低分子量肝素和地塞米松对PNH患者红细胞体外抑制溶血作用的研究

目的 研究低分子量肝素和地塞米松对阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者红细胞体外溶血的作用。方法 采集6例典型溶血发作的PNH患者外周血，采用Ham试验、微量补体溶血敏感试验（mCLST)检测单独或联合加入不同剂量的低分子量肝素和地塞米松后对溶血的影响；同时检测各种不同剂量的药物对活化部分凝血活酶时间（APTT）的影响。结果 （1）低分子量肝素、地塞米松体外对PNH患者的红细胞均有抑制溶血的作用，此种作用随剂量的增大而增大。当同时加入上述两种治疗量的药物时，对溶血的抑制作用明显加强。同时，在此种剂量下APTT的延长未超过2倍。（2）Ham试验检测时地塞米松有抑制溶血的作用，mCLST检测时地塞米松随加入方法的不同对溶血的作用不同。低分子量肝素在Ham和mCLST试验中均可发挥抑制溶血的作用。结论 低分子量肝素、地塞米松均有抑制PNH患者红细胞溶血的作用，其作用机制存在差异；二者具有协同作用，治疗剂量对出凝血的影响较小，在PNH患者红细胞溶血发作的治疗中有应用前景。     

CD55/CD59缺陷检测及其在阵发性睡眠性血红蛋白尿诊断中的意义

目的：应用外周血红细胞CD55和CD59的检测并结合相关检验，建立有效的诊断和鉴别诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)的实验体系。方法：运用流式细胞术检测10例PNH患外周血红细胞和粒细胞的CD55和CD59，并分别对缺陷红细胞作激光散射分析(FS)及FS／CD55和FS／CD59双参数分析，结合溶血性贫血(溶贫)相关其他检验，作出PNH诊断。结果：5例PNH发作期患酸溶血试验呈阳性，CD55和CD59缺陷红细胞在流式细胞术检测中具有特征性的改变；5例PNH缓解期酸溶血试验等无明显改变，患外周血CD55和CD59缺陷红细胞的数量较少。运用流式细胞术分别作红细胞FS／CD55和FS／CD59双参数分析，发现CD59缺陷与红细胞FS具有相关性。正常红细胞与缺陷红细胞的FS分布存在明显差异。部分再生障碍性贫血患外周血也存在PNH样细胞，但FS／CD59检测结果与PNH患具有不同特征。结论：流式细胞术检测外周血红细胞CD55和CD59缺陷结合溶血性贫血的常规检验可对PNH作出较明确的诊断和鉴别诊断。     

CD55、CD59检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症标准方法建立

目的建立流式细胞术(FCM)检测阵发性睡眠性血红蛋白尿症(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuriaP,NH)的标准方法。方法应用FCM对49例PNH病人,18例自身免疫性溶血性贫血(AIHA),10例缺铁性贫血(IDA),正常对照40例;采用活细胞直接免疫荧光标记法检测红细胞和粒细胞膜表面的CD55和CD59的表达。结果49例PNH病人除2例红细胞CD55-、CD59-的百分率小于5%,其余病例红细胞和粒细胞CD55-、CD59-的百分率均大于5%(5.9%￣79.1%)。18例AIHA病人红细胞和粒细胞CD55-、CD59-的百分率均小于5%。10例IDA病人有8例红细胞CD55-、CD59-的百分率均大于5%(5.0%￣9.1%),而粒细胞CD55-、CD59-的百分率均小于5%。40例正常对照红细胞和粒细胞CD55-、CD59-的百分率均小于5%。49例PNH病人蛇毒因子试验5例阴性;糖水试验4例阴性、酸溶血试验5例阴性。而这其中仅2例病人蛇毒因子试验、糖水试验、溶血试验同时阴性。其余病人蛇毒因子试验、糖水试验、酸溶血试验均阳性。结论同时检测红细胞和粒细胞膜的CD55和CD59诊断PNH,该方法的灵敏度与特异性均高达100%。因此,针对国内其他单位在开展此项目时仅检测CD55或CD59,或者只检测红细胞或白细胞的CD55、CD59的情况,作者认为同时检测红细胞和粒细胞膜的CD55和CD59诊断PNH是值得在临床推广的标准方法。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者血细胞表面CD55和CD59的检测及临床意义

目的探讨红细胞和粒细胞膜CD55与CD59抗原表达在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)诊断中的应用。方法采用流式细胞术结合直接免疫荧光法检测25例PNH、20例再生障碍性贫血(AA)、20例健康对照者外周血红细胞和粒细胞膜CD55和CD59抗原的表达,并同时做酸化血清溶血试验(Ham试验)、蔗糖溶血试验和尿含铁血黄素试验(尿Rous试验)。结果与AA组和健康对照组相比,PNH患者外周血红细胞、粒细胞膜CD55、CD59表达缺失率均明显增高(P<0.05);而AA组和健康对照组缺失率均小于5%,且两者之间差异没有统计学意义(P>0.05)。25例PNH患者中,9例Ham试验阴性,6例蔗糖溶血试验阴性,7例尿Rous试验阴性,这些患者的红细胞、粒细胞的CD55、CD59表达缺失率均大于5%。结论利用流式细胞术同时检测患者红细胞和粒细胞膜CD55与CD59抗原对PNH的诊断与鉴别诊断具有重要价值。     

体外转运红细胞囊泡的GPI锚定蛋白cD59保护阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种后天获得性克隆溶血疾病,由于血细胞膜上缺乏具有调节蛋白补体的GPI-锚定蛋白如CD59和CD55等,所以对补体敏感,易产生溶血。红细胞存储或ATP耗空时有囊泡释放,经免疫印迹试验证明囊泡中富含CD59。应用免疫亲和层析柱分离PNH CD59~-红细胞,然后与红细胞囊泡保温,保温后分别测定PNH CD59~-细胞表面CD59含量和溶血度。用流式细胞仪测定CD59,结果发现保温后CD59含量增加;用蛇毒因子溶血试验测得溶血度有显著下降。体外实验证明囊泡上的CD59可以转运到PNH CD59~-红细胞上,并具有抑制补体溶血的功能,使PNH CD59~-红细胞在受补体攻击时不易溶血。     

CD55和CD59检测对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿的意义

目的：探讨检测患者红细胞和中性粒细胞膜上CD55和CD59表型的缺失对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）的意义。方法：应用流式细胞仪间接免疫荧光标记法检测40例正常人（对照组），29例PNH患者（PNH组），16例自身免疫性溶血性贫血患者（AIHA组），12例缺铁性贫血患者（IDA组）的红细胞和中性粒细胞CD55和CD59表型的缺失情况。结果：PNH组红细胞和中性粒细胞CD55^-、CD59^-的百分率与对照组比较有显著性差异（P〈0．01），AIHA组、IDA组与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：利用流式细胞术同时检测患者红细胞和中性粒细胞膜CD55和CD59表型的缺失是目前诊断PNH最可靠、最敏感的方法。     

用外周血细胞免疫表型诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿

最近发现,阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)患者血细胞膜缺乏磷脂酰肌醇聚糖(PIG)参与构成的表面分子。作者用免疫荧光法检测PNH 患者外周血细胞PIG-表面分子,以明确其对PNH 诊断的意义。12例PNH 受检者均为酸溶血试验阳性。经抗PIG-表面分子的单克隆抗体CD59(红细胞)、CD55(多形核中性粒细胞)和CD48(淋巴细胞和单核细胞)等检测表明,全部患者的红细胞、中性粒细胞和单核细胞均有PIG-表面分子缺乏细胞;11例患者的     

81例阵发性睡眠性血红蛋白尿症实验室资料分析

目的评价阵发性睡眠性血红蛋白尿症的实验室特点。方法对1997年7月~2003年7月我院PNH病例进行回顾性分析。结果81例PNH患者中,常用的酸化血清溶血(H am's)试验阳性率97.4%,蛇毒因子溶血(COF)试验阳性率为85.1%,蔗糖溶血试验阳性率为100%,微量补体溶血敏感试验(M CLST)阳性率为94.6%。结论多种溶血试验联合应用有助于PNH的诊断。     

临床是如何应用“抗O”试验来帮助诊断风湿病的？

答：乙型溶血性链球菌能产生一种溶解人和兔红细胞的溶血毒素O。当该毒素遇到相应抗体时，毒性被中和而不出现溶血现象。目前临床诊断风湿病是否活动时，常用本试验测定血清中抗链球菌溶血素O抗体的含量。当抗体效价值高到400U以上时，表明该病人不久前或目前有溶血性链球菌感染。     

评估骨髓、外周血红细胞和粒细胞CD55、CD59检测在PNH诊断中的应用

目的评估骨髓红细胞、粒细胞CD55、CD59检测对阵发性睡眠性血红蛋白尿（paroxys—realnoturnal hemoglobinura,PNH）的诊断价值。方法收集107例PNH及其他-系至三系血细胞减少患者骨髓及外周血标本,采用流式细胞仪检测其红细胞、粒细胞CD55、CD59表达缺失情况。通过受试者工作特征（receiverOperatingcharacteristic,ROC）曲线评价各指标对PNH的诊断效能,并采用线性内插法计算其诊断PNH的诊断点。结果除PNH外,骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血、白血病及各类贫血患者的骨髓、外周血CD55-、CD59-红细胞、粒细胞比例,大多数均在5％以下。各疾病组间各指标比例差异均有统计学意义（P均〈0．05）。PNH患者各指标比例均较其他疾病患者高,且差异均有统计学意义（P均〈0．05）。造血干细胞疾病组与非造血干细胞疾病组的骨髓CD55-粒细胞比例差异无统计学意义（P〉0．05）。骨髓CD55-、CD59-红细胞、粒细胞比例诊断PNH的ROC曲线下面积均达0．700以上。各指标对PNH的诊断点分别为骨髓CD55红细胞4．81％,骨髓CD59-红细胞4．25％,骨髓CD55-粒细胞49．43％,骨髓CD59粒细胞4．63％,外周血CD55-红细胞3．99％,外周血CD59红细胞3．25％,外周血CD55-粒细胞4．17％,外周血CD59-粒细胞4．71％。结论骨髓红细胞、粒细胞CD55、CD59的诊断价值优于外周血,可以作为诊断PNH的辅助手段。     

嗜水气单胞菌hec毒素溶血试验诊断阵发性睡眠性血红蛋白 …

目的 研究嗜水气单胞菌ｈｅｃ毒素对红细胞的作用,为阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）的临床诊断提供一种新方法。方法 从患暴发性传染病的家养鲫鱼分离到嗜水气单胞菌,其培养上清经硫酸铵沉淀获得粗提毒素,经ＤＥＡＥ纤维素层析得提纯毒素。粗提毒素作用于ＰＮＨ和其他贫血患者及正常人的红细胞,采用９６孔板在波长６３０ｎｍ酶标仪比色;同时用ＣＤ５９单抗和ＦＴＴＣ标记的羊抗鼠ＩｇＧ标记红细胞,以流式细胞仪分析毒素     

Investigation of the survival of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria red cells through the immunophenotyping of reticulocytes

BACKGROUND: Complement-mediated lysis of red cells (RBCs) is a classic feature of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) that is traditionally studied with a combination of radiolabeling of RBCs and in vitro hemolysis tests. Phenotyping of reticulocytes was used as an alternative method for the evaluation of the relative life span of normal RBCs (PNH I) and RBCs that were partially (PNH II) or completely (PNH III) deficient in CD59. STUDY DESIGN AND METHODS: Murine monoclonal antibodies CD55, CD58, and CD59 and thiazole orange were used to phenotype reticulocytes by two-color flow cytometry in nine PNH patients. RBC survival could be calculated from the ratio of CD59- or CD59low mature RBCs to CD59- or CD59low reticulocytes obtained from these patients who had not received a transfusion. RESULTS: The life span of PNH III RBCs varied from about 17 to 60 days. PNH II reticulocytes were found in the four patients with PNH II RBCs. The life span of PNH II RBCs varied with their residual expression of CD59, and cells with 15 to 20 percent of the normal amount of CD59 were protected against in vivo hemolysis. CONCLUSION: Phenotyping of reticulocytes is a convenient and reliable tool for evaluating the relative survival of normal and PNH RBCs. PNH II and PNH III reticulocytes are phenotypically distinct, and some PNH II RBCs may be sensitive to complement-mediated lysis in vitro, but normally they are complement-resistant in vivo.     

CD59检测在阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断中的意义

目的　探讨CD5 9检测对阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (paroxysmalnocturnalhemoglobinuria ,PNH)及再生障碍性贫血 (AA) PNH综合征的临床诊断意义。方法　用FITC标记的CD5 9单抗 ,以流式细胞仪检测 13例PNH、37例AA和 2 0例正常人外周血红细胞和粒细胞膜表面CD5 9的表达情况。结果　正常人红细胞和粒细胞CD5 9表达阳性率均 >98% ;13例PNH患者红细胞及粒细胞CD5 9表达阳性率均 <90 % ;37例再障患者中 2 4例表达正常 ,13例红细胞或粒细胞CD5 9表达阳性率均有不同程度的减低。结论　CD5 9检测是诊断PNH较直接而又特异、敏感的方法 ,特别是对表现不典型的PNH及AA PNH综合征的诊断具有重要意义     

Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and the transfusion of washed red cells. A myth revisited

Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) is an uncommon, acquired clonal stem cell disorder primarily affecting red cells that have an abnormal sensitivity to complement lysis. Since 1948, the use of saline-washed red cells (WRBCs) has been advocated to minimize hemolysis after transfusion to patients with PNH. Thirty-eight years of experience (1950 through 1987) with patients who had PNH were reviewed. Twenty-three patients with a positive Ham's test had been transfused with 556 blood components, including 431 RBC products: 94 units of whole blood, 208 units of packed RBCs, 80 units of white cell-poor RBCs, 38 units of WRBCs, 5 units of frozen RBCs, and 6 units of intraoperatively salvaged RBCs. Only one documented episode of posttransfusion hemolysis related to the underlying diagnosis of PNH was found, and it was associated with the transfusion of a unit of type O whole blood to an AB-positive individual. This unit contained ABO-incompatible plasma; this case was similar to one in an earlier report from which originated the recommendation for using WRBCs. The posttransfusion increment in hemoglobin concentration in patients receiving ABO-identical packed RBCs was comparable to that in patients receiving frozen or washed RBCs. These findings indicate that the use of WRBCs is unnecessary and that patients with PNH should be transfused with group-specific blood and blood products.     

PNH异常红细胞的计数及其意义

采用乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）单抗结合荧光免疫标记红细胞，通过流式细胞仪直接对单个红细胞膜上ＡｃｈＥ进行定量检测，发现阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者体内红细胞可分为两个类群，一群ＡｃｈＥ含量正常（ＡｃｈＥ（＋）］，一群ＡｃｈＥ缺失［ＡｃｈＥ（一）］；ＡｃｈＥ（－）红细胞百分率与蛇毒因子（ＣｏＦ）诱发的补体溶血率呈正相关；经ＣｏＦ诱发补体溶血后，仍可发现有对补体不敏感但无ＡｃｈＥ的异常红细胞，说明对补体不敏感的红细胞仍有其它异常。本法有可能成为一种比补体溶血试验更灵敏、更特异并易定量的ＰＮＨ诊断方法。     

用流式细胞仪检测CD_(59)表型对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症的意义

目的：探讨根据免疫表型检出糖化肌醇磷脂（ＧＰＩ）缺陷细胞在阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）诊断中的意义。方法：用ＦＩＴＣ标记的ＣＤ５９单抗，以流式细胞仪分析２９例ＰＮＨ患者外周血及骨髓中ＣＤ５９－细胞的百分率。结果：正常人外周血红细胞、中性粒细胞（ＰＭＮ）及骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）中的ＣＤ５９－细胞均＜５％，而２８例ＰＮＨ红细胞的ＣＤ５９－细胞均＞１０％（１２．８％～９８．０％），２９例ＰＭＮ均＞１０％（１２．０％～９０．１％），１５例骨髓ＭＮＣ均＞１０％（１７．９％～７３．５％）。１０例表现不典型或Ｈａｍ试验阴性者经本法确诊为ＰＮＨ，７例疑为本病者经本法否定。结论：用流式细胞仪检测ＣＤ５９表型是目前诊断ＰＮＨ的较直接而又特异、敏感的方法。     

用流式细胞仪检测CE59表型对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症…

探讨根据免疫表型检出糖化肌醇磷脂缺陷细胞在阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断中的意义。方法：用ＦＩＴＣ标记的ＣＤ５９单抗，以流式细胞仪分析２９例ＰＮＨ患者外周血及骨髓中ＣＤ５９细胞的百分率。结论：用流式细胞仪检测ＣＤ５９表型是目前诊断ＰＮＨ的较直接而又特异，敏感的方法。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症血细胞免疫表型的研究

目的：探讨血细胞膜表面糖基磷脂酰肌醇（ＧＰＩ）锚蛋白分子表达异常在诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）时的意义。方法：应用一组单克隆抗体，采用免疫荧光法检测２２例ＰＮＨ患者粒细胞、红细胞、淋巴细胞的免疫表型。结果：发现ＰＮＨ患者粒细胞和红细胞膜表面与ＧＰＩ锚接蛋白有关的抗原ＣＤ５５和ＣＤ５９表达异常，而且较常规的溶血检查敏感。结论：检测血细胞膜表面ＧＰＩ锚蛋白分子表达可为确定或排除ＰＮＨ的诊断提供敏感、特异的证据。     

Serum-Red Cell Interactions at Low Ionic Strength: Erythrocyte Complement Coating and Hemolysis of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria Cells

Complement coating and hemolysis were observed when erythrocytes from patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) were incubated in isotonic sucrose solution in the presence of small amounts of serum. Normal cells were likewise coated with complement components but did not hemolyze. Both normal and PNH erythrocytes reduced the hemolytic complement activity of the serum used in this reaction.Experience with other simple saccharides and related compounds suggests that the low ionic strength of the sucrose solution is the feature that permitted complement coating of red cells and hemolysis of PNH erythrocytes. Isotonic solutions of other sugars or sugar alcohols that do not readily enter human erythrocytes could be substituted for sucrose.The mechanism for these reactions may possibly relate to the agglutination observed with erythrocytes tested in the serum-sucrose system. Even though PNH hemolytic activity could be removed by prior heating of serum or barium sulfate treatment of plasma, the agglutination phenomenon still persisted.The in vitro conditions necessary for optimal sucrose hemolysis of PNH erythrocytes were described and compared with those of the classical acid hemolysis test. The requirement for less serum in the sucrose hemolysis system than needed in the standard acid hemolysis reaction makes certain experiments, especially those using large amounts of autologous PNH serum, much more feasible. Additional advantages of the sucrose hemolysis test are that it can be carried out at room temperature in the presence of oxalate and citrate and that critical pH control is not essential. To date, the sucrose hemolysis test has been a sensitive and specific one for PNH. A modified test used for screening purposes, the "sugar water" test, is very easy to perform.     

从再生障碍性贫血患者检出阵发性睡眠性血红蛋白尿症异常细胞的观察

目的：探讨在再生障碍性贫血（再障）患者中检出阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）异常细胞的发生率。方法：用荧光标记的抗ＣＤ５９抗体，以流式细胞仪检测缺失ＣＤ５９的异常细胞。结果：１０名正常人骨髓单个核细胞及外周血红细胞和中性粒细胞的ＣＤ５９标记率均＞９５％。２３例再障患者中约２／３标记率正常，另外１／３患者的标记率有不同程度的减低。结论：该法是从再障患者检出少量ＰＮＨ异常细胞的良好手段，可用以早期发现再障－阵发性睡眠性血红蛋白尿症综合征。