调节性T细胞与Th17细胞相关因子在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达及意义

目的研究调节性T细胞(Treg)、Th17细胞的相关细胞因子在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中表达的作用及意义。方法雌性BALB/c小鼠12只,随机分为正常对照组和模型组,模型组采用肌球蛋白诱导实验性自身免疫性肌炎(EAM)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组小鼠淋巴结中与Treg和Th17细胞分化及功能相关的细胞因子Foxp3、IL-10、TGF-β、RORγt、IL-6、IL-17、IL-23的mRNA表达。结果与正常小鼠相比,肌炎组小鼠淋巴结中Treg的转录因子Foxp3表达降低,相关的细胞因子IL-10、TGF-βmRNA表达水平增高;Th17的转录因子RORγt及相关的细胞因子IL-6、IL-17、IL-23 mRNA表达有不同程度的升高(P0.05)。结论实验性自身免疫性肌炎中Treg表达降低,而Th17及其相关因子表达升高,提示Treg和Th17之间的失衡在肌炎发病机制中起一定作用。     

BMSCs调节TGF-β1/Smad通路对肝硬化大鼠免疫调节功能的作用研究

目的：探究BMSCs调节TGF-β1/Smad通路对肝硬化大鼠免疫调节功能的作用。方法：36只大鼠随机分为对照组、模型组和BMSCs组,每组12只。模型组和BMSCs组大鼠通过四氯化碳构建肝纤维化模型,BMSCs组大鼠尾静脉注射BMSCs(3×10~6个)。检测各组大鼠肝功能指标,HE和Masson染色检测肝组织损伤和纤维化情况,流式细胞术检测外周血中Th17细胞和Treg比例。Western blot、RT-qPCR检测胶原蛋白(Col)Ⅰ、ColⅢ、TGF-β1和Smad水平。结果：模型组大鼠ALT、AST、纤维化水平、肝组织ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1和Smad mRNA和蛋白水平显著高于对照组(P<0.05)。BMSCs组ALT、AST、纤维化水平、肝组织ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1和Smad mRNA和蛋白水平显著低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠Th17细胞占比和Th17/Treg显著高于对照组,Treg水平显著低于对照组(P<0.05)。BMSCs组Th17水平和Th17/Treg显著低于模型组,Treg水平显著高于模型组(P<0.05...     

茯苓多糖对系统性红斑狼疮患者Th17/Treg平衡的影响

目的:研究茯苓多糖对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的免疫调节作用。方法:选取45例SLE患者和35例健康对照者,应用磁珠分选法分离外周血CD4~+ T细胞,流式细胞术检测CD4~+ T细胞中Th17和Treg细胞的比例。用茯苓多糖分别处理健康对照者及患者的CD4~+ T细胞,MTT法检测细胞活力以测定茯苓多糖毒性,ELISA检测细胞中白细胞介素17(IL-17)、IL-6、IL-10及转化生长因子β(TGF-β)的含量,RT-q PCR和Western blot法分别测定维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与叉头框蛋白P3(Foxp3)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与健康对照组相比,SLE患者的Th17细胞比例显著升高,Treg细胞比例明显降低(P0.05)。用100μg/L的茯苓多糖处理SLE患者CD4~+ T细胞,与空白对照组相比,IL-17和IL-6的含量显著降低,IL-10和TGF-β的含量明显上升(P0.05);RORγt的mRNA和蛋白表达显著下降,同时Foxp3的表达在mRNA和蛋白水平上明显增加(P0.05);并且Th17/Treg的比值降低(P0.05)。结论:茯苓多糖可以通过升高Treg并降低Th17细胞的比例,对SLE起到一定的治疗作用。     

Th17/Treg及其相关细胞因子在结肠癌中的表达并与肿瘤分期的相关性

研究结肠癌患者肿瘤组织中Th17细胞、Treg细胞及患者外周血中相关细胞因子的表达水平,探讨其表达与肿瘤分期的相关性及可能机制。运用流式细胞分析(FACS)技术检测30例结肠癌肿瘤组织及癌旁正常组织中Th17细胞及Treg细胞的比例;采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测20例结肠癌患者外周血中Th17、Treg相关细胞因子IL-23和IL-10的表达水平。结果显示结肠癌肿瘤组织中Th17细胞和Treg细胞的比例明显高于癌旁正常组织(P<0.05),进展期肿瘤组织中Treg细胞的比例高于早期(P<0.05),而Th17细胞的比例较早期无明显差异(P>0.05),进展期肿瘤组织中Th17/Treg细胞的比例比早期偏低(P<0.05)。结肠癌患者外周血中IL-23、IL-10的mRNA水平升高,与健康对照组差异明显(P<0.05),且进展期与早期结肠癌IL-10mRNA的表达水平差异显著(P<0.05),而IL-23mRNA在两组间无明显差异(P>0.05)。随着结肠癌病程的进展,肿瘤组织内Th17细胞及Treg细胞的比例逐渐升高,且Treg细胞比Th17细胞升高更加明显。相关细胞因子IL-23和IL-10在患者外周血中的变化趋势和Th17、Treg细胞在肿瘤组织中的变化趋势相一致,提示Th17、Treg细胞在结肠癌的表达可能与肿瘤免疫微环境中相关的细胞因子调节有关。     

白芷乳剂对过敏性鼻炎小鼠血清细胞因子及鼻黏膜中Th17/Treg平衡的影响

为探讨白芷乳剂对过敏性鼻炎小鼠血清细胞因子及鼻黏膜中Th17/Treg平衡的影响,采用卵清蛋白诱发过敏性鼻炎小鼠模型,将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组和白芷组。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察鼻黏膜组织的病理变化,FCM检测血液中Th17和Treg的比例,ELISA检测血清和鼻腔灌洗液中IgE、IL-6、IL-10、IL-17和转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)的水平,RT-PCR检测鼻黏膜中IL-17和TGF-β1 mRNA的表达。HE染色结果显示:与正常组比较,模型组有大量嗜酸性粒细胞为主的炎症细胞浸润;与模型组比较,白芷组鼻黏膜上皮细胞排列整齐,上皮破损状况良好,嗜酸性粒细胞浸润相对减少。与正常组比较,模型组Th17比例增多(P0.01),Treg比例减少(P0.05),血清和鼻腔灌洗液中IL-6和IL-17水平显著升高(P0.01),IL-10和TGF-β1水平显著降低(P0.01);与模型组比较,白芷组Th17比例减少(P0.01),Treg比例增多(P0.05),血清和鼻腔灌洗液中IL-6和IL-17水平显著降低(P0.01),IL-10和TGF-β1水平显著升高(P0.05)。这提示白芷能有效缓解过敏性鼻炎小鼠的症状,减轻其鼻黏膜组织损伤,其机制可能与下调Th17比例,上调Treg比例,恢复Th17/Treg平衡有关。     

紫杉醇通过调控JAK2/STAT3通路对肝纤维化模型大鼠Th17/Treg影响的研究北大核心CSCD

目的:探究紫杉醇调控Janus激活激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对肝纤维化大鼠T辅助细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)的影响。方法:将36只乙肝病毒(HBV)转基因小鼠分为对照组、模型组和紫杉醇组(n=12)。模型组和紫杉醇组通过四氯化碳构建HBV相关的肝纤维化模型,紫杉醇组通过尾静脉注射紫杉醇(2 mg/kg)干预。检测各组肝功能指标,通过HE和Masson染色检测肝组织损伤和纤维化情况。流式细胞术检测外周血中Th17和Treg比例。Western blot和/或RT-qPCR检测IL-6、TGF-β1、JAK2和STAT3水平。结果:三组各项指标比较差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组的ALT[(147.42±16.88)U/L]、AST[(275.12±28.06)U/L]、纤维化水平[(11.24±1.64)%]、肝组织中IL-6、TGF-β1、JAK2、STAT3 mRNA和蛋白水平显著高于对照组(P<0.05)。紫杉醇组的ALT[(80.28±9.47)U/L]、AST[(186.34±21.34)U/L]、纤维化水平[(4.15±0.98)%]、肝组织中的IL-6、TGF-β1、JAK2、STAT3 mRNA和蛋白水平显著低于模型组(P<0.05)。模型组小鼠的Th17[(2.75±0.38)%]和Th17/Treg(1.77±0.23)水平显著高于对照组,Treg[(1.55±0.25)%]显著低于对照组(P<0.05)。紫杉醇组的Th17[(1.94±0.20)%]和Th17/Treg(0.73±0.87)水平显著低于模型组,Treg[(2.67±0.38)%]显著高于模型组(P<0.05)。模型组单个核细胞中的JAK2和STAT3蛋白水平高于对照组(P<0.05),紫杉醇组JAK2和STAT3蛋白水平显著低于模型组(P<0.05)。结论:紫杉醇可减少肝组织中IL-6和TGF-β1表达,并诱导失衡的Th17/Treg平衡向Treg偏移,从而缓解HBV相关的肝纤维化,紫杉醇的抗纤维化作用可能与JAK2/STAT3通路有关。     

MBD2对Th2/Th17细胞平衡的调控及其在哮喘中的作用研究北大核心CSCD

目的:探究甲基CpG结合区域蛋白2(MBD2)在哮喘中的作用及其对Th2/Th17分化的影响。方法:在条件性敲除CD4+T细胞中MBD2表达的小鼠构建以中性粒细胞浸润为主的哮喘模型,并将小鼠分为4组:WT生理盐水组(A组)、WT哮喘组(B组)、CD4CreMBD2fl/fl生理盐水组(C组)、CD4CreMBD2fl/fl哮喘组(D组),每组10只。应用RT-PCR和Western blot实验检测MBD2在各组小鼠脾脏组织中的表达;使用乙酰胆碱(Mch)激发试验检测各组小鼠的气道高反应;收集小鼠肺泡灌洗液(BALF),使用血细胞计数法计算其中的细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数量,ELISA法检测细胞因子IL-4与IL-17的表达,HE染色观察各组小鼠肺组织的病理学改变;免疫磁珠分选各组小鼠脾脏中的CD4+T细胞,流式细胞术、RT-PCR及ELISA分别检测Th2、Th17细胞比例及其相关细胞因子的表达水平;分离并培养小鼠na?ve CD4+T细胞,通过慢病毒载体以靶向沉默细胞中MBD2基因表达,流式细胞术检测其对na?ve CD4+T细胞Th2与Th17分化的影响。结果:与A、B组小鼠相比,C组与D组小鼠脾脏组织中MBD2的mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01);A组与C组小鼠肺组织结构正常,而B组小鼠肺组织中支气管黏膜充血水肿,管腔狭窄,黏膜上皮细胞出现大量坏死脱落,大量炎症细胞浸润,D组介于A组与B组之间;与A组小鼠相比,B组与D组小鼠的气道反应性显著增高(P<0.05),且BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、IL-4及IL-17均显著增加(P<0.05),C组中仅有嗜酸性粒细胞及IL-4明显增加(P<0.01);而与B组相比,D组小鼠中嗜酸性粒细胞及IL-4表达均明显增加(P<0.05)。在脾脏淋巴细胞中,B组与D组小鼠的Th2、Th17细胞比例、GATA3和RORγt mRNA及IL-4与IL-17表达水平均较A、C组小鼠显著增加(P<0.01),与B组相比,D组小鼠中以Th2细胞及相关细胞因子占主导地位(P<0.05);成功利用慢病毒载体沉默小鼠na?ve CD4+T细胞MBD2的表达,且沉默其表达后能显著促进Th2细胞的分化比例(P<0.05),而Th17细胞比例明显降低(P<0.05)。结论:敲除CD4+T细胞中MBD2基因表达可通过促进Th2细胞及IL-4细胞因子表达,而抑制Th17细胞及IL-17表达从而改善以中性粒细胞浸润为主的重症哮喘。     

Th17细胞和调节性T细胞失衡参与实验性自身免疫性脑脊髓炎的发病

目的探讨Th17细胞和调节性T细胞(Treg)失衡在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病过程中的作用。方法建立EAE小鼠模型,在EAE发病的不同时期运用流式细胞术检测小鼠脾脏Treg比例变化,用实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测小鼠脾淋巴细胞Foxp3、视黄酸相关的孤儿受体γt(RoR-γt)以及脑组织IL-17 mRNA表达,ELISA检测小鼠外周血IL-6、转化生长因子β(TGF-β)及IL-17A含量变化。结果与佐剂对照组比较,CD4+CD25+Foxp3+Treg比例和Foxp3 mRNA的表达,在EAE发病初期及高峰期明显下降,而在慢性期明显升高(P0.05);RoR-γt mRNA表达量在发病初期与佐剂对照组比较显著增加(P0.05),而高峰期及慢性期与佐剂对照组比较则无显著差异(P0.05)。EAE组小鼠外周血中TGF-β、IL-6浓度在发病初期和高峰期明显升高(P0.05);随病情发展,IL-6浓度逐渐降低,在发病慢性期与佐剂对照组比较无明显差异(P0.05),而TGF-β浓度在发病慢性期仍较高,与佐剂对照组比较明显升高(P0.05)。EAE组小鼠外周血中IL-17A含量在EAE不同时期均有明显升高,且高峰期升高最明显(P0.05)。结论 Th17细胞/Treg失衡参与了EAE发病过程。     

1型糖尿病患儿CD4~+T细胞亚群变化初探

目的 探讨CD4~+细胞亚群[Th1、Th2、CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Tr)及Th17细胞]在1型糖尿病(TIDM)患儿免疫发病机制中的作用.方法 新诊断TIDM患儿20例,同年龄对照组(Ctrl组)20例.用流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Tr及Th17细胞比例.荧光定量PCR(real-time PCR)检测Th1、Th2、Tr、Th17细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3、ROR-γt、IFN-、IL-4、IL-10、IL-17A、CTLA-4、GITR等细胞因子和负性调节因子mRNA表达;应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4、TGF-β、IL-6血浆水平.结果 (1)与正常对照组相比,TIDM患儿Th1细胞比例明显增高(P<0.01),Th2细胞比例明显降低(P<0.01),Tr和Th17细胞比例与正常对照组相比无明显差别(P>0.05).(2)Th1细胞转录因子及细胞因子T-bet、IFN-γ较正常对照组明显升高(P<0.01);Th2细胞转录因子及细胞因子GATA-3、IL-4明显降低(P<0.01);Tr细胞转录因子Foxp3表达与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),Tr细胞相关细胞因子及负性调节因子IL-10、CTLA-4及GITR基因表达明显低于对照组(P<0.01);Th17细胞转录因子ROR-γt及细胞因子IL-17A基因表达与对照组相比无明显差异(P>0.05);(3)TIDM患儿外周血IFN-γ浓度明显增高,IL-4明显降低,TGF-β、IL-6浓度无明显改变(P>0.05).结论 TIDM患儿Th1/Th2失衡,加上Tr细胞抑制功能缺陷,可能导致TIDM严重细胞免疫功能紊乱.     

β2 GP1诱导的EAPS小鼠Treg/Th17细胞比率变化的研究

目的:观察EAPS疾病进展过程中小鼠外周血Th17细胞与CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的比率变化。方法:以重组人β2糖蛋白1(rhβ2GP1)主动免疫BALB/c小鼠建立EAPS模型,免疫12周后检测外周血浆抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2GP1)、抗心磷脂抗体(a CA)、IL-17、IL-2、IL-6、TGF-β、活化部分凝血活酶时间(APTT)和血小板计数(PLT)及流产率。流式细胞术(FCM)检测小鼠PBMC中CD4+CD25+Treg及Th17细胞的比率。结果:与对照组相比,模型小鼠anti-β2GP1、a CA、IL-17、IL-2、IL-6水平明显升高,APTT延长,TGF-β降低,PLT升高,流产率提高,差异有统计学意义(P<0.05)。PBMC中CD4+CD25+Treg细胞频率8周前与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),12周后逐渐减少,明显低于对照组(P<0.05);Th17细胞频率逐渐升高,明显高于对照组(P<0.05);CD4+CD25+Treg/Th17比值明显低于对照组(P<0.05)。结论:EAPS小鼠外周血Th17/Treg细胞比率失衡可能在EAPS的发生发展中起重要作用。     

原发性肾病综合征患儿外周血Th17与CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的水平

目的:观察原发性肾病综合征(PNS)患儿外周血Th17细胞和CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)及其相关因子的水平和功能,初步探讨其在儿童PNS发病中的作用。方法:PNS患儿分为单纯型肾病(SNS)20例、肾炎性肾病(NNS)15例;同时以20例健康体检儿童作为对照组。采用流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞和Treg细胞比例;Real-time PCR法检测PBMC中RORC、IL-23p19和Foxp3 mRNA的表达;ELISA分别检测血清中IL-1β、IL-6、TGF-β1的水平。结果:SNS、NNS组患儿Th17细胞及RORC、IL-23p19 mRNA、IL-1β、IL-6的水平均明显高于正常组(P0.05),且NNS组患儿以上指标明显高于SNS组(P0.05);SNS、NNS组患儿Treg细胞、Foxp3 mRNA和TGF-β1水平的表达明显低于正常组(P0.05),其中两组疾病患儿血清TGF-β1的水平无统计学意义(P0.05),其余指标NNS患儿均明显低于SNS组(P0.05)。结论:Th17/Treg细胞功能失衡可能在儿童PNS的发病中起到重要作用,其失调程度可能与PNS的临床表现、对激素的敏感性、病理类型、及预后有关。     

NF-κB寡核苷酸对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达影响的研究

为探讨NF-κB寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达的影响,建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,将NF-κB ODN注射到大鼠右后踝关节腔内,并设对照组、模型组和实验组。42d后用流式细胞仪检测各组大鼠脾脏Th17、Treg百分率、凋亡率;qRT-PCR检测IL-17、TGF-β和IL-6mRNA表达;用ELISA检测血清和关节液IL-17、TGF-β、IL-6含量。结果显示实验组大鼠脾脏Th17占CD4~+T细胞比例及IL-17和IL-6mRNA表达、血清和关节液中IL-17和IL-6的水平均低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Th17凋亡百分率低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg占CD4~+T细胞比例及TGF-βmRNA表达、血清和关节液中TGF-β的水平均高于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg凋亡百分率与模型组相比明显降低,差别有统计学意义(P0.05)。由此可知,NF-κB ODN调节CD4~+T细胞Th17、Treg之间细胞平衡及相关细胞因子的分泌,对CIA有较好的治疗作用。     

Lewis肺癌细胞通过TLR9对CD4~+CD25~+Treg细胞影响的研究

目的:本研究以Lewis肺癌细胞为研究对象,探讨肿瘤细胞通过TLRs对CD4+CD25+Treg细胞的影响。方法:我们采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴细胞共培养系统中CD4+CD25+Treg细胞数量变化;通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp3和TLR1-9mRNA表达的影响;采用TLR9受体阻断剂氯喹阻断Lewis肺癌TLR9的表达。结果:与对照组相比,共培养组CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达均明显增高(P0.05);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞共培养后可影响多种TLRs表达,其中TLR9 mRNA表达与对照组相比明显增高(P0.05),阻断Lewis肺癌细胞TLR9可明显降低CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达(P0.05)。结论:Lewis肺癌细胞可通过TLR9促进CD4+CD25+Treg细胞产生及功能增强,参与诱导肿瘤的免疫耐受,从而促进肿瘤的发生和发展。     

慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞/调节性T细胞比值变化的意义北大核心CSCD

目的测定慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)和CD4+IL-17+T细胞(Th17细胞)频率及其相关细胞因子的变化,并探讨Th17/Treg平衡在CHB发病过程中的作用。方法选取CHB住院患者(CHB组)60例,其中35例轻中度CHB患者(CHB-LM),25例慢性重型肝炎患者(CSHB),同时选取21位健康体检者作为正常对照组(HC)。流式细胞术检测外周血中Th17和Treg的细胞频数,双抗体夹心ELISA检测血清中IL-17、IL-23、IL-10及转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平。结果与HC组相比,CHB患者外周血Th17细胞频率及其相关细胞因子IL-17、IL-23浓度明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);Treg频率及其相关细胞因子IL-10及TGF-β1浓度明显增高。Th17/Treg比值变化显示,与HC组相比,在CHB组中该比例明显升高,具有显著性差异,且与CHSB组相比,在CHB-LM组中该比值明显降低。结论 Th17细胞/Treg的失衡是造成慢性乙型肝炎病程演变的重要因素,检测Th17细胞/Treg比值变化对疾病发展的早期预测有一定价值。     

细粒棘球蚴早期感染对小鼠T细胞亚群的影响

目的观察细粒棘球蚴感染早期,小鼠体内脾细胞中T细胞亚群及相关细胞因子表达的改变。方法以细粒棘球蚴感染Balb/c小鼠后收集细胞用FCM检测Th1、Th2、Treg、Th9细胞;同时用qRT-PCR检测IL-9、IL-10、IFN-γ、IL-4、PU.1和TGF-β的mRNA水平表达量;用ELISA检测血清中IL-9、IL-10、IFN-γ、IL-4、TGF-β和IL-25的含量。结果 FCM检测原头蚴组不同时间点Th1、Th2、Treg、Th9细胞的比例,差异均有统计学意义(P0.05);qRT-PCR检测IL-9、IL-10、IFN-γ、IL-4、PU.1和TGF-β的mRNA水平表达量在感染后升高,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);ELISA检测血清中IL-9、IL-10、IFN-γ、IL-4、TGF-β和IL-25的含量在感染后升高,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论原头蚴能刺激小鼠体内脾细胞向Th1、Th2、Treg、Th9细胞分化且上调相应细胞因子的分泌,且Th9与Th2、Treg之间呈正相关,提示这些亚群细胞可能在包虫病感染的免疫逃逸中发挥一定作用。     

白芍总苷对过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡及JAK1/STAT3信号通路蛋白的影响北大核心CSCD

目的:基于蛋白酪氨酸激酶1/信号转导因子3(JAK1/STAT3)信号通路探讨白芍总苷对过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法:动物实验分为对照组、模型组、实验组、抑制剂组,模型组、实验组、抑制剂组小鼠尾静脉注射印度墨水及灌胃麦角蛋白复制过敏性紫癜模型,实验组、抑制剂组小鼠每日灌胃0.1 g/kg白芍药总苷和AG490,连续处理4周。ELISA测定各组小鼠血清IL-10及IL-17含量;流式细胞术检测各组小鼠血清Treg、Th17变化;Western blot检测各组小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达。结果:与对照组相比,模型组、实验组、抑制剂组小鼠血清Treg占CD4+T细胞比例和IL-10含量明显下降,Th17占CD4+T细胞比例、IL-17含量以及小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达明显升高(均P<0.05);与模型组相比,实验组、抑制剂组小鼠血清Treg占CD4+T细胞比例和血清IL-10含量明显升高,Th17占CD4+T细胞比例、IL-17含量以及小鼠皮肤和肾脏组织p-JAK1、p-STAT3表达明显降低(均P<0.05)。结论:白芍总苷可通过抑制JAK2/STAT3信号通路调控过敏性紫癜小鼠Treg/Th17免疫平衡。     

白芍总苷对EAT小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响

目的建立实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)小鼠模型,观察不同剂量白芍总苷(TGP)治疗组小鼠脾细胞中调节性T细胞(Treg)和Th17细胞比例及其功能的变化。方法将EAT模型小鼠随机共分为模型(model)组、高剂量TGP (THD)组、中剂量TGP (TMD)组、低剂量TGP(TLD)组和雷公藤多苷(TII)组共5组;real-time PCR检测脾细胞中Foxp3 mRNA和RORγt mRNA的表达;流式细胞计量术检测脾细胞中Treg和Th17细胞的比例;ELISA检测血清中TGF-β1和IL-17的水平;化学发光法检测血清中抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)的水平。结果 TGP处理组(包括低、中和高剂量组)Th17细胞比例较模型组明显降低(P0.001);中和高剂量TGP组Foxp3 mRNA表达量较模型组明显增高(P0.05); Treg细胞比例较模型组明显增高(P0.01,P0.05);IL-17浓度较模型组明显降低(P0.01,P0.05);TGAb浓度较模型组明显降低(P0.05);中剂量TGP组TGF-β1浓度较模型组显著增高(P0.01)。结论 TGP能调节Treg/Th17免疫平衡,有利于EAT疾病的转归,其中以中和高剂量TGP组疗效显著。     

血红素加氧酶-1调节CD4~+T细胞亚群拮抗过敏性哮喘的实验研究

制备哮喘小鼠模型,干预血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达,探讨HO-1在过敏性气道炎症中抗炎及其对T辅助细胞(T helper,Th)1、Th2、Th17和调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的调节作用。用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏、激发BALB/c小鼠制备以嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)浸润为主的哮喘动物模型,并在致敏、激发中给予HO-1底物氯化高铁血红素(hemin)诱导HO-1高表达。经肺脏组织病理切片,血清OVA特异性IgE水平,肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)炎症细胞分类计数观察哮喘小鼠气道炎症程度;western blot和real-time PCR分别检测肺脏和脾脏组织HO-1基因表达和蛋白量,肺脏组织Th1、Th2、Th17及Treg分泌的细胞因子及特定转录因子基因表达;流式细胞术分析脾脏CD4+T细胞亚群。实验结果显示,OVA致敏、激发后(OVA组),小鼠肺脏和脾脏HO-1表达较正常组增高,血红素干预后(OVA+hemin组),HO-1蛋白表达则进一步升高;肺脏病理组织学显示OVA组见大量炎症细胞浸润,以EOS为主,伴BALF中细胞总数和EOS数及血清OVA特异性IgE增加,但经血红素干预后,上述现象明显减轻;OVA组肺组织中T-bet表达及IFN-γ水平降低;但GATA-3和RORγt表达及IL-4、IL-17A和IL-6水平较正常组显著增高,而血红素能逆转该结果;进一步显示OVA+hemin组Foxp3表达和IL-10及TGF-β水平较其余两组显著增高;脾脏CD4+T细胞亚群结果显示OVA组可见大量Th2,Th17略有增多,Th1和Treg则略降低,血红素干预明显下调Th2和Th17细胞比例,显著提升Treg细胞比例,而Th1则呈现升高趋势。结果表明,上调HO-1表达能显著拮抗EOS性气道炎症,该作用是通过调节Th17/Treg和Th1/Th2细胞平衡,促进TGF-β和IL-10分泌以抑制气道炎症。     

卵巢癌患者外周血Th17/Treg细胞的检测及其临床意义

目的:检测卵巢癌患者外周血中辅助性T细胞17(T help cell 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的水平并探讨其临床意义。方法:选取55例卵巢癌和60例健康对照者为研究对象,采用细胞内染色流式细胞术(Flow cytometry,FCM)、实时定量PCR(real time PCR)、酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测外周血Th17/Treg细胞百分率、核转录因子retinoid-related orphan receptor gamma-t(RORγt)/foxhead winged-helix box protein 3(Foxp3)mRNA的表达以及血浆中白细胞介素17(Interleukin-17,IL-17)/转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)的水平。结果:卵巢癌患者外周血中CD4+IL-17+/CD4+T细胞百分率、RORγt mRNA及IL-17水平与正常对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组相比,卵巢癌患者外周血中CD4+Foxp3+Treg/CD4+T细胞百分率、Foxp3 mRNA及TGF-β1水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:卵巢癌患者外周血中Th17/Treg细胞失衡,Th17/Treg细胞可能参与卵巢癌的发病过程。     

消退素D1对干燥综合征小鼠免疫调节的影响

目的 探讨消退素D1(RvD1)对干燥综合征（SS）小鼠免疫调节的影响。方法 20只非肥胖糖尿病（NOD）小鼠随机分为模型组和RvD1组,每组10只,另选10只Balb/c小鼠为对照组。8周后检测小鼠的饮水量、唾液量、颌下腺质量和体质量。检测小鼠血清白细胞介素（IL）-2、IL-4、IL-10和干扰素（IFN）-γ水平。流式细胞术检测血清辅助性T细胞（Th）1和Th2的表达。RT-PCR法检测颌下腺组织T-bet和GATA-3 mRNA的表达量。结果 与对照组比较,模型组小鼠饮水量明显升高,唾液量明显降低（P<0.05）;而与模型组比较,RvD1组小鼠饮水量明显降低,唾液量明显升高（P<0.05）。与对照组比较,模型组小鼠颌下腺质量与指数均明显降低（P<0.05）;与模型组比较,RvD1组小鼠颌下腺质量与指数均明显升高（P<0.05）。与对照组比较,模型组小鼠Th1细胞比例显著升高,Th2细胞比例降低（P<0.05）;与模型组比较,RvD1组小鼠Th1细胞的比例显著降低,Th2细胞的比例升高。与对照组相比,模型组小鼠IL-2和IFN-γ表达明显升高,IL-...