FAM83H在食管鳞癌中的表达及对癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：食管鳞癌是常见的消化道恶性肿瘤，基因异常表达参与食管鳞癌的恶性生物学行为。探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）诱导的FAM83H在食管鳞癌组织中的表达水平，以及其表达水平与临床病理学参数之间的关系，初步研究FAM83H对食管癌细胞生物学行为的影响。方法：用TGF-β1处理食管癌细胞Eca109后，在倒置显微镜下观察Eca109细胞形态学的变化。应用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测TGF-β1处理前后食管癌细胞中上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）相关标志物以及FAM83H表达水平的变化。应用RTFQ-PCR检测FAM83H在不同食管癌细胞系、67例2015—2017年河北医科大学第四医院生物样本库收集的食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的表达情况，并分析其表达水平与临床病理学参数之间的关系。应用MTS实验以及transwell小室迁移、侵袭实验检测FAM83H在体外对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果：TGF-β1处理后，Eca109细胞的形态变为细长梭形、纺锤形，呈现出明显的间充质细胞形态；Eca109细胞中E-cadherin表达水平降低，而N-cadherin、vimentin、Snail、Twist 1表达水平均显著升高（P<0.05）。同时，TGF-β1处理后，FAM83H表达水平上调（P<0.01）。FAM83H在食管鳞癌组织中表达升高（P<0.05），与食管鳞癌患者病理学分化程度相关（P<0.05）。FAM83H在食管癌细胞系中表达升高（P<0.01）。转染针对FAM83H的小干扰RNA后，可以显著抑制FAM83H的表达水平（P<0.05）。在体外FAM83H促进食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.05）。结论：TGF-β1诱导EMT过程以及FAM83H表达，FAM83H表达水平升高可能与食管鳞癌的发生、发展相关，且在体外促进食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

TGF-β诱导的linc01503促进食管鳞状细胞癌细胞的增殖、侵袭及EMT过程

目的：探讨长链非编码RNA（long noncoding RNA，lncRNA）linc01503 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell cancer，ESCC）组织和细胞中的表达及其对ESCC 细胞增殖、侵袭及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的影响。方法：选取2012 年1 月至2014 年12 月河北医科大学第四医院收治的119 例ESCC患者的癌及癌旁组织标本，应用qPCR法检测ESCC 组织及ESCC 细胞系（Kyse150、Kyse170、Eca109、TE1 和TE13）中linc01503 的表达水平；分别用pGPU6-shRNAlinc01503转染、TGF-β1 处理ESCC 细胞，用qPCR 法检测转染前后EMT相关基因及处理前后linc01503 表达的变化，用MTS及Transwell 小室法检测linc01503 对ESCC细胞增殖及侵袭的影响。结果：linc01503 在ESCC组织和细胞系中高表达（均P<0.05），ESCC组织中linc01503 高表达与患者淋巴结转移、浸润深度、TNM分期有关联，并与生存期密切相关（均P<0.05）。TGF-β 处理促进ESCC细胞的EMT过程，同时诱导linc01503 表达明显上调。linc01503 敲低明显抑制细胞的增殖及侵袭能力（均P<0.05），同时明显增加了E-cadherin 的表达而降低了N-cadherin、vimentin 基因的表达（均P<0.05）。结论：linc01503 作为TGF-β 的下游效应基因之一，促进了ESCC细胞的增殖、侵袭及EMT过程。     

过表达lncRNA LINC00886 抑制食管鳞状细胞癌Eca109 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的: 检测lncRNA LINC00886 在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织及细胞系中的表达及其对Eca109 细胞体外增殖、迁移及侵袭的影响。方法: 收集2014 年6 月至2016 年12 月河北医科大学第四医院生物标本库69 例ESCC手术患者的癌及对应的癌旁组织标本,以及ESCC细胞系Eca109、TE13、TE1、Kyse150、Yes-2 和Kyse170,用qPCR 法检测LINC00886 在ESCC组织及细胞系中的表达情况。分别用pIRES2-LINC00886、pIRES2-NC转染Eca109 细胞,用qPCR法检测pIRES2-LINC00886 转染Eca109细胞后LINC00886 的过表达效率;用MTS、克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell 侵袭实验分别检测过表达LINC00886 对Eca109 细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果: 在ESCC组织中LINC00886 表达水平明显低于癌旁组织（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期和淋巴结转移相关（均P<0.05）。LINC00886 在ESCC 细胞中的表达水平也低于对照组（均P<0.01）。转染pIRES2-LINC00886 后,Eca109 细胞中LINC00886 的表达水平显著高于对照组（均P<0.05）。与对照组相比,过表达LINC00886 明显抑制Eca109 细胞的增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.01)。结论: lncRNA LINC00886 低表达可能与ESCC的发生发展相关,过表达LINC00886可抑制ESCC细胞的增殖、迁移与侵袭能力。     

FOXD1 在食管鳞状细胞癌组织中表达的意义及其对TE1 细胞恶性生物 学行为影响的分子机制

目的：分析FOXD1 在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达及其与临床病理特征和患者预后的关系,探讨其对 ESCC TE1 细胞增殖、侵袭能力的影响及其对TGF-β1 诱导TE1 细胞EMT 进程的影响。方法：采用qPCR 和IHC 法检测ESCC 组 织和细胞中FOXD1 的表达,并分析其与临床病理特征和患者预后的关系;构建FOXD1 敲减质粒并转染TE1 细胞,检测其对TE1 细胞增殖、侵袭能力的影响;用qPCR 和WB 法检测TGF-β1 处理前后FOXD1 及EMT 相关基因和蛋白的表达变化及敲减FOXD1 对EMT 相关基因和蛋白表达的影响。结果：ESCC 组织和细胞中FOXD1 均呈高表达（均P<0.01）,并与患者OS 呈负相关;FOXD1 表达水平、肿瘤TNM 分期以及淋巴结转移均是影响ESCC 患者预后的独立危险因素（均P<0.01）。TGF- β1 可促进TE1 细胞FOXD1 的表达,并诱发其EMT 进程（均P<0.05）;敲减FOXD1 可抑制TE1 细胞的增殖和侵袭能力,并可部分逆转由TGF-β1 诱发的TE1 细胞EMT 进程。结论：FOXD1 在ESCC 组织及TE1 细胞中呈高表达且是影响ESCC 患者预后的独立危险因素,敲低 FOXD1 可显著抑制TE1 细胞的增殖、侵袭及TGF-β1 介导的EMT 进程。     

过表达miR-145-5p 通过下调IGF1R抑制食管鳞状细胞TE-10 细胞的恶性生物学行为

目的：探究miR-145-5p 对食管鳞状细胞癌TE-10 细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）等恶性生物学行为的分子机制。方法：qPCR法检测miR-145-5p 在食管鳞状细胞癌细胞和正常食管上皮细胞中的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-145-5p 与胰岛素样生长因子1 受体（insulin-like growth factor 1 receptor，IGF1R）的靶向调控关系，Western blotting 检测IGF1R蛋白和EMT相关蛋白的表达，CCK-8 法和Transwell 检测miR-145-5p/IGF1R分子轴对TE-10 细胞增殖、侵袭、迁移的影响。结果：miR-145-5p 在3 株食管鳞状细胞癌细胞中低表达且在TE-10 细胞中表达最低（P<0.01 或P<0.05）。过表达miR-145-5p 可显著抑制TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程（P<0.01 或P<0.05）。双荧光素酶报告基因证实miR-145-5p 靶向下调IGF1R表达（P<0.01）。回复实验进一步证实，与单独过表达IGF1R相比，同时过表达miR-145-5p 和IGF1R能显著缓解IGF1R 对TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT 进程的促进作用（P<0.01 或P<0.05）。结论：过表达miR-145-5p 通过靶向下调IGF1R进而抑制了食管鳞状细胞癌TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程。     

IQGAP1 在食管鳞状细胞癌中的表达及其对TE-2 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨具有IQ 结构域的GTP 激酶活化蛋白1（Ras GTPase-activating-like protein, IQGAP1）在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组织与细胞中的表达及其对TE-2 细胞增殖及侵袭能力的影响。方法: 收集2015 年1 月至2016 年12 月郑州大学附属肿瘤医院125 例ESCC手术切除的癌及癌旁组织标本,以及ESCC细胞系TE-2、TE-3、ECA109 和正常食管上皮细胞株Het-1A。用免疫组化染色法检测癌组织中IQGAP1 的表达,分析其表达水平与临床病理特征的关系;用qPCR和Western blotting 检测ESCC细胞中IQGAP1 mRNA和蛋白的表达。用si-IQGAP1（阳性转染组）、si-CTRL（阴性对照组）质粒转染TE-2 细胞,用MTT法、Transwell 小室法和Western blotting 分别检测沉默IQGAP1 对TE-2 细胞增殖、侵袭能力以及上皮钙黏蛋白和神经钙黏蛋白表达的影响。结果: IQGAP1 在ESCC组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织（P<0.05）,其高表达与肿瘤分期和分级密切相关（均P<0.05）;IQGAP1 mRNA和蛋白在TE-2、TE-3、ECA109 细胞中表达水平显著高于Het-1A细胞（均P<0.05）。沉默IQGAP1 后,与阴性对照组和空白组比较,阳性转染组TE-2 细胞中IQGAP1 mRNA及蛋白的表达水平明显下降（均P<0.05）;细胞的增殖和侵袭能力显著降低（均P<0.05）,上皮钙黏蛋白表达水平升高（P<0.05）,神经钙黏蛋白表达水平下降（P<0.05）。结论: IQGAP1 在ESCC组织中高表达,敲减IQGAP1 可抑制ESCC细胞的增殖和侵袭能力,其在ESCC的发生发展过程中起重要的作用。     

miR-216b-5p靶向ATG5介导自噬逆转食管癌Eca109细胞的顺铂耐药性

目的：探讨miR-216b-5p 对食管癌Eca109 细胞顺铂（DDP）耐药性的影响及其作用机制。方法:采用qPCR 法检测miR-216b-5p 在食管癌细胞TE-1、KYSE-150、Eca109 和耐药细胞Eca109/DDP 中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将miR-216b-5p mimic 及mimic NC、自噬相关蛋白5（ATG5）过表达质粒转染到Eca109/DDP 细胞中,用CCK-8、EdU 法和FCM分别检测转染后细胞的增殖和凋亡;mRFP-eGFP-LC3双荧光标记实验检测mRFP-eGFP-LC3慢病毒感染后各组细胞自噬发生情况, WB法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1和P62 表达。用荧光素酶报告基因实验验证miR-216b-5p与ATG5的靶向关系,WB法检测ATG5的表达。建立裸鼠Eca109/DDP细胞移植瘤模型,观察miR-216b-5p过表达对移植瘤生长的影响。结果：miR-216b-5p在TE-1、KYSE-150、Eca109 和Eca109/DDP 细胞中均呈低表达（均P<0.05）。过表达miR-216b-5p可显著抑制Eca109/DDP 细胞的增殖并诱导凋亡（均P<0.05）,减少细胞中自噬小体数量（P<0.05）,下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1蛋白水平、上调P62 蛋白水平（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-216b-5p靶向并负调控ATG5的表达（P<0.05）,过表达ATG5 可使miR-216b-5p mimic 对Eca109/DDP 细胞增殖、自噬的抑制作用和凋亡的诱导作用明显减弱（均P<0.05）,自噬相关蛋白P62 表达降低、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1 表达升高（均P<0.05）。荷瘤实验结果表明,miR-216b-5p 过表达可显著抑制裸鼠移植瘤的生长（P<0.05）。结论：miR-216b-5p过表达可逆转食管癌Eca109/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与靶向负调控ATG5表达并影响细胞自噬有关。     

LINC01140 通过 miR-452-5p/Wnt/β -catenin 轴调控食管鳞状细胞癌 Eca109细胞的增殖与侵袭

目的：探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC01140在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）组 织及细胞中的表达及其对Eca109细胞增殖与侵袭的影响及其分子机制。方法：选取2012年3月至2015年5月河北医科大学第 四医院收治的 133 例 ESCC 患者的临床资料和 GEPIA 数据库中收集的 182 例 ESCC 组织及 286 例食管正常黏膜组织的 LINC01140表达数据,以及 ESCC 细胞系 Kyse150、Eca109 和 TE13。用 qPCR 法检测癌组织和细胞中LINC01140的表达水平, 分析其表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。分别将pcDNA3.1-LINC01140、阴性对照（pcDNA3.1-NC）或 miR-452-5p mimic及阴性对照（miR-NC）转染到Eca109细胞,MTS、Transwell实验分别检测细胞的增殖与侵袭能力。用双荧光报告基因实验 及 TOP/FOP 报告基因系统检测 LINC01140 与 miR-452-5p 的靶向结合作用及 LINC01140 对 Wnt/β-catenin 通路活化水平的影 响。结果：LINC01140在ESCC组织和细胞中表达均显著下调（均P<0.01）,LINC01140 低表达与 ESCC 患者年龄、淋巴结 转移、TNM分期及OS密切相关（均P<0.05）。LINC01140过表达明显抑制 Eca109 细胞的增殖及侵袭能力（均P<0.01）。机制 研究表明,LINC01140可能通过竞争结合miR-452-5p影响Wnt/β-catenin信号通路的活化水平继而调控Eca109细胞的恶性生物学 行为。结论：LINC01140通过靶向miR-452-5p/Wnt/β-catenin轴促进ESCC细胞的增殖与侵袭能力,其有望成为ESCC患者靶向 治疗的潜在靶点及预后评估的标志物。     

WISP1在食管鳞癌组织和细胞中的表达及对细胞侵袭迁移的影响

目的探讨Wnt诱导的分泌型蛋白1(WISP1)在食管鳞癌(ESCC)组织和细胞中的表达及其对ESCC细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法应用基因芯片技术筛选ESCC的差异表达基因,免疫组化检测43例ESCC组织的WISP1蛋白水平,实时定量PCR(qPCR)检测78例ESCC组织及人食管上皮细胞HET-1A和ESCC细胞(TE-1、KYSE150、Eca109、KYSE450和EC9706)的WISP1 mRNA水平;脂质体法将靶向WISP1的小干扰RNA(si-WISP1)和阴性siRNA(si-NC)转染Eca109和KYSE450细胞,采用MTT比色法检测增殖活力,Transwell小室实验检测迁移和侵袭能力。结果按照差异倍数≥2.0、P≤0.05的标准在ESCC中筛选出108个差异有统计学意义的基因,其中高表达61个、低表达47个,上调倍数最高的基因依次为WISP1、HOXC8和HMGA2,而下调最高的基因依次为HLF、PLA2G2A和LOC729264。ESCC组织的W1SP1高表达率为72.09%(31/43),高于癌旁组织的32.56%(14/43),ESCC组织中WISP1 mRNA水平为1.882±1.551,高于癌旁组织的-1.784±1.383(P<0.05),分层分析发现有淋巴结转移者的WISP1 mRNA水平高于无淋巴结转移者(P<0.05)。与HET-1A细胞相比,ESCC细胞的WISP1水平升高(P<0.05),而Eca109和KYSE450细胞转染si-WISP1后的WISP1水平、增殖活力和穿膜细胞数均低于转染si-NC的细胞(P<0.05)。结论WISP1在ESCC组织和细胞中均为高表达且参与了ESCC转移过程,下调WISP1可抑制ESCC细胞的增殖和侵袭迁移能力,有望成为ESCC诊治的潜在新靶标。     

INHBA-AS1 通过c-Myc/SCD 通路调控宫颈癌HeLa 细胞的鸟氨酸代谢和EMT进程

目的：探讨抑制素β亚基A反义RNA1（INHBA-AS1）对宫颈癌HeLa 细胞EMT和鸟氨酸代谢途径的影响及其机制。方法：体外常规培养HeLa 细胞,实验分为10组：对照组、阴性对照（NC）组、sh-INHBA-AS1组、PluriSIn 1[硬脂酰辅酶A去饱和酶（stearyl CoA desaturase,SCD）抑制剂]组、NC+PluriSIn 1 组、sh-INHBA-AS1+PluriSIn 1 组、10058-F4（c-Myc 抑制剂）组、NC+10058-F4组、sh-INHBA-AS1+10058-F4组、sh-INHBA-AS1+OE-c-Myc 组。平板克隆实验检测各组细胞的增殖能力,FCM检测各组细胞的凋亡情况,Transwell 小室实验检测各组细胞的侵袭、迁移能力,qPCR 法检测各组细胞中INHBA-AS1、c-Myc、SCD 和EMT 相关基因（N-cadherin、TGF-β、ZEB1）mRNA 的表达,WB 法检测各组细胞中c-Myc、SCD、EMT 相关（N-cadherin、TGF-β、ZEB1）、S-腺苷-甲硫氨酸脱羧酶（SAMDC）和亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶（SSAT）蛋白的表达,ELISA 检测各组细胞上清液中鸟氨酸脱羧酶（ODC）的含量。结果：敲减INHBA-AS1表达使HeLa 细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低（均P<0.05）而细胞凋亡率显著升高（P<0.05）,qPCR、WB法检测结果显示,敲减INHBA-AS1 均可显著抑制HeLa 细胞中c-Myc、SCD、N-cadherin、TGF-β、ZEB1和SAMDC的表达（均P<0.05）,而促进SSAT的表达（P<0.05）,并降低HeLa 细胞上清液中ODC的含量（P<0.05）。与c-Myc抑制剂和SCD抑制剂单独处理相比,其联合敲减INHBA-AS1后上述作用更加显著（均P<0.05）;与sh-INHBA-AS1组相比,进一步过表达c-Myc 后HeLa 细胞的增殖能力显著升高（P<0.05）、SCD和N-cadherin 蛋白表达水平显著升高（P<0.05）、细胞上清液中ODC含量显著升高（P<0.05）。结论：INHBA-AS1可通过c-Myc 调控SCD的表达,从而影响HeLa 细胞鸟氨酸代谢和EMT进程,进而促进HeLa细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

C-藻蓝蛋白抑制TGF-β1诱导的宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化

目的：探究C-藻蓝蛋白（C-phycocyanin，C-PC）对转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1，TGF-β1）诱导的 宫颈癌Caski细胞上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的影响。方法：根据处理方法不同将Caski细胞分为 3组即10 ng/ml TGF-β1处理组、 10 ng/ml TGF-β1+300 μg/ml C-PC共处理组和对照组（未加药处理），处理24 h后观察细胞的形态 变化；采用划痕实验及Transwell实验分别检测TGF-β1和C-PC对Caski细胞迁移和侵袭的影响；Western blotting方法检测C-PC 对TGF-β1诱导的Caski细胞上皮表型标志蛋白E-cadherin、间质表型标志蛋白N-cadherin表达水平的影响；qPCR 法检测间质表 型相关锌指转录因子Snail、Zeb1、Twist mRNA的表达。结果：TGF-β1处理组Caski细胞失去原有的上皮表型的特征， 而TGF-β 1+C-PC共处理组细胞保持正常的上皮表型的特征；TGF-β1处理组Caski细胞的迁移率[（60.0±1.4） % vs（33.5±2.2） %、（40.0± 2.8） %， 均P<0.05]和侵袭穿膜细胞数[（108.2±6.2）vs（25.2±3.1）、（39.8±5.4）个， 均P<0.01]较共处理组和对照组显著升高；与对照 组相比，TGF-β1处理组Caski细胞中E-cadherin表达显著降低（P<0.05），Twist、Snail、Zeb1的mRNA表达水平显著升高（P<0.01）， 而加入C-PC共处理可逆转上述改变（P<0.05或P<0.01），同时显著降低N-cadherin的蛋白表达水平（均P<0.05）。结论：C-PC处 理能够抑制TGF-β1诱导的Caski细胞侵袭转移能力进而影响EMT过程，其机制可能与C-PC处理降低Twist、Snail、Zeb1的 mRNA表达有关。     

1,25(OH)2D3调控ERK通路对食管鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨1,25-二羟维生素D3 [1,25(OH)2D3]对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞增 殖、迁移和细胞周期的影响及其相关机制。方法：用不同浓度1,25(OH)2D3处理ESCC细胞TE-11、KYSE30、TE-1和KYSE510后, 用CCK-8法检测细胞的增殖能力。再用浓度分别是0、0.1、0.15、0.2 μmol/L的1,25(OH)2D3处理TE-11和KYSE30细胞,划痕愈合 实验、流式细胞术分别检测细胞的迁移能力和细胞周期分布情况,WB法检测细胞中cyclin D1、P27、ERK和p-ERK蛋白的表达水 平。结果：1,25(OH)2D3 显 著 抑 制 TE-11 和 KYSE30 细 胞 的 增 殖 能 力 ,其 抑 制 程 度呈时间依赖性和浓度依赖性。0.1和 0.2 μmol/L的1,25(OH)2D3处理48 h后,与空白对照组比较,TE-11和KYSE30细胞的迁移能力均显著降低（P<0.05或P<0.01）,处 于G0/G1期细胞显著增加（P<0.05或P<0.01）,细胞中 cyclin D1 和 p-ERK 蛋白水平显著下调、P27 蛋白水平明显上调（P<0.05或P<0.01）而ERK蛋白的表达无明显变化。结论：1,25(OH)2D3显著抑制ESCC细胞的增殖和迁移能力并阻滞细胞周期进程,其 可能通过调控ERK信号通路而发挥作用。     

长链非编码RNAXLOC_005009对食管鳞状细胞癌生物学特性的影响

目的:探讨长链非编码RNA XLOC_005009基因对食管鳞状细胞癌(ESCC)的体外增殖、迁移、侵袭和细胞周期与细胞凋亡等生物学特性的影响.方法:收集2015-2016年河北医科大学第四医院肿瘤研究所57例ESCC患者手术切除的癌组织及癌旁组织标本.应用实时荧光定量PCR检测XLOC_005009基因在人ESCC细胞系Eca 109、Kyse 170与ESCC组织及其癌旁组织的表达,构建pcDNA3.1-XLOC_005009过表达质粒并转染Eca109、Kyse170细胞,应用MTS法、克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室、流式细胞术分别检测转染前后细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭、细胞周期与凋亡的变化.结果:XLOC 005009 mRNA在食管癌组织中的表达明显低于癌旁组织(0.06±0.06 vs 0.21±0.19,P＜0.05),且食管癌细胞XLOC 005009 mRNA表达亦均低于对照组(P＜0.05).转染过表达质粒的Eca109和Kyse 170细胞XLOC_005009基因表达显著高于对照组(Eca109细胞:039±0.17 vs0.02±0.00;Kyse170细胞:0.35±0.08 vs 0.01±0.01,均P＜0.05).与对照组相比,XLOC_005009基因过表达Eca 109和Kyse170细胞增殖能力细胞显著减弱(P＜0.05);克隆形成率显著减少(P＜0.05);穿膜细胞数显著减少[Eca109细胞:(146.40±34.47) vs(193.00±26.33);Kyse170细胞:(157.80±32.51)vs (269.00±29.89),均P＜0.05];Eca109细胞迁移率无显著变化,Kyse170细胞迁移率明显减小(P＜0.05);S期细胞比例增加,细胞凋亡影响不明显.结论:XLOC_005009低表达与食管癌的发生发展密切相关,XLOC_005009过表达可抑制食管癌细胞的体外增殖、侵袭与迁移能力.     

lncRNA NUP50-AS1 在食管鳞癌组织中的表达及其对Eca109 细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）NUP50-AS1 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell cancer, ESCC）组织及细胞株中的表达及其对人食管癌Eca109 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选取自2015 年1 月至2016 年12 月河北医科大学第四医院生物标本库的49 例ESCC手术患者的癌组织和相应癌旁组织,qRT-PCR检测ESCC癌组织、癌旁组织及5 种食管癌细胞株（TE1、TE13、Eca109、Kyse150 和Kyse170）中NUP50-AS1 表达水平。shRNA 转染NUP50-AS1 后,选用sh2 -NUP50-AS1 进行后续功能实验。采用MTS法、克隆形成实验检测敲减NUP50-AS1 表达对Eca109 细胞增殖的影响,划痕实验检测敲减NUP50-AS1 表达对细胞迁移的影响,Transwell 小室实验检测敲减NUP50-AS1 表达对细胞侵袭的影响。结果：NUP50-AS1 在ESCC组织中的相对表达量显著高于癌旁组织(2.003±0.870 vs 1.000±0.000,P<0.05）;NUP50-AS1 在ESCC组织中的表达水平与淋巴结转移及TNM分期相关（均P<0.01）,NUP50-AS1 在5 株食管癌细胞系中相对表达量均明显上调（P<0.05）,其中Eca109 细胞的NUP50-AS1 表达水平最高。转染后,sh2-NUP50-AS1 转染组干扰效率最高,敲低NUP50-AS1 可明显抑制Eca109 细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论：ESCC组织中lncRNA NUP50-AS1 表达明显高于癌旁组织,且与癌症分期和淋巴结转移有关,敲减其表达明显抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,NUP50-AS1 的高表达可能与ESCC的发生发展密切相关。     

NRAGE影响人食管癌细胞放射抗性的作用及其机制研究

背景与目的：食管癌是全球威胁人类生命和健康的常见恶性肿瘤之一，中国每年食管癌发病人数占全球发病总人数的一半以上，以食管鳞癌最为常见。放疗是食管癌三大治疗手段之一，而放射抗性是导致其治疗失败的主要原因。神经营养因子受体相互作用MAGE类药物（neurotrophin receptor-interacting MAGE homolog，NRAGE）在放射抗性细胞株TE13R120中表达量明显高于亲本TE13细胞，且NRAGE亚细胞定位变化可能参与食管癌细胞放射抗性的形成。通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系，以进一步明确NRAGE基因与食管鳞癌细胞放射抗性的关系，分析该基因影响放射抗性的具体机制。方法：通过基因转染构建NRAGE稳定表达的食管癌细胞系。采用细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性，采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡；细胞划痕、Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitive polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞中β-catenin表达情况。组间差异采用t检验或方差分析。结果：实验分为转染过表达组（Eca109/NRAGE组）和空白对照组（Eca109组）。Eca109/NRAGE细胞中NRAGE的表达量明显高于Eca109（t=29.65，P<0.05）。照射后Eca109/NRAGE细胞的放射抗性显著高于Eca109。流式细胞术检测结果显示，Eca109/NRAGE细胞中对射线抵抗性最强的S期细胞比例增加，对射线最敏感的G ₂ /M期减少。Eca109/NRAGE细胞凋亡率较Eca109细胞降低（t=3.268，P<0.05）。Eca109/NRAGE细胞迁移和侵袭能力均高于Eca109。RTFQ-PCR和Western blot检测结果显示，β-catenin的mRNA表达及蛋白水平在Eca109/NRAGE细胞中明显高于Eca109（t=15.87，P<0.05）。结论：NRAGE参与Eca109细胞放射抗性的形成，改变细胞的细胞周期分布和凋亡情况，影响细胞迁移及侵袭能力并可能影响食管癌细胞的放射敏感性，该作用可能与激活Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

食管鳞癌中lncRNA uc061hsf.1的表达及对Eca109、KYSE450细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探讨uc061hsf.1基因在食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）中表达及其对Eca109与KYSE450细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响。方法:本文对34例ESCC组织及癌旁组织进行RT-PCR检测，分析uc061hsf.1的表达与ESCC临床病理特征关系；通过在Eca109与KYSE450细胞系中沉默和上调uc061hsf.1表达，分别检测两组细胞增殖、凋亡、侵袭能力的变化。结果:uc061hsf.1在ESCC组织中低表达，其表达水平在分化差、淋巴结转移的患者中更低（P均＜0.05），与年龄、性别等无明显相关性；沉默uc061hsf.1可导致Eca109与KYSE450细胞系增殖及侵袭能力均明显升高，细胞凋亡无明显变化；相反，上调uc061hsf.1在这两组细胞系中的表达，则两组细胞系的增殖和侵袭能力均明显降低，且细胞凋亡率明显增加。结论:uc061hsf.1沉默可促进食管鳞癌Eca109与KYSE450细胞增殖和侵袭能力；而过表达uc061hsf.1能够抑制Eca109与KYSE450细胞增殖和侵袭，且促进细胞凋亡。     

lncRNA DGCR5通过上调EGFR表达促进食管鳞状细胞癌TE1细胞的恶性生物学行为

目的：探讨长链非编码 RNA（long non-coding RNA，lncRNA）DiGeorge 综合征临界区基因 5（digeorge syndrome critical region gene 5，DGCR5）对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）TE1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法：采用qPCR检测ESCC细胞系 TE1、Yes-2、KYSE150 和 Eca9706 中 DGCR5 的表达水平。将siRNA-DGCR5（si-DGCR5）和阴性对照组（si-NC）质粒转染进TE1细胞，用CCK-8、划痕愈合、Transwell小室法分别检测TE1细胞增殖、迁移和侵袭能力。依据GEPIA数据库资料分析食管癌组织中 DGCR5 表达与细胞表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）的相关性，并用qPCR和Western blotting（WB）检测ESCC细胞系中EGFR mRNA和蛋白表达水平，进一步用WB实验检测转染 si-DGCR5 前后 TE1细胞中EGFR蛋白的表达水平。结果：DGCR5 在 ESCC 细胞系中均高表达（均 P<0.01），转染siDGCR5组TE1细胞中DGCR5的表达水平明显低于si-NC组（P<0.01）。敲低DGCR5后,TE1细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著低于si-NC组细胞（均 P<0.01）。GEPIA 数据库的分析显示，食管癌组织中 DGCR5 表达水平与 EGFR 的表达呈正相关（P<0.01）。敲低DGCR5后TE1细胞中EGFR蛋白表达水平明显下降（P<0.01）。结论：lncRNA DGCR5在ESCC细胞中呈高表达，可能通过上调EGFR表达来促进TE1细胞的增殖、侵袭和迁移等恶性生物学行为。     

lncRNA01296 在食管癌组织中的表达及其对食管癌TE-2 细胞增殖和迁移的影响

目的：探究lncRNA01296 在食管癌组织中的表达及其对食管癌TE-2细胞增殖和迁移的影响。方法：收集2017年1 月至2018年9月承德医学院附属医院肿瘤科收治的36例食管癌组织及相应的癌旁组织,并培养人正常食管上皮细胞（HEEC）及人食管癌细胞系ECA109、TE-1 及TE-2。用qPCR检测癌组织及ECA109、TE-1 及TE-2 细胞中lncRNA01296、小核核糖核蛋白A(SNRPA)及神经生长因子（NGF）mRNA的表达水平。重组慢病毒干扰载体转染食管癌细胞系及相应对照细胞系,分别分为干扰1组、干扰2组及对照组,WB实验检测转染后细胞SNRPA 及NGF 蛋白的表达水平,MTS 实验检测转染后TE-2 细胞的增殖能力,Transwell实验检测TE-2 细胞侵袭和迁移能力。结果：lncRNA01296、SNRPA及NGF mRNA在食管癌组织及细胞系中呈高表达（均P<0.01）,且lncRNA01296、SNRPA及NGF mRNA在低分化的TE-2细胞中表达高于其他癌细胞（均P<0.05）。干扰1组和干扰2组lncRNA01296、NGF mRNA表达水平明显低于对照组（均P<0.01）,而SNRPAmRNA表达水平与对照组无明显差异（P>0.05）;干扰1组和干扰2 组SNRPA及NGF蛋白表达水平明显低于对照组（均P<0.01）。敲减48、72 h后,干扰1组及干扰2组TE-2细胞相对增殖能力明显低于对照组（P<0.05或P<0.01）;对照组、干扰1组及干扰2组侵袭细胞数分别为（72.0±6.3）、（36.6±4.3）及（33.9±3.7）个,迁移细胞数分别为（85.2±9.9）、（47.5±8.1）及（43.8±6.5）个,干扰1 组及干扰2 组侵袭及迁移细胞数显著低于对照组（均P<0.01）;结论：lncRNA01296可通过上调SNRPA表达促进NGF介导的食管癌细胞的增殖和迁移,为临床食管癌诊断和治疗提供新的靶点。     

lncRNA CASC11通过EZH2调控PI3K/AKT通路促进食管鳞癌细胞顺铂耐药的机制研究

目的:探讨lncRNA CASC11对EZH2及磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号轴的调控作用,及对食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞顺铂（DDP）耐药性的影响。方法:取ESCC组织（76例）及癌旁组织（76例）,并体外培养正常食管黏膜上皮细胞（HET-1a）及ESCC细胞系（TE-1、Eca109、KYSE150、KYSE450和KYSE510）,qRT-PCR法检测lncRNA CASC11表达。逐步增加DDP浓度构建DDP耐药ESCC细胞（TE-1/DDP）,并随机分成si-NC组、si-lncRNA-CASC11组、si-lncRNA CASC11+IGF-1组、si-lncRNA CASC11+si-PTEN组,另取正常培养的TE-1细胞为Control组。克隆形成实验、CCK-8、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、耐药性、凋亡、迁移;qRT-PCR及Western Blot法检测lncRNA CASC11及EZH2、PI3K/AKT途径抑制物PTEN、PI3K/AKT通路蛋白、EMT标记蛋白（E-cadherin、N-cadherin）表达;RNA免疫沉淀（RIP）法检测PTEN对EZH2的调控关系;染色质免疫沉淀（ChIP）检测EZH2、PTEN、lncRNA CASC11三者间调控关系。将lncRNA CASC11敲低TE-1/DDP细胞接种于裸鼠皮下并进行DDP干预,检测瘤体体积及瘤体重量,免疫组化分析Ki67活性。结果:lncRNA CASC11在ESCC癌组织、细胞系和TE-1/DDP细胞中的表达均显著升高（P＜0.05）。敲低lncRNA CASC11可抑制TE-1/DDP细胞增殖、迁移及EMT进程,触发细胞凋亡,并抑制细胞耐药及EZH2-PI3K/AKT生存途径的活化（P＜0.05）。裸鼠荷瘤实验证实敲低lncRNA CASC11可增加TE-1细胞对DDP的敏感性（P＜0.05）。EZH2可结合PTEN启动子并降低PTEN表达,而敲低lncRNA CASC11可减少EZH2与PTEN启动子区域的结合。PTEN敲低或给予IGF-1干预,均可部分逆转lncRNA CASC11敲低发挥的抗癌及抗DDP耐药性产生的作用（P＜0.05）。结论:lncRNA CASC11可通过与EZH2相互作用来沉默PTEN,激活PI3K/AKT介导的细胞存活途径,提高ESCC对DDP的耐药性,而敲低lncRNA CASC11可降低癌细胞对DDP的耐药性,增强ESCC对DDP的化疗敏感性。     

食管鳞癌中LncRNA DLEU1的表达及对食管鳞癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达,及其对肿瘤细胞增殖和迁移的影响。方法收集58例手术切除的ESCC及其相应癌旁组织,RT-qPCR检测ESCC组织和细胞中DLEU1的表达水平。Log rank Test法分析ESCC组织中DLEU1的表达与患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier法分析DLEU1表达与ESCC患者生存的相关性。多变量Cox回归模型评估DLEU1对ESCC患者预后的影响。采用CCK-8和划痕愈合实验检测DLEU1对Eca9706细胞增殖和迁移的影响。结果ESCC组织中DLEU1高表达(P<0.01),其高表达与ESCC患者肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移呈显著相关性(均P<0.05)。DLEU1高表达与ESCC患者预后不良呈负相关(P<0.01),且是影响ESCC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。与对照组相比,体外敲低DLEU1的表达可显著抑制Eca9706细胞的增殖和迁移能力(P<0.01)。结论DLEU1在ESCC组织中高表达,是影响ESCC患者预后的独立危险因素,且具有促进肿瘤细胞增殖和迁移的能力。