表达率均为100%,明显高于CD5（77.8%）（P〈0.01）;47例ALLcMPO表达均阴性。（2）伴髓系抗原表达阳性者（My＋ALL）完全缓解（CR）率为66.7%,低于髓系抗原表达阴性者（My-ALL）（87.0%）,但无统计学意义（P〉0.05）;14例CD34＋的患者CR率为64.3%,18例CD34-的患者CR率94.4%,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论免疫表型分析有助于ALL的诊断和预后判断。     

156例儿童急性白血病免疫分型研究

目的研究儿童急性白血病免疫分型特点,了解儿童急性白血病抗原表达规律和免疫亚型分布情况。方法采用CD45／SSC双参数设门方法的三色流式细胞术检测白血病细胞膜表面及胞浆内分化抗原。结果156例儿童急性白血病免疫可分为4类：未分化型占0．7％,急性淋巴细胞白血病69-2％,急性髓细胞白血病25％,急性混合型白血病5．1％。108例儿童ALL中,B淋巴细胞白血病（B—ALL）占90．7％,T淋巴细胞白血病占9．3％,CD10、CD19、CD20在B—ALL中表达较高,阳性率分别为83．5％、98．9％、21．6％。CD13、CD33、CD117、胞浆内MPO在AML各亚型中有较高的表达率,阳性率分别为94．8％、94．8％、67．6％、86．5％,AML—M3患者CD34及HLADR呈低表达,均明显低于其他髓系白血病,差别有统计学意义（P〈0．05）。结论免疫分型技术在儿童急性白血病患者诊断中具有重要意义。是骨髓形态学诊断的有力补充。