不同强度康复训练对脑缺血再灌注大鼠运动功能和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨应用不同强度康复训练对脑缺血再灌注大鼠运动功能以及海马区和梗死灶周围胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，大脑中动脉阻塞1h，再灌注7d和14-d，36只造模成功的大鼠随机分为造模对照组、常规康复训练组和强化康复训练组，分别采用姿势反射试验、肢体不对称应用试验和角落试验观察各组大鼠的运动功能，应用免疫组织化学方法分别检测各组大鼠缺血侧海马区和梗死灶周围GFAP的表达情况。结果缺血再灌注7d和14d时，两个康复训练组大鼠行为学评分优于造模对照组，其GFAP表达的光密度值高于造模对照组；缺血再灌注14d时，强化康复训练组大鼠行为学评分优于常规康复训练组，其GFAP表达的光密度值高于常规康复训练组。结论康复训练可促进脑缺血再灌注大鼠运动功能的恢复和星形胶质细胞的活化，强化康复训练的效果更明显。     

局灶性脑缺血预处理星形胶质细胞GFAP表达变化

目的观察GFAP在大鼠局灶脑缺血和局灶脑缺血预处理（IPC）中的表达。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,将大鼠分为正常组、MCAO组I、PC＋MCAO组,按缺血时间不同各组又分为3 h6、h1、2 h、1 d、3d7、d组,观察1 d时间点大鼠神经功能、梗死体积,观察不同时间星形胶质细胞变化及其标志物GFAP表达。结果10 min IPC可使大鼠神经功能增加并减少梗死体积,MCAO和IPC＋MCAO后星形胶质细胞标志物GFAP表达随缺血时间延长阳性表达增多,10 minIPC随缺血时间延长,星形胶质细胞阳性细胞数增多,在缺血1、3、7 d明显增加,与MCAO相比差异显著。结论缺血预处理可能通过激活星形胶质细胞产生缺血耐受作用。     

细胞周期依赖的蛋白激酶抑制剂Olomoucine对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖表达的影响

目的探讨细胞周期抑制剂Olomoucine对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)表达的影响及意义。方法建立大鼠脊髓半切损伤模型,随机分为假手术组、损伤对照组和Olomoucine干预组,采用免疫印迹分析脊髓损伤后CSPGs的表达;应用免疫荧光技术检测损伤区域胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和CSPGs的表达;采用改良Gale联合评分法对大鼠瘫痪后肢进行运动功能评估。结果脊髓损伤后星形胶质细胞明显活化增殖,GFAP和CSPGs的表达显著高于假手术组(P<0.05),010moucine干预可有效下调GFAP和CSPGs的表达(P相似文献   

“醒脑开窍”针刺法对脑缺血再灌注大鼠模型早期脑内血管内皮生长因子与胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:探讨"醒脑开窍"针刺法对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠早期脑内血管内皮生长因子(VEGF)与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法:健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和电针对照组,每组20只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。电针组和电针对照组主穴取双侧内关、水沟、三阴交、百会,采取"醒脑开窍"法行电针治疗30min。首次针刺在动物造模成功后24h内进行,其后每天上午针刺1次,每7天为一疗程(针刺6d,休息1d)。假手术组、模型组常规饲养于笼内,不进行任何干预治疗。各组大鼠在模型制作成功后第7天、第14天两个时间点取10只进行Longa神经功能评估、免疫组化SP法观察VEGF与GFAP的表达。结果:电针对照组和假手术组大鼠无神经功能缺损症状,在模型制作成功后第7天、第14天时,电针组大鼠神经功能恢复明显优于模型组。免疫组化SP法检测电针对照组和假手术组可见少量VEGF与GFAP的表达,模型组大鼠脑梗死后第7天,脑缺血周围出现VEGF与GFAP表达增多,第14天时增多明显,与假手术组比较均有明显差异。电针组VEGF与GFAP表达在各时间点较模型组增加更显著。结论:"醒脑开窍"针刺法能通过促进脑局灶性缺血再灌注大鼠脑内VEGF与GFAP的表达,有效改善大鼠局灶性脑梗死后的神经功能恢复。     

细胞周期抑制剂对局灶性缺血缺氧性脑损伤后神经细胞凋亡的影响

目的探讨细胞周期抑制剂对脑神经细胞凋亡的影响。方法采用光化学方法制作局灶性缺血模型,干预组大鼠腹腔注射细胞周期抑制剂Olomoucine。用HE染色测定皮层梗死灶的体积;免疫组织化学法观察缺血后第3天假手术组、缺血对照组和干预组大鼠梗死灶周围凋亡细胞的表达;用聚丙烯酰胺凝胶电泳(Westernblot)观察Caspase3蛋白的表达。结果对照组梗死灶明显大于干预组;干预组梗死灶周围凋亡细胞数较假手术组显著增高,但明显低于对照组(P<0.05);Westernblot显示Caspase3蛋白的表达,干预组较假手术组增高(P<0.05),而较对照组明显降低(P<0.05)。结论脑缺血损伤后细胞周期调控参与了神经细胞的凋亡过程。     

磁场对大鼠脑缺血再灌注后胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:探讨磁场对大鼠脑缺血再灌注后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法:线栓法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)脑缺血2h再灌注模型。将24只雄性SD大鼠随机分成模型组(n=12)、磁疗组(n=12),每组再分为3d、7d两个亚组,每组6只。磁疗组在缺血再灌注12h后予磁场处理(0—10.5m T,频率50Hz,20min/次,1次/d)。模型组干预过程中除不开机外,其余过程同磁疗组。在治疗3d、7d后(处死前)对大鼠进行神经功能缺损评分(m NSS),脑组织切片采用免疫组织化学染色方法观察脑缺血周围GFAP表达变化。结果:磁疗7d组大鼠m NSS评分较模型组降低(P0.05);磁疗组脑缺血周围GFAP免疫组织化学染色反应阳性细胞计数增加(P0.05)。结论:磁疗可促进大鼠脑缺血再灌注后GFAP的表达,促进脑组织修复。     

骨髓单个核细胞移植对大鼠局灶性脑缺血后神经功能恢复的影响

目的 观察骨髓单个核细胞(BMMCs)移植对大鼠局灶性脑缺血后右侧额叶缺血灶周围区胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及Nogo-A表达的影响,并探讨其促进神经功能恢复的可能机制。 方法 从SD大鼠骨髓中分离BMMCs,采用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,于缺血再灌注24 h后根据Longa评分选择入组模型,采用随机数字表法将48只MCAO大鼠分为模型组及观察组,每组再细分为7 d、14 d及21 d共3个亚组。将BMMCs缓慢注入观察组缺血侧纹状体内,模型组则注入等体积磷酸盐缓冲液（PBS）。各组大鼠分别于干预后7 d、14 d及21 d时再次进行Longa评分,随后麻醉处死取脑,采用免疫组织化学染色观察各亚组大鼠右侧额叶缺血灶周围脑区GFAP及Nogo-A表达。 结果 缺血再灌注21 d时,发现观察组大鼠肢体神经功能缺损评分低于模型组（P<0.05）;观察组大鼠在再灌注14 d及21 d时其GFAP表达数量均较模型组增多［(37.62±2.45) vs (27.62±1.69),(38.00±1.85) vs (27.25±1.83),P<0.05］,而Nogo-A表达数量均较模型组降低［(28.88±2.64)vs(32.50±1.60),(23.87±2.36)vs(32.00±1.85),P<0.05］;观察组大鼠在再灌注21 d时其Nogo-A表达量明显低于再灌注14 d时水平［(23.87±2.36) vs (28.88±2.64),P<0.05］。 结论 BMMCs移植能促进局灶性脑缺血大鼠受损神经功能改善,其作用机制可能与促进缺血灶周围脑组织GFAP表达及抑制Nogo-A表达有关。     

大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞Cyclin D1及Cyclin E的表达

目的:研究大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞细胞周期蛋白Cyclin D1及Cyclin E的表达差异及变化。方法:建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,双光源流式细胞术检测假手术组及缺血再灌注后1d、3d、7d、15d组大鼠大脑皮质星形胶质细胞Cyclin D1及Cyclin E的表达。结果:假手术组大鼠星形胶质细胞表达Cyclin D1及Cyc-lin E,Cyclin E的表达高于Cyclin D1(P0.05);局灶性脑缺血后,星形胶质细胞Cyclin D1的表达逐渐增加,7d及15d时高于假手术组(P0.05);局灶性脑缺血后,星形胶质细胞Cyclin E的表达无明显变化,各组间比较差异无统计学意义。结论:局灶性脑缺血后星形胶质细胞Cyclin D1表达增强,提示Cyclin D1可能参与脑缺血后星形胶质细胞的活化增殖。     

芪棱汤对脑缺血-再灌注后大鼠脑梗死边缘区胶质细胞纤维酸性蛋白表达的影响

目的:通过观察大鼠局灶性脑缺血-再灌注不同时间芪棱汤对胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,探讨芪棱汤对局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用.方法:采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞致短暂局灶性脑缺血模型.大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤治疗组、芪棱汤治疗组;于缺血2 h再灌注3、12、24、72和168 h进行神经功能评分,用免疫组化法检测各组梗死边缘区GFAP表达的动态变化.结果:各组大鼠神经功能评分差异均有显著性(P均<0.05),芪棱汤组明显优于其他组.再灌注3 h和12 h两个治疗组GFAP阳性细胞数均低于模型组,而芪棱汤治疗组少于补阳还五汤治疗组(P<0.05);再灌注24、72和168 h时间段,两个治疗组GFAP阳性细胞数均多于模型组(P均<0.05),且芪棱汤治疗组多于补阳还五汤治疗组(P均<0.05).结论:芪棱汤可能通过调节脑缺血-再灌注后大鼠梗死边缘区脑细胞GFAP的表达来减少脑缺血-再灌注损伤,且芪棱汤疗效优于补阳还五汤.     

高压氧对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤小胶质细胞和基质金属蛋白酶的影响

目的：探讨高压氧(HBO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑梗死体积的影响及其可能作用机制。方法：应用血管内细丝栓堵大脑中动脉(MCA)制作局灶脑缺血再灌注大鼠模型，用HBO(2.0ATA)治疗后，观察MCA缺血2h再灌注损伤6h、24h、48h、72h、120h和10d各组大鼠脑梗死灶体积百分比、小胶质细胞和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的变化。结果：HBO组与缺血组相比72h～120h梗死灶体积百分比减小，缺血24-48h小胶质细胞减少，缺血48h和120h MMP-9蛋白表达减少。结论：HBO能减小脑缺血梗死灶体积，其作用可能与HBO抑制小胶质细胞活化及下调MMP-9蛋白表达有关。     

Effect of Cell Cycle Inhibitor Olomoucine on Astroglial Proliferation and Scar Formation after Focal Cerebral Infarction in Rats

Background:Astrocytes become reactive following many types of CNS injuries.Excessive astrogliosis is detrimental and contributes to neuronal damage.We sought to determine whether inhibition of cell cycle could decrease the proliferation of astroglial cells and therefore reduce excessive gliosis and glial scar formation after focal ischemia.Methods:Cerebral infarction model was induced by photothrombosis method.Rats were examined using MRI,and lesion volumes were estimated on day 3 post-infarction.The expression of glial fibrillary acidic protein(GFAP) and proliferating cell nuclear antigen(PCNA) was observed by immunofluorescence staining.Protein levels for GFAP,PCNA,Cyclin A and Cyclin B1 were determined by Western blot analysis from the ischemic and sham animals sacrificed at 3,7,30 days after operation.Results:Cell cycle inhibitor olomoucine significantly suppressed GFAP and PCNA expression and reduced lesion volume after cerebral ischemia.In parallel studies,we found dense astroglial scar in boundary zone of vehicle-treated rats at 7 and 30 days.Olomoucine can markedly attenuate astroglial scar formation.Western blot analysis showed increased protein levels of GFAP,PCNA,Cyclin A and Cyclin B1 after ischemia,which was reduced by olomoucine treatment.Conclusion: Our results suggested that astroglial activation,proliferation and subsequently astroglial scar formation could be partially inhibited by regulation of cell cycle.Cell cycle modulation thereby provides a potential promising strategy to treat cerebral ischemia.     

olomoucine对星形胶质细胞增殖的影响及机制研究

目的:观察细胞周期抑制剂olomoucine对培养星形胶质细胞(AS)机械损伤后增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:建立体外培养大鼠纯化的AS物理损伤模型(划痕损伤模型),随机分为对照组、划痕组和干预组,划痕组和干预组均继续培养,干预组给予olomoucine干预。利用免疫荧光细胞化学方法观察损伤后BrdU表达;利用Westernblot印迹分析损伤后PCNA、p27的表达。结果:划痕损伤刺激12h开始出现损伤边缘区AS胞体肥大、数目增加,BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较对照组增高(P<0.05),p27表达水平较对照组下降(P<0.05);干预组的BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较划痕组明显减少(P<0.05),p27表达上调(P<0.05)。结论:损伤刺激可促使AS发生反应性胶质增生,CDK选择性细胞周期抑制剂olomoucine可以通过调控细胞周期抑制其反应性增生。     

缺血再灌注损伤大鼠脑内GFAP的变化及通心络的影响

目的：探讨胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在脑缺血再灌注损伤（MCAO）后星形胶质细胞的活化增殖情况及通心络对其影响.方法：采用大鼠缺血再灌注损伤（MCAO）模型,应用免疫组织化学方法观察缺血后3d、7d、14d以及21d缺血侧室管膜及室管膜下区（SVZ）、海马齿状回（SGZ）GFAP的变化.给予模型大鼠通心络灌胃,观察神经干细胞增殖分化的变化.结果：GFAP阳性细胞随缺血再灌注时间的延长,荧光强度值增加,第7天、第14天、第21天组与假手术组比较,差异具有显著性意义（P＜0.05）.造模后通心络组BrdU阳性细胞荧光强度值和BrdU＋GFAP免疫双标荧光强度值均高于脑缺血再灌注模型组,差异显著（P＜0.05）.结论：大鼠缺血再灌注损伤后可引起其缺血侧SVZ、SGZ区星形胶质细胞反应和增殖：而通心络可显著增加MCAO大鼠神经干细胞增殖分化能力.     

局灶性脑缺血对内源性神经干及前体细胞增殖、分化和迁移的影响

背景正常成年动物中枢神经系统内存在能增殖、多向分化潜能的神经干细胞或神经前体细胞.在生理情况下,这些内源性神经干细胞或前体细胞处于静息状态.当脑缺血时,这些细胞将处于何种状态?目的研究大鼠局灶性脑缺血时,内源性神经干细胞的分布、增殖、分化.设计以大鼠为研究对象,随机对照的探索性研究.单位一所医学院的神经生物学研究室、组织胚胎学教研室.材料实验于2001-07/2002-07在泸州医学院神经生物学研究室完成.选择健康成年SD大鼠41只,雌雄不限,体质量250～300 g.干预阻塞大鼠大脑中动脉2 h再灌流0.5,3,6,12 h,1,2,3,5,10 d制成局灶性脑缺血模型,阻塞线不能阻塞大脑中动脉为假手术组,正常大鼠为对照组.在各时间点处死动物,制成脑组织切片,用免疫组织化学单标和双标观察内源性神经干细胞或前体细胞的增殖、分布、分化.主要观察指标内源性神经干/前体细胞的分布、分化.结果在正常组和假手术组多数脑室室管膜细胞增殖性细胞核抗原免疫反应阳性,脑实质内有零星散在增殖性细胞核抗原阳性细胞.再灌流3 h,增殖性细胞核抗原阳性细胞出现在嘴侧脑室下层.再灌流12 h以后,双侧侧脑室的一些脉络膜丛细胞增殖性细胞核抗原免疫反应阳性.再灌流3～10 d,视前区梗死区周边、纹状体、额顶皮质的增殖性细胞核抗原免疫反应阳性细胞显著增加.再灌流3 d,增殖性细胞核抗原阳性细胞开始出现于海马齿状回的颗粒下层,并随再灌流时间延长,增殖性细胞核抗原阳性细胞数量增多.免疫组化双标显示再灌流3 d视前区有很少量的增殖性细胞核抗原/胶质纤维酸性蛋白双阳性细胞,随后增多.再灌流10 d内,未检查到增殖性细胞核抗原/神经丝双标阳性细胞.结论脑缺血时诱导内源性神经干细胞增殖、分化,并向缺血纹状体和皮质迁移,此现象有助于阐明神经功能康复的机制.     

鼠脑射频损伤区神经修复的实验研究

目的：研究鼠脑射频性损伤后神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、增生细胞核抗原（PCNA）的变化规律,进一步探讨脑外伤后神经修复的机制,为进一步治疗颅脑外伤作前期探索。方法：建立鼠脑射频损伤动物模型,分别研究损伤后的不同时段GFAP阳性、PCNA阳性、及二者均阳性的细胞。结果：总结GFAP阳性、PCNA阳性细胞的特点;GFAP阳性细胞、PCNA阳性的分布范围;GFAP阳性细胞的峰值远远大于PCNA阳性细胞的峰值;且二者均阳性的细胞数量极少。结论：颅脑损伤后修复主要依靠GFAP阳性细胞为主的胶质细胞肥大来完成。     

脊髓源星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白表达抑制最佳短发夹样RNA分子筛选及真核表达载体构建

背景:哺乳动物脊髓损伤后胶质瘢痕形成是神经再生的物理和化学屏障,减轻或延缓胶质瘢痕形成给损伤脊髓再生创造了有利条件。目的:设计筛选并构建大鼠胶质原纤维酸性蛋白短发夹样RNA真核表达载体。设计:观察性动物实验。单位:南方医科大学附属深圳医院脊柱外科。材料:选用Wistar大鼠25只,雌雄不拘,清洁级,体质量20～25g。DMEM/F12、lipofectamine2000、Trizol RNA分离试剂盒;胎牛血清(Hyclone);BamHⅠ、HindⅢ、PstI、SalI、T4连接酶;质粒小提试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒;第一链cDNA合成试剂盒;兔抗鼠GFAP一抗。方法:实验于2005-10/2006-06在南方医科大学附属深圳医院完成。针对GFAP基因全编码序列设计并合成3对9bp茎环结构19bp干扰序列特异性shRNA模板,体外定向克隆构建特异性重组质粒真核表达载体;通过体外大鼠脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制模型,脂质体介导RNA干扰分子转染,由实时荧光定量RT-PCR及western blot技术,观察RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果,筛选最佳GFAP表达干扰抑制真核表达载体。主要观察指标:①序列特异性干扰shRNA模板合成;②构建特异性重组质粒真核表达载体;③体外大鼠脊髓源星形胶质细胞培养;④实时荧光定量RT-PCR;⑤RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果。结果:序列测定证实GFAP-shRNA重组质粒真核表达载体构建成功,通过实时荧光定量RT-PCR、western blot技术筛选出最佳GFAP-shRNA效应表达载体,在mRNA及蛋白表达水平抑制靶基因表达效率分别为81%、63%、56%。结论:构建并筛选成功的GFAP-shRNA效应真核表达载体,在大鼠原代星形胶质细胞GFAP表达抑制模型中能高效抑制GFAP-基因表达,为后续多靶点RNA干扰技术在脊髓损伤胶质瘢痕抑制基因治疗研究策略的应用奠定前期基础。     

Effects of the Cell Cycle Inhibitor Olomoucine on Inflammatory Response and Neuronal Cell Death after Spinal Cord Injury in Rats

Objective:The influence of olomoucine on microglial proliferation with associated inflammatory response after spinal cord injury has been determined.Methods:Microglial proliferation and neuronal apoptosis were observed by immunofluorescence.Level of the proinflammatory cytokine interleukin-1β(IL-1β)expression in the injured cord was determined by Western blot analysis.Results:the cell cycle inhibitor olomoucine,administered at 1 h post injury,significantly suppressed microglial proliferation and produced a remarkable reduction of tissue edema formation.In the olomoucine-treated group,a significant reduction of activated and/or proliferated microglial induced IL-1β expression was observed 24 h after SCI.Moreover,olomoucine evidently attenuated the number of apoptotic neurons after SCI.Conclusion:Our findings suggest that modulation of microglial proliferation with associated proinflammatory cytokine expression may be a mechanism of cell cycle inhibition-mediated neuroprotections in the CNS trauma.     

Cellular effects of olomoucine in human lymphoma cells differing in p53 function

Olomoucine, a purine derivative, inhibits multiple cyclin-dependent kinases that play important roles in regulating the G1/S and G2/M transitions of the cell cycle. In this study we investigated the cellular effects of olomoucine in two human Burkitt's lymphoma cell lines, WMN (containing wild-type p53) and CA46 (containing mutant p53), and found that in consistency with its ability to block the activity of cyclin E/Cdk2 and cyclin B1/Cdc2 kinases, olomoucine caused cell cycle arrest at both G1/S and G2/S boundaries. Moreover, cell cycle arrest occurred equally well in these two cell lines bearing different p53 gene status, suggesting that p53 was not responsible for the cell cycle arrest by olomoucine. A similar p53-independent fashion was also observed in the cytotoxic potency and apoptosis induction of olomoucine, in contrast to ionizing radiation which caused more cytotoxic activity and apoptosis in the WMN cell line bearing wild-type p53 compared with CA46 cells bearing mutant p53. Such p53-independent cytotoxicity of olomoucine was also confirmed in other human Burkitt's lymphoma and lymphoid cell lines containing wild-type and mutant p53. Therefore, our results give an impetus to continued research into olomoucine that might be a very useful chemotherapeutic strategy in the treatment of patients with mutant p53 tumors, at least in lymphoma patients. Copyright Copyright 1999 S. Karger AG, Basel.