X射线对体外培养星形胶质细胞增殖的影响及机制研究

目的：观察X射线照射对培养星形胶质细胞（AS）增殖的影响,为X射线的广泛应用提供理论依据。方法：将体外培养80%汇合的AS,在AS无血清培养基继续培养48h后分为对照组和放疗组,对照组更换含10%FBS的DMEM-F12培养基,放疗组更换含10%FBS的DMEM-F12培养基,并同时给与X射线照射,利用western印迹分析各组PCNA、p53、cyclinE的表达。结果：X射线照射后能降低S期细胞比率,呈剂量依赖性,但并不增加AS的凋亡率。通过对AS无血清培养48h后,大部分细胞周期同步于G0期,对照组更换培养基后12h出现PCNA、cyclinE表达水平增高;放疗组p53表达水平较对照组显著增高,PCNA、cyclinE表达水平较对照组显著降低。结论：X射线照射可以通过调控细胞周期有效抑制AS的增生。     

选择性CDK抑制剂对大鼠局灶性脑缺血后胶质增殖及疤痕形成的抑制作用

目的:探讨选择性周期素依赖性蛋白激酶抑制剂Olomoucine对局灶性脑缺血后星形胶质细胞增殖及胶质疤痕形成的抑制作用。方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组12只、模型组27只和干预组33只。3组均手术暴露颅骨,模型组和干预组建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型,之后干预组腹腔注射Olomoucine,分别将3组大鼠于处理后3、7、30 d处死,应用免疫组织化学法检测梗死灶周围胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;Western blot法观察损伤侧皮质GFAP、增殖细胞核抗原(PCNA)、周期素蛋白A(CyclinA)和周期素蛋白B1(Cy-clinB1)的表达。结果:缺血后各组梗死灶边缘区GFAP表达明显增强,缺血后7和30 d模型组GFAP表达明显强于干预组(P<0.05),并且7和30 d对照组缺血边缘区可见胶质疤痕形成,尤以30 d最为明显;GFAP、PCNA、Cy-clinA和CyclinB蛋白的表达,模型组明显高于干预组(P<0.05)。结论:Olomoucine可部分抑制胶质细胞的活化增殖及疤痕的形成。该结果提示调控细胞周期可能是治疗脑缺血新的方向。     

AG1478对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生的影响

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生的影响。方法:SD大鼠60只,随机分为对照组,AG1478组和假手术组,各组20只。观察AG1478对大鼠脊髓损伤后磷酸化表皮生长因子受体(pEGFR)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达、髓鞘脱失、神经功能恢复及体重的影响。结果:AG1478组大鼠pEGFR和GFAP的表达较对照组明显减弱(P0.01),损伤区脱髓鞘范围明显较对照组减小(P0.01),BBB评分明显高于对照组(P0.01),体重较对照组增加更明显(P0.05)。结论:AG1478可能通过阻断星形胶质细胞上的EGFR通路抑制胶质增生,促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复。     

细胞周期抑制剂对局灶性缺血缺氧性脑损伤后神经细胞凋亡的影响

目的探讨细胞周期抑制剂对脑神经细胞凋亡的影响。方法采用光化学方法制作局灶性缺血模型,干预组大鼠腹腔注射细胞周期抑制剂Olomoucine。用HE染色测定皮层梗死灶的体积;免疫组织化学法观察缺血后第3天假手术组、缺血对照组和干预组大鼠梗死灶周围凋亡细胞的表达;用聚丙烯酰胺凝胶电泳(Westernblot)观察Caspase3蛋白的表达。结果对照组梗死灶明显大于干预组;干预组梗死灶周围凋亡细胞数较假手术组显著增高,但明显低于对照组(P<0.05);Westernblot显示Caspase3蛋白的表达,干预组较假手术组增高(P<0.05),而较对照组明显降低(P<0.05)。结论脑缺血损伤后细胞周期调控参与了神经细胞的凋亡过程。     

氯沙坦干预早期动脉粥样硬化家兔内膜增生的相关因素

目的:探讨血管紧张素II受体拮抗剂氯沙坦对加速性动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)早期家兔血管单核细胞趋化蛋白-1(monocytechemoattractantprotein-1,MCP-1)及丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinases,MAPK)蛋白表达的影响。方法:以家兔加速性动脉粥样硬化早期模型为研究对象,将24只家兔随机分成对照组、早期动脉粥样硬化组和氯沙坦干预组,每组8只,采用组织学、免疫细胞化学和生物化学方法评价加速性AS早期家兔血管组织学、增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)、MAPK和MCP-1蛋白表达和组织胆固醇含量的改变。结果:早期动脉粥样硬化组血管内膜与中膜厚度比值、内膜PCNA阳性细胞数明显增加,MAPK与MCP-1蛋白表达平均光密度值均显著增加(P<0.001),氯沙坦干预组内膜与中膜厚度比值较早期动脉粥样硬化组显著下降(0.92±0.10和0.23±0.04,t=30.086,P<0.001),PC-NA阳性细胞数明显减少(t=23.944,P<0.001),血管壁MAPK与MCP-1蛋白表达水平明显下降(0.025±0.006和0.054±0.007,0.057±0.006和0.205±0.019,F=265.14,410.55,P<0.001),主动脉组织胆固醇含量明显降低(t=3.913,P<0.05)。结论:氯沙坦干预可抑制血管损伤时MCP-1及MAPK蛋白表达,减轻加速性AS病变血管内膜增生,减少胆固醇     

地塞米松干预大鼠星形胶质细胞周期素的表达及细胞周期进程

背景:有研究表明地塞米松可引起星形胶质细胞凋亡,但其机制不清,有关地塞米松干扰星形胶质细胞的周期素表达的作用未见报道。目的:观察地塞米松引起大鼠星形胶质细胞凋亡与周期素表达的关系。方法:将不同浓度的地塞米松(0,10-5,10-4,10-3mol/L)与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24h后,经流式细胞仪检测细胞周期,并用免疫细胞化学方法检测周期素A和E在星形胶质细胞内的表达。结果与结论:地塞米松10-5,10-4mol/L浓度组G1期细胞指数较对照组增加(P<0.05,P<0.01),10-3mol/L组的S期细胞指数较对照组明显升高(P<0.01);周期素A的表达随着地塞米松浓度的升高而减弱(P<0.05)。周期素E的表达在地塞米松0,10-5,10-4mol/L组随着地塞米松浓度的升高而减弱(P<0.05),但在10-3mol/L浓度组反而表达增强(P<0.01)。说明地塞米松10-5,10-4mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于G1期且与周期素A和E表达降低有关,地塞米松10-3mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于S期主要与周期素A表达降低有关。     

细胞周期依赖的蛋白激酶抑制剂Olomoucine对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖表达的影响

目的探讨细胞周期抑制剂Olomoucine对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)表达的影响及意义。方法建立大鼠脊髓半切损伤模型,随机分为假手术组、损伤对照组和Olomoucine干预组,采用免疫印迹分析脊髓损伤后CSPGs的表达;应用免疫荧光技术检测损伤区域胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和CSPGs的表达;采用改良Gale联合评分法对大鼠瘫痪后肢进行运动功能评估。结果脊髓损伤后星形胶质细胞明显活化增殖,GFAP和CSPGs的表达显著高于假手术组(P<0.05),010moucine干预可有效下调GFAP和CSPGs的表达(P相似文献   

甲状腺癌组织中p27和增殖细胞核抗原的表达及其相关性分析

目的探讨甲状腺癌组织中p27和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况及其相关性。方法用免疫组织化学法检测86例甲状腺癌(甲状腺癌组)、54例甲状腺腺瘤(腺瘤组)和瘤旁正常甲状腺组织(正常组)中p27和PCNA的表达情况。结果 p27在甲状腺癌组阳性表达率分别为37.21%,高于腺瘤组和正常组,差异有统计学意义(P<0.01)。PCNA在甲状腺癌组阳性表达率为66.27%,高于腺瘤组和正常组,差异有统计学意义(χ2=22.16,P<0.01)。p27在甲状腺乳头状癌、滤泡癌、髓样癌和未分化癌中的阳性表达率分别为48.94%、31.25%、14.29%和11.11%,差异有统计学意义(χ2=8.85,P<0.05);PCNA在乳头状癌、滤泡癌、髓样癌和未分化癌中的阳性表达率分别为53.19%、75%、85.71%和88.89%,差异有统计学意义(χ2=8.57,P<0.05)。甲状腺癌p27和PCNA表达呈负相关(r=-0.51,P<0.01)。结论 p27和PCNA在甲状腺癌中的阳性表达明显减少,并且随着分化程度降低减少更为明显;而PCNA在甲状腺癌中的阳性表达明显增加,并且随分化程度降低增加更为明显;并且p27和PCNA表达呈负相关。     

周期素依赖激酶抑制剂对大鼠局灶性脑梗死后胶质增生的影响

目的　通过抑制细胞周期素依赖激酶 (cyclin dependentkinase ,CDKs) ,对星形胶。质细胞增殖进行干预 ,以探讨其对胶质增生的影响。方法　建立大鼠大脑中动脉阻塞 (middlecerebralarteryocclusion ,MCAO)再灌流模型 ,随机分为脑缺血对照组和干预组 (分别于再灌流后第 3天、第 5天腹腔注射CDKs抑制剂 ) ,应用免疫印迹和免疫组织化学方法检测各组MCAO后第 4周损伤侧皮层胶质纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)的表达 ;并通过HE染色对皮层中风囊体积进行测定 ,观察CDKs抑制剂对胶质增生的影响。结果　MCAO后第 4周 ,皮层可形成明显的中风囊 ,并且在胶质瘢痕附近存在密集、活化的星形胶质细胞 ;损伤侧皮层GFAP蛋白的表达明显增强。经给予CDKs抑制剂处理后 ,可明显缩小中风囊体积 (P <0 0 5 ) ,并部分抑制了GFAP蛋白的表达 (P <0 0 5 )以及星形胶质细胞的过度增殖。结论　通过对细胞周期蛋白的调控 ,可部分抑制胶质增生 ,从而有可能为神经再生和功能重建提供更有利的生存环境。     

HD02对新生大鼠海马神经干细胞增殖分化和细胞周期的影响

目的观察 HD02对新生大鼠体外培养神经干细胞( neural stem cell,NSC)增殖、分化和凋亡的影响. 方法分离、培养新生大鼠海马 NSC,采用免疫荧光双标技术检测 NSC增殖分化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化. 结果 HD02的中低剂量组 BrdU阳性细胞数、 BrdU+ Nestin,BrdU+ NeuroD,BrdU+ NF200,BrdU+ GFAP,BrdU+ Oli阳性细胞数和 S期细胞比率明显高于空白对照组和 EGB761组 (P< 0.01), G0/G1期比率 (51.12± 3.66)%明显低于正常对照组 (68.23± 3.30)%;细胞凋亡率 (5.18± 0.80)%与 EGB761(4.98± 0.40)%相比差异无显著性意义 (P >0.05),但却明显低于正常对照组 (6.43± 0.55)% (P< 0.01). 结论HD02能显著促进 NSC增殖分化.其机制可能与缩短 G0/G1期、减少凋亡、促进 S期比率有关.     

Effect of Cell Cycle Inhibitor Olomoucine on Astroglial Proliferation and Scar Formation after Focal Cerebral Infarction in Rats

Background:Astrocytes become reactive following many types of CNS injuries.Excessive astrogliosis is detrimental and contributes to neuronal damage.We sought to determine whether inhibition of cell cycle could decrease the proliferation of astroglial cells and therefore reduce excessive gliosis and glial scar formation after focal ischemia.Methods:Cerebral infarction model was induced by photothrombosis method.Rats were examined using MRI,and lesion volumes were estimated on day 3 post-infarction.The expression of glial fibrillary acidic protein(GFAP) and proliferating cell nuclear antigen(PCNA) was observed by immunofluorescence staining.Protein levels for GFAP,PCNA,Cyclin A and Cyclin B1 were determined by Western blot analysis from the ischemic and sham animals sacrificed at 3,7,30 days after operation.Results:Cell cycle inhibitor olomoucine significantly suppressed GFAP and PCNA expression and reduced lesion volume after cerebral ischemia.In parallel studies,we found dense astroglial scar in boundary zone of vehicle-treated rats at 7 and 30 days.Olomoucine can markedly attenuate astroglial scar formation.Western blot analysis showed increased protein levels of GFAP,PCNA,Cyclin A and Cyclin B1 after ischemia,which was reduced by olomoucine treatment.Conclusion: Our results suggested that astroglial activation,proliferation and subsequently astroglial scar formation could be partially inhibited by regulation of cell cycle.Cell cycle modulation thereby provides a potential promising strategy to treat cerebral ischemia.     

Effects of the Cell Cycle Inhibitor Olomoucine on Inflammatory Response and Neuronal Cell Death after Spinal Cord Injury in Rats

Objective:The influence of olomoucine on microglial proliferation with associated inflammatory response after spinal cord injury has been determined.Methods:Microglial proliferation and neuronal apoptosis were observed by immunofluorescence.Level of the proinflammatory cytokine interleukin-1β(IL-1β)expression in the injured cord was determined by Western blot analysis.Results:the cell cycle inhibitor olomoucine,administered at 1 h post injury,significantly suppressed microglial proliferation and produced a remarkable reduction of tissue edema formation.In the olomoucine-treated group,a significant reduction of activated and/or proliferated microglial induced IL-1β expression was observed 24 h after SCI.Moreover,olomoucine evidently attenuated the number of apoptotic neurons after SCI.Conclusion:Our findings suggest that modulation of microglial proliferation with associated proinflammatory cytokine expression may be a mechanism of cell cycle inhibition-mediated neuroprotections in the CNS trauma.     

Suppression of Astroglial Scar Formation and Enhanced Axonal Regeneration Associated with Functional Recovery in a Spinal Cord Injury Rat Model by the Cell Cycle Inhibitor Olomoucine

Objective：To determine if a cell cycle inhibitior, olomoucine, would decrease neuronal cell death, limit astroglial proliferation and production of inhibitory CSPGs, and eventually enhance the functional compensation after SCI in rats. Methods： Three were used as un-operated controls and twelve as sham operated controls. Follow- ing spinal cord injury, 48 rats were randomly and blindly assigned to either olomoucine （n=24） or vehicle treatment （n=24） groups. Results： Up-regulations of cell cycle components were closely associated with neuronal ceil death and astroglial proliferation as well as the production of CSPGs after SCI. Meanwhile, administration of olomoucine, a selective cell cycle kinase （CDK） inhibitor, has remarkably reduced the up-regulated cell cycle proteins and then decreased neuronal cell death, astroglial proliferation as well as accumulation of CSPGs. More importantly, the treatment with olomoucine has also increased expression of growth-associated proteins-43 （GAP-43）, reduced the cavity formation, and improved functional deficits. Conclusion： Suppressing astroglial cell cycle in acute spinal cord injuries is beneficial to axonal growth, in turn, the future therapeutic strategies can be designed to achieve efficient axonal regeneration and functional compensation after traumatic CNS injury.     

体外培养大鼠星形胶质细胞划伤模型

目的复制体外培养大鼠星形胶质细胞划伤模型。方法利用传至第2代的体外培养的大鼠星形胶质细胞进行细胞划伤实验。分别于划伤前10min、划伤后1、3、6、12、24h观察细胞形态变化,并取培养上清液进行乳酸脱氢酶活性测定。结果细胞划伤后划痕两侧边缘整齐,随时间推移细胞突起逐渐向划痕区延伸,且划痕区出现星形胶质细胞。细胞划伤后乳酸脱氢酶漏出量短时间内迅速增加,之后各时间点持续增加(P<0.05),且均高于相应时间点的对照组(P<0.05)。结论细胞形态变化及培养上清液中乳酸脱氢酶漏出量证实体外培养大鼠星形胶质细胞划伤模型复制成功。     

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注损伤肾组织细胞增殖的影响

目的探讨外源性的骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)对缺血再灌注肾损伤的肾组织细胞增殖的影响。方法取SD雄性大鼠胫、股骨骨髓,percoll密度梯度分离法分离骨髓MSCs。32只雌性SD大鼠复制缺血再灌注肾损伤的模型,随机分为两个组:移植组和对照组。移植组经下腔静脉移植骨髓MSCs,对照组给予等量生理盐水,分别于1天、2天、3天、4天处死大鼠,两组大鼠每天均经腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶(bromodeoxyuridine,BrdU)。留取肾组织采用免疫组织化学染色方法检测BrdU阳性细胞在肾组织内的分布情况。结果在缺血再灌注后的第二天,移植组和对照组都有表达BrdU阳性细胞,并随时间延长BrdU阳性细胞个数逐渐增多,但移植组BrdU阳性细胞明显高于对照组,两者有统计学意义(P值<0.05)。结论移植的外源性骨髓MSCs能够促进损伤肾脏的细胞增殖,参与肾损伤的修复。     

E-cadherin和PCNA在胃癌中的表达

目的:研究胃癌中上皮钙粘附素(epithelial cadherin,E-cadherin)和增殖细胞核抗原(Proliferating cell nu-clear antigen,PCNA)表达的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测胃癌 60例手术后的存档石蜡切片组织中E-cad-herin、PCNA的表达情况。结果:65％(39/60)的胃癌病例E-cadherin的表达减弱,35％(21/60)的病例E-cadherin的表达正常。50％(30/60)的胃癌病例PCNA呈高表达,50％(30/30)的病例PCNA呈低表达。二者的表达有相关性(P<0.05)。结论;E-cadherin表达正常对胃癌细胞增殖有抑制作用,E-cadherin的表达减弱后细胞增殖能力增加;E-cadherin对胃癌细胞增殖的抑制作用是不完全的。     

电针对局灶性脑缺血成年大鼠内源性神经干细胞增殖的影响

目的：研究成年大鼠脑缺血后缺血脑区神经干细胞增殖情况及电针干预对其影响,探讨电针治疗缺血性脑损伤的作用机制。方法：采用开颅热凝闭法制作大脑中动脉闭阻（MCAO）模型,随机分为模型组与电针组,缺血后用溴脱氧尿苷（BrdU）腹腔注射标记增殖的神经细胞。选用“大椎”、“百会”行电针干预,采用BrdU免疫组化观察脑缺血后第3d、7d、14d与21d四个不同时相BrdU阳性细胞数量的变化情况。结果：脑缺血后不同时相缺血侧皮质、齿状回、纹状体和SVZ均有BrdU阳性细胞,其中第7d的阳性细胞数量增加最为显著（P〈0．01）;而且电针组在不同时相的细胞数量均较同时相模型组有明显的增加（P〈0．05或P〈0．01）。结论：缺血可激发相关脑区神经干细胞的增殖。电针可起到促进作用,推论这种作用可能是电针治疗脑缺血的重要作用机制之一。