酶联免疫吸附试验检测炭疽抗毒性抗体的研究——Ⅱ 炭疽病人血清抗毒性抗体的检测

用ELISA检测临床确诊为皮肤炭疽病例17例,发病后不同时期49份血清中的炭疽抗毒性抗体,检测阳性率达80～100％。炭疽接触者20份血清,检测阳性率达50～60％。健康人20份血清抗体水平较低。各组间抗毒性抗体的光密度值比较,相差非常显著。以荚膜荧光抗体染色法检测上述血清中荚膜抗体,健康人和炭疽接触者均呈阴性,炭疽病人荚膜抗体检测阳性率为93.8％。同一病例发病后一个月,抗毒性抗体水平最高,随发病时间延长,抗体水平逐渐下降,而抗毒性抗体水平个体差异较为悬殊,个别病例在一年以后抗毒性抗体仍可维持较高水平。炭疽病人血清中抗毒性抗体与荚膜抗体同时存在,但未观察到两者之间有平行关系。     

酶标抗体及酶标葡萄球菌A蛋白染色法在炭疽快速诊断中的应用——一、快速检测炭疽病人荚膜抗体的实验研究

本文介绍了酶标抗体及酶标葡萄球菌A蛋白染色检测炭疽荚膜抗体的方法,并与荧光抗体染色法作了比较。检测16例47份炭疽病人血清荚膜抗体,三种方法的阳性率分别为78.8％、78.8％和80.9％,相差不显著(P>0.05)。系统地观察7例病人荚膜抗体动态变化,提示多数炭疽病人的荚膜抗体可能维持9个月左右,并进一步证实检测该抗体可作为炭疽病的临床追溯诊断和流行病学调查的有力证据。本实验证明上述三种方法的敏感性和特异性均相似,而两种酶标染色法,尤其是酶标葡萄球菌A蛋白染色法的优点更多,更便于推广使用。     

抗炭疽PA15单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立

目的:制备抗炭疽保护性抗原15(protective antigen,PA15)单克隆抗体,初步建立双抗体夹心ELISA检测炭疽感染者血清中的保护性抗原?方法:以纯化的PA63蛋白为免疫原免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,间接ELISA?Western blot?免疫沉淀(IP)和蛋白质谱分析单抗特异性,并建立双抗体夹心ELISA检测方法?结果:制备了2株抗PA15单克隆抗体,命名为3D7和8E9?SDS-PAGE电泳可见抗体的重链和轻链,间接ELISA?Western blot发现单抗3D7和8E9可与PA15?PA63特异性结合,IP和蛋白质谱分析发现单抗3D7可与PA83特异性结合,双抗体夹心ELISA方法检测炭疽感染血清中保护性抗原的最低检出浓度为16 ng/ml?结论:成功制备了抗PA15单克隆抗体,并建立了双抗体夹心ELISA方法检测炭疽感染血清中的保护性抗原?     

兔抗麻雀IgY酶标抗体的制备

目的制备辣根过氧化物酶（HRP）标记的兔抗麻雀IgY抗体,为禽类血清学检测体系的建立提供技术储备。方法硫酸铵盐析法粗提麻雀血清IgY,进一步在SDS-PAGE上分离后,切下带有目的条带的凝胶作为免疫原,免疫实验兔制备抗血清,Protein-A柱亲和纯化兔抗IgY血清IgG,,使用改良过碘酸钠法制备酶结合物。ELISA检测酶标抗体的工作浓度,western blotting检测酶标抗体的特异性。结果硫酸铵盐析法粗提IgY,可去除部分杂蛋白,SDS-PAGE上分离后切下带有目的条带的凝胶,可以得到足够纯度的抗原,将带有IgY的凝胶作为抗原免疫后获得的抗血清经Protein-A纯化后,二抗在SDS-PAGE上鉴定,纯度达到99%以上。改良的过碘酸钠法标记获得的抗体浓度为1.008 mg/mL,ELISA检测酶标抗体效价为1∶1000。Western blotting鉴定抗体具有特异性。结论获得了优质可靠的兔抗麻雀IgY酶标抗体。     

固定化胰岛素检测胰岛素抗体

胰岛素抗体的检测方法最早采用放射免疫法(RIA),但要有同位素实验室,昂贵的检测仪器,还有放射性污染的危险。近年来发展了酶标免疫法(EIA),可避免RIA法的缺点而不失其微量、正确的特点。一般EIA法将抗原或抗体包被于酶标板小孔中,往往因酶标板产品批号及生产厂家之不同,包被效果不一,明显影响重复性。本文将胰岛素通过     

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备

目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。     

化学发光酶免疫分析法及ELISA法检测在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用价值

目的对比分析化学发光酶免疫分析法及ELISA法检测在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用效果。方法选取于2014年2月至2016年10月开封市中心医院收治的62例疑似肝炎患者,采集所有入选者血液样本,对其乙肝病毒(HBV)及核心抗体Ig G与Ig M先实施ELISA法检测,再实施化学发光酶免疫分析法检测,对比两种检测方法HBV检出情况及对乙肝Ig G与Ig M检出情况。结果 ELISA法HBV阳性检出率(95.16%)与化学发光酶免疫分析法(98.39%)相比,差异无统计学意义(P>0.05);ELISA法对乙肝Ig G与Ig M抗体检测阳性率为19.35%(12/62)、17.74%(11/62),低于化学发光酶免疫分析法69.35%(43/62)、80.65%(50/62),差异有统计学意义(P<0.05)。结论与ELISA法相比,化学发光酶免疫分析法对乙肝病毒的核心抗体检出率较高。     

兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

目的纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测。方法采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG, 用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab₂)；用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG(Ab₂)；采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(rabbit anti-hamster IgG-HRP)；用直接ELISA 和 Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定；应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA)。结果金黄地鼠血清IgG纯度达95%；兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab₂)免疫双扩散效价为1:64；兔抗金黄地鼠IgG-HRP经直接ELISA 和 Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000；酶免(IEA)效价为1∶2000。 结论高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件。     

抗幽门螺杆菌尿素酶抗体的检测及其临床应用

以幽门螺杆菌(HP)特异性尿素酶作为抗原,用间接酶联免疫法(ELISA)检测149例经胃镜检查患者血清抗尿素酶抗体IgG,以≥450EU为阳性标准.结果显示,ELISA检测HP的灵敏性为92.0%,特异性为86.5%;胃窦炎症的存在,HP的检出和血清抗体水平三者间呈现明显的正相关;抗体水平的高低与胃     

抗双链DNA抗体不同检测方法的比对分析

目的评价间接免疫荧光法(IIFA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)和免疫印迹法(IBT)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的特点及应用价值。方法采用IIFA、ELISA和IBT法对实验组(系统性红斑狼疮患者,n=70)及健康对照组(健康人,n=650)血清标本进行抗dsDNA抗体的检测。结果经IIFA、ELISA法及IBT法检测,实验组抗dsDNA抗体的阳性率分别为34.29%,54.29%和44.29%;健康对照组抗dsDNA抗体的阳性率分别为0.15%,4.46%和1.54%,ELISA和IBT检出阳性率与IIFA方法比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在血清抗dsDNA抗体的检测上,IIFA法特异性高,敏感性较低;而ELISA和IBT法检测敏感性高,特异性较差。     

酶标葡萄球菌A蛋白ELISA法检测大年龄人群白喉免疫效果的研究(简报)

人群对白喉免疫力的高低与体内抗毒素抗体水平有密切关系,因此,检测人群血清中白喉抵毒素抗体水平,对评价免疫状况、观察预防接种效果等均有重要意义。本研究为配合白喉预防及流行病学调查的实际需要,探讨用酶标葡萄球菌A蛋白(简称酶标SpA)的 ELISA法检测人群血清白喉抗毒素抗体水平,并与间     

狂犬病抗体免疫金标检测试纸的研制

目的应用酶联免疫原理和胶体金层析技术,研制狂犬病抗体免疫金标检测试纸。方法采用特殊的生产工艺,在玻璃纤维膜包被胶体金标记狂犬病抗原,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被狂犬病抗原和兔抗狂犬病抗体,制成狂犬病抗体免疫金标检测试纸(人用)。结果当待检样品阳性时,在检测线处形成抗原抗体的免疫复合物而凝聚显色;当待检样品阴性时,检测线处不形成抗原抗体免疫复合物不显色。整个试验过程只需15 m in。试纸与ELISA试剂比较,两者都具有微量、特异、准确的优点,且金标试纸独具操作方便、快速和结果直观、容易判定的优点。结论应用胶体金免疫层析技术建立的"狂犬病抗体免疫金标检测试纸",可以准确地检测出被检样品是否带有狂犬病抗体,同时还可以通过检测线颜色的深浅判定抗体的含量高低。     

应用PPA—ELISA检测实验家兔弓形虫抗体的研究

目前弓形虫病的诊断较常用的免疫血清学方法为间接荧光抗体试验(IFA)间接血凝试验(IHA)和染色试验(DT).但有些方法操作繁琐,设备复杂,有些要用活的虫体,不易标准化,自动化,不适于大规模普查.近年来,国外试图将ELISA用于该病的诊断获得满意结果,为了简化ELISA所用酶标第二抗体的制备程序,使这一新技术适用于检测多种哺乳动物血清中弓形虫IgG抗体,用于弓形虫病流行病学调查,我们采用过氧化物酶标记金萄菌A蛋白(PPA)取代酶标第二抗体进行酶联免疫吸附试验(PPA—ELISA),对实验感染家兔血清弓形虫抗体进行了检测,现将结果简报如下:     

检测肺炎荚膜多糖IgG抗体ELISA方法的建立

对抗原的包被浓度，缓冲液及包被条件进行了选择和优化，建立了检测肺炎荚膜多糖抗体浓度的间接ELISA法，用该ELISA系统比较了不同包被的（CPS，CPS－Tyr,mHSA)在不同酶标测定板中的包被效果。结果表明，单独的多糖对酶标测定板有较强的吸附性，板孔间检测结果均一性良好（CV＝1．24％），同其它结合物包被一样，足以区别保护和非保护性抗体浓度，能够较好地评价结合疫苗在动物和人体内诱导的抗体水平。     

McAb-ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心注和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS患者血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清、102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的抗体确为HFRS病毒特异性抗体。     

免疫酶标电泳技术检测结核菌特异抗体研究

近十年来研究检测结核病人血清中特异抗体的方法引起国内外重视,已报道都以酶联免疫吸附试验(ELISA)法包被不同抗原,间接检测相应抗体,其操作较复杂,检测时间均需24小时以上。本文首先在国内应用免疫酶标电泳技术(IELEP)检测血清中结核菌特异抗体,无需复杂昂贵设备,具有操作简便、快速,兼具特异性、灵敏度、稳定性优于LISA法的优点。IELEP法检测血清中结核菌特异抗体将酶标记抗原(聚合OT为抗原)和血清标本分别置于阴、阳极端,在电泳作用下直接相遇形成初级免疫复合物,经酶促反     

单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg/抗-HBe检测评估

采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试剂检测HBeAg及抗-HBe,结果显示单克隆抗体(McAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1:5000,比酶标法ELISA高1倍多,与RIA相当,且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变,1年内批间变异系数为5.8％,相同标本重复检测变异系数为5.94％,是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外,研究发现一孔一期法同时测HBeAg/抗-HBe时,无论标记抗体为单克隆或多克隆,其包被只能用单克隆抗体。     

快速斑点酶标法检测抗丝聚蛋白抗体

目的 建立一种快速、简便的抗丝聚蛋白抗体(anti-filaggrin antibody,AFA)的检测方法。方法 采用快速斑点酶标法(Rapid-Dot-ELISA,R-Dot-ELISA)检测15份AFA阳性的类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者和15份AFA阴性的正常健康者血清的AFA。检测中采用不同浓度的丝聚蛋白、不同的封闭液、不同浓度的酶标抗体,摸索检测条件。确定检测条件后,采用R-Dot-ELISA和ELISA法检测100例RA患者和150例包括系统性红斑狼疮(SLE)、强直性脊柱炎等非RA的自身免疫病患者和50例健康者血清的AFA,比较两种方法检测AFA的一致性,并判断R-Dot-ELISA检测AFA对RA的诊断价值。结果 丝聚蛋白浓度为40~160 μg/mL,封闭液为含1%BSA和10%小牛血清的PBS,酶标抗体稀释度为1∶80~1∶320是较合适的检测条件。R-Dot-ELISA与ELISA法检测AFA,结果一致率为98％(r=0.947,P＜0.05),对RA诊断的敏感度、特异度等统计学指标无差异。结论 R-Dot-ELISA检测AFA快速、简便,且对RA的诊断具有较高的敏感性及特异性,适用于基层流行病学调查和临床快速诊断。     

单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg／抗HBe检测评估

采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试刑检测HBeAg及抗-HBe，结果显示单克隆抗体(MgAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1：5000，比酶标法ELISA高1倍多，与RIA相当，且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变，1年内批间变异系数为5．8％，相同标本重复检测变异系数为5．94％，是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外，研究发现一孔一期法同时测HBeAg／抗-HBe时，无论标记抗体为单克隆或多克隆，其包被只能用单克隆抗体。     

ELISA法在HIV抗体检测中的应用及检测影响因素

目的:探讨ELISA法在HIV抗体检测中的应用及检测影响因素。方法:初筛采用酶联免疫吸附测定法(ELISA),确认由省疾控中心采用免疫印迹法(WB)。结果:2010年5月~2012年5月,共检测76450例一般住院患者HIV抗体,确认阳性8例,阳性率0.01%。结论:一般住院患者中仍混杂有感染者,利用ELISA法可以达到较好的HIV抗体检测效果。临床要注意控制各检测影响因素,做好HIV防控工作!