视黄酸对胎鼠腭突融合的影响及其作用机制

目的探讨视黄酸(all-trans retinoic acid,atRA)对胎鼠腭突融合的影响及其作用机制。方法对孕13d胎鼠双侧腭突进行体外培养,HE染色观察atRA对腭突融合的影响;免疫双标记分析atRA对腭突组织细胞凋亡及层粘连蛋白降解的影响;Western blot检测腭突组织中Smad2磷酸化的变化。结果经72h培养,对照组双侧腭突完全融合;5μmol/L atRA实验组双侧腭突可接触但不能融合。共聚焦显微镜显示,双侧腭突接触处层粘连蛋白降解,上皮细胞向口侧和鼻侧三角处迁移,并逐渐凋亡;atRA抑制层粘连蛋白降解,接缝处上皮组织完好,上皮细胞无凋亡发生,间质组织中可观察到细胞凋亡。Western blot图片显示:在腭突融合过程中,Smad2磷酸化增强;相反,atRA实验组未检测到Smad2磷酸化。结论atRA抑制双侧腭突接缝处基底膜降解和上皮细胞向口、咽三角处迁移及凋亡,诱发腭间质组织细胞凋亡,进而抑制双侧腭突融合,其作用机制可能与中嵴上皮细胞中Smad2磷酸化被抑制相关。     

视黄酸阻滞胎鼠腭间质细胞周期进程并诱导凋亡

目的探讨全反式视黄酸(atRA)对小鼠胚胎腭间质细胞(MEPM)细胞增殖和细胞周期的影响及其分子生物学作用机制。方法MEPM细胞取材于孕13d胎鼠腭组织。MTT比色法检测atRA对MEPM细胞增殖活力的影响;流式细胞术分析atRA对细胞周期分布的影响,并同时观察有无细胞凋亡现象发生;Western-blot检测atRA对细胞周期蛋白D和E表达的影响,并观察对视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)磷酸化的影响。结果与溶剂对照组相比,在5~10μmol/L浓度范围内,atRA能够显著性抑制MEPM细胞增殖活力(P<0.05),并将细胞周期滞留在G0/G1期(P<0.05)。atRA对细胞周期蛋白D和E的表达及相应酶活性均表现为抑制效应。观察Rb的变化也显示,atRA降低Rb的磷酸化作用。结论atRA对腭器官发育敏感期腭间质细胞增殖活力及细胞周期的抑制作用可能是atRA诱导诱导唇腭裂的机制之一。     

过量全反式视黄酸对腭突中嵴上皮细胞迁移的影响

目的通过细胞划痕实验观察过量全反式视黄酸(all-trans retinic acid,atRA)对原代腭突中嵴上皮细胞迁移的影响。方法以10 w龄昆明小鼠按雌雄比例2:1合笼,得到妊娠13 d孕鼠。将1只妊娠13 d孕鼠处死,分离得到全部胎鼠腭突,以中性蛋白酶分离腭突中嵴上皮,继以胰酶消化,用DMEM/F-12培养基调整细胞浓度后接种于培养瓶中,CO2培养箱中培养96 h。取同等细胞浓度接种于6孔板中,同样条件下培养24 h。弃去原培养基,在各孔贴壁细胞层划出一条划痕带,分别加入相应培养基后得到3孔5μmol/L atRA实验组和3孔对照组,继续原条件培养72 h。结果:原代腭突中嵴上皮细胞贴壁生长,多角形或卵圆形,成片生长;当细胞融合率>80%,呈现铺路石状外观。在培养过程中,对照组划痕逐渐弥合,培养72 h,爬行细胞几乎覆盖整个划痕带;而atRA实验组未见到向划痕区迁移的细胞,划痕宽度没有改变。结论:过量atRA可抑制腭突中嵴上皮细胞发生迁移。     

TERE1基因在小鼠胚胎双前肢正常发育和异常发生中的表达

[目的]观察移行上皮反应基因（TERE1）在小鼠胚胎双前肢正常发育和异常发生中的表达,探讨TERE1在短肢发生中的作用。[方法]ICR小鼠受孕后,将其随机分为实验、对照两组,各64只。于孕第10天（GD10）,经口灌胃一次给予实验组孕鼠80 mg/kg的全反式视黄酸（atRA）、对照组孕鼠给予等体积的大豆油,并分别于GD11～GD18取两组胎鼠的双前肢。于GD12取下小鼠胚胎双前肢,以atRA诱导,培养72 h后收获肢。利用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测TERE1在各样本中的表达情况。[结果]在整体动物试验中,atRA可诱致小鼠胚胎明显的短肢畸形;在体外试验中,atRA可诱致小鼠胚胎前肢多种骨骼发育异常。TERE1在正常、异常肢及培养肢芽中均有表达。在正常和异常肢中,TERE1的表达模式一致;除GD15外,实验肢中TERE1的表达均低于相同时点正常肢的表达水平。在体外培养肢,各组的表达量随培养时间的延长而增加。实验组在培养24 h,atRA各剂量组的表达量均低于对照组（P〈0.05）;培养48 h和72 h,在2.5×10-6 mol/L～1.0×10-5 mol/L剂量范围有随剂量增加表达量增加的趋势,但在高剂量组（2.0×10-5 mol/L）表达又下降。[结论]TERE1与小鼠胚胎前肢的发育过程有关,atRA在诱致小鼠前肢异常发生中可引起TERE1 mRNA的表达改变。     

全反式视黄酸诱发胎鼠腭裂及抑制Smad2磷酸化的作用

目的观察过量全反式视黄酸(atRA)对胎鼠腭发育的影响及其对Smad2磷酸化的调节作用。方法将ICR孕鼠随机分为atRA实验组和溶剂对照组,在11天(查见阴栓为孕0天),分别灌胃给予80mg/(kg·d)atRA或等体积的玉米油溶剂。常规HE组织学染色观察胎鼠上腭发育情况;免疫组化和Western Blot检测突中嵴上皮内pSmad2的表达。结果80mg/(kg·d)atRA可导致90%胎鼠发生腭裂;在腭突融合过程中,中嵴上皮细胞内Smad2被内源性的激活,出现明显磷酸化,在80mg/(kg·d)atRA组,可检测到总Smad,但是不能检测到磷酸化pSmad2的表达。结论孕期过量atRA可导致胎鼠发生腭裂,其致畸作用机制可能与中嵴上皮细胞内Smad2磷酸化被抑制有关。     

全反式视黄酸对小鼠胚胎发育毒性的体外实验研究

目的为研究全反式视黄酸（atRA）的发育毒性及其可能的作用机制，本研究采用植入后体外全胚胎培养方法研究atRA对小鼠胚胎生长发育的影响。方法孕8．5日龄小鼠胚胎移植于atRA终浓度为0、0．01、0．1、0．2、0．4、1．0、10．0μmol／L的全胚胎培养基中，体外连续培养48h，观察atRA对胚胎发育和器官形态分化的影响。结果atRA可影响小鼠胚胎在体外的生长发育，并呈现剂量-效应关系；0．1μmol／L组，atRA明显影响卵黄囊直径、颅臀长、前脑、中脑、听觉系统、视觉系统、心脏、体位和前肢芽等指标，与对照组比较，差异有显著性（P〈0．05）；≥0．20μmol／L组，卵黄囊体积减小、表面皱缩、血管减少及分化程度降低，神经系统、心脏、腮弓和颅面等多种器官出现畸形，所有器官形态分化指标均显著低于对照组（P〈0．05）。结论atRA有致畸性和胚胎毒性，在器官形成期可以引起神经系统、心脏、腮弓和颅面等多种器官的发育畸形。     

邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯对小鼠胚胎发育毒性的体外实验研究

为探讨邻苯二甲酸 二 2 乙基己基酯 (Di 2 ethylhexylphthalate ,DEHP)对体外培养小鼠胚胎的发育毒性 ,采用植入后全胚胎培养模型 ,将 8.5天龄Balb c小鼠胚胎移入含DEHP即刻离心血清培养 48h ,DEHP终浓度为 0、12 .5、2 5、5 0、10 0和 2 0 0mg L ,观察DEHP对小鼠胚胎生长发育和组织器官形态分化的影响。结果显示DEHP对体外培养小鼠胚胎生长发育毒性的最大无作用剂量为 12 .5mg L ,≥ 2 5mg L的DEHP可诱发胚胎生长迟缓及组织器官形态分化异常 ,出现心脏、神经系统、腮弓发育异常及小肢芽、体位异常等畸形 ;10 0mg L的DEHP对体外培养胚胎偶尔呈致死效应 ;2 0 0mg L时各组织器官形态分化均出现了异常 ,但未发现死胎。上述改变具有明显的剂量 -效应及剂量 -反应关系。提示DEHP对体外培养的小鼠胚胎具有胚胎毒性 ,并以致畸效应为主     

苯致小鼠胚胎肢芽发育毒作用

目的 研究苯对小鼠胚胎肢芽发育和分化的影响,探讨苯的发育毒性.方法 应用恒温旋转培养装置对12 d孕龄小鼠胚胎前肢芽进行培养,观察不同浓度的苯对肢芽发育和分析的影响,并进行Neubert评分.结果 苯浓度在75μmoL/L以上时,前肢芽的发育和分化受到抑制,且随着苯浓度的增加,肢芽各软骨的发育分化越差,Neubert评分越少,剂量-效应关系良好.结论 苯可抑制小鼠胚胎肢芽发育和分化.     

镉致肾小管上皮细胞Hormesis效应

目的观察镉致肾小管上皮细胞Hormesis效应。方法取对数生长期RTEC细胞,分别暴露于含0(对照)、0. 16、0. 31、0. 63、1. 25、2. 50、5. 0、10. 0、20. 0、40. 0μM氯化镉的10%胎牛血清的DMEM/F12培养液,分别染毒24h、48h和72h。采用噻唑蓝(MTT)法检测不同染镉组中细胞存活率评估镉对RTEC细胞的毒性和增殖活力的影响。结果 0. 16～40. 0μM镉对RTEC细胞活力影响的剂量-效应关系表现为"低剂量刺激和高剂量抑制"为特征的双相曲线,呈明显的Hormesis效应。染镉24～72h,2. 50μM染镉组诱导RTEC增殖兴奋效应最为明显;最大低促效应出现在24h,最大低促效应剂量为2. 50μM,其促进细胞增殖效应为对照组的112. 24%。作用24h时,细胞增殖半数抑制率(IC50)为28. 38μM。结论一定剂量镉可诱导RTEC细胞增殖,呈明显的Hormesis效应,在Hormesis效应带剂量镉可显著提高RTEC细胞的增殖活性。     

sHsps在小鼠正常腭发育和腭裂发生过程中的表达

目的　研究sHsps在正常腭发育及腭裂发生过程中的表达情况。方法　在GD10经口一次分别给予实验组孕小鼠80mg kg的视黄酸(RA)、对照组孕鼠等体积的植物油,并分别于GD15 GD17取两组胎鼠的腭,利用RT- PCR方法半定量检测实验和对照组中sHsps的表达丰度。结果　正常腭除Hspb10在GD17不表达外,其余Hsps基因在GD15 - GD17均有明显表达,Hsp2 0、Hsp2 5、Hsp2 7、Hsp32、Hspb2、Hspb3、Hspb7表达丰度基本恒定,Hsp30、Hspb5随胚龄的增加而表达丰度增高,Hsp10、Hsp2 2、Hspb4、Hspb9在GD16出现表达高峰。Hsp30、Hsp32、Hspb4、Hspb10在GD15 - GD17的表达丰度腭裂组明显高于正常组。Hsp10、Hsp6 0、Hspb5、Hspb9在GD15 - GD17的表达丰度腭裂组明显低于正常组。Hspb9、Hspb10在正常腭发育和腭裂发生过程中的表达模式明显不同。结论　15种Hsps除Hspb10在GD17不表达外,其余在GD15 - GD17正常腭发育过程中均有明显表达,但不同Hsps的表达特点有所不同;Hsp30、Hsp32、Hspb4、Hspb10在腭裂发生中可能主要起应激保护反应,Hsp10、Hsp6 0、Hspb5、Hspb9、Hspb10可能与腭裂的发生有关。     

视黄酸诱导H9c2细胞p38 MAPK转位的研究

目的了解H9c2心肌细胞中p38MAPK的分布及其在全反式视黄酸(atRA)诱导下的转位。方法对H9c2细胞进行饥饿加药,应用激光扫描共聚焦显微镜对细胞内的p38进行定位扫描。通过对p38荧光强度的核浆比进行分析,得出atRA与SB202190对H9c2细胞内p38核转位的影响。结果在未受刺激细胞内,p38较多分布在胞浆;经atRA分别刺激细胞5min,30min后,胞浆中p38的荧光强度均变弱,核浆比显示实验组与对照组间有显著性差异。SB202190能明显抑制atRA诱导的p38核转位(P<0.01),并且,由SB202190抑制组与对照组的p38核浆比能看出,SB202190降低了26.1%的p38核转位。结论atRA能诱导心肌细胞中p38的核转位,p38信号转导通路可能参与心脏的发育调控。     

1988—1992年中国非综合征性唇腭裂发生率的动态变化

目的：了解我国1988－1992年非综合征性唇腭裂发生率的动态变化趋势及流行病学特征。方法：在1988－1992年期间,采用以医院为单位的整群抽样方法,对全国500多所医院孕28周至产后7天的4349例非综合征性唇腭裂病例进行回顾性分析。结果：我国5年非综合征性唇腭裂发生率无显著性差异,城乡发生率也无显著性差异。男性发生率为14．9／万,女性发生率为11．7/万,差异有显著性,非综合征性唇腭裂的性别比为1．3：1。三类非综合征性唇腭裂各自的发生率为：唇裂合并腭裂：7．8／万,单纯性唇裂：3．8／万,单纯性腭裂：1．8/万。结论：我国非综合征性唇腭裂发生率无变化趋势,城乡无差异。男性高于女性,唇裂合并腭裂为最常见类型。     

河北省0～6岁儿童唇腭裂发生情况及因素分析

目的:探讨唇腭裂的发生和干预措施。方法:利用2003～2008年河北省0～6岁儿童出生缺陷调查资料进行回顾性分析。结果:2003～2008年河北省0～6岁唇腭裂患儿2 529例,发病率为5.70/万;河北省唇腭裂发生呈逐年增加趋势,2003年与2008年唇腭裂发病率与6年平均发病率比较差异具有统计学意义(P<0.01);在河北省11个区市中以邯郸市发病率最高,为9.13/万,与6年平均发病率比较差异具有统计学意义(P<0.01);男孩发病率高于女孩,男女性别比为1.81:1,多胞胎发病率高于单胎,乡村发病高于城镇,山区高于平原;河北省0～6岁唇腭裂发生遗传因素占5.42%,母亲因素占33.93%,父亲因素占4.71%;有55.08%接受孕前优生健康检查,74.77%接受孕期保健;5.10%的唇腭裂儿童接受矫治手术。结论:河北省唇腭裂发病率仍处于较高水平,且呈逐年增加趋势。应采取全方位综合预防干预措施,重视孕前优生健康检查,加强孕期保健和做好新生儿筛查,并及时、适时地为出生缺陷患儿进行矫治,真正提高人口素质和生活质量。     

超声容积断层显像技术在胎儿唇腭裂诊断中的价值

目的探讨超声容积断层显像技术在胎儿唇腭裂诊断中的价值,以提高超声对胎儿唇裂、唇裂合并腭裂的检出率。方法采用SIEMENS ACUSON Antares超声诊断仪对33例产前二维超声诊断为唇裂及唇裂合并腭裂可疑的胎儿进行多切面扫查,同时采集经正中矢状切面胎儿颜面部的三维容积数据进行保存,应用三维后处理功能Multi Slice超声容积断层显像技术对容积数据进行处理分析。结果 33例产前超声诊断为唇裂及唇裂合并腭裂可疑的胎儿均获得较满意的超声容积断层图像,其中单侧唇裂3例,双侧唇裂合并双侧腭裂5例,单侧唇裂合并牙槽突裂7例,单侧唇裂合并双侧腭裂2例,单侧唇裂合并单侧腭裂14例,正中唇裂合并正中腭裂1例,漏诊1例单纯软腭裂。所有病例经产后和引产证实。结论超声容积断层显像技术是诊断胎儿唇腭裂特别是腭裂有效的方法。