用流式细胞仪分析尿毒症患者血小板膜糖蛋白的变化

应用流式细胞仪和抗血小板膜糖蛋白（GP）Ⅰb及GPⅡb／Ⅲa．单克隆抗体，测定了尿毒症患者和正常人血小板表面GPⅠb的量以及静息和用ADP活化条件下，血小板膜GPⅡb／Ⅲa的量。结果表明，尿毒症组血小板膜GPⅠb的量与对照组相比，无显著性差异（P＞0．05）；在静息和活化状态下，尿毒症组血小板膜GPⅡb／Ⅲa的量与正常对照组相比，也无显著性差异（P＞0．05），并且尿毒症组血小板以ADP活化后，其GPⅡb／Ⅲa表达的量与血浆肌酐或尿素氮水平无显著相关性（r＝－0．154，P＞0．05；r＝－0．177，P＞0．05）。提示尿毒症患者血小板膜GPⅠb和GPⅡb／Ⅲa的量无明显异常。     

老年人血脂水平与血管性血友病因子及血小板膜糖蛋白的关系

目的探讨老年人血脂水平与血管性血友病因子及血小板膜糖蛋白的关系。方法应用ELISA法测定了99例老年高血脂症患者(高TG组32例,高LDL-C组36例,高TC,TG,LDL-C组31例)及32例健康老年对照组的血管性血友病因子(vWF)及血小板膜糖蛋白Ⅱb,Ⅲa(GPⅡb,GPⅢa)水平。结果和对照组相比,老年高血脂症患者(高TG组,高LDL-C组,高TC,TG,LDL-C组)血清vWF均显著高于健康老年对照组;血小板膜GPⅡb分子数/血小板和血小板膜GPⅢa分子数/血小板均明显高于健康老年对照组(P<0.01)。相关分析表明:老年高血脂症组GPⅡb,GPⅢa分别与TG(r分别为0.5218,0.5917)呈中度相关,与LDL-C(r分别为0.7842,0.7914)和vWF(r分别为0.8612,0.8413)呈高度相关。结论高血脂可造成血管内皮细胞功能障碍和损伤,导致血小板的活化,血小板膜糖蛋白(GPⅡb,GPⅢa)的测定对诊断和预防血栓性疾病有着重要价值。     

胰岛素对正常人血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa表达的影响及机制

目的探讨胰岛素对正常人血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa表达的影响及其机制。方法建立全血血小板膜GPⅡb/Ⅲa表达的流式细胞术测定方法,观察胰岛素以及一氧化氮合酶抑制剂硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)、鸟苷酸环化酶(GC)抑制剂亚甲蓝(MB)分别及与胰岛素联合作用下对血小板膜GPⅡb/Ⅲa表达的影响。结果(1)胰岛素对正常人静息血小板膜GPⅡb/Ⅲa表达无明显影响;而显著抑制凝血酶、胶原活化的血小板膜GPⅡb/Ⅲa的上调表达,且该效应呈剂量和时间依赖性;(2)L-NAME、MB几乎完全阻断胰岛素对血小板膜GPⅡb/Ⅲa表达的抑制效应。结论胰岛素可通过NOS→NO→GC→GMP通路抑制血小板膜GPⅡb/Ⅲa的表达。     

缺血性脑血管病不同时相血小板膜糖蛋白测定的临床意义

目的探讨缺血性脑血管病不同时相血小板膜糖蛋白(GP)测定的临床意义。方法采用定量流式细胞仪测定108例缺血性脑血管病患者(包括短暂性脑缺血发作20例、腔隙性脑梗死49例及脑血栓形成39例)和30例正常对照者外周血血小板膜糖蛋白GPⅢa(CD61)、GPⅠb(CD42b)、GPⅠa(CD49b)在病程不同时相〔(急性期(≤3d)、发病1周、2周及恢复期〕的表达。同时采用ESS评分评价神经功能缺损程度及其与GP的相关性。结果脑血栓形成的急性期、短暂性脑缺血发作的急性期和发病后1周,GPⅢa表达明显高于正常对照组(P<0.05);此两种疾病状态急性期均存在GPⅠb下降,差异无统计学意义(P>0.05);腔隙性脑梗死各期均未发现GPⅢa的明显表达。在病变恢复期,脑血栓形成中GPⅠa的表达明显高于腔隙性脑梗死(P<0.05);短暂性脑缺血发作急性期GPⅠa表达略升高,恢复期降低(P>0.05)。Pearson相关分析显示ESS评分与GPⅠb的表达呈正相关(r=0.233,P<0.05),偏相关分析显示GPⅢa、GPⅠb及GPⅠa两两之间均有相关关系。结论脑血栓形成和短暂性脑缺血发作的急性期均有GPⅢa和GPⅠb的明显活化,前者恢复期GPⅠa表达亦显著增加。血小板膜糖蛋白的改变可能反映血栓前状态,可作为一种有效评估某些缺血性脑血管疾病发展及预后的因子。     

急性白血病患者血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的改变

目的探讨急性白血病患者血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb／Ⅲa的变化及其临床意义。方法以流式细胞仪用免疫荧光标记法分析GPⅡb／Ⅲa(检测CD 41／CD 61),测定30例正常人、39例急性白血病患者血浆GPⅡb／Ⅲa的阳性表达率及ADP诱导血小板CD 41／CD 61表达的动力学特征。结果正常人血浆阳性表达率CD 41和CD 61分别为93.87％±6.60％；急淋患者分别为57.22％±39.55％和57.44％±39.02％；急非淋患者分别为52.26％±41.16％和52.78％±40.47％。经t检验,急性白血病患者CD41／CD61的阳性表达率明显低于正常对照组(P＜0.01)。ADP可诱导其CD41和CD61表达增高。结论检测GPⅡb／Ⅲa的阳性表达率,对研究急性白血病的病理生理有一定的价值。     

急性白血病患者血小板免疫状态的变化

目的 :探讨急性白血病患者出血与血小板相关抗体 (PAIgG)和抗血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa (抗GPⅡb/Ⅲa)自身抗体的关系。方法 :用酶联免疫吸附法测定 60例急性白血病 (AL)患者和 2 0例正常对照的PAIgG和抗GPⅡb/Ⅲa自身抗体。其中抗GPⅡb/Ⅲa自身抗体用SZ 2 1 (针对GPⅢa)和SZ 2 2 (针对GPⅡb)两种单抗同时测定。并同时测定了血小板计数 (BPC)和血小板聚集功能 (PagT)等。结果 :AL组PAIgG值 ((1 54 .30± 2 5 .71 )fg/plt)显著高于正常对照组 ((2 .0 8± 1 .72 )fg/plt) ,P <0 .0 1。 60例AL中 40例在正常参考值 (5 .8fg/plt)以上。其中 2 4例外周血血小板减少 ,且PAIgG值与血小板数呈负相关 (P <0 .0 0 1 ,r=- 0 .395) ;1 6例血小板数正常。 60例AL中抗GPⅡb/Ⅲa自身抗体阳性率 40 % (2 4 / 60 ) ,其中 1 4例单独SZ 2 1阳性 ,1 0例SZ 2 2阳性。 2 4例阳性患者均呈现ADP诱导的聚集功能减低 ,用 5μlADP诱聚时 ,最大聚集率 (5 .58± 4 .76) %。 结论 :部分AL患者存在血小板免疫异常所致的免疫性血小板减少和血小板质的异常     

血小板膜糖蛋白和血浆vWF在不同脑缺血事件的表达

目的 探讨血小板膜糖蛋白(GP)和血管性假血友病因子(vWF)在不同脑缺血事件的表达以及两者的相关性.方法 以ELISA法和免疫浊度法分别测定了3组脑缺血事件患者及对照组血浆GPⅠb、GPⅡb/Ⅲa和vWF.结果 脑缺血事件各组GPⅠb水平均显著低于对照组,P＜0.01;GPⅡb/Ⅲa和vWF水平均显著高于对照组,P＜0.01;各研究组之间有显著性差异,P＜0.01.直线相关分析,脑缺血事件组GPⅠb与vWF呈中度相关,P＜0.01.结论 脑缺血事件时血小板处于明显活化状态;临床症状严重性、血小板活化水平及血管内皮功能受损程度呈显著相关性.     

过敏性紫癜患儿血小板表面黏附分子CD62P和GPⅡb/Ⅲa表达水平的变化

目的 了解过敏性紫癜(HSP)患儿血小板表面黏附分子CD62P、GPⅡb/Ⅲa的表达情况,探讨其在HSP发病机制中的作用.方法 选择2006年3～11月我院收治的29例HSP患儿,选择同期27例外科非感染性疾病患儿作为对照,应用流式细胞仪检测外周血小板黏附分子CD62P、GPⅡb/Ⅲa的水平.结果 与对照组比较,HSP组血小板GPⅡb/Ⅲa表达水平为(26.30±10.25)%,比对照组的(20.67±7.80)%明显增高(P＜0.05),且HSP肾炎者[(29.43±10.10)%]明显高于HSP非肾炎者[(21.18±8.72)%,P＜0.05];HSP组与对照组CD62P分子的表达水平分别为(1.33±0.40)%和(1.24±0.41)%.两组比较无显著性差异(P=0.43).结论 HSP患儿血小板GPⅡb/Ⅲa表达增加,尤以合并肾脏损害时明显.血小板的异常活化参与了HSP、过敏性紫癜肾炎(HSPN)发病的病理生理过程.     

胰岛素对正常人血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa表达的影响及机制

目的 探讨胰岛素对正常人血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱb／Ⅲa表达的影响及其机制。方法 建立全血血小板膜GPⅡb/Ⅲa表达的流式细胞术测定方法，观察胰岛素以及一氧化氮合酶抑制剂硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)、鸟苷酸环化酶(GC)抑制剂亚甲蓝(MB)分别及与胰岛素联合作用下对血小板膜GPⅡb/Ⅲa表达的影响。结果 (1)胰岛素对正常人静息血小板膜GPⅡb／Ⅲa表达无明显影响；而显著抑制凝血酶、胶原活化的血小板膜GPⅡb／Ⅲa的上调表达，且该效应呈剂量和时间依赖性；(2)LNAME、MB几乎完全阻断胰岛素对血小板膜GPⅡb／Ⅲa表达的抑制效应。结论 胰岛素可通过NOS→NO→GC→GMP通路抑制血小板膜GPⅡb／Ⅲa的表达。     

脑梗死患者血浆血小板α颗粒膜蛋白140的变化及意义

目的:探讨脑梗死患者血浆血小板α颗粒膜蛋白140(GMP-140)含量的变化及临床意义.方法:采用放射免疫法测定急性脑梗死患者及正常对照组血浆GMP-140的含量.结果:脑梗死组血浆GMP-140的含量为(68.33±6.46)g/L,显著高于对照组(4.67±3.84)g/L(P＜0.05).结论:血浆GMP-140含量的测定为血栓性疾病的早期诊断提供了指标,为抗血小板药物的筛选及作用机制的研究提供了依据.     

老年高血压病并发脑梗死患者内皮细胞损伤和血小板活化的研究

目的 :研究老年高血压病并发脑梗死患者、老年高血压病患者的内皮细胞损伤、血小板活化和炎症因子改变。方法 :选择 2 8例老年高血压病并发脑梗死患者 (发病 72h内 )、31例Ⅰ ,Ⅱ期老年高血压病患者和 2 8例老年正常对照 ,测定其血浆vonWillebrand因子 (vWF)、α颗粒膜蛋白 - 140 (GMP 140 )和血清C反应蛋白 (CRP)含量。结果 :老年高血压病并发脑梗死组血浆vWF含量、GMP 140含量和血清CRP含量均明显高于老年高血压病组及老年正常对照组 ;老年高血压病组血浆vWF含量、GMP 140含量亦明显高于老年正常对照组 ,血清CRP含量较老年正常对照组高 ,但差异无显著性。结论 :老年高血压病并发脑梗死患者存在明显的内皮细胞损伤、血小板活化和炎症改变 ;Ⅰ ,Ⅱ期老年高血压病患者亦有明显的内皮细胞损伤和血小板活化。     

心肌梗死患者血清脑钠肽、血液流变学及血小板活化指标变化的研究

目的探讨心肌梗死患者血清脑钠肽(BNP)、血液流变学及血小板活化指标的变化规律。方法选择2010年9月至2012年4月于河北北方学院附属第三医院进行治疗的37例心肌梗死患者作为观察组,同期选择在本院进行体检的37名健康体检者作为对照组,检测两组的血清BNP、血液流变学及血小板活化指标并进行比较。结果观察组的血清BNP、血浆黏度、全血黏度、红细胞聚集及刚性指数、CD62p、血小板膜糖蛋白纤维蛋白原受体、CD61、GPⅡb/Ⅲa、血小板α颗粒膜蛋白140水平均明显高于对照组,且Killip分级Ⅲ～Ⅳ级患者高于Ⅰ～Ⅱ级患者(均P<0.05)。结论心肌梗死患者血清BNP、血液流变学及血小板活化指标均呈现升高的趋势,且严重程度对其升高程度有一定影响。     

15例遗传性血小板膜糖蛋白缺陷疾病临床和基因突变分析

目的探讨遗传性血小板膜糖蛋白(GP)缺陷疾病临床特征和发病机制。方法采用血小板聚集试验观察血小板对各种诱聚剂的反应,流式细胞术检测血小板膜GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ、αⅡb/β3复合物的含量;应用PCR扩增与DNA直接测序技术进行GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ、αⅡb/β3复合物基因突变分析,同时进行100名健康对照人群相关基因检测并结合千人基因组资料以排除基因多态性。结果 4例大血小板综合征(BSS)患者血小板数减少,血小板体积巨大,对瑞斯托霉素(RIS)诱导的聚集显著降低,对二磷酸腺苷(ADP)诱聚剂反应正常,血小板膜糖蛋白GPⅠbα表达量严重降低;11例血小板无力症(GT)患者,血小板计数均正常,对ADP诱聚剂反应低下,而对RIS反应基本正常。流式细胞仪检测结果显示,Ⅲ型GT 1例,Ⅱ型GT 5例,Ⅰ型GT 5例。基因测序共发现16种突变,其中GPⅠbα基因突变c.G987 A、c.1480ins A,αⅡb基因突变c.C2870 T、c.C2330 A、c.T2597 G为新的突变。结论在BSS和GT中,血小板膜糖蛋白异常与致病基因缺陷有关,出血症状严重程度可能受多种因素的影响。     

Activity of platelet in patients with high level of LDL and the effect of LDL on platelet glycoproteins

OBJECTIVE: To investigate the activity of platelet in patients with high level of low density lipoproteins (LDL) and the effect of LDL on platelet glycoproteins (GP). METHODS: Platelet glycoproteins, whose platelet were activated or unactivated, were measured by flow cytometry. RESULTS: The amount of the platelet membrane GP II b/III a in patients was not significantly different from that of the control when platelet was unactivated (P > 0.05); when platelet was activated by adenosine diphosphate (ADP), the amount of patients' platelet GP II b/III a was increased markedly in comparison with that in the control (P < 0.01). Having been preincubated with LDL, the platelets were activated by ADP and the amounts of GP II b/III a of patients group and the control were all increased obviously as compared with those in the platelets which were not incubated with LDL (P < 0.01; P < 0.01). There was no significant difference of the amount of granule membrane protein-140 (GMP-140) between patients and the control when platelet was activated by thrombin (P > 0.05). Having been preincubated with LDL, platelet was activated by thrombin, the amounts of GMP-140 on patients' and control platelet were all increased markedly (P < 0.01, P < 0.01). CONCLUSION: The activity of platelet in patients with high level of LDL is increased significantly. LDL can increase the expression of platelet glycoproteins.     

Effect of the platelet membrane GP Ⅰ a gene polymorphism in the pathogenesis of unstable angina pectoris

Objective: To investigate the effect of platelet membrane glycoprotein(GP) Ⅰ a gene polymorphism in the pathogenesis of unstable angina pectoris (UAP) in Chinese people. Methods: Collagen type Ⅰ -induced platelet aggregation was measured in 33healthy subjects in vitro. Plasma level of α-granule membrane protein (GMP-140) was measured in both the above 33 healthy subjects during fasting and 35 patients with recent onset effort anina during rest onset within 24 h after hospitalization. Furthermore, the platelet membrane GP Ⅰ a gene 807C/T polymorphism was checked in all subjects with polymerase chain reaction-sequence specific primers(PCR-SSP)technique. Results: The lag time before 30% platelet aggregation was significantly longer in healthy subjects with CC genotype than with TC genotype ( P ＜0.01). However, there was no significant difference in the maximal platelet aggregation between healthy subjects with the above two genotypes. Plasma level of GMP-140 was significantly higher in TC genotypic patients with recent onset effort angina than in CC genotypic patients with the same type of UAP( P ＜ 0.05) and healthy subjects ( P ＜ 0.01), furthermore, there was also significant difference between the latter two groups( P ＜ 0.05). Conclusion: The rapid initiation of collagen-induced platelet aggregation may be associated with platelet membrane GP Ⅰ a T807 allele, which may play an important role in the pathogenesis of UAP.     

老年慢性肺心病患者GPⅡb／Ⅲa和P—selectin的变化及意义

摘要：目的探讨老年慢性肺心病患者血小板活化标志物GPⅡb／Ⅲa、p-selectin的变化及其与Pa02、PaC02的关系。方法用三色全血流式细胞术测定36例老年慢性肺心痛患者外周血中血小板GPⅡb／Ⅲa、P—selectin的表达水平,检测患者动脉血氧分压、二氧化碳分压,并与28例老年健康对照者及28例非老年健康对照者比较。结果老年慢性肺心病GPⅡb／Ⅲa、P-selectin均明显高于老年健康对照组及非老年健康对照组（均P〈0．001）。且与动脉血氧分压呈负相关、与动脉血二氧化碳分压呈正相关。老年健康对照组GPⅡb／Ⅲa、P—selectin阳性表达率亦高于非老年健康对照组（均P〈0．05）。结论老年慢性肺心病患者血小板明显活化,其活化程度与PaO2、PaCO2关系密切。     

老年脑梗死患者急性期血小板活化的检测及临床意义

目的比较老年急性脑梗死(ACI)患者与健康老年人血小板功能的不同。方法采用玻璃球旋转法、比浊法和流式细胞术检测36例ACI患者和19例对照人群的血小板黏附率(PAgT)以及血小板膜糖蛋白(GMP)CD41、CD62p和CD63的阳性表达率。结果老年ACI患者组PAdT、PAgT、CD41、CD62p和CD63的检测值,分别为31%±13%、40%±14%、12.34%±3.31%、7.82%±2.59%、21.34%±6.63%;对照组上述各项检测值,分别为22%±9%、27%±13%、8.98%±2.5%、4.87%±1.79%、17.87%±4.45%。结论老年ACI患者血小板处于激活状态,血小板黏附、聚集、释放等功能增强,血小板活化与老年ACI的发病机制有关。     

老年高血压病并发脑梗死患者内皮细胞损伤和血小板活化的研究

目的：研究老年高血压病并发脑梗死患者、老年高血压病患者的内皮细胞损伤、血小板活化和炎症因子改变。方法：选择28例老年高血压病并发脑梗死患者（发病72h内）、31例I,Ⅱ期老年高血压病患者和28例老年正常对照,测定其血浆von Willebrand因子（vWF)、α颗粒膜蛋白-140（GMP-140）和血清C反应蛋白（CRP）含量。结果：老年高血压病并发脑梗死组血头vWF含量、GMP-140含量和血清CRP含量均明显高于老年高血压病组及老年正常对照组;老年高血压病组血浆vWF含量、GMP-140含量亦明显高于老年正常对照组,血清CRP含量较老年正常对照组高,但差异无显著性。结论：老年高血压病并发脑梗死患者慧明显的内皮细胞损伤、血小板活化和炎症改变;I,Ⅱ期老年高血压病患者亦有明显的内皮细胞损伤和血小板活化。     

心肌缺血时血小板功能变化的机制

研究了冠心病人以及实验大鼠心肌缺血期间血小板功能变化的机制。利用血小板聚集仪检测血小板聚集率（PAgR）。应用CD41,CD62和标记第二抗体FITC在流式细胞仪上检查了GPⅡb/Ⅲa和GMP-140表达的变化。利用荧光血小板聚集仪测定了血小板ATP的释放量;利用血小板离子钙聚集仪检测胞浆内钙含量。结果表明缺血时PAgR的增高是由于血小板表面的GPⅡb/Ⅲa受体表达增加所致。缺血期间GMP-140表达的增加表明心肌缺血时血小板易于被激活,并且黏滞性增高。心肌缺血时ATP释放量也明显增加。在血小板ATP释放反应和血小板聚集率之间有正反馈相互作用关系。心肌缺血能显著引起胞浆内钙含量的增高,后者是导致血小板功能异常变化的重要细胞内机制。